Microbiología General

Pruebas Bioquímicas:
Óxido-Fermentación
INVESTIGACIÓN

Es una prueba que indica del tipo de metabolismo energético: respiratorio (O) o fermentador
(F). Se suele utilizar glucosa como sustrato. Se detecta la acumulación de ácidos con un
indicador ácido-base (azul de bromotimol). La bacteria se inocula con el hilo recto (por picadura
) y se incuba en condiciones de aerobiosis (sin parafina) y de anaerobiosis (con parafina, tubo
cerrado), simultáneamente.

Las bacterias que respiran aerobiamente crecen en la superficie del medio del tubo abierto.
Transforman la glucosa en CO2, la superficie del medio se verá ligeramente amarilla (por la
formación de ácido carbónico originado al reaccionar el CO2 con el agua del medio). En el tubo
cerrado el cultivo se mantiene azul-verdoso. Las bacterias fermentadoras producen ácidos a
partir de la glucosa. Viran el cultivo del tubo cerrado a amarillo; en el tubo abierto se inicia el
viraje en el fondo, pero transcurridas 24 horas los ácidos pueden difundir por todo el medio
virándolo a amarillo.

Las bacterias pueden utilizar los carbohidratos por la vía fermentativa o por la vía oxidativa. Las
bacterias anaerobias los fermentan; las facultativas pueden fermentarlos o degradarlos
oxidativamente; las aerobias estrictas sólo pueden oxidarlos.

Para detectar si las bacterias utilizan los carbohidratos por la vía oxidativa o fermentativa se
utiliza el agar OF, que contiene agar, peptona y azul de bromotimol como indicador de pH.
Inicialmente el medio es de color verde (pH 7,1) y vira a amarillo cuando el medio se acidifica
(pH de 6 a 7,6) producto de la fermentación u oxidación del carbohidrato.

Se inoculan los dos tubos con la bacteria por picadura y se mantiene a 37°C por 24 horas,
obteniéndose:
En el tubo sin aceite: La producción de ácidos débiles reduciría el ph del medio esto será
evidenciado gracias al indicador produciéndose una coloración amarilla en todo el tubo,
aunque puede variar su intensidad.

En el tubo con aceite: La fermentación de la glucosa produce ácidos fuertes respecto a los que
produce la vía oxidativa, ejemplo de estos ácidos son el ácido láctico, ácido fórmico, ácido
acético, entre otros. El medio se acidifica y el vire del indicador da como resultado una
coloración amarilla intensa en la totalidad del tubo.

PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

Se determina si la bacteria es capaz de fermentar un carbohidrato particular (producción de

ácidos acompañados o no de gases). Se aplica a bacterias con metabolismo fermentador,
ensayándose por separado diferentes carbohidratos.

La producción de ácidos se pone de manifiesto con un indicador ácido-base (púrpura de

bromocresol) y la de gases con una campanilla Durham (tubo cerrado por uno de sus extremos
que se coloca invertido en medio de cultivo).

HIPOTESIS

Determinar la actividad de una vía metabólica a partir de un sustrato (Oxigeno o Glucosa) que
se incorpora en el medio de cultivo, y que ma bacteria al crecer involucra o no. Se usa para
determinar la presencia o ausencia de enzimas.

MATERIALES

 Tubos de ensaye
 Asa bacteriológica
 Mechero bunsen
 Matraz Erlenmeyer
 Probeta
 Agua destilada
 Papel filtro
 Gasas
 Algodón
PROCEDIMIENTO
BIBLIOGRAFIA

 Biologia.edu.ar. (2017). Desinfectantes y antisépticos. [online] Available at:

http://www.biologia.edu.ar/microgeneral/micro-ianez/19_micro.html#oxi
 MAURER, I.M. (1969): A test for stability and long-term effectiveness in disinfectants.
Pharm. J. 203: 529-534.
 MYERS, T. (1988): Failing the test: germicides or use dilution technology ASM News 54:
1921
 Santiago Dionisio, M. (2000). Manual de prácticas de laboratorio de microbiología I y II.
1st ed. Universidad Autónoma de Guerrero
 Ugr.es. (2017). Agentes químicos. [online] Available at:
https://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/14agquimicos.htm
 FRANKLIN, T.J., G.A. SNOW (1989): Biochemistry of antimicrobial action (4th edition).
Chapman and Hall, Londres. Para los contenidos del presente tema, se recomienda el
capítulo 3