Práctica N° 7

Métodos de siembra por aislamiento de

microorganismos

1. Introducción
Para efectuar el estudio de los microorganismos, se han diseñado diversos métodos
que permiten cultivarlos bajo condiciones artificiales, y manejar un solo tipo de
microorganismo. Cultivar un microorganismo significa promover intencionalmente el
desarrollo de éste en medios de cultivo y condiciones de laboratorio controladas.
Cuando éste contiene una sola especie de microorganismo, se denomina cultivo puro
o axénico y cuando contiene más de una especie de microorganismos, cultivo mixto.
Para efectuar el estudio de un organismo particular es necesario separarlo de la
población mixta en la que se encuentra. Para tal fin se emplean técnicas de
aislamiento que conduzcan a la obtención de un cultivo puro.

Existen diferentes técnicas de siembra: por suspensión de la muestra en medios

líquidos; por estría en la placa de Petri y tubos con medios solidificados en forma
inclinada; diseminación y por piquete en tubos con medios sólidos o semisólidos.
 2. Desarrollo experimental
I. Siembra de microorganismos en medio líquido
 Se cargó el asa de siembra circular con un inóculo de Escherichia coli y se procedió a
sumergirla en un tubo de 13x100 con caldo nutricio y se agitó ligeramente.

II. Siembra de microorganismos en medios sólidos

a. Siembra por estría
 Se cargó el asa de siembra circular con un inóculo de Escherichia coli y se procedió a
ejecutar movimientos en zigzag sobre la superficie de la placa de Petri con medio de
cultivo Agar MacConkey, girando la placa de 60 a 90 grados por estriado.

b. Siembra en medio en plano inclinado

 Se extrajo una pequeña muestra del microorganismo Staphylococcus sp. con el asa de
siembra en punta y se procedió a hacer el estriado sobre la superficie de un tubo de
13x100 con Agar Tripticasa de soya.

c. Siembra por diseminación

 Con una pipeta estéril, se depositó 0.1 mL de cultivo del microorganismo de Escherichia
coli en el centro de la placa de Petri con Agar Nutricio.
 Con una espátula de Drigalski, esterilizado con calor, se procedió a diseminar el inóculo
(esparcir por toda la superficie del medio de cultivo.

Figura N° 1: Extracción de muestra (lado izquierdo); depósito del inóculo (centro) y diseminación
(lado derecho).

3. Conclusiones
 En este laboratorio se aprendió a realizar los distintos tipos de siembra en los
cuales se aislaron los cultivos microbianos. Los resultados serán visualizados en la
práctica 8.
 El cultivo de microorganismos es una técnica que puede llevarse a cabo al
proporcionar al microorganismo un medio favorable para su crecimiento. Ello
significa que las nuevas células dispondrán de los nutrimientos necesarios para
emplearlos como materiales sintéticos, una fuente de energía y temperatura,
oxígeno y otros factores que sean adecuados.

4. Recomendaciones
 Siempre que se vaya a hacer el sembrado, hacerlo al lado del mechero (radio de
esterilización) para evitar algún tipo de contaminación de nuestra muestra.
 Al momento de realizar el sembrado por estría, tomar la última línea como punto
de partida para el nuevo estriado y evitar el cruce de más de 1 estría, con el fin de
obtener colonias aisladas.
 Al momento de insertar el asa de siembra, hacerlo superficialmente, mas no hasta
la base del tubo.
5. Cuestionario
a. ¿qué es una cepa pura? Investigue el nombre de tres instituciones que se
encarguen de vender cepas puras.
 Cepa pura:

Es una población de células de una sola especie, descendientes de una célula,

debido al interés en la conservación de sus cualidades definitorias. De una manera
más básica puede definirse como un conjunto de especies bacterianas que
comparten característica.

 Instituciones que venden cepas puras:

 ATCC (American
Type Culture
Collection)

 PROQUIFA

 Corning
 b. Menciones los cuidados para eliminar los riesgos de contaminación.
 Trabajar con las cepas entregadas por el profesor a cargo, cerca del
mechero (radio de esterilización).
 Trabajar siempre con guantes, para evitar contaminar los tubos o placas de
Petri con medios de cultivo.
 Esterilizar el asa siembra cada vez que inoculamos un microorganismo a un
medio.

c. Investigue la composición química de los medios Agar Tripticasa de soya, Agar

MacConkey y Baird Parker. Explique qué tipo de medios son con base en
composición y uso.

Medio Composición Tipo de medio

Utilidad Composición
Agar triptacasa de soya (TSA) Triptosa 15g Simple Sintético
Peptona 5g
Extracto de levadura 3g
Glucosa 5g
Cloruro de Sodio 5g
Agar 15g
Agua destilada 1000 ml

Agar MacConkey Peptona 17g Selectivo Sintético

Pluripeptona 3g
Lactosa 10g
Mezcla de sales biliares 1.5g
Cloruro de sodio 5g
Agar 13.5 g
Rojo neutro 0.03g
Cristal violeta 0.001g
Agua destilada 1000 ml

Agar Baird Parker Peptona 10g Diferencial Complejo

Extracto de carne 5g
Extracto de levadura 1g
Cloruro de litio 5g
Agar 17g
Glicina 12g
Piruvato de sodio 10g
Bibliografía

 García Gustavo, Gómez Guillermo, Velásquez Luis, Pineda Fabio, Saldarriaga

Yamillé; Manual de Laboratorio de Microbiología General; Medellín. Fecha de
consulta 24/9/17.
 García Martos P, Fernández del Barrio M. T, Paredes Salido F; Microbiología Clínica
Practica; 2 ed; [Internet]; Universidad Cadiz; 1994. Fecha de consulta 24/9/17 ;
Disponible en:
http://books.google.com.co/books?id=4N8qVKckrUUC&pg=PA59&lpg=PA59&dq=a
gar+nutritivo&source=bl&ots=MzpORnHtoh&sig=RJfj5PaPQnO8zC14atA0RYHJHtk
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