Rodríguez Álvarez Alfonso Laboratorio de genética 22/02/2018

Resumen del artículo: Comparison of DNA extraction methods for meat analysis.
Burhanettin Yalçınkaya, Eylem Yumbul, Erkan Moziog˘lu, Muslum Akgoz

Los productos cárnicos son fuentes alimenticias para la mayoría de la población a nivel mundial y es
por esto que tanto autoridades como consumidores, demandan un productor de calidad.
Lamentablemente este tipo de alimentos tiende a ser adulterado lo cual ocasiona problemas de
salud, económicos y sociales. Para llevar a cabo el análisis de estos productos se han llevado a cabo
diferentes métodos analíticos pero todos estos han presentado desventajas tanto en tiempo como
en reproducibilidad y repetibilidad, por esto es que se intenta encontrar una alternativa utilizando
un análisis en base a DNA como PCR, hibridación de DNA y secuenciación de nucleótidos. Para llevar
a cabo estos métodos, es necesario llevar a cabo una extracción efectiva del DNA, para lo cual
existen kits comerciales que aunque presentan facilidades para la extracción, son métodos con un
alto costo y hay una dependencia hacia las compañías que los producen. Para evaluar su efectividad
se compararon entre sí.

Se obtuvieron muestras de carne de un mercado y se mezclaron y homogeneizaron con buffer

(10mM Tris, 1mM EDTA, pH 8.0). Posteriormente se centrifugaron y se llevó a cabo la extracción con
15 diferentes procesos entre los cuales se encontraban el método Tris-EDTA, método con bromuro
de hexadeciltrimetilamonio y el método de la sal, entre otros.

La integridad y cantidad de DNA extraído se examinó con electroforesis en gel. En base a los
resultados, la mayor cantidad de DNA se obtuvo con el método de la sal, a su vez el método de la
urea y de Qiagen también arrojaron resultados altos en comparación a los demás métodos. Los
métodos Alkaline, Genespin y GuSCN no presentaron bandas en el gel a diferencia del resto de los
métodos en que se pudieron observar bandas de DNA degradado. Para determinar la cantidad de
DNA se realizó un análisis espectroscópico de absorbancia y fluorescencia que arrojo resultados
entre 46 ± 7–401 ± 71 ng/lL, siendo el método de la urea el más alto seguido por el método de la
sal, método Wizard y GUSCN aunque posteriormente se utilizó Quant-iT para eliminar interferencias
y se obtuvo que el método de la sal fue el más alto en cuanto a concentración de DNA, esto
indicando una alta contaminación en los demás métodos. La pureza del DNA se determinó con
espectroscopia de absorbancia a 260, 280 y 230 nm y se los valores de los radios A260/280 se
encontraron en un rango 1.68 ± 0.13–1.98 ± 0.02 siendo los métodos TE y Alkaline los más bajos.
Finalmente se realizó un PCR para determinar la cantidad de DNA, mostrando que el método de la
sal fue el de más alta concentración y para analizar los inhibidores de PCR se realizó otro análisis
mostrando que el método Wizard, urea, TE y Alkaline mostraron la mayor inhibición.

Conclusión

El método de la sal, es el método más efectivo para la extracción de DNA en productos de carne
para su posterior análisis en PCR, ya que presenta ventajas en cuanto a facilidad, costo y
ambientales.

Bibliografía

Yalçınkaya, B., Yumbul, E., Mozioğlu, E., & Akgoz, M. (2017). Comparison of DNA extraction
methods for meat analysis. Food Chemistry, 221, 1253-1257. doi:10.1016/j.foodchem.2016.11.032