MÉTODOS Y TECNICAS DE CULTIVO

Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y componentes que

crean las condiciones necesarias para el desarrollo de microorganismos.

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir las
siguientes condiciones (temperatura, grado de humedad, presión de oxígeno y acidez o
alcalinidad.

La gran mayoría de las bacterias patógenas requieren de nutrientes complejos en composición a

los líquidos orgánicos del cuerpo humano.

El agar es un elemento solidificante empleado para la preparación de medios de cultivo. En los

diferentes medios de cultivo se encuentran materiales de enriquecimiento como los siguientes:

1. Hidratos de carbono. Estos se adicionan para incrementar el valor nutritivo del medio y
para detectar reacciones de fermentación de los microorganismos que ayuden a
identificarlos.
2. El suero y la sangre completa. Estos se añaden para generar crecimiento de los
organismos menos resistentes.
3. Colorantes. Estos actúan como indicadores para llevar a cabo la detección de
microorganismos, por ejemplo la formación de ácido o como inhibidores de crecimiento
de unas bacterias y no de otras, es decir se utiliza rojo fenol se considera que va a actuar
en un pH básico y amarillo en un pH acido.

FACTORES DE CRECIMIENTO

Los factores de crecimiento son vitaminas, purinas, pirimidinas, aminoácidos. La mayoría de los
microorganismos son capaces de sintetizar estos compuestos pero en algunos casos es necesario
suministrarlos en el medio de cultivo.

TAREA (TIPOS DE BACTERIAS GRAM POSITIVAS Y GRAM NEGATIVAS)

PROPIEDADES PARA EL CULTIVO DE MICROORGANISMOS

1. Disponibilidad de nutrientes
2. Consistencia adecuada del medio
3. Presencia o ausencia de oxigeno
4. Condiciones adecuadas de humedad
5. pH
6. Temperatura
7. Esterilidad del medio

TIPOS DE MEDIO DE CULTIVO

1. Medios generales. Permiten el desarrollo de microorganismos y se trata de medios de

cultivo que no contienen agentes selectivos.
2. Medios de enriquecimiento. Son medios con nutrientes simples pero que además
contienen factores de crecimiento especiales como sangre o suero, estos medios de
cultivo son para microorganismos muy exigentes.
 3. Medios selectivos. Permite el crecimiento de determinados microorganismos e inhiben el
desarrollo de los demás pero no existen medios de cultivo que sean totalmente selectivos
para un microorganismo.
4. Medios diferenciales. Son aquellos que resaltan propiedades que contiene ciertos
microorganismos y de esa forma se puede distinguir de otros microorganismos que crecen
en el medio.

EJEMPLOS DE MEDIOS DE CULTIVO

--- EMB (Agar Levine Eosina Azul de Metileno)

Es un medio de cultivo selectivo y diferencial que se utiliza para diferenciar y aislar

enterobacterias. Se dividen en fermentadoras de lactosa con producción de ácido y en no
fermentadoras de lactosa.

a) Selectivo. Contiene agentes que inhiben las bacterias grampositivas y generando

crecimiento de las gramnegativas.
b) Diferencia. Contiene lactosa y dos colorantes, eosina y azul de metileno, las cuales van a
distinguir las bacterias fermentadoras de lactosa y las no fermentadoras. Creciendo tres
tipos de microorganismos:

1. Microorganismos que fermentan lactosa produciendo condiciones fuertemente

acidas por la producción de ácido en la fermentación. Se producen colonias de color
morado obscuro pero en la superficie se percibe un brillo verde metálico, esto sucede
por las condiciones de acides de los dos colorantes que interactúan y se precipitan
sobre la colonia.
2. Microorganismos que fermentan lactosa produciendo una moderada producción de
ácido. Generando colonias de color rosa.
3. Microorganismos que no fermentan lactosa. No se modifica el pH del medio por lo
tanto se producen colonias incoloras.

--- XLD (Agar Xukisa-Lisina-Dexoxicolato)

Es un medio selectivo y diferencial que se usa para aislar y diferenciar patógenos entéricos
especialmente Shigella.

a) Selectivo. Contienen desoxicolato sódico como agente selectivo que inhibe el crecimiento
de bacterias grampositivas.
b) Diferencial. Contiene tres azúcares, xilosa, lactosa y sacarosa, un aminoácido y un
indicador de pH y pueden crecer dos tipos de microorganismos:

1. Microorganismos que fermentan los azúcares. Se produce ácido por la fermentación

con el correspondiente viraje del indicador amarillo.
2. Microorganismos que no fermentan los azúcares y descarboxilan la lisina. La
descarboxilización produce una mina que alcaliniza el medio la cual hace que el
indicador vire a rosa, esto nos da lugar a colonias de color rosa o bien que haga que el
medio que lo rodea se vuelva completamente rosa.
--- Agar MacConkey. Es un medio selectivo y diferencial para aislar y diferenciar enterobacterias
las cuales son bacilos gram negativos aerobios facultativos.

a) Selectivo. El medio contiene sales biliares y cristales violetas que inhiben las bacterias
grampositivas.
b) Diferencial. Contiene lactosa y un indicador de pH y distingue dos tipos de
microorganismos.

1. Microorganismos que fermentan lactosa. Como producción de ácido dan colonias

de color rosa.
2. Microorganismos que no fermentan lactosa. Y producen colonias incoloras
aunque el medio cambie de color anaranjado.