Laboratorio de biología molecular Pedro Córdoba, Gustavo Larriva, Bryan Boga

Grupo 2 B

Informe práctica 3: Extracción de ADN genómico bacteriano

Introducción

La información genética se encuentra almacenada en una molécula de ácido

desoxirribonucleico o ADN. En las bacterias, además del material cromosómico, muchas
bacterias cuentan con ADN extracromosómico, que al igual que el genoma central que es
circular, este lleva consigo información que no es esencial o fundamental para la vida, pero le
aporta funciones o características que le pueden resultar útil. Al igual que cualquier otra
molécula de ADN, se encuentra compuesta por nucleótidos que se unen por enlaces
covalentes mediante enlaces fosfodiester entre los carbones 3’ y 5’ de la desoxirribosa.
Además, existe una estructura de grupos fosfatos y azúcares que forman el esqueleto del
ADN (Martínez, 2015).

En la actualidad el estudio de la información genética nos permite entender y analizar

la diversidad genética, explicar patrones y procesos, distinción entre individuos y muchas
otras aplicaciones más. La primera parte del estudio genético comienza con la extracción del
ADN que va a ser usado como muestra; es necesario que el ADN que va a ser usado como
muestra sea puro e íntegro. La extracción del ADN consiste en el aislamiento y purificación
del ADN que va a ser usado. Una característica del ADN que puede ser útil para su
extracción es que tiene una carga parcialmente negativa, debido a que los grupos fosfatos
tienden a repelerse y en una solución acuosa se puede crear una capa hidrante en donde los
grupos fosfatos quedan expuestos (Alejos, Aragón y Cornejo, 2014). También se utilizan
solventes orgánicos para separar al ADN de las proteínas para que cuando se suspenda en la
fase acuosa se le pueda aislar mediante la precipitación con etanol. En sí, se pueden definir 5
etapas: la homogeneización de los tejidos, la lisis celular, separación de proteínas, la
precipitación y redisolución del ADN (Bioted, 2012).

Desde los últimos años se ha comenzado a usar kits o combos de extracción. En estos
kits de extracción vienen incorporados que tienen compuestos inorgánicos cargados
positivamente que tienen la capacidad de retener pedazos de ADN y separarlos del resto de
compuestos. Además de esto, estos kits vienen con compuestos que realizan el proceso de
lisis, unión y lavado. La ventaja de estos kits es que disminuyen el tiempo necesario para la
extracción del ADN, el número de procesos y consecuentemente el trabajo necesario, y se
puede lograr una extracción de mayor pureza en determinadas muestras (Alejos, Aragón y
Cornejo, 2014).

Resultados
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Gráfico 1. Muestra 1

Fuente: laboratorio de biología molecular, USFQ

Análisis del gráfico 1: en este gráfico se puede ver que existe un primer pico, y el más alto,
en los 226 nm lo que nos indica que podría tratarse de una contaminación. Además, se puede
ver que la curva se estabiliza por 243 nm hasta los 269 nm, esto podría representar a la
muestra original de ADN.

Gráfico 2. Muestra 2

Fuente: laboratorio de biología molecular, USFQ

Análisis del gráfico 2: al igual que en el anterior gráfico, se puede ver un pico a los 233 nm,
algo que podría indicar una contaminación. Igual se puede ver que la curva se estabiliza un
poco a los 256 a 269 nm; sin embargo, la estabilización es menor que en la muestra número 1
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Discusión

El ADN que se extrajo no es de buena calidad pues se encuentra contaminada, una

buena muestra se encuentra en un nivel de absorbancia de 260 nm/280 nm las cuales deben
presentar un valor de que este entre los 1,8 y la proporción de 260 nm/230 nm cuyo rango
debe estar entre los 2,0 a 2,2.(Puerta & Urreña, 2008). En nuestra muestras se encuentra un
valor de 1,56 y de 0,32, mientras que en la otra de 1,55 y 0,40, como se muestran en el
gráfico 1 y 2 respectivamente. Esto quiere decir que la muestra puede estar contaminada por
carbohidratos y fenoles, estas moléculas bloquean la luz que emana el espectrofotómetro
haciendo que mande los resultados que se obtuvieron, si hubiera existido solo ADN
hubiéramos tenido las medidas que se explicaron en un principio. (Barbas,2005)

Pudo haber existido errores al momento de realizar la práctica, como una mala
extracción del sobrenadante, por lo cual se pudo quedar residuos y por ello no se pudo
obtener un ADN de buena calidad (Barbas, 2005). Este ADN que se obtuvo no se puede
utilizar para los siguientes laboratorios que se realizaran, pues al estar contaminados no
podemos realizar de manera efectiva los procesos que debemos realizar posteriormente.

Bibliografía

Alejos, L., Aragón, M. y Cornejo, A. (2014), Extracción y purificación de ADN. Recuperado

el 22 de febrero del 2018, de:
http://www.publicaciones.inecc.gob.mx/libros/710/extraccion.pdf

Barbas, P. (2005). De la Biología molecular a la Biotecnología. México D.F.: Trillas S.A.

Bioted. (2012). Extracción ADN bacteriano. Recuperado el 22 de febrero del 2018, de:
http://bioted.es/protocolos/EXTRACCION-ADN-BACTERIANO.pdf

Martínez, L. (2015). Extracción de ADN. Recuperado el 22 de febrero del 2018, de:

http://genetica.uab.cat/base/documents/genetica_gen/Laura%20Mart%C3%ADnez%20Mart
%C3%ADn2015_4_19P21_19.pdf

Puerta , J., & Urreña, C. (2008). Prácticas de Biología Molecular. Madrid: Universidad
Javeriana.