¨DETECCION FENOTIPICA DE BETA-LACTAMASAS EN AISLADOS

CLINICOS DE ENTEROBACTERIAS PROVENIENTES DE PACIENTES

INGRESADOS EN EL HOSPITAL ¨JOSE ANTONIO VARGAS DURANTE
2015-2016¨

Objetivo General

Detectar fenotípicamente Beta-Lactamasas en aislados clínicos de enterobacterias

provenientes de pacientes ingresados en el Hospital “José Antonio Vargas” durante
2015-2016.

Objetivos Específicos

Determinar in vitro la prevalencia de muestras clínicas de pacientes ingresados en el

Hospital “José Antonio Vargas” con desarrollo bacteriano.

Identificar bioquímicamente las especies de enterobacterias causantes de infección

nosocomial.

Determinar in vitro la prevalencia de enterobacterias causantes de infección

nosocomial según el tipo de muestras analizadas y el área de hospitalización.

Determinar la sensibilidad de las Enterobacterias aisladas a antibióticos Beta-

Lactámicos, mediante la aplicación del método de difusión de Kirby Bauer.

Determinar fenotípicamente la presencia de Beta-lactamasas de Expectro Expandido

(BLEE), Beta-lactamasas de Tipo AmpC y Carbapenemasas en enterobacterias
causantes de infección en pacientes ingresados en el Hospital “José Antonio Vargas”,
mediante el método de difusión de Kirby Bauer aplicando la técnica de acercamiento
de discos de Jarlier.
 RESULTADOS

En el presente estudio se procesaron un total de 157 muestras biológicas con

el fin de determinar mecanismos de resistencia a antibióticos beta-lactámicos en
aislados de enterobacterias provenientes de pacientes ingresados en el hospital José
Antonio Vargas durante 2015-2016. Teniendo que en 89 de las muestras procesadas
se encontró aislamiento bacterianos; es decir, el 57% del total de las muestras
analizadas (Figura 9).

43%
CDB
SDB
57%

Figura 9. Distribución porcentual de muestras analizadas con y sin desarrollo

bacteriano de pacientes ingresados en el Hospital ¨José Antonio Vargas¨, durante
2015-2016.

(CDC: Con Desarrollo Bacteriano/SDB: Sin Desarrollo Bacteriano).

Del total de muestras con desarrollo bacteriano se pudo encontrar que el 74%
fueron aislados monobacterianos y solo un 26% presentaron aislamientos
polimicrobianos (Figura 10).
Figura 10. Distribución de aislados bacterianos por muestras analizadas de pacientes
ingresados en el Hospital ¨José Antonio Vargas¨, durante 2015-2016.

Al analizar los resultados obtenidos se obtuvo que del 100% de las muestras
con desarrollo bacteriano la distribución de bacterias aisladas fue la siguiente; 60%
fueron bacilos gram negativos fermentadores pertenecientes a especies de la familia
Enterobacteriaceae, 27.5% bacilos gram negativos no fermentadores y 12.5% de
cocos gram positivos (Figura 11).

Cocos Gram Positivos Bacilos Gram Negativos Bacilos Gram Negativo No Fermentador

12,5%
27,5%

60%

Figura 11. Distribución porcentual de bacterias aisladas en muestras provenientes de

pacientes ingresados en el Hospital ¨José Antonio Vargas¨, durante 2015-2016.
 La unidad de investigación estuvo representada por el 60% de bacilos gram
negativos fermentadores pertenecientes a especies de la familia Enterobacteriaceae,
aislados de muestras biológicas provenientes de pacientes ingresados en el hospital
José Antonio Vargas durante 2015-2016, en busca de la expresión de los diferentes
mecanismos enzimáticos de resistencia bacteriana a antibióticos betalactámicos.

Al realizar la diferenciación por género y especie de los microorganismos

causantes de infección se encontró que las enterobacterias aisladas con mayor
frecuencia fueron: Klebsiella pneumoniae presente en 21 de los aislamientos
obtenidos representando el 39%, seguido por Escherichia coli con un 37%, Klebsiella
ozaenae 6%, Proteus mirabilis 6%, Citrobacter freundii 4%, Complejo Pantoea
agglomerans 2%, Proteus vulgaris 2%, Providencia rettgeri 2%, Enterobacter
cloacae 1% y Enterobacter gergoviae 1% (Figura 12).

39%
37%

6% 6%
4%
2% 1% 1% 2% 2%

Figura 12. Distribución porcentual de enterobacterias aisladas en pacientes

ingresados en el Hospital ¨José Antonio Vargas¨, según género y especie.
 Al analizar los aislados con crecimiento de enterobacterias en pacientes
ingresados en los diferentes servicios de hospitalización del centro en estudio, se
pudo determinar que de las 47 muestras analizadas monobacterianas y
polimicrobianas; el 51% fueron muestras de secreción de herida quirúrgica, seguido
por secreción de escara y urocultivos con un 10,6% respectivamente, secreción de
absceso con un 8,5%, secreción endotraqueal 5,5%, hemocultivos y punta de catéter
con un 4,3% respectivamente y un 2,2% en secreción de escroto. De esta manera se
evidencio, que el mayor porcentaje de muestras con crecimiento de enterobacterias
fue en secreciones procedentes de heridas quirúrgicas (ver cuadro 4).

CUADRO 4. Distribución porcentual según tipo de muestras con aislamiento

de enterobacterias.

TIPO DE MUESTRA N° %
Secreción de Herida 24 51,0%
quirúrgica
Secreción Endotraqueal 4 5,5%
Secreción de Escara 5 10,6%
Hemocultivo 2 4,3%
Punta de catéter 2 4,3%
Urocultivo 5 10,6%
Secreción de absceso perianal 4 8,5%
Secreción de escroto 1 2,2%
Total 47 100%

El mayor porcentaje de bacterias gram negativas de la familia

Enterobacteriaceae aisladas durante 2015-2016 en el Hospital ¨José Antonio Vargas¨
por servicios de hospitalización fue el área de Cirugía General con un 53,7% de
aislamientos positivos, seguido de la Unidad de Cuidados Intensivos (U.C.I), con un
18,5%; Traumatología (T.R.M), con un 14,8 % ; Medicina Interna un 5,6% y
finalmente los servicios de Obstetricia-Ginecología, Neonatología, Observación
Adultos y Pediatría con un 1,85% para cada una de estas áreas de hospitalización
( Ver cuadro 5).

CUADRO 5. Distribución porcentual de los diferentes servicios de

hospitalización con aislamientos de microorganismos pertenecientes a la familia
Enterobacteriaceae en pacientes ingresados durante 2015-2016 en el Hospital ¨José
Antonio Vargas¨

Servicio de Hospitalización N° %
Cirugía 29 53,70%
Unidad de cuidados Intensivos 10 18,50%
Traumatología 8 14,80%
Medicina Interna 3 5,60%
Neonatología 1 1,85%
Obstetricia 1 1,85%
Observación Adultos 1 1,85%
Pediatría 1 1,85%
Total 54 100%

Al estudiar el patrón de sensibilidad a antibióticos de las Enterobacterias

aisladas (Figura 13) se pudo observar que la Amoxicilina/Acido clavulánico es el
antibiótico ante el cual estas bacterias presentaron mayor resistencia (n=35); seguido
por Ampicilina Sulbactam (n=33); Ceftriaxona (n= 25); Ceftaxidima (n=25);
Cefepime (n=19); de las Piperacilina (n=3). Corroborando así fenotípicamente la
expresión de betalactamasas de Expectro extendido en enterobacterias. Por otra parte,
se pudo apreciar una gran sensibilidad frente a los Carbapenemicos. Así, solo 2 cepas
fueron resistentes a Imipenem y Meropenem, sin expresar fenotípicamente la
producción de carbapenemasas.
 TZP

ME

IM

CAZ
RESISTENTE
FOX INTERMEDIO
CRO SENSIBLE

FEP

SAM

AMC

Figura 13. Distribución del patrón de sensibilidad, sensibilidad intermedia y

resistencia expresado por las Enterobacterias aisladas ante los distintos
antimicrobianos betalactámicos probados in vitro.

Al evaluar el patrón de sensibilidad a través del método de acercamiento de

disco de Jarlier, técnica fenotípica más utilizada en el laboratorio de microbiología
clínica para establecer la presencia de B-lactamasas en el 60% de los aislados de
enterobacterias, se encontró que el 28% presento mecanismos de resistencia de tipo
enzimático con la expresión de B –lactamasas (Figura 14).
 28%

72% Con Mecanismos de Resistencia

Sin Mecanismos de Resistencia

Figura 14. Distribución del porcentaje de enterobacterias portadoras de mecanismos

de resistencia de tipo enzimático en aislados de pacientes ingresados en el Hospital
¨José Antonio Vargas¨

De los mecanismos de resistencia determinados fenotípicamente en bacterias

pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae se encontró la expresión de B-
lactamasas de Expectro Extendido (BLEE) en una proporción del 24%, seguido por
un 4% de B-lactamasas de tipo AmpC (Figura 15). Igualmente se observó que del
100% de aislados con cepas productoras de B-lactamasas de Expectro extendido
Klebsiella pneumoniae expreso esta enzima en 47%, seguido por Escherichia coli con
un 40%, con respecto a la expresión de B-lactamasas de tipo AmpC encontramos a
Klebsiella ozaenae y Complejo Pantoea agglomerans con un 6,5% respectivamente
(Figura 16). La producción de β-lactamasas de espectro extendido (BLEE) es el
mecanismo más frecuente observado en bacilos Gram negativos resistentes a los
antibióticos β-lactámicos. Estas enzimas hidrolizan la unión amida del anillo β-
lactámico de las penicilinas, oximinocefalosporinas y los monobactámicos y son
inhibidas por el ácido clavulánico, sulbactam y tazobactam. Las AmpC son serin-
betalactamasas pertenecientes al grupo 1 según la clasificación de Bush-Jacoby-
Medeiros. Son también llamadas cefalosporinasas aunque su espectro de acción
hidrolítica no sólo incluya cefalosporinas.
 DISTRIBUCION MECANISMOS ENZIMATICOS
30.00%

25.00%

20.00%

15.00%

10.00%

5.00%

0.00%
BLEE AmpC

Figura 15. Distribución porcentual de la expresión de mecanismos de resistencia

asociados a los antibióticos β-lactámicos en enterobacterias aisladas en pacientes
ingresados en el Hospital ¨José Antonio Vargas¨.

AmpC BLEE

47%
40%

6.5% 6,5%

Complejo Escherichia coli Klebsiella Klebsiella

Pantoea pneumoniae ozaenae
agglomerans

Figura 16. Distribución porcentual de enterobacterias por género y especie

productoras de B-lactamasas detectadas en pacientes ingresados en el Hospital ¨José
Antonio Vargas¨.

Los especímenes de donde se asilaron los microorganismos BLEE reportados

fueron secreción de herida quirúrgica, secreción endotraqueal, secreción de escara,
hemocultivo, punta de catéter y urocultivo De los anteriores especímenes se destaca
secreción de herida quirúrgica como la muestra que presentó un mayor número de
aislamientos positivos para BLEE, así mismo se pudo observar que el mayor número
de estos aislados pertenecían a muestras del servicio de cirugía general; seguida por
muestras positivas aisladas del servicio de traumatología, siendo estos dos servicios
en donde se concentraron el mayor número de aislados productores de β-lactámasas
de Expectro extendido ( Ver figura 17).

5
4.5
4
3.5
3 CRG
2.5 UCI
2
TRM
1.5
1 M.I
0.5 NEONATO
0

Figura 17. Distribución de microorganismos BLEE según servicio y tipo de muestra

en pacientes ingresados en el Hospital ¨José Antonio Vargas¨.
(CRG: Cirugía; UCI: Unidad de cuidados intensivos; TRM: Traumatología; MI:
Medicina interna; NEONATO: Neonatología)
(S.H.Q: Secreción herida quirúrgica; S.E.T: secreción endotraqueal; S.E: secreción de
escara; Hemo: hemocultivo; P. catéter: punta de catéter; URO: Urocultivo)