Practica No.

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Reacciones de identificación de carbohidratos

Introducción.

Los carbohidratos, glúcidos o azúcares constituyen una de las más importantes

clases de moléculas constituyentes de los organismos. Los carbohidratos son
derivados aldehídicos o cetónicos de alcoholes polioxidrilados y por lo tanto tienen
las propiedades características de esos grupos como son la formación de oxina e
hidrazonas. Existen diferentes tipos de reacciones químicas que sirven para
determinar cualitativamente la presencia de carbohidratos (monosacáridos,
disacáridos y polisacáridos) como son las siguientes:

a. Prueba de Molish: Se basa en la acción deshidratante e hidrolizante del ácido

sulfúrico concentrado sobre los carbohidratos. En esta prueba el ácido fuerte
cataliza la hidrólisis de cualquier enlace glucosídico presente en la muestra, y la
deshidratación del mismo a furfural (pentosas) e hidroximetil furfural (hexosas) de
los monosacáridos resultantes. Estos furfurales se condensan con naftol y dan un
producto colorado. Esta prueba sirve para la identificación de azúcares en general.
b. Prueba de Benedict (detecta la presencia de azúcares reductores) Se basa en la
reducción de Cu2+ a Cu+ en medio básico débil. Aunque es similar a la reacción de
Fehling, el medio básico débil y el estabilizante (citrato sódico) utilizados hacen que
este test sea más sensible y estable.
c. Prueba de Lugol: Se basa en la formación de un complejo entre el ion I3- y la
molécula de amilosa de almidón, la cual tiene una conformación helicoidal. Al
introducirse el ion I3- dentro de la hélice se forma una solución color azul o negra
dependiendo de la concentración. La amilopectina produce un color púrpura rojizo,
y el glucógeno un color pardo rojizo.
d. Prueba de Barfoed: Permite distinguir monosacáridos de disacáridos. Aquí el Cu2+
del reactivo (acetato cúprico en ácido acético diluido), es reducido a Cu2+ (Cu+) en
solución de ácido débil, en un tiempo de 5 a 7 minutos con los monosacáridos. Los
disacáridos reducen el ion Cu2+ en un tiempo de 7 a 12 minutos. El Cu2O es un
precipitado de color rojo. Es necesario realizar esta prueba en condiciones de pH y
de calentamiento fijas y estrictas.
Objetivo

Observar las propiedades químicas que se utilizan para la identificación de

diferentes tipos de carbohidratos

Materiales y Reactivos
- Glucosa - 20 tubos de ensaye 10 ml
- Galactosa - Gradilla
- Maltosa - 5 vasos de precipitado 50 ml
- Sacarosa - Mechero
- Almidón - Tela de asbesto
- Naftol - Tripie
- Etanol absoluto - 3 pipetas serológica 10 ml
- Citrato de sodio - 1 pipeta serológica 1 ml
- Na2CO3 anhídro - Piseta de agua destilada
- CuSO4 - Pinza para tubo de ensaye
- Reactivo de Lugol - Vidrio de reloj
- Acetato cúprico - Agitador de vidrio
- Ácido acético concentrado - Propipeta
- H2SO4 concentrado
- HCl 1 M
Preparación de reactivos
Reactivo de Molish:
Disolver 10 g de naftol en 100 ml de etanol al 95%
Reactivo de Benedict.
En 60 ml de agua disolver 17.3 g de citrato de Na y 10 g de Na2CO3 anhídro. Ésta
se añade lentamente y agitando a una solución de 1.73 g de CuSO 4 en 15ml de
agua y se afora todo a 100ml.

Reactivo de Lugol:
Moler y mezclar finamente en un mortero 50 g de yodo y 100 g de yoduro de potasio.
Disolver con agua destilada y aforar hasta un volumen de 1 litro.
Reactivo de Barfoed:
Disolver 13.3 g de acetato cúprico con 200 ml de agua y filtrar si es necesario, añadir
1.9 ml de ácido acético concentrado.
Metodología
• Prueba de Molish (identifica de azúcares en general)
1. Se numeran 7 tubos de ensaye
2. Se añade a cada tubo 1 ml de: agua (ensayo blanco), glucosa, galactosa,
maltosa, sacarosa, almidón y solución problema.
3. Adicione 5 gotas del reactivo de Molish y agite.
4. Incline cada tubo y deposite cuidadosamente por las paredes del tubo 2 ml
de ácido sulfúrico concentrado.
5. La aparición de un anillo rojo violeta en la interfase indica la presencia de
carbohidratos en la solución.

• Prueba de Benedict (detecta la presencia de azúcares reductores)

1. Se numeran 7 tubos de ensaye
2. Se añade a cada tubo 1 ml de: agua (ensayo blanco), glucosa, galactosa,
maltosa, sacarosa, almidón y solución problema.
3. Se añaden 2 ml de reactivo de Benedict a cada uno de ellos y se mezcla bien.
4. Se calientan en un baño de agua hirviendo durante 5 minutos.
5. Si la reacción es positiva aparece un precipitado rojizo, verde o amarillo

• Prueba de Lugol (detecta la presencia de almidón)

1. Se numeran 7 tubos de ensaye

2. Se añade a cada tubo 1 ml de: agua (ensayo blanco), glucosa, galactosa,
maltosa, sacarosa, almidón y solución problema.
3. Acidifique las muestras con 5 gotas de HCl 1 M.
4. Luego adicione 1 gota de lugol.
5. La aparición de un anillo rojo violeta en la interfase indica la presencia del
6. carbohidrato en la solución.

• Prueba de Barfoed (Permite distinguir monosacáridos de disacáridos)

1. Se numeran 7 tubos de ensaye

2. Coloque 2 ml de reactivo de Barford en cada tubo
3. Añade a cada tubo 1 ml de: agua (ensayo blanco), glucosa, galactosa,
maltosa, sacarosa, almidón y solución problema.
4. Se ponen en un baño hirviendo anotando el tiempo que tarda en aparecer un
precipitado amarillo-rojizo o rojo. Los monosacáridos dan la reacción con
mayor rapidez que los disacáridos.
Resultados
1. Resuma sus observaciones en una tabla e interprete los resultados

Soluciones Molish Benedict Lugol Barfoed

Agua
Glucosa
Galactosa
Maltosa
Sacarosa
Almidón
Solución
problema

2. Con la ayuda de la tabla anterior, identificar el azúcar problema.

Cuestionario.
1. Explicar por qué los azúcares empleados dan positivo o negativo en las
pruebas ensayadas.
2. ¿Cuándo se considera que un hidrato de carbono es reductor? Cita dos
ejemplos de monosacáridos y disacáridos reductores.
3. ¿Cuál es el reactivo que tradicionalmente (más común) se emplea para
saber si es reductor o no reductor?
4. Escribe la reacción química que sucede entre el reactivo de Molish y
uno de los carbohidratos que usaste.
5. Escribe la reacción química que sucede entre el reactivo de Barfoed y
uno de los carbohidratos que usaste.
6. ¿Qué reacción de las realizadas se podría utilizar para identificar
glucosa en orina?

Bibliografía
• Nelson, D. L. (2007) Lehninger: Principios de Bioquímica. Editorial Omega. 5ª
Edición.