FORMULARIO DE GUÍAS PRÁCTICAS DE APLICACIÓN Y EXPERIMENTACIÓN

DE LOS APRENDIZAJES

I. INFORMACIÓN GENERAL
ASIGNATURA FUNDAMENTOS DE FÍSICA NIVEL PRIMERO “A”
Unidad de
CICLO MARZO -
organización Formación Básica
ACADEMICO AGOSTO 2018
Curricular
DOCENTE ARACELI A. PILAMALA R.
II. INFORMACIÓN SOBRE LAS ACTIVIDADES PRÁCTICAS
Tema:
Se debe escribir el tema en correspondencia con el sílabo y el tipo de práctica que se
realizará
Objetivos:
Se debe escribir objetivos específicos que se lograrán con la actividad.
Modalidad:
Se debe escribir la modalidad de desarrollo de la actividad si es presencial o
no presencial
Tiempo de Duración:
Se debe escribir el tiempo planificado en horas para el desarrollo de la actividad por
el estudiante
Instrucciones:
Se debe escribir las instrucciones para el desarrollo de la actividad indicando
al estudiante la preparación previa al desarrollo de la actividad práctica
Listado de equipo, materiales y recursos:
- Se debe escribir los materiales que se van a utilizar según el tipo de actividad
práctica a desarrollar
Actividades por desarrollar:
- Se debe explicar la secuencia de lo que el estudiante debe ejecutar en el proceso
de la actividad práctica.
Resultado de Aprendizaje:
Se debe escribir el resultado de aprendizaje y este debe coincidirse con el del sílabo
según la unidad a la que corresponde la actividad práctica
Conclusiones:
Se debe detallar las características del producto final que debe entregar el
estudiante, así como acompañar de un cuestionario que sirva de autoevaluación al
estudiante.
Recomendaciones:
Si fuera necesario hacer alguna sugerencia al estudiante para que resulte de mayor
utilidad la actividad a desarrollar
Bibliografía:
Debe aparecer la bibliografía aprobada en el sílabo y además alguna otra específica
relacionada con la temática si fuera necesario.
Notas:

VALIDACIÓN DE LAS GUÍAS DE PRÁCTICAS

Fecha de elaboración: 2 de marzo de 2018

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 NOMBRES COMPLETOS NOMBRES COMPLETOS
DOCENTE PLANIFICADOR UTA
COORDINADOR UNIDAD DE
ORGANIZACIÓN CURRICULAR

M.Sc. Carlos Santiago Moreno Miranda

COORDINADOR DE CARRERA

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 GUÍA DE PRÁCTICAS
LABORATORIO TALLER SIMULACIÓN xX CAMPO

CARRERA: Biotecnología

ASIGNATURA: Química Orgánica I

NIVEL: Segundo PARALELOS: A y B

ÁREA ACADÉMICA: Básica DOCENTE: Ing. MSc. Isaác Molina

CICLO ACADÉMICO: Marzo – agosto 2018

PRÁCTICA N: 1

I. TEMA:
ANÁLISIS CUALITATIVO DE COMPUESTOS ORGÁNICOS: SOLUBILIDAD DE
COMPUESTOS ORGÁNICOS
II. OBJETIVO:
Determinar el comportamiento de solubilidad de los compuestos orgánicos en disolventes
inertes y en disolventes activos.
III. INSTRUCCIONES:

a) Solubilidad en disolventes orgánicos

Coloque en un tubo de ensayo 0,1g de la muestra problema. Agregue 1 ml de disolvente a

ensayar; agite y observe (prueba de solubilidad en frío). Si la muestra no se ha disuelto,
repita el procedimiento agregando de mililitro en mililitro hasta completar 3ml. Si la
muestra no se disuelve, es insoluble en frío (caso contrario es soluble en frío).

Si la sustancia es insoluble en frío, caliente la muestra hasta ebullición y con agitación

constante (los disolventes orgánicos deben calentarse con baño maría, si el disolvente es
agua puede calentarse con el mechero). Mantenga constante el volumen de disolución
durante el calentamiento. Observe si hay solubilización o no. Si la hay, la sustancia es
soluble en caliente (caso contrario es insoluble).

Cuando la sustancia es sólida y soluble en caliente, enfríela a temperatura ambiente y luego

en baño de hielo. Observe si hay formación de cristales. Anote sus resultados (para cada
muestra) en la siguiente tabla:

3
 Tabla 1. Solubilidad de la muestra problema en disolventes orgánicos
Éter Acetato
Disolvente Hexano Acetona Etanol Metanol Agua
etílico de etilo
Solubilidad
en frío
Solubilidad
en caliente
Formación
de cristales
Fuente: Lab. de Química Orgánica

b) Solubilidad en disolventes activos (realice estas pruebas a temperatura ambiente)

Siguiendo el diagrama de solubilidad, coloque en un tubo de ensayo 0,1g de sustancia

problema y agregue, en porciones de 1ml, 3ml del disolvente. Agite y anote sus
observaciones. Use muestra nueva en cada ensayo de solubilidad. Con los datos obtenidos
llene el siguiente cuadro para cada muestra:

Tabla 2. Solubilidad de la muestra problema en disolventes activos

NaOH NaHCO3 HCl H2SO4 H3PO4 Grupo de
Muestra H2O (C2H5)2O
5% 5% 5% 85% 85% solubilidad

Fuente: Lab. de Química Orgánica

IV. LISTADO DE EQUIPOS, MATERIALES Y RECURSOS:

Reactivos

 Hexano
 Acetato de etilo
 Etanol
 Agua bicarbonato de sodio 5%
 Ácido sulfúrico conc.
 Éter etílico
 Etanol
 Acetona
 M etanol
 Hidróxido de sodio 5%
 Ácido clorhídrico 5%
 Ácido fosfórico 85%
 Heptano l
 Propanol
 Butanol
 Anilina
 Hidroxilamina
 P-toluidina
 Nitroanilina
 Fenol
 1-naftol

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  2-naftol
 Acetilacetona
 Acetona
 Ciclohexanona
 Anhídrido acético
 Alcohol, metílico anhidro
 Tolueno
 Ciclohexano
 Clorobenceno
 Benceno
 Éter de petróleo
 Benzoato de metilo
 Salicilato de metilo
 Benzaldehído
 Formaldehído
 Ácido adípico
 Ácido ftálico
 Ácido matico
 Ácido benzoico
 Ácido pícrico
 Ácido sulfanílico
V. ACTIVIDADES POR DESARROLLAR:

 Discuta acerca de los resultados obtenidos para todos los ensayos realizados.
 Desarrollar el siguiente cuestionario:

 De acuerdo con las pruebas de solubilidad. ¿Cuál es el grado de polaridad de su

compuesto?
 ¿Cuándo un disolvente es ideal para efectuar la recristalización de un sólido?
Explique.
 ¿En base a su respuesta, cual disolvente seleccionaría para recristalizar su muestra?
¿Un sólido que es soluble en determinado disolvente frio, puede ser recristalizado
en dicho solvente? ¿Por qué?
 ¿Un sólido que es insoluble en un disolvente caliente, puede recristalizar en él?
 ¿Por qué el alcohol etílico y n-propílico son completamente solubles en éter y
agua, pero el etilenglicol y el glicerol son muy solubles en agua y casi insolubles
en éter?
 ¿Por qué la urea CO(NH2)2, punto de fusión 132°C, es muy soluble en agua y en
cambio la examinada, (CONH2)2, punto de fusión 420°C es sólo ligeramente
soluble en agua?
 ¿Por qué es la anilina más soluble en agua que el 1-aminohexano?
 El yoduro de etilo, CH3CH2I, es polar, pero contrariamente a lo que ocurre con el
 alcohol etílico y el ácido acético, que son también líquidos polares, es insoluble en
agua. Explique la diferencia.
 Compare la solubilidad en agua de cada uno de los siguientes pares de
compuestos:

CH3CH2CH2Br y CH2CICH2CI
CH3CH2CH2OH y HOCH2CH2OH
CH3CHBr2 y CH3CHO
CH3CH2I y CH3CH2NH2

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  Prediga el grupo de solubilidad de los siguientes compuestos:

 De los nitrofenoles isómeros:

 ¿Cuál es el menos soluble en agua?

 ¿Cuál es el menos soluble en benceno?

 ¿Por qué los hidrocarburos y sus derivados son prácticamente insolubles en agua?
VI. RESULTADOS OBTENIDOS:

Reportar las tablas 1 y 2 con cada una de las muestras problema.

VII. CONCLUSIONES:

Concluir en base a los objetivos planteados.

VIII. RECOMENDACIONES:

 Leer la hoja guía previamente a la práctica.

 Traer todos los implementos de protección personal (EPP)

VALIDACIÓN DE LAS GUÍAS DE PRÁCTICAS

Fecha de elaboración: 2 de marzo de 2018

__________________________
Ing. MSc. Isaác Molina
DOCENTE PLANIFICADOR UTA

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MSc. Patricio Orozco Freire Dr. Rodny Peñafiel
COORDINADOR COORDINADOR DE CARRERA
UNIDAD DE ORGANIZACIÓN CURRICULAR

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LABORATORIO TALLER SIMULACIÓN xX CAMPO

CARRERA: Biotecnología

ASIGNATURA: Química Orgánica I

NIVEL: Segundo PARALELOS: A y B

ÁREA ACADÉMICA: Básica DOCENTE: Ing. MSc. Isaác Molina

CICLO ACADÉMICO: Marzo – agosto 2018

PRÁCTICA N: 2

I. TEMA:
ANÁLISIS CUALITATIVO DE COMPUESTOS ORGÁNICOS: PRUEBAS DE
CLASIFICACIÓN DE GRUPOS FUNCIONALES
II. OBJETIVO:
Identificar el grupo funcional del compuesto problema mediante la; reacciones con los
diferentes reactivos a emplearse.
III. INSTRUCCIONES:

a. Identificación de alquenos: solución de permanganato de potasio:

Disolver 20mg o dos gotas del compuesto a ensayar en 1ml de agua o en 1ml de etanol
95%. Añada 1 gota de solución de permanganato de potasio al 1%. Una prueba positiva
queda indicada por la pérdida del color púrpura del reactivo y la formación de MnO2 como
un sólido marrón. Los compuestos que tienen dobles y triples enlaces dan prueba positiva.

b. Identificación de aldehídos y cetonas: reactivo de Tollens:

Prepare el reactivo de Tollens de acuerdo con las siguientes instrucciones: en un tubo de

ensayo completamente limpio, coloque 2ml de una solución de nitrato de plata al 5% y
añada una gota de solución diluida de NaOH a 10%. Adicione gota a gota con agitación
constante una solución de hidróxido de amonio al 2%, hasta que se disuelva
completamente el óxido de plata precipitado. Entonces añada 2 o 3 gotas del compuesto a
ensayar. Observe y anote los cambios que tienen lugar. Si no aparece algún resultado
notable, caliente el tubo hasta 35°C en un baño María.

Reactivo de Schiff

Coloque 2ml del reactivo de fucsina para aldehídos o reactivo de Schiff en un tubo de
ensayo y adicione 1 gota del compuesto a ensayar. Agregue suavemente el tubo y observe
el color desarrollado después de 3 o 4 minutos.

c. Identificación de alcoholes: solución de permanganato de potasio:

Disolver dos gotas del compuesto a ensayar en 1 ml de agua. Añada 1 gota de solución de
permanganato de potasio al 1%. Una prueba positiva queda indicada la formación de MnO2
como solido marrón.

1
d. Identificación de fenoles: solución de cloruro férrico:

A una solución acuosa del compuesto (aproximadamente al 0,1%), se le añade una gota de
solución de cloruro férrico al 1%. Ensaye la prueba con fenol. Compare el color producido
con el del agua pura y una gota de solución del reactivo de cloruro férrico. Ocasionalmente,
el color producido no es permanente por lo que deberá observar cuidadosamente la
solución en el instante que se añade la gota de cloruro férrico.

Cuando el fenol no da color, un procedimiento alterno al anterior es el siguiente: a unos

30mg de sólido o 1 gota del líquido a ensayar, disuelto o suspendido en 1 ml de cloroformo
añade dos gotas de una solución que se prepara disolviendo 1g de cloruro férrico en 100
ml de cloroformo. Entonces, añada 1 gota de piridina y observe cualquier cambio de color
que pueda ocurrir.

Prueba de agua de bromo:

Agregara un tubo de ensayo 1ml de cada solución preparada. Agregar de 3 a 4 gotas de

agua de bromo y agitar hasta que permanezca la coloración. Observar los cambios en cada
muestra. Al cambiar de coloración y formar un precipitado será positivo para un fenol.

e. Identificación de aminas: prueba de Lignin:

Disuelva entre 10 y 20mg del compuesto en unas gotas de etanol y humedezca un área
pequeña de papel periódico con la solución. Coloque 2 gotas de HCl 6N sobre la zona
humedecida. El desarrollo inmediato de un color amarillo o anaranjado es una prueba
positiva para aminas aromáticas primarias y secundarias. Si la prueba es negativa, repítala
usando una solución caliente de la amina en etanol y solución caliente de ácido clorhídrico.

Las aminas alquílicas primarias y secundarias, y las aminas cíclicas, no dan colores
amarillo o anaranjado a temperatura ambiente, pero si dan estos colores cuando se usan
calientes. Las aminas terciarias, aminoácidos alifáticos y aminas no dan prueba positiva.

Prueba con ácido nitroso:

Agregar 0,5 ml de las soluciones problema en tubos de ensayo. Colocar los tubos de ensayo
en un baño de agua fría (0-4ºC). Adicionar 5ml de ácido clorhídrico al 25% (v/v).
Posteriormente, agregar 1ml de solución fría de nitrito de sodio al 20% (p/v). Observar los
cambios ocurridos. Al formar un precipitado de coloración anaranjada será una amina.

f. Identificación de ácidos carboxílicos: prueba con solución de bicarbonato de sodio:

Coloque 20mg o dos gotas de los compuestos a ensayar en 2ml de solución de NaHCO3 al
5%. La evolución de CO2 gaseoso es señal de una prueba positiva. Si el desconocido es un
sólido, añada a la solución resultante suficiente solución de HCl concentrado hasta
alcanzar un pH entre 1 y 2. La aparición de un precipitado confirma la presencia de un
ácido carboxílico.

Prueba yodato-yoduro:

Agregar 0,1g o 0,1ml de la muestra problema en un tubo de ensayo. Adicionar 3-4 gotas
de yoduro de potasio al 2% (p/v). Agregar 3 a 4 gotas de yodato de potasio al 4% (p/v).
Llevar el tubo de ensayo a baño María por un minuto. Enfriar la muestra. Adicionar gota

2
 a gota una solución de almidón al 5% (p/v). En presencia de un ácido carboxílico se
formará una coloración azul.
IV. LISTADO DE EQUIPOS, MATERIALES Y RECURSOS:

Materiales

 Tubos de ensayo
 Vasos de precipitación
 Pipetas
 Probetas
 Pera de succión
 Espátulas
 Matraces Erlenmeyer
 Goteros
 Gradillas
 Vidrios de reloj/Cajas Petri

Reactivos

 Ciclohexano
 Tolueno
 Acetaldehído
 Benzaldehído
 Acetona
 Ciclohexanona
 Etanol
 lsopropanol
 Butanol
 Metanol
 Fenol
 1-naftol
 Anilina
 o-toluidina
 Difenilamina
 Permanganato de potasio
 Agua destilada
 Etanol 95%
 Nitrato de plata
 Hidróxido de sodio
 Hidróxido de amonio
 Fucsina
 Cloruro férrico
 Agua de bromo
 Cloroformo
 Ácido clorhídrico
 Bicarbonato de sodio
 Piridina
 Ácido benzoico
 Ácido adípico
 Almidón

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  Nitrito de sodio
 Yoduro de potasio
V. ACTIVIDADES POR DESARROLLAR:

 ¿Cuál es el indicador universal para identificar grupos funcionales? ¿Cómo se lo

prepara?
 ¿Qué grupos funcionales permite identificar?
 ¿Qué método cualitativo se puede emplear para identificar alquinos?
 ¿Cuáles pueden ser las aplicaciones de la identificación de grupos funcionales?
 Desarrolle las reacciones de identificación con cada prueba señalada en el marco
teórico con los siguientes compuestos:

o
1-butanol, 2-butanol, terc-butanol, ciclohexanol.
o
Cinamaldehído, cumaldehído, furfural.
o
2-butanona, acetofenona, benzofenona.
o
Resorcinol, hidroquinona, m-cresol.
o
N-metilanilina, n-butilamina, trietilamina, acido m-toluico, ácido salicílico, ácido
oxálico
VI. RESULTADOS OBTENIDOS:

 Reportar la siguiente tabla:

Grupo
Compuesto Prueba
funcional
Prueba
R. R. Cloruro Ácido Bicarbonato Yodato- Permanganato
de
Tollens Schiff férrico nitroso de sodio yoduro de potasio
Lignina
Fuente: Lab. de Química Orgánica


Reportar las reacciones respectivas en cada prueba realizando con los compuestos
identificados de cada grupo funcional.
VII. CONCLUSIONES:

Concluir en base a los objetivos planteados.

VIII. RECOMENDACIONES:

 Leer la hoja guía previamente a la práctica.

 Traer todos los implementos de protección personal (EPP).
 Traer los materiales necesarios para la ejecución de la práctica.

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Fecha de elaboración: 2 de marzo de 2018

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Ing. MSc. Isaác Molina
DOCENTE PLANIFICADOR UTA

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MSc. Patricio Orozco Freire Dr. Rodny Peñafiel
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CARRERA: Biotecnología

ASIGNATURA: Química Orgánica I

NIVEL: Segundo PARALELOS: A y B

ÁREA ACADÉMICA: Básica DOCENTE: Ing. MSc. Isaác Molina

CICLO ACADÉMICO: Marzo – agosto 2018

PRÁCTICA N: 3
I. TEMA:
CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA
II. OBJETIVO:
Aplicar cromatografía de capa fina (CCF) para muestras de analgésicos y colorantes.
III. INSTRUCCIONES:

Preparación de las muestras

Preparar una solución de los colorantes a una concentración de 0,1% (5 ml).

Para los analgésicos se trituran por separado hasta obtener un polvo fino. Intentar disolver
0,2gr en 5ml de etanol al 95%. Filtre y conserve el filtrado para aplicar en las placas de capa
fina. El patrón de la cafeína se prepara disolviendo 0,1gr de cafeína en 10ml de etanol al 95%.
En caso de no disolverse, someter a baño María.

Preparación de la placa para cromatografía de capa fina

Cortar un trozo de la lámina de sílica gel para CCF según lo requerido.

Trazar una línea con lápiz a 0,5cm del borde inferior y a 0,5cm del borde izquierdo donde se
colocará la primera siembra, la segunda siembra se la realizará a 0,5cm de la primera aplicación
(continuar con el mismo proceso para las demás aplicaciones), la última siembra se la realiza
a 0,5cm de distancia del borde derecho de la placa.

Aplicar las diferentes muestras sobre la placa cromatográfica en los puntos de señalados.

Colocar en un vaso de precipitación el solvente a emplear (figura 1).

Dejar eluir y evitar que el solvente llegue a la línea superior marcada con lápiz y con las
muestras aplicadas, retirar y dejar secar los cromatogramas.

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 Figura 1. Cromatografía de capa fina y preparación de muestra

Preparación del solvente

Preparar las soluciones que se indican en la tabla l, un volumen de 5ml para cubrir la base del
recipiente a emplear (que no sea mayor a 0,5cm de altura):

Tabla 1. Relación para mezcla de solventes

Mezcla Solventes Relación
M1 1-butanol: ácido acético: agua: hexano 4:3:5:1
M2 Butanol: etanol: amoniaco 2:1:2
Fuente: Lab. de Química Orgánica

Revelado De Placas De Capa Fina

Luz ultra violeta (UV)

Una vez seco los cromatogramas que contienen el patrón de cafeína y el analgésico llevar a la
lampara de luz ultravioleta (UV). Dibujar las marcas visibles y luego tomar las respectivas
mediciones para el cálculo del factor de retardo (Rf).

Yodo

Colocar dos o tres cristales de yodo en un vaso de precipitación, introducir la placa que
contiene la cafeína y el analgésico dentro del vaso de precipitación, luego tapar con papel
aluminio, llevar a una fuente de calor (plancha de calentamiento, mechero), observar.
IV. LISTADO DE EQUIPOS, MATERIALES Y RECURSOS:

Materiales

 Tubos de ensayo
 Papel filtro
 Pipetas
 Probetas
 Vasos de precipitación

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  Espátulas
 Mortero y pistilo
 Vidrios de reloj
 Tijera
 Regla
 Embudos
 Matraces Erlenmeyer
 Varillas de agitación

Compuestos y Reactivos

 Butanol
 Agua
 Ácido acético
 Hexano
 Cafeína
 Analgésicos con contenido de cafeína
 Rojo congo 0,1% (m/v)
 Rojo de fenol 0,1% (m/v)
 Azul de metileno 0,1% (m/v)
V. ACTIVIDADES POR DESARROLLAR:

 Reportar los datos de distancias recorridas por los colorantes y los analgésicos sobre
las placas de capa fina.
 Desarrollar el cuestionario:

1. Indique la clasificación de la cromatografía de acuerdo al estado físico del

eluyente y del mecanismo de separación.
2. ¿En qué consisten las fuerzas propulsoras y las fuerzas retardantes en
cromatografía?
3. ¿Qué es el RF?
4. El valor del Rf ¿depende del eluyente?
5. ¿Qué es el TR?
6. ¿Explique las razones por las cuáles unos solventes son más polares que otros?
Considerar los solventes utilizados en la práctica.
7. ¿Por qué se dice que la cromatografía en capa fina es un criterio parcial y no total
de identificación?
8. ¿Cuál es la importancia y las aplicaciones de cromatografía de capa fina?
9. Qué significa que una sustancia tenga: Rfm menor a 0,5; mayor a 0,5 e igual a 0,5?
10. Según lo realizado en la práctica, ¿cuál será el resultado de los siguientes errores
en cromatografía de capa fina?
 Aplicación de solución muy condensada.
 Utilizar eluyente de alta profundidad.
 Empezar con gran cantidad de eluyente en la cámara de cromatografía.

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 VI. RESULTADOS OBTENIDOS:

 Calcular el Rf para cada color y para los analgésicos con cada mancha observada.
Tabla 2. Datos obtenidos
Distancia recorrida (cm)
Colores
Solvente Marca Color Rx Rx Rf
separados
(solvente) (colores/analgésicos)

Fuente: Lab. de Química Orgánica

 Reportar los gráficos (fotografías)

VII. CONCLUSIONES:
Concluir en base a los objetivos planteados.
VIII. RECOMENDACIONES:
 Leer la hoja guía previamente a la práctica
 Traer todos los implementos de protección personal (EPP)
 Traer los materiales necesarios para la ejecución de la práctica.

VALIDACIÓN DE LAS GUÍAS DE PRÁCTICAS

Fecha de elaboración: 2 de marzo de 2018

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Ing. MSc. Isaác Molina
DOCENTE PLANIFICADOR UTA

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MSc. Patricio Orozco Freire Dr. Rodny Peñafiel
COORDINADOR COORDINADOR DE CARRERA
UNIDAD DE ORGANIZACIÓN CURRICULAR

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 GUÍA DE PRÁCTICAS
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CARRERA: Biotecnología

ASIGNATURA: Química Orgánica I

NIVEL: Segundo PARALELOS: A y B

ÁREA ACADÉMICA: Básica DOCENTE: Ing. MSc. Isaác Molina

CICLO ACADÉMICO: Marzo – agosto 2018

PRÁCTICA N: 4

I. TEMA:
CROMATOGRAFÍA EN COLUMNA
II. OBJETIVO:
Separa una mezcla de licopeno y β-caroteno por cromatografía de columna.
III. INSTRUCCIONES:

Preparación del extracto de salsa de tomate

Pese 2g de pasta de tomate en un vaso de precipitación pequeño, adicione 20ml de etanol al

95% y mezcle completamente por agitación circular manual por algunos minutos. Este proceso
extrae el contenido de agua de la salsa de tomate.

Filtre a través de un pequeño pedazo de algodón colocado en un embudo de tallo corto.

Coloque un pedazo de papel filtro sobre la pasta que permanece en el embudo y presiónela con
los dedos para exprimir y remover el etanol.

Adicione un exceso de unos pocos ml de etanol. Coloque la pasta residual sobre un papel filtro
1impío, remueva y deseche el algodón y el primer papel filtro. Envuelva la pasta en el papel
y presiónelo para lograr secarla lo más posible. Coloque la pasta resultante en un vaso de
precipitación de 50 ml y añada 10 ml de cloroformo.

Agite completamente para extraer los pigmentos. Separe por decantación la solución orgánica
de la pasta de tomate y filtre por gravedad usando como recipiente colector un pequeño vaso
de precipitación limpio y seco. Concentre, calentando en un baño de vapor hasta obtener un
volumen de 1-2 ml.

Preparación del extracto de zanahoria rallada

El extracto de zanahoria rallada se obtiene siguiendo los siguientes pasos:

En un vaso de precipitación de 50ml pese 2 gramos del zanahoria rallada y deshidratada en un

horno 1 microondas y adicione 10ml de cloroformo.
Agite y macere la mezcla con la espátula, hasta que desaparezca n los grumos de la pasta.
Después, filtre por gravedad a través de un embudo de tallo corto, al cual se le ha colocado un
pequeño pedazo de algodón en el cuello del mismo, lo suficientemente suelto, para que no se
atore en el tallo bloqueando la salida de líquido filtrado.

10
Recoja el filtrado en una fiola de 50ml de capacidad limpia y seca. Evapore la solución,
calentándola en un baño de vapor hasta unos pocos ml.

Preparación de la cabeza de columna

En un Erlenmeyer de 25ml, mezcle completamente el concentrado de zanahoria, con el

extracto de pasta de tomates.

Lave los envases que contenían los extractos de los pigmentos con unos ml de cloroformo y
transfiera las soluciones al Erlenmeyer que contiene la mezcla. Si observa películas insolubles
en suspensión, filtre la mezcla por gravedad.

Caliente la solución de la mezcla hasta sequedad, de nuevo en un baño de vapor cuya

temperatura no exceda la ebullición del cloroformo. Sea cuidadoso en no calentar por encima
de esa temperatura, debido a que las moléculas de pigmentos pueden oxidarse y decolorarse si
son sometidas a sobrecalentamiento.

Añada al residuo 1ml de éter de petróleo y una gota de cloroformo y use la solución formada
como la cabeza de la columna. Guarde, algunas gotas de la solución de pigmentos, para realizar
análisis posteriores por cromatografía de capa fina.

Preparación de la columna de cromatografía

La mezcla de pigmentos, se cromatografía en una bureta de 2ml de capacidad limpia y seca,

empaquetada con una columna de sílica, preparada con ligroína (fracción de éter de petróleo,
de punto de ebullición, entre 63-75ºC) como solvente.

Coloque, un pequeño pedazo de lana de vidrio o algodón en el fondo de la bureta, haciéndolo

llegar empujando hacia abajo con facilidad.

Pese en una fiola, 24g de sílica. Adicione la sílica activada (100-125°C por un par de horas)
con la ayuda de un embudo en forma rígida y constante, por el tope de la bureta, mientras
continua con el proceso de empaquetamiento, golpeando la bureta intermitentemente. Las
paredes de la bureta no deben golpearse fuertemente.

Adicione 30ml de ligroína en el interior de la bureta.

Manteniendo abierta la llave de la bureta, permita que parte del solvente drene, recogiéndolo
en una fiola de 25ml de capacidad que encuentre limpio y seco. Arrastre la sílica que se haya
quedado adherida en las paredes de la bureta, haciendo uso de una varilla de vidrio o con
algunos mi de solvente. Repita este proceso tantas veces como sea necesario.

Durante este procedimiento, puede ser beneficioso, golpear suavemente las paredes de la
bureta con los dedos o con un pedazo de manguera de goma, para tratar de compactar la sílica
que se forma, no permita, que la columna se seque durante el proceso de empaquetamiento, es
decir el nivel de líquido debe estar por encima de la superficie de la sílica dentro de la bureta.
Drene el exceso de solvente, hasta que alcance justamente el nivel superior de la columna.

Cromatografía de columna

Cierre la llave de drenaje. Si usted aún no ha evaporado los extractos con cloroformo de los
pigmentos, proceda a la preparación de la cabeza de columna, siguiendo los pasos que se
indican en el instructivo respectivo.

11
 Transfiera la solución de pigmentos a la columna, por intermedio de una pipeta larga. Guarde,
algunas gotas de 1 a solución de pigmentos, para realizar análisis posteriores por cromatografía
de capa fina.

Abra la llave de drenaje de solvente, y permita que el líquido coloreado pase a la columna.
Cuando el tope de la columna, coincida con el nivel del solvente, cierre la llave de drenaje.

Haciendo uso de una pipeta capilar, adicione cuidadosamente unos pocos ml de ligroína para
lavar las paredes de la bureta y permitir que esta nueva fracción de sol ven te pase a la columna,
abriendo la llave de drenaje, hasta que nuevamente coincidan el nivel de líquido con el tope de
la columna de sílica. Todo el material coloreado, deberá, en este punto estar en la columna de
sílica. Permita, que la columna repose por espacio de 5 minutos. Después de esto, añada una
cantidad apreciable de una mezcla de ligroína: acetato de etilo al 2% a la bureta, teniendo el
cuidado de añadir los primeros mi por las paredes de la misma.

Empiece a eluir la columna, tomando fracciones de aproximadamente 1ml en tubos de ensayo.

De aquí en adelante, el (β-caroteno amarillo se moverá rápidamente a lo largo de la columna,
mientras que el licopeno rojo se moverá más lentamente).

El tomate contiene una pequeña cantidad de β-caroteno, además del licopeno. La zanahoria,
por otra parte, contiene mayormente β-caroteno, con una muy pequeña cantidad de licopeno.
Solamente con un trabajo muy cuidadoso, se podrá obtener alguna cantidad de Ji copen o, sin
embargo, al menos una fracción contendrá esencialmente β-caroteno puro.

Cromatografía de capa fina

Realizar cromatografía de capa fina (CCF) con los pigmentos por separado y de la mezcla de
los pigmentos de licopeno y β-caroteno, empleando como solvente una mezcla de acetona: éter
de petróleo (1:9). Determinar el Rf.
IV. LISTADO DE EQUIPOS, MATERIALES Y RECURSOS:

Materiales

 Tubos de ensayo
 Papel filtro
 Pipetas
 Probetas
 Vasos de precipitación
 Espátulas
 Mortero y pistilo
 Vidrios de reloj
 Tijera
 Embudos
 Matraces Erlenmeyer
 Varillas de agitación

Compuestos y Reactivos

 Éter de petróleo

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  Acetona
 Etanol
 Cloroformo
 Sílica
 Acetato de Etilo
 Salsa de Tomate
 Zanahoria
V. ACTIVIDADES POR DESARROLLAR:

 Discuta acerca de los resultados obtenidos tanto para cromatografía de columna como
para CCF.
 Desarrollar el cuestionario:

1.
¿Qué factores afectan la separación de una muestra en cromatografía en columna?
2.
¿Cuántas variantes hay de la cromatografía en columna?
3.
¿Para qué tipo de muestras es adecuado este método?
4.
Si una mezcla de alcanfor y naftaleno se separa por cromatografía sobre alúmina,
¿cuál de los dos hidrocarburos eluirá primero y cuál al último? ¿Cuál sería el más
polar?
5. Una vez efectuada la elución de una cromatografía en columna si los componentes
de la mezcla a separar son productos no coloreados, ¿cómo podríamos saber en
qué fracción o fracciones se encuentra cada uno de los componen tes de la mezcla
original?
6. Un colorante desconocido, se piensa que puede ser azul de metileno, ¿cómo se
podría comprobar esta suposición usando un procedimiento basado en una técnica
cromatográfica?
7. ¿Qué debe hacerse para encontrar el eluyente adecuado para una sustancia en una
cromatografía en columna?
8. La recuperación cuantitativa del producto principal ¿sería más completa si se
recogieran fracciones mayores o menores de 10ml? ¿Por qué?
9. La cromatografía en columna es la técnica más general para separar mezclas de
sustancias ¿a qué escala?
10. Para una mezcla de tres compuesta; (A, B y C) que en CCF de sílica gel en un
determinado eluyente da lugar a los valores de Rf de 0,8 para A; 0,1 para B y 0,4
para C, prediga cuál de ellos eluirá en segundo lugar en cromatografía en columna
de sílica gel, si utilizamos el mismo diluyente
VI. RESULTADOS OBTENIDOS:

 Reportar los datos de distancias recorridas por los pigmentos de tomate y zanahoria en
CCF.
 Calcular el Rf para cada mancha observada.
 Reportar los gráficos (fotografías ).
VII. CONCLUSIONES:
Concluir en base a los objetivos planteados.

VIII. RECOMENDACIONES:
 Leer la hoja gula previamente a la práctica.
 Traer todos los implementos de protección personal (EPP).
 Traer los materiales necesarios para la ejecución de la práctica.

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VALIDACIÓN DE LAS GUÍAS DE PRÁCTICAS

Fecha de elaboración: 2 de marzo de 2018

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Ing. MSc. Isaác Molina
DOCENTE PLANIFICADOR UTA

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MSc. Patricio Orozco Freire Dr. Rodny Peñafiel
COORDINADOR COORDINADOR DE CARRERA
UNIDAD DE ORGANIZACIÓN CURRICULAR

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