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DETERMINACIÓN DEL NÚMERO DE COLIFORMES

TOTALES, COLIFORMES FECALES Y ESCHERICHIA


COLI

Lucio Villanueva, Miguel Angel


Ordaya Pachas, Nathalie Jesús

Escuela Profesional de Ingeniería en Acuicultura


Facultad de Oceanografía, Pesquería, Ciencias Alimentarias y Acuicultura
Universidad Nacional Federico Villarreal

2017
DETERMINACIÓN DEL NÚMERO DE COLIFORMES TOTALES, COLIFORMES
FECALES Y ESCHERICHIA COLI

ÍNDICE

Página
Resumen……………………………………………………………………………3
Objetivos……………………………………………………………………………4
Introducción...………………………………………………………………………5
Método – Procedimiento……………………………………………………………6
Resultados…………………………………………………………………………..8
Conclusiones………………………………………………………………………..9
Recomendaciones…………………………………………………………………...10
Referencia bibliográfica…………………………………………………………….14

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DETERMINACIÓN DEL NÚMERO DE COLIFORMES TOTALES, COLIFORMES
FECALES Y ESCHERICHIA COLI

RESUMEN

En el presente informe se da a conocer el método para cuantificar el número de


microorganismos presentes en la muestra liquida que se usó proveniente de agua del
acuario de la Facultad de oceanografía, pesquería, ciencias alimentarias y acuicultura.
Dentro de la técnica usada más común fue la del procedimiento basado en diluciones en
serie, haciendo crecer microorganismos en medios de cultivo sintéticos líquidos, como
la estimación por el método del Numero Más Probable (NMP). Este método usado es
del número más probable que, comenzó con nueve tubos (NMP/9 tubos) sembrando el
agua de acuario en diluciones consecutivas en tubos de ensayo con campanas Durham
con 9ml de caldo lactosado bilis verde brillante (caldo BRILA) y se homogeniza
girando. Para todas las siembras se trabajó cerca del mechero para tener el ambiente
esterilizado. Los tubos de ensayo se rotulan, se colocan en una lata y se envuelve esta
con papel kraft con ligas y se lleva a la estufa durante 48 horas. Después del tiempo
establecido se observa y se considera positivo para coliformes si presenta más del 20%
de volumen de gas en la campana Durham y desde ahí a partir de esos tubos positivos
para determinar E. coli se incuba a 45°C por 24 horas mas con tubos con caldo Brila y
el otro con caldo triptona.

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FECALES Y ESCHERICHIA COLI

OBJETIVOS

Objetivo específico:

 Determinar la calidad sanitaria de un agua destinada para actividades de cultivos


acuícolas provenientes de un acuario de la FOPCAA.

Objetivos generales:
 Demostrar la presencia de coliformes en la calidad de agua del acuario
proveniente de la FOPCAA.
 Conocer el medio donde se desarrollan los colifores totales, colifores fecales y
E. coli

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FECALES Y ESCHERICHIA COLI

INTRODUCCIÓN
La calidad del agua se define como: el conjunto de caracteres físicos químicos y
biológicos que deben satisfacerse con el fin de que el agua que se suministra sea segura
para el fin destinado.
Para que el agua sea de calidad potable debe de reunir ciertos factores:
a) Físicos. Color, olor, sabor, temperatura, conductividad específica, sólidos, pH.
b) Químicos. Alcalinidad, metales, nutrimentos, sulfatos, OD (Oxígeno Disuelto), DBO
(Demanda Bioquímica de Oxígeno).
c) Biológicos. El método microbiológico para detectar la presencia de microorganismos
coliformes en el agua contempla tres fases: Prueba Presuntiva, Prueba Confirmativa,
Prueba Completa.
Los parámetros físico-químicos dan información extensa de la naturaleza de las
sustancias químicas del agua y sus propiedades físicas, sin aportar información de su
influencia en la vida acuática; los métodos biológicos aportan esta información pero no
señalan algo acerca del contaminante o contaminantes responsables.
La determinación de microorganismos indicadores de contaminación fecal permite
poner de manifiesto que el agua, ha sido contaminada con materia fecal y su posible
transmisión de enfermedades causadas por organismos enteropatógenos (bacterias que
viven y se desarrollan en la cavidad entérica –intestino grueso- de animales de sangre
caliente).
La definición generalmente aceptada para el término “coliformes” describe a estos
microorganismos como bacilos Gram negativos, no esporulados, aerobios o anaerobios
facultativos que fermentan la lactosa con producción de ácido y gas, aunque algunos
pueden ser fermentadores tardíos o no fermentadores, como Citrobacter y Serratia,
respectivamente. La mayoría de los coliformes pueden encontrarse en la flora normal
del tracto digestivo del hombre o animales, por lo cual son expulsados especialmente en
las heces, por ejemplo Escherichia coli. Por esta razón, su presencia constante en la
materia fecal, los coliformes son el grupo más ampliamente utilizado en la
microbiología de alimentos como indicador de prácticas higiénicas inadecuadas. Como
los coliformes también pueden vivir en otros ambientes, se distingue entre coliformes
totales y coliformes fecales. Esta práctica se refiere a coliformes totales.
El uso de los coliformes como indicador sanitario puede aplicarse para: • La detección
de prácticas sanitarias deficientes en el manejo y en la fabricación de los alimentos. • La
evaluación de la calidad microbiológica de un producto, aunque su presencia no
necesariamente implica un riesgo sanitario, cuando los coliformes son de origen no-
fecal. • Evaluación de la eficiencia de prácticas sanitarias e higiénicas en el equipo. • La
calidad sanitaria del hielo y los distintos tipos de agua utilizados en las diferentes áreas
del procesamiento de alimentos.

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MÉTODO

 Ámbito espacial y temporal:


La práctica se realizó el día 29 de agosto del 2017, en el laboratorio de microbiología de
la facultad de Oceanografía, Pesquería, Ciencias Alimentarias y Acuicultura, ubicado en
roma n° 350 distrito de Miraflores.

 Unidades de análisis:
Se trabajó con materiales y equipos del laboratorio, para su reconocimiento e
introducción al manejo de estos. Las muestras fueron obtenidas de casa, tienda,
panadería; obtenida por los alumnos.

 Método de trabajo:
Método del Numero Más Probable (NMP) con 9 tubos.

Materiales:
- Tubos de ensayo
- Campana de Durham
- Caldo lactosado bilis verde brillante (caldo BRILA)
- Caldo Triptona
- Encendedor.
- Mechero de Bunsen.
- Pipetas graduadas.
- Gradilla para tubos de ensayo.
- Estufa de 37°C
- Estufa de 45°C
- Agua de acuario de la FOPCAA

Procedimiento:
1.- Primero se cerró las ventanas del laboratorio de microbiología, se desinfectó la mesa
de trabajo con alcohol, y se encendio el mechero.
2.- En la gradilla tenemos un total de 12 tubos de ensayo lo cuales usaremos primero 3
tubos para preparar SSP esteril.
3.- Consecutivamente se extrajo 1ml del agua de acuario al primer tubo y se considera
como 10-1, agitamos fuertemente y se lleva 1ml a otro tubo se considera 10 -2 hasta el 10-
3
.

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4.-Para este prueba tomamos primero alícuotas de 1ml del tubo 10-1 para llevarlo a 3
tubos por dilución con 9ml de caldo lactosado bilis verde brillante (caldo BRILA) y se
homogenizo cada uno.
5.- Consecutivamente se extrajo alícuotas de 1ml del tubo 10-2 para llevarlo a otros 3
tubos con 9ml de caldo lactosado bilis verde brillante (caldo BRILA) y se homogenizo
cada uno.
6.- Y finalmente se extrajo alícuotas de 1ml del tubo 10-3 para llevarlo a otros 3 tubos
con 9ml de caldo lactosado bilis verde brillante (caldo BRILA) y se homogenizo cada
uno.
5.- Por último, en una lata se colocan los 9 tubos con caldo BRILA y campana de
Durham y se envuelve en papel kraft y ligas debidamente rotuladas; se incubo a la
estufa a 37°C durante 48 horas.

Figura 1: Se muestran los 12 Figura 2: Se mezcló con SSP


tubos de ensayo en la gradilla. esteril el agua de acuario

Figura 4: Se envuelve con


Figura 3: Se ensambló el vaso de
papel debidamente rotulado
la licuadora.

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RESULTADOS
- De los 9 tubos solo pudimos observar que en uno de los tubos con dilución de
10-1 caldo Brila había más del 20% con gas en la campana Durham.

Figura 05. 3 tubos de 10-1


- Seguidamente debimos de volver a incubar a 45°C por 24 horas más para
determinar si hay presencia de E. coli: tubo positivo repicar a dos tubos, uno con
caldo Brila y el otro con caldo triptona., manteniendo la marcación con su
respectiva dilución.

Figura 06. Sembrado de un tubo de 10-1 en dos tubos (caldo Brila y otro
caldo Triptona).

- A las 24 horas observamos que no había presencia de gas ni cambio de color en


cada tubo.

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CONCLUSIONES
 En los resultados se observa que las unidades de formación de colonias va de
forma creciente en el siguiente modo: 10-3, 10-2, 10-1 de las disoluciones. Siendo
esta la forma correcta, porque se supone que el número es mayor de éstos es en
la disolución 10-1 por no tener más que una disolución, y el menor 10-3 por tener
varias disoluciones.
 Los resultados son los siguientes:
Disolución 10-1 (A, B, C) = 1 tubo con más de 20%
Disolución 10-2 (A, B, C) = 0
Disolución 10-3 (A, B, C) = 0
 El agua de acuario en la primera etapa hubo presencia de coliformes en un tubo
de ensayo con dilución 10-1 y en la segunda etapa ya no hay presencia en un tubo
de gas ni en el otro hay cambio de color al echar reactivo de kovacs, por lo tanto
solo hay presencia de coliformes pero no de E.coli

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RECOMENDACIONES
 Se rotula todos los materiales de vidrio a utilizar, para evitar equivocaciones y
saber cuál es cual.
 Todas las diluciones se trabajan con diferentes pipetas para que éstas tengan
diferentes cantidades.
 Todos los procedimientos se deben realizar cerca al mechero (ambiente estéril),
para así obtener resultados confiables.
 Desinfectar bien la mesa de trabajo con alcohol, cerrar todas las ventanas y lavar
nuestras manos para que ningún microorganismo exterior afecte nuestra prueba a
realizar.
 Al momento de realizar la prueba utilizar todos los materiales previamente
esterilizados.
 Cuando se estén realizando las pruebas seguir todos los procedimientos paso a
paso para luego obtener un efectivo y correcto resultado.

REFERENCIA BIBLIOGRÁFICA

 file:///C:/Users/pc/Downloads/619.pdf
 http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/Tecnic-Basicas-Coliformes-en-
placa_6528.pdf

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