MANUAL DE PROCEDIMIENTOS LABORATORIOS Código: FMVZ.LB.M.

004

MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO Versión: 001

Fecha: 18-05-2015

Practica N° 2

Tema: Colorantes y Métodos de Tinción

Tinción. - Su objetivo es teñir un microorganismo con uno o varios colorantes para destacar su
morfología y estructura.

Colorantes. - Son sales compuestas por iones + (básicos) y – (ácidos), los cuales tiñen estructuras
de acuerdo a la polaridad de la bacteria.

Tabla 1. Clases de Tinciones

Simple o Directa Compuesta o Diferencial Especial

Utiliza un solo colorante de Utiliza más de un colorante Utilizadas para colorear y aislar
manera que todos los elementos partes específicas de
adquieren el mismo color microorganismos.

Safranina Gram Tinta China: cápsula

Azul de metileno Zielh Neelsen Schaefferfidton: endosporas

Azul de lactofenol Giemsa

Verde malaquita

Rojo fenol

Violeta de Genciana

Tomado de: Forbes 2007, Rodríguez 2005, Quinn 2011.

Tinción Gram

Fundamentada en la composición de la pared celular bacteriana. Las bacterias Gram (+) tienen una
gruesa pared de peptidoglucano y ácido teicoico. Al contacto con el colorante primario y el
mordiente forman el complejo Cristal Violeta - Yodo que resiste la acción de decolorante y se
observan de color violeta.
Las bacterias Gram (-) tienen lapared de peptidoglucano más delgada y poseen lipopolisacáridos
que se disuelven al contacto con el decolorante y se tiñen con el colorante de contraste por lo que
se observan de color rosa.

Procedimiento:

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 Cristal violeta (colorante primario) 1 minuto.

 Yodo (mordiente) 1 minuto.
 Alcohol cetona (decolorante) 10 segundos.
 Safranina (colorante contraste) 30 segundos.
 Lavar la placa después de cada paso, colocar una gota de aceite de inmersión y observar con
lente 100x

Tinción Giemsa

Tinción Giemsa es utilizada habitualmente para examen de frotis sanguíneos, la cual permite la
diferenciación de diferentes tipos de células sanguíneas. La tinción Giemsa admite la observación
de hemoparásitos.

Procedimiento:

 Realizar el frotis sanguíneo en porta objetos.

 Fijar con alcohol metílico durante 5 minutos.
 Lavar la placa.
 Sumergir la extensión en una solución diluida al 1:9 de colorante Giemsa y agua destilada
por al menos 15 min.
 Lavar la placa y dejar secar.
 Observar al microscopio con lente 40x.

Azul de metileno

Es considerada como una coloración simple la cual tiñe a todas las bacterias o estructuras por igual.
La tinción de azul de metileno no es diferencial y se utiliza para teñir las estructuras presentes en el
citoplasma de la bacteria.

Procedimiento.

 Efectuar un extendido fino. Fijar a la llama.

 Cubrir con colorante durante un minuto.
 Lavar el portaobjeto con agua.

Informe N° 2

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1. Nombre, Fecha, Tema

2. Resultados

Tabla N°1 Resultados obtenidos con la utilización de diferentes tinciones

Tipo de Muestra Tinción Resultados Esperados Resultados

Observados

Caso 1 Azul de lactofenol, Candida spp. Levaduras

KOH

Caso 2 Gram Escherichia coli Bacilo gram -

Caso 3 Gram Estafilococos Coco gram +

Caso 4 Gram Fosobacterium Bacilo gram -

Caso 5 Giemsa Levaduras Levaduras

Descripción de la tabla

3. Análisis de Artículo: Laboratory Perspective of Gram Staining and its significance in

Investigations of infectious diseases.

4. Conclusiones

5. Bibliografía:

Nota: El informe deberá ser escrito con letra Times New Roman #12.Los resultados deberán
estar acompañados de la referencia bibliográfica. Usar Mendeley – Vancouver.

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