INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

Unidad Profesional Interdisciplinaria de

Ingeniería Campus Guanajuato
Ingeniería Biotecnológica

Ingeniería Celular
6BM1

Modelos morfológicamente estructurados

Campos Falcón Erick de Jesús, Carreón Delgado David Fernando,

Hernández Montesinos Itzel Yoali, Lara Pérez Elizabeth, Hector
 Modelos Morfologicamente
Estructurados
Son particularmente relevantes para la descripción de
crecimiento de hongos filamentosos, donde la
diferenciación celular tiene lugar en relación con la
extensión de la hifa.

En estos modelos, las células se dividen en un número

finito Q de estados celulares Z, y la conversión entre los
diferentes estados celulares se determina mediante una
secuencia de reacciones empíricas de metamorfosis.

2
 No se sabe por qué los hongos filamentosos se diferencian en células con un fenotipo
completamente diferente al de su origen. Por lo tanto, no es posible establecer modelos
mecanísticos detallados que describan estos cambios en la morfología, y deben usarse
reacciones de metamorfosis empírica.

La estequiometría de la reacción de metamorfosis está dada por relaciones muy simples:

Zq se usará para describir la quinta forma morfológica en sí misma y la fracción de masa

celular que es Zq. En la reacción de metamorfosis, una forma morfológica se convierte
espontáneamente a otra forma.

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 ∆ es una matriz estequiométrica. Se supone que las reacciones de
metamorfosis no implican ningún cambio en la masa total, y la
suma de todos los coeficientes estequiométricos en cada reacción
es, por lo tanto, igual a cero.

Para describir la velocidad de las reacciones de metamorfosis, se

introduce una velocidad de reacción hacia delante ui para la i-ésima
reacción, y las velocidades de todas las reacciones de
metamorfosis se recogen en el vector de velocidad u.

Cuando la tasa de crecimiento específico ha sido especificada para

cada forma morfológica, la tasa de crecimiento específico de la
biomasa total se da como una suma ponderada de las tasas de
crecimiento específicas de las diferentes formas morfológicas:

4
 La velocidad de formación de cada forma morfológica está determinada tanto por las
reacciones de metamorfosis como por las reacciones de crecimiento asociadas para
cada forma

El primer término explica la formación neta de la quinta forma morfológica por las
reacciones de metamorfosis (el vector ∆q especifica los coeficientes estequiométricos
para la quinta forma morfológica en todas las reacciones de metamorfosis) . El
segundo término explica el crecimiento de la quinta forma morfológica y el último
término explica la dilución debida al crecimiento de la biomasa.

5
 Ejemplo 7.8
Existe un modelo estructurado
morfológicamente que describe la
estabilidad del plásmido

Representa un obstáculo para la

aplicación comercial de
bacterias y hongos.

6
 ● Aumentando el número de copias del
plásmido.
● Diseñando el sistema del plásmido,
asegurando que las células libres de
plásmido no puedan sobrevivir.
Nota: El coeficiente estequiométrico δ
(parámetro de segregación) es la
probabilidad de formación de una célula
libre de plásmido tras el crecimiento de
una que si contiene plásmido.

El modelado de las estabilidad puede

hacerse usando modelos
estructurados morfológicamente

7
 Dado que no se forma ninguna masa
celular debido a la reacción de la
metamorfosis

8
 Balance de
células

Con plásmido Sin plásmido

La tasa específica de
crecimiento para el total
de masa está dado por:

9
 La fracción de células libres de plásmidos aumentará
continuamente debido a dos factores:

● Formación constante de células libres de plásmido a

partir de células que contienen plásmido
● Dado que las células libres de plásmido superarán a
las que contienen plásmido.

Se tiene un cultivo mixto dos

diferentes cepas de una misma
especie, es común en cultivos hongos
filamentosos, durante tiempos
prolongados.

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 Cultivos Oscilantes de Levadura

Período de maduración
Mitosis

Gemación Se prepara para la

Acumulación de división celular
carbohidratos Síntesis material genético
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 Modelos de Metabolismo Celular

c
Células hijas Células madre

Descripción de la
cinética de
Modelo Modelo
crecimiento global
morfológicamente estructurado
estructurado intracelularmente

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 Limitaciones Modelo
Estructurado
Intracelularmente

● Concentraciones de oxígeno
disuelto
Glucosa limitada ● Concentraciones de etanol
S. cerevisiae ● Concentraciones de glucosa
● Tasa de absorción de oxígeno
● Velocidad de evolución del
dióxido de carbono
● Variables intracelulares (NADH y
Oscilaciones DNA)
espontáneas de
13
muchas variables
 Cultivos Oscilantes de Levadura

Medición de CO2 y DOT Concentración de etanol (cuadrado) y

acetato (triángulo)
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 Hjortso y Nielsen (1994)
Oscilaciones
espontáneas

● Si la población puede dividirse en un

Cultivo número discreto de subpoblaciones.
sincrónico ● Si el tiempo de generación de una
subpoblación es un múltiplo entero
del tiempo de generación del otro.

Creación de una célula madre Proporción de células madre e

de una célula hija recién nacida hijas en la población

… Con n
15
 Relación entre en período de oscilación y el factor de dilución en
cultivo continuo

Sea m la población de células madre y d la población de células hija. Y de modo que en cada
generación se tienen nuevas células madre e hija

p es la probabilidad de que una

célula madre desarrolle una nueva
célula hija en t.

Cultivos crecen en forma

exponencial

16
 Todas las células madre comienzan
Hjortso y
a formar células hijas
Nielsen (1994)
inmediatamente

Duboc y von
El tiempo de oscilación será Stockar
inversamente proporcional a D (2000)

Si la población no consiste en un número finito de

subpoblaciones con reglas rigurosamente mantenidas para el
tiempo de generación, entonces todo el concepto de sincronía se
desmorona.
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 Crecimiento de microorganismos
filamentosos

Sistemas de Productores de
expresión enzimas industriales
eficientes
Productos finales de
alta calidad

Industria alimentaria

Descomposición de
alimentos

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 Células entrelazadas
Mecanismos de Germinación por filamentos largos
de una espora Formación de de ramificación
crecimiento
micelio conocidos como hifas

El crecimiento está Crecen sólo por

regulado por la sus puntas
generación de
protoplasma en las
puntas de las hifas
Número de puntas en el micelio

Variables morfológicas
características
También se puede definir en
Unidad de crecimiento de hifas: Relación relación a la masa total del
entre el tamaño del micelio y el número de micelio (llamada unidad de
puntas masa de crecimiento hifal).

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 Micelio densamente
Condiciones que
ramificado con un
favorecen el
diámetro de hifas
crecimiento rápido
grande.

Condiciones que no Micelio menos ramificado, y el

favorecen el diámetro de la hifa (de la cadena
crecimiento rápido central donde comienza el
crecimiento) es pequeño.

Enzimas líticas excretadas de las vacuolas

transportadas atacan el esqueleto microfibrilar
en la pared celular y la plastifican.

Incapaz de resistir la presión interna del

citoplasma, las microfibrillas se estiran y la
superficie de la pared aumenta.
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 La formación de un nuevo Describe todos los eventos que Para A. Nidulans, la duración del
septo se conoce como ciclo de conducen a la formación de un ciclo de duplicación de un nuevo
duplicación. nuevo compartimiento apical septo es idéntica al tiempo de
completo. duplicación de biomasa.

Para modelar la formación de

metabolitos secundarios,
que pueden estar
Mediante el uso de celdas de flujo determinados por la
continuo bajo un microscopio de análisis diferenciación celular.
de imágenes automatizado, es posible Se debe considerar la
seguir el crecimiento de elementos de estructura morfológica
hifas individuales y estudiar la cinética de Cuando el objetivo es una
crecimiento con gran detalle descripción de la morfología
de los elementos de las hifas.

No muchos modelos abordan el Normalmente se centran No es necesario considerar

mecanismo de crecimiento de en el metabolismo explícitamente la estructura
microorganismos filamentosos primario de las hifas

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 Modelo de Megee et. al (1970)
Primer modelo morfológicamente estructurado para hongos
filamentosos. Se usó para describir crecimiento y formación de producto
en Aspergillus awamori.

Considera 5 formas morfológicas:

▪ ZA: Compartimento apical en crecimiento activo.
▪ ZH: Compartimento subapical en crecimiento activo.
▪ ZC: Hifas desarrollando conidióforos
▪ ZB: Esporas negras
▪ ZM: Esporas maduras

Se describió el ciclo de vida de hongos imperfectos (hongos sin

reproducción sexual). El modelo incluye formación de producto
como resultado de los procesos de diferenciación.
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 Modelo de Nielsen (1993)
Derivado del modelo de Megee et. al. Se desprecian los parámetros de formación de
esporas:
El crecimiento activo, consumo de
▪ ZA: Células apicales sustrato y formación de biomasa ocurren
sólo en células apicales y subapicales
▪ ZS: Células subapicales
▪ ZH: Células de hifas
Cuando una punta se extiende, una célula apical se
convierte en subapical. Una nueva célula apical se
produce de material celular subapical cuando se forma
un punto de derivación en el compartimento subapical

Cuando las células subapicales se

vuelven vacuoladas cambian a células de
hifas activas

23
 Formulaciones matemáticas. Modelo de Nielsen

▪ 3 Reacciones de metamorfosis se describen en (1). Representan

derivación, crecimiento de puntas y diferenciación, respectivamente.
▪ La formación de hifas inactivas se asume como inhibida por las altas
concentraciones de sustrato.
▪ El modelo Monod describe el crecimiento de células apicales y
subapicales, donde S es la concentración de glucosa extracelular.
24
 Formulaciones matemáticas. Modelo de Nielsen
Velocidad específica de crecimiento de biomasa y balances de masa:

a1 es una constante fisiológica

Diámetro de hifa: determinada por el contenido
de agua y la densidad de la
hifa

25
 Formulaciones matemáticas. Modelo de Nielsen
Longitud de Unidad de Crecimiento de Hifas:
a2 es una constante fisiológica
determinada por la masa de
compartimento apical por
punta.

Velocidad de extensión de puntas

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 El modelo se comparó con datos experimentales para G. candidum

Las mediciones del diámetro de

hifa, volumen de la unidad de
crecimiento de hifas y la longitud de
la unidad de crecimiento de hifas en
un quimiostato de estado
estacionario se muestran como
funciones de la tasa de dilución D.
El diámetro de hifas aumenta con D
y desde la unidad de crecimiento de
hifas el volumen es
aproximadamente constante. lhgu
disminuye con la tasa de dilución.
Cuando la concentración de glucosa
disminuye, los elementos de hifas
se vuelven menos ramificados y
forman largas hifas.

27
 Se muestran las medidas
de la longitud total de la
hifa, el número de puntas y
la longitud de la unidad de
crecimiento de la hifa
durante el crecimiento de
una sola espora en un
medio sólido.

Se observa que la longitud total de la hifa aumenta exponencialmente, mientras que

hay una fase de retraso antes de que se forme el primer punto de derivación, es decir, el
número de puntas aumenta de uno a dos. Debido a la formación repentina de nuevas
puntas, la longitud de la unidad de crecimiento de hifas oscila hasta que el número de
puntas aumenta y se obtiene un valor casi constante para lhgu.
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