Professional Documents
Culture Documents
Fisión Binaria
El crecimiento de una célula procariota continua hasta que se divide en dos células nuevas, mediante un
proceso denominado 'fisión binaria'. El tabique del cual la célula madre se divide en dos, se denomina
'septo' y se origina por crecimiento hacia adentro de la
membrana citoplasmática y la pared celular hacia direcciones
opuestas hasta que la célula se divide.
El tiempo necesario para completar un ciclo de crecimiento
depende de cada organismo y, a la vez, de diversos factores
tales como la nutrición y la genética. El control de la división
celular es un proceso complejo que parece estar ligado con
sucesos que ocurren durante la replica del cromosoma.
Una proteína clave que determina la forma en procariotas se denomina MreB. Esta proteína forma una
especie de citoesqueleto similar al de la actina en Bacteria y en Archaea. Las bacterias 'cocos' carecen
de MreB y de los genes que las codifican, lo cual sugiere que la forma bacteriana es, por 'default' ,
esférica.
Antes de la división celular, cuando una celula se alarga, se sintetiza una nueva pared celular, que debe
añadirse a la preexistente. En la zona del anillo de FtsZ, se abren pequeños huecos en la pared que son
creados por enzimas llamadas 'autolisinas', similares en función a la lisozima y están presentes en el
divisoma . El nuevo material se añade a través de estas aberturas. En la superficie de las Gram +, la
unión entre el antiguo péptidoglicano y el nuevo, forma un reborde.
Por ello, es crucial que el nuevo péptidoglicano se incorpore dentro
del preexistente ANTES de que se corten los enlacs de este último,
a fin de aasegurar que la presión de turgencia no haga estallar la
celula en un proceso de 'autolisis'.
Biosíntesis del Péptido glicano
Durante el crecimiento celular, la síntesis del nuevo péptidoglicano (PG) supone el corte controlado del
PG preexistente por las autolisinas y la inserción simultánea de precursores.
En este proceso, interviene una molécula transportadora de naturaleza lipídica, el bactoprenol. Éste, es
un alcohol muy hidrofóbico que se une a la unidad precursora del PG haciendo que sean lo
suficientemente hidrofóbicos como para atravesar la membrana. Una vez en el periplasma, el
bactoprenol conecta con enzimas que mete los precursores en el punto de crecimiento de la pared
celular y catalizan la formación de los enlaces glicosídicos.
Bactoprenol (undecaprenol fosfato) unido a unidad precursora de PG, ácido n-acetil murámico.
Transpeptidación
Crecimiento exponencial
En cada periodo fijo de tiempo , el número de células se duplica. Eso se denomina crecimiento
exponencial. Una característica del crecimiento exponencial, es que la velocidad de aumento de número
de células se incrementa con el tiempo. Es una progresión geométrica en base 2:
Parametros de crecimiento:
Tiempo de generación g = t/n (n se puede calcular, por ejemplo, midiendo el nº de celulas iniciales
y finales)
Mientras que g es una medida del tiempo que tarda una población en duplicar su número de células, k es
una medida del número de generaciones que ocurren en un cultivo, por unidad de tiempo.
Curva de crecimiento
-Fase de latencia: Es el periodo entre que se inocula un cultivo en un medio fresco, hasta que comienza a
reproducirse. Es el tiempo que le toma a los bichitos sintetizar los componentes que les falta para la
división celular.
-Fase exponencial: Cada célula se divide para formar dos. La velocidad de crecimiento esta influenciada
por condiciones tanto ambientales como genéticas propias del bichito.
-Fase estacionaria: Los cultivos se reproducen indefinidamente? NO! En general, todo se termina cuando
o bien se acaba algun nutriente esencial, o bien se acumula un producto de desecho inhibitorio.
Frecuentemente, pasan ambas cosas. No hay aumento ni disminución en el número de células. Es un
equilibrio dinámico.
-Fase de muerte: Luego de la fase estacionaria, si la incubación continua, las células empiezan a morir.
Recuento de células totales: Se puede determinar contando una muestra con el microscopio mediante el
método de recuento directo. Éste se puede hacer de dos formas, en muestras secas sobre porta o en
muestras líquidas, donde se emplean cámaras de recuento especiales (portas escavados modificados,
con cuadrados marcados de area conocida). Éste método, si bien directo y rápido, presenta ciertas
limitaciones: 1) no distingue células vivas de muertas , 2) las células pequeñas son difíciles de ver con el
microscopio y se pierden en el recuento, 3) la precision es difícil, 4) Se requiere de un microscopio de
contraste de fases cuando las muestras no se tiñen, 5) El método no es adecuado para baja densidad
celular, 6) las células móviles se deben inmovilizar antes del recuento.
Recuento de células viables: Una célula viable es aquella capaz de dividirse y dar lugar a descendencia.
Entonces, contar células viables implica culivar y contar colonias. Hay dos métodos: el de extensión en
placa (Lo que hicimos en el labo) y el de vertido en placa.
Fuentes de error: tamaño del inóculo, cuan adecuado es el medio y las condiciones de incubación y
duracion de la misma. Colonias muy pequeñas pueden pasar desapercibidas en el recuento. Además,
gupos de dos o tres células tambien dan origen a una colonia, por lo que se comete un error por
defecto. Lo que se expresa es 'unidades formadoras de colonias' en vez de 'células viables'.
Medidas indirectas del crecimiento microbiano
Turbidez: A mayor número de células, mayor turbidez. Se puede medir con un fotómetro o un
espectrofotómetro. Se debe realizar una curva de calibración.
Un cultivo continuo es un sistema abierto, con volumen constante, al que se añade continuamente
medio fresco y del que se retira continuamente medio usado con células a una velocidad constante
(cultivo en medio renovado). Una vez que se alcanza el equilibrio en el sistema, el número de células
permanece constante y se dice, entonces, que el sistema está en estado de equilibrio. Se realiza cuando
es deseable tener un cultivo estable en esas condiciones.
Son cuatro los factores ambientales a considerar, por su efecto sobre el crecimiento de los
microorganismos: temperatura, pH, disponibilidad de agua y oxígeno.
Al igual que con la temperatura, cada microorganismo crece en un rango de pH (en general, de entre 2 y
tres unidades) y normalmente posee un pH optimo bien definido. Se distinguen acidófilos y alcalófilos.
La disponibilidad del agua se expresa en términos físicos como la 'actividad de agua' a w , y es el cociente
entre la presión de vapor de una solución y la presión de vapor del agua pura a la misma temperatura.
En la mayoría de los casos, el citoplasma tiene una concentración de solutos mayor que el medio, por lo
que el agua tiene a entrar por ósmosis. Sin embargo, cuando una celula se encuentra en un medio con
concentracion salina alta (o, lo que es igual, baja actividad de agua) , hay una tendencia a que salga el
agua del citoplasma.
Los organismos que crecen bien en esas condiciones e incluso hasta dependen de concentraciones
salinas altas, se denominan 'halófilos'. (Les gusta) También están los que sólo se la bancan
('halotolerantes').
También existen organismos 'osmófilos' (afinidad por medios con alta concentración de azúcar) y
'xerófilos' (afinidad por medios muy secos)
Cómo hace una célula para crecer en medios con baja aw? Necesita incorporar más agua,
incrementando la concentración salina intracelular. Para ello, incorpora los llamados 'solutos
compatibles' , que son denominados asi porque no alteran el metabolismo celular. En algunos casos, el
rganismo los sintetiza.
Se distinguen 4 tipos de solutos compatibles:
-Tipo carbohidratos. (ej Sacarosa)
-Tipo aminoácidos (ej prolina)
-Tipo Alcohol (Tipo manitol)
-Otros (Propionato de DMSonio)
Todos se producen de manera lateral en la reducción de oxígeno a agua durante la respiración. Incluso
las flavoproteinas, quinonas, tioles y ferrosulfoproteinas tambien pueden generarlas.