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Enfermedades Médicas
Prof. Titular: MV Graciela Alicia Mira
- Vet Brandi, G
- MV Esarte. M
- MV Fidanza, M
- MV Gabriele, C
- MV Gonzalez, A
- Vet Gonzalez, S
- Vet Juarez, M
- Vet Lódola, V
- Vet Mántica, F
- MV Maubecin, E
- Vet Micciullo, V
- MV Mira, G
- Vet Nosach, N
- Dra Pereira, M
- Vet Perez, M
- MV Pretti, R
- Vet Regonat, M
- MV Vartabedian. A
- Vet Vesco, C
TOMA DE MUESTRAS
MUESTRA DE SANGRE
Plasma
(pruebas de coagulació
coagulación)
Centrifugar 10´
10´a 1500rpm Centrifugar 10´
10´a 1500rpm
Plasma +
Suero Prot. coagulación
Elementos formes + Elementos formes
proteínas coagulación
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5 6
*trauma durante la toma de muestra, principalmente si se emplea una jeringa ya que puede
generarse turbulencia al extraer la sangre y provocar hemólisis
*agitación excesiva.
*acción de compuestos químicos (ácidos, álcalis alcohol).
*cambios en la presión osmótica.
*conservación de la sangre a altas temperaturas, antes o durante el transporte al laboratorio.
*la muestra de sangre se debe transferir a los tubos tan rápido como sea posible para evitar la
coagulación, desacoplando la aguja de la jeringa y expulsando el contenido suavemente.
*mantener la muestra refrigerada hasta su envío al laboratorio. Nunca congelarla
-Técnica:
1) se posiciona al animal de tal forma que se pueda trabajar en forma segura (tanto para el
propietario, animal, como el personal) y cómodamente. Colocar bozal.
2) preparar la piel del animal, la cual debe estar limpia, seca y libre de pelos. Colocar un
antiséptico local, de rutina se utiliza alcohol, el cual también ayuda a visualizar mejor la vena a
punzar.
Figura 3:
Extracción vena yugular
Vena cefálica
antibraquial
canino
-Conservación de la muestra: una vez que se ha obtenido la muestra, ésta debe ser
conservada en forma adecuada, ya que una incorrecta conservación alterará los valores
hematológicos y bioquímicos.
Para hematología: Lo ideal es que la muestra sea procesada lo antes posible, de no ser así
debe conservarse en la heladera (4º C) hasta el momento del procesamiento. Nunca debe
congelarse la muestra de sangre ya que esto produciría la crenación de los eritrocitos. Si se
confeccionaran frotis en el momento de la toma de muestra los mismos deben ser remitidos,
enfrentados de a 2 envueltos en papel y conservados a temperatura ambiente (Figura 5)
Figura 5:
Cuando existe la posibilidad de separar el suero de la muestra ésta puede ser conservada a
4ºC en heladera por 4 días, en el congelador por 1 semana y a menos temperatura (-15ºC, -
20ºC) por más tiempo.
Recordar que antes de comenzar a procesar la muestra esta debe ser llevada a temperatura
ambiente.
B - ORINA:
1) Toma de muestra:
Lo ideal es recolectar la primera orina de la mañana ya que es la que tiende a estar más
concentrada, pero en medicina veterinaria esto en general no se cumple
La muestra puede recolectarse de las siguientes formas:
-Cistocentesis (Figura 6): El animal puede ubicarse en decúbito esternal o en estación. Se
realiza la correcta antisepsia de la zona y se realiza la punción vesical (pudiendo hacerse en
forma ecoguiada ó no ) y se recolecta la orina. De esta forma se obtiene una muestra estéril ,
siendo ésta la forma ideal de obtener orina para cultivo . Puede a veces contener algo de
sangre proveniente de la lesión que genera la aguja sobre la pared de la vejiga. Para poder
realizarla, el paciente debe estar tranquilo y tener un volumen suficiente de orina en la vejiga.
Es el método que evita la presencia de contaminantes y células del tracto urinario bajo.
Figura 6:
PUNCION VESICAL
Sonda K33:
Perros chicos ó medianos
b) Sondaje uretral en canino hembra (Figura 8): Esta técnica es más complicada que en el caso
del macho, dado que el orificio uretral externo se encuentra en el piso de la vagina, por lo cual
se debe emplear un vaginoscopio y adecuada iluminación para visualizar el orificio.
Generalmente se utiliza una sonda K33 a la cual se le inserta un vástago metálico en la punta
para dar cierta resistencia a la misma y poder introducir con facilidad la punta de la sonda. Una
vez introducida el extremo de la sonda en el orificio uretral se retira el vástago metálico y sigue
introduciéndose la sonda hasta que comienza a fluir orina. Esta maniobra puede realizarse con
la perra en estación o en decúbito lateral.
Figura 8:
Orificio uretral
externo
c- Sondaje uretral en felino macho (Figura 9): para realizarlo debe exteriorizarse el pene y
utilizar una sonda PC 40 o una Tom Cat (que sirve para dejar fijada a la piel en caso de fludt).
Siempre debe trabajarse con sumo cuidado sobre todo ante la sospecha de una posible
obstrucción uretral, para no dañar la misma. Con respecto a la hembra felina el sondaje no se
utiliza.
Figura 9
PC 40
Sonda Tom Cat
-Micción espontánea: Se puede tomar la muestra directamente del suelo (previamente limpio)
o de la bandeja sanitaria (sin piedras) en el caso de los felinos La misma puede cubrirse con un
nylon donde el animal realizará la micción. Esta muestra normalmente contiene contaminantes
y bacterias del ambiente, por lo que no puede ser usada para cultivo. Es importante aclararle al
dueño que no recoja la orina del piso con un algodón, ya que los elementos del sedimento
quedarán retenidos en el mismo.
Esperar a que el animal esté por orinar y colocar un recipiente limpio recolectando la orina en
el tramo medio de la micción (chorro medio), así se reduce la cantidad de contaminantes y esta
muestra puede ser utilizada para cultivo.
3) Conservación:
La muestra una vez obtenida debe guardarse en la heladera hasta el momento de su
procesamiento (para evitar el sobrecrecimiento bacteriano que puede alterar algunos
parámetros de la muestra).
Cuando se va a procesar, debe llevarse a temperatura ambiente ya que el frio puede hacer
cristalizar algunas sustancias y pueden así aparecer cristales que no se observarán con la
orina temperatura ambiente.
Es ideal que la orina sea procesada dentro de las 24 hs de extraída para evitar cambios
químicos y citológicos.
C- MATERIA FECAL:
Para la realización de un buen estudio coproparasitológico, lo que se debe hacer es lo
siguiente:
Juntar dentro de un frasco conteniendo formol al 5% una pequeña porción de cada deposición
que realice el animal durante un período de 3 a 5 días. El formol 5% es uno de los fijadores más
usados en donde los huevos y quistes se conservan por tiempos prolongados.
Preparación del formol al 5%: se parte del formol al 40% (al cual se considera como 100%) y se
mezclan 5cc de formol al 40% con 95cc de agua de la canilla.
Utilizar un frasco de boca ancha y limpio. Es importante que el formol cubra la totalidad de la
materia fecal, ya que sino la muestra no cumple con las condiciones óptimas de conservación
produciendo errores en el resultado.
Deben tomarse varias muestras y en diferentes momentos del día ya que la eliminación de
huevos por materia fecal no se da en todas las deposiciones y puede variar el momento del día
en que son expulsados.
Rotular la muestra.
D- PUNCIÓN GANGLIONAR:
Todo linfonódulo que esté aumentado de tamaño o con su consistencia modificada debe ser
punzado.
Debe evaluarse, en primera instancia, que ganglios se van a punzar. Si varios ganglios
aparentan ser patológicos, se debera punzar por lo menos dos de ellos alejados entre sí.
Cuando el ganglio esté muy grande, será mejor elegir otro de menor tamaño, ya que
probablemente al estar tan aumentado la irrigación no llegue al centro del mismo y comiencen
a producirse fenómenos de necrosis en la zona central que pueden perturbar la lectura
citológica.
Se prefiere no elegir para punzar los ganglios submaxilares ya que normalmente al estar
relacionados con el drenaje linfático de la región de la boca puede obtenerse material
inflamatorio o hiperplásico, ya que muchos de los pacientes presentan infecciones o lesiones
en la cavidad orofaríngea.
Preparar el material a utilizar en forma previa: portaobjetos, agujas (25/8), jeringas (3ml, 5ml),
algodón,)
Colocar bozal y posicionar al animal según el área a punzar (estación, decúbito lateral, decúbito
esternal, etc), si el animal presenta mucho pelo, puede depilarse previamente el área.
Tomar firmemente el ganglio con una mano entre el dedo pulgar e índice y con la otra mano
sostener la jeringa acoplada a la aguja y punzar el ganglio (Figura 11). Una vez insertada la
aguja, mover el émbolo de la jeringa (aspirando) y mover la aguja en forma de abanico dentro
del ganglio. Esto garantiza una mayor proporción de células en el preparado.
Quitar la aguja, llenar la jeringa con aire, volver a colocar la aguja y expulsar el aire de la
jeringa empujando el émbolo, realizarlo apuntando el bisel de la aguja hacia un portaobjeto
apoyado en la mesa. Así las células que se obtuvieron de la punción aspiración serán
expulsadas desde dentro de la aguja hacia el portaobjeto. Con otro portaobjeto se extenderá el
material y se secará al aire. Esto se denomina PAAF (punción aspiración con aguja fina).
Figura 11:
1
2
3 4
En el caso de que el material obtenido sea sangre o esté contaminado con sangre, deberá
repetirse, ya que en el extendido el material sanguíneo nos dificultará el diagnóstico.
Otra opción es el PAF (punción con aguja fina sin aspiración). Solo se diferencia en que en
lugar de punzar con aguja más jeringa, sólo se punza con la aguja y se la mueve en forma de
abanico. Luego con una jeringa llena de aire se expulsa lo obtenido en la aguja sobre un
portaobjeto.
Una vez que el material está seco, se deber rotular y se puede o fijar y teñir o acondicionar
para su envío al laboratorio.
E- HISTOPATOLOGÍA
Los tres pilares sobre los que asienta un correcto diagnóstico histopatológico son la toma de
muestra, la fijación y el procesamiento de la misma.
1- Fijador utilizado: si bien no es el único, el más corriente es el Formol al 10%, que se
obtiene al agregarle a una parte de Formol al 40%, nueve de agua destilada. Aún no siendo el
mejor fijador, reúne ciertas condiciones tales como bajo precio, fácil preparación, gran poder de
penetración, endurecimiento rápido de los tejidos y conservación de los lípidos.
Lo ideal es usar el Formol bufferado al 10% en agua destilada para mejorar su
condición de fijador.
Existen también las mezclas fijadoras, ya que no hay un fijador ideal. Las más utilizadas son:
a- Líquido de Zenker, que es una mezcla de bicromato de potasio, cloruro de mercurio y
ácido acético, que resulta ser un buen fijador nuclear y citoplasmático.
b- Líquido de Helly, constituido por bicromato de potasio, cloruro de mercurio y formol.
c- Líquido de Bouin, que es una mezcla de ácido pícrico, formol y ácido acético, que es
un buen fijador citoplasmático.
2- Recipiente: pueden usarse bolsas o frascos. Los frascos deben ser de boca ancha, con
tapa a rosca y cierre hermético, preferentemente de plástico, para evitar las rupturas
accidentales.
En cuanto a las bolsas, se usan las de conservación de alimentos para freezer, las que vienen
en varios tamaños y son útiles para enviar piezas completas de gran volumen. Como
desventajas pueden mencionarse que el cierre de las mismas no es hermético y debe
asegurarse con tela adhesiva y también la poca estabilidad (equilibrio) que poseen.
3- Volumen del fijador: diez a veinte veces el de la muestra. Recordar que primero se
coloca el fijador y luego la muestra y no lo contrario, ya que debido a que el peso específico de
las muestras es mayor que el del fijador, estas van a depositarse en el fondo del recipiente ,
demorando la fijación en esa superficie de contacto. Una excepción a esto son las piezas que
contienen tejido adiposo que tienden a flotar en el formol, por lo que es imprescindible
colocarles encima una gasa o algodón a modo de pesa.
5- Sitio de la toma: es uno de los puntos más importantes, ya que la muestra tomada de un
sitio incorrecto proporcionará un diagnóstico erróneo, como por ejemplo el de tejido sin
anormalidades histopatológicas. Esto reviste particular importancia en el caso de biopsias
cutáneas donde lo más conveniente es tomar varias muestras con sacabocado.
Cuando la muestra es muy grande es conveniente tomar muestras del centro, bordes y
periferia, que incluya tejido normal para que en caso de neoplasias pueda conocerse el margen
de resección.
6- Duración de la fijación: el tiempo mínimo de fijación es de 24 horas, salvo para
muestras milimétricas que requieran urgencia en el diagnóstico donde el tiempo puede
reducirse a 12 horas.No existe un tiempo máximo de fijación en Formol, lo que se recomienda
es cambiar periódicamente el fijador si ha de conservarse la muestra por un tiempo
prolongado. Cabe recordar que no es necesario refrigerar las piezas que ya tienen un fijador.
7- Número de muestras: cada muestra debe ir en recipientes separados, si esto no es
posible habrá que identificarlas, por ejemplo con material de sutura por ejemplo : si fueran 3
muestras a una no se la identifica, a la otra se le coloca un punto y a la otra dos puntos y esto
se anota en el protocolo.
Toda muestra debe ser acompañada por un protocolo donde deben constar los siguientes
datos:
- Propietario
- Profesional solicitante
- Datos del animal : especie, raza, sexo, edad
- Sitio preciso de la toma: importante en ciertas neoplasias y también en enfermedades
inmunomediadas que tienen predilección por determinadas zonas anatómicas
- Fecha y hora de extracción: en el caso de la hora para aquellas muestras milimétricas cuyo
diagnóstico urge
- Fijador utilizado: recordar que el formol no es el único fijador. Prestar atención a la
concentración del mismo, ya que podrían estar en formol al 5 % en caso de emergencias
donde no se pudo disponer del fijador en la concentración adecuada.
- Breve reseña: tiempo de evolución, características macroscópicas, tratamientos realizados,
cirugías previas, etc.
- Diagnóstico presuntivo: es una forma de ver si hay correspondencia entre lo que se ve
clínicamente y los hallazgos histopatológicos.
Como corolario de lo expuesto hasta ahora el profesional actuante recibirá un informe donde
deben figurar:
- Descripción macroscópica de la o las muestras recibidas: esto tiene una doble importancia,
por un lado la descripción de las características visibles de las piezas y por otro la
correspondencia entre el número de muestras enviadas por el clínico o cirujano y el de las
procesadas por el patólogo (función de control).
- Descripción microscópica: de suma importancia en el caso de neoplasias donde
interesan datos como el grado de anaplasia celular, invasión vascular, infiltración de tejidos,
índice mitótico, grado de resección, etc.
- Diagnóstico histopatológico: constituye el punto final en la tarea del patólogo.
F- BACTERIOLOGIA
Las muestras destinadas a estudio bacteriológico pueden ser tomadas desde distintos tejidos o
cavidades.
Es importante saber cómo debemos tomar la muestra en cada situación para no cometer
errores y que finalmente el resultado del cultivo sea satisfactorio.
Todos los elementos que vayamos a utilizar deben ser estériles para no contaminar la muestra.
Si es posible, se deben obtener especímenes antes de la administración de antimicrobianos, o
esperar por lo menos 48hs después de la última dosis antes de recoger la misma.
La muestra debe tomarse del sitio donde se encuentre la infección, lo mas rápido posible en el
curso del proceso de la enfermedad, ya que a medida que esta progresa, se presenta necrosis
de tejidos y algunos de los microorganismos (m.o) causantes, pueden morir o ser
enmascarados por el crecimiento exagerado de otras bacterias.
Se debe obtener una cantidad adecuada de material y en caso de lesiones en varios sitios, que
sea de cada uno de los mismos.
Mantener al mínimo la contaminación posible de órganos, tejidos o secreciones adyacentes.
Es probable que algunos especímenes se contaminen con flora autóctona durante el proceso
de recolección. Se deben extremar los cuidados en el uso de técnicas antisépticas para reducir
la cantidad y probabilidad de contaminación. El éxito del diagnóstico bacteriológico estará
dado por la presencia en mayor número de m.o patógenos y el menor número de
contaminantes de la muestra obtenida.
Se necesitan dispositivos de recolección y sistemas de transporte apropiados para asegurar la
supervivencia del m.o patógeno y para un posterior aislamiento e identificación de dicho
germen. Los mismos pueden ser recipientes estériles, con cierre hermético, hisopos con medio
de transporte (Medio de Stuart, Cary-Blair) o hisopos embebidos en solución fisiológica estéril.
Es muy importante identificar correctamente los recipientes, adjuntando un protocolo con:
1. datos del paciente, si esta recibiendo alguna medicación y una breve anamnesis del
caso
2. tipo de muestra
3. forma de recolección.
colocar iodopovidona.
punzar con aguja acoplada a jeringa (en el caso de punzar la cavidad torácica deberá
utilizarse una llave de tres vías).
G- MICOLOGIA:
En micología, la toma de muestra difiere si se trata de micosis superficiales o profundas.
Micosis superficiales: cuando se toman muestras de pelos para cultivo de dermatofitos, se debe
limpiar, en especial la zona periférica, con alcohol 70%, esto permite reducir la recolección de
contaminantes bacterianos y fúngicos del medio ambiente.
El material se obtiene de la porción marginal mas activa de la lesión, raspando los bordes con
bisturí, arrancando pelos con el folículo piloso o con alicate en caso de tomar trozos de uñas
afectadas.
Estas muestras se remiten a temperatura ambiente en seco, en un sobre de papel, entre dos
portaobjetos o en un tubo estéril.
Micosis profundas: Generalmente se tratan de muestras de biopsias. Si fueran lesiones
abscedadas, fluidos o muestras de médula ósea, el material se obtiene por punción aspiración
previa desinfección de la zona, como ya fuera descripto anteriormente.
En el caso de búsqueda de micosis en muestras pulmonares, se puede realizar un lavado
bronquial o transtraqueal, o un cepillado bronquial.
TÉCNICAS HEMATOLÓGICAS
El hemograma es uno de los métodos complementarios más utilizados en la clínica veterinaria.
Consta de una serie de determinaciones, algunas de las cuales pueden realizarse con pocos
elementos en el consultorio (hematocrito, confección de frotis y tinciones), mientras que otros
deben ser realizados en el laboratorio (recuento leucocitario, dosaje de hemoglobina, índice de
reticulocitos)
Hemograma:
- Hematocrito
- Hemoglobina
- Indice de reticulocitos
- Recuento leucocitario
- Confección de frotis y tinciones
- Recuento absoluto de eosinófilos (RAE)
En el consultorio, con pocos elementos el clínico puede realizar algunas de las técnicas
incluídas en el hemograma (hematocrito, índice de reticulocitos, frotis sanguíneos) que pueden
permitirles una rápida aproximación diagnóstica a distintas patologías.
A) Hematocrito:
El VCA nos aporta en forma directa el porcentaje de eritrocitos circulantes y depende tanto de
la cantidad y tamaño de los glóbulos rojos como así también del volumen plasmático.
Con heparina: podemos tomar la muestra directamente del animal, ya sea del cono de
la aguja en la extracción o realizando una punción por ejemplo en oreja, almohadilla,
etc.
El MC se llena por capilaridad y luego debe sellarse el extremo que no fue utilizado para su
carga con plastilina o la llama de un mechero.
HEMATOCRITO
DATOS A OBTENER:
OBTENER:
EVALUACIONDEL PLASMA
MICROFILARIAS
CAPA FLOGISTICA
VOLUMEN CELULAR
AGLOMERADO
Capa flogística
Hepatozoon canis
2 3
1
4 5
Presencia de microfilarias:
Cuando los datos de la clínica hacen sospechar de un cuadro de filariasis, la búsqueda de
microfilarias puede hacerse colocando un microhematocrito al microscopio y focalizando la
zona del plasma en contacto con la capa flogística. Se ubica la capa a menor aumento (10x) y
luego deben visualizarse las microfilarias a mayor aumento (40x) donde en caso positivo se las
podrá ver en movimiento. Otra forma de visualizarlas es en el frotis teñido con Giemsa o
Tinción 15
Tubo de microhematocrito para
buscar microfilarias Microfilaria en frotis teñido
con Giemsa
10x
40x
Volumen celular aglomerado (VCA):
En los cachorros, al momento del nacimiento pueden observarse valores similares al de los adultos,
pero inmediatamente sufre un descenso normal, llegando a los valores expresados para cachorros,
el que suele comenzar a aumentar con la incorporación de dieta sólida, observándose ya entre los
8 y 10 meses de vida valores correspondientes a los adultos.
El valor del hematocrito depende tanto de la cantidad y tamaño de los eritrocitos, en relación al
plasma. Por lo tanto pueden observarse valores que superan los valores máximos normales en
casos de: Policitemia vera, o en casos en casos donde el volumen plasmático se encuentra
reducido (hemoconcentración, deshidratación).
La obtención de valores inferiores a los normales se observa en todas las anemias donde el valor
del hematocrito se utiliza como uno de los elementos para determinar los índices hematimétricos
que nos permitirán clasificar las anemias.
Valores de Referencia:
Caninos Adultos 37-55%
Caninos < 1año: 30-50%
Felinos Adultos y Cachorros 28-45%.
B) Hemoglobina:
Como en esencia toda la hemoglobina (Hb) está presente dentro de los eritrocitos, generalmente el
recuento eritrocitario, el hematocrito (Ht) y el contenido de hemoglobina son paralelos entre sí,
excepto en ciertas patologías donde existen alteraciones en la producción de hemoglobina.
El contenido de hemoglobina se determina por métodos colorimétricos cuya lectura se realiza con
un espectrofotómetro; el método mas utilizado es el de la CIANOMETAHEMOGLOBINA, donde el
reactivo de trabajo (FERROCIANURO) en combinación con la hemoglobina da una solución
coloreada, donde la intensidad del color resultante es proporcional a la concentración de
Hemoglobina. Se utilizan los siguientes volúmenes:
CONCENTRACION DE HEMOGLOBINA
CORPUSCULAR MEDIA
CHCM = Hb X 100 = %
Hto
•HIPOCROMICA
ANEMIA •NORMOCRONICA
•HIPERCROMICA
Recordar que los valores incrementados de CHCM (hipercromía) son sólo transitorios y se dan en
la anemia hemolítica inmunomediada con lisis extravascular, donde a nivel de los macrófagos se
produce el descarozado de los eritrocitos, los cuales no son lisados sino que vuelven a la
circulación con un tamaño menor (por la pérdida de parte de su membrana) pero con el contenido
normal del eritrocito. Este es el único caso en el que se puede hablar de hipercromía, pero debe
recordarse que estas células pierden la capacidad de modificar su forma y son rápidamente
lisadas.
En las muestras lipémicas no puede medirse la Hb ya que se produce un aumento por la turbidez
del plasma.
Los valores disminuídos de CHCM (tipocromía) suelen presentarse en los pacientes con anemia
regenerativa, en especial en aquellos con altos porcentajes de reticulocitos, los cuales no han
terminado aun de sintetizar Hb. También en los pacientes con deficiencia crónica de hierro suelen
observarse CHCM inferiores a los valores normales, dado que el hierro es un componente
fundamental de la molécula de Hb, por lo tanto en casos de déficit no se logra sintetizar la cantidad
de Hb necesaria para que el normoblasto ortocromático (última célula de la serie eritroide nucleada)
expulse el núcleo. Al retener el núcleo esta célula vuelve a dividirse (microcitos) y con menor
contenido de Hb (hipocromía)
C) Índice reticulocitario:
El reticulocito es el estadío previo al eritrocito maduro, el cual retiene material basófilo que se
observa como un reticulado intracelular, producto del precipitado de los ribosomas. La presencia
de reticulocitos en sangre periférica constituye un valioso elemento de pronóstico para diferenciar
las anemias regenerativas de aquellas arregenerativas. La cantidad de reticulocitos en sangre
aporta datos sobre la intensidad de la respuesta medular. La liberación de reticulocitos por parte de
la médula ósea tarda de 48 a 72hs desde el inicio del proceso. Es muy importante recordar que el
reticulocito es una célula que sigue madurando en sangre una vez extraída la misma, razón por lo
cual es fundamental que la misma sea remitida inmediatamente al laboratorio y que éste determine
el índice de reticulocitos dentro de las primeras horas ya que de lo contrario si el tiempo se excede,
muchos de los reticulocitos presentes en la muestra de sangre habrán madurado y se habrán
convertido en eritrocitos maduros alterando el valor real de dicho índice.
Técnica: Colocar 1 ó 2 gotas de sangre en un tubo de hemólisis y agregar la misma cantidad del
colorante. Incubar a Baño María a 37º durante 15´. Retirar del baño y hacer un frotis. Dejar secar y
mirar con inmersión contando la cantidad de reticulocitos que se encuentran en 500 glóbulos rojos.
Sacar el porcentaje
Cálculo:
1- Sacar el porcentaje de reticulocitos
3- Hacer la corrección en base a la vida media del reticulocitos, la cual está en relación con el Ht
del paciente. Cuanto más importante es el grado de anemia la médula ósea libera a sangre
reticulocitos que tienen una vida media más larga en circulación que aquellos que tienen un Ht
normal donde el reticulocitos tarda un dia en madurar
PERRO GATO
Ht vida x Ht vida x
45 1 35 1
35 1,5 25 1,5
25 2 15 2
15 2,5 10 2,5
Indice de reticulocitos (IR) = rec. Absoluto de reticulocitos
vida media s/ especie
D) Recuento de Leucocitos:
A diferencia de los hematíes los leucocitos no exhiben un lapso vital en la sangre sino que la
abandonan al azar en respuesta a estímulos quimiotácticos. Su producción y cinética depende de
las necesidades orgánicas como respuesta a ciertas noxas. Otras veces, su producción puede
estar alterada como en el caso de alteraciones neoplásicas de células precursoras. Por estos
motivos que es fundamental realizar una evaluación tanto del número total de leucocitos como la
evaluación de los distintos tipos presentes.
Para realizar el recuento de leucocitos totales se realiza una dilución 1:20 (20 µl de muestra y 380
µl de diluyente) con diluyentes como ácido acético glacial al 2% o ácido clorhídrico al 1%. Estos
diluyentes lisan los glóbulos rojos. Se debe esperar un minuto para realizar la carga. Previamente
debe pegarse el cubrecámaras sobre las barras laterales de la cámara y éste debe quedar firme
verificando la formación de los anillos de Newton. Se puede realizar la carga con pipeta o utilizando
un capilar de manera precisa y rápida, sin formación de burbujas y evitando el rebasamiento y se
espera que las células sedimenten para realizar la lectura.
Se deben leer a poco aumento (10x) los 2 cuadrantes opuestos si el conteo fuese mayor a 6000
glóbulos blancos o los cuatro cuadrantes si el conteo fuese menor.
La lectura de cada uno de los 16 cuadrados dentro del cuadrante se realiza de izquierda a derecha
y para evitar el conteo doble se cuentan las células que están en contacto con las líneas internas
superior e izquierda y no las células que contactan con las líneas internas inferior y derecha. Si en
el recuento se obtuviera una diferencia superior al 20% en cada cuadrante debe realizarse
nuevamente el procedimiento por la incorrecta distribución de células.
Recordar que en los recuentos muy altos (recuentos mayores a 80000 glóbulos blancos) debe
realizarse una dilución mayor de la muestra.
Las leucocitosis se presentan comúnmente como leucocitosis neutrofílica debido a que este tipo
celular es el predominante en sangre periférica en caninos y felinos. Se debe generalmente a la
respuesta medular en casos de tipo infecciosos, tóxicos, químicos y en respuestas a enfermedades
sistémicas.
Las leucopenias pueden deberse a la reducción total de leucocitos o como ocurre frecuentemente
a la disminución marcada de uno de los tipos celulares, generalmente neutrófilos, por ser las
células que se presentan en mayor cantidad. Esta es una respuesta común de observar en ciertas
enfermedades virales o como respuesta a aplasia medular sea medicamentosa , tóxica o por
neoplasias hematopoyéticas.
E) Frotis sanguíneo:
Para completar la evaluación de las células sanguíneas es necesario recurrir al examen del frotis
sanguíneo el cual nos aporta datos sobre los distintos elementos celulares:
Tinciones:
Las tinciones que se utilizan rutinariamente en hematología son del tipo de ROMANOWSKY que
están basadas en colorantes como el Azul de metileno y Eosina. Dos son las más utilizadas:
1) Metanol-Giemsa: una vez realizado el extendido se coloca en un recipiente con barras paralelas
y se fija durante 1´a 3´ con Metanol. Pasado ese tiempo se enjuaga con agua y se lo cubre con el
colorante de Giemsa el cual se prepara en una dilución 1:10 con agua corriente. Pasado ese
tiempo se enjuaga con agua, se deja secar y luego se observa al microscopio.
2) Tinción 15 (tinción rápida): el kit viene con 3 reactivos: un fijador, un colorante acidófilo y uno
basófilo. La tinción se realiza introduciendo en primer lugar 5 veces el preparado en el fijador, se
escurre perfectamente y se realizan 5 pasadas por el colorante aciódofilo, se vuelve a escurrir
minuciosamente (para evitar la contaminación de cada reactivo) y por último se hacen 5 pasadas
en el colorante basófilo. Al finalizar esta etapa debe lavarse con agua corriente, dejar secar y
observar al microscopio.
Una vez seco el preparado se procede a la lectura. El área de monocapa es el único lugar donde
debe realizarse la evaluación celular. Dos errores comunes en la lectura de los frotis de sangre
citológicos son intentar identificar las células de las áreas gruesas del frotis y las células dañadas.
En las áreas gruesas, las células están suspendidas de manera más derecha, de modo que cuando
se observa desde arriba la célula presenta un diámetro más pequeño y se colorea de manera
demasiado oscura para una evaluación apropiada. Todos los frotis presentan algunas células
dañadas con formas características de coloración distorsionada, que no deben ser tomadas en
cuenta.
Para realizar la evaluación primero se lee con objetivo de menor aumento (10x) para observar la
distribución celular, acúmulos celulares y/o plaquetarios. El recuento diferencial de leucocitos, las
características morfológicas y la presencia de cuerpos de inclusión, hemoparásitos y alteraciones
tóxicas leucocitarias se realiza utilizando el objetivo con aceite de inmersión (100x).
Para realizar un adecuado recuento diferencial leucocitario se lee en guarda griega de borde a
borde y empezando por la cola del frotis.
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En general se cuentan 100 leucocitos anotando los distintos tipos celulares. Si el recuento
leucocitario en cámara llega a ser alto lo ideal es hacer una lectura de 200 a 300 células.
IMPORTANTE: el recuento leucocitario relativo de cada uno de los tipos celulares SOLO sirve para
calcular el valor absoluto de cada tipo de leucocito. Para su cálculo (si es que el laboratorio no lo
expresa) debe sacarse haciendo una regla de tres: por ej: si el porcentaje de neutrófilos leidos en el
frotis es del 90% y el recuento leucocitario absoluto en cámara de Neubauer fue de 10000
leucocitos/mm3, el valor absoluto de neutrófilos de ese paciente será de 9000 neutrófilos/mm3. Es
este valor el que debe utilizarse para interpretar el cuadro leucocitario.
NUNCA DEFINIR SI HAY NEUTROPENIA O NEUTROFILIA (lo mismo para cualquier otro tipo de
leucocito) A PARTIR DE LA FÓRMULA LEUCOCITARIA RELATIVA YA QUE PUEDEN
COMETERSE ERRORES IMPORTANTES DE INTERPRETACION.-
Ej:
Fórmula leucocitaria relativa
NS: 90%
R.Leucocitario/mm3
Valor Referencia de NS en caninos: 3000-11500/mm3
Fórmula
Leucocitaria 18000 NS/mm3 9000 NS/mm3 2700 NS/mm3
Absoluta
Valores de referencia:
Caninos: 100 a 1250/mm3
Felinos: 0 a 1500/mm3
VALORES HEMATOLOGICOS DE REFERENCIA
Es el análisis clínico que nos permite identificar las distintas parasitosis ( helmintos y protozoos
del tracto gastrointestinal) que afectan a los animales domésticos
RECOLECCION DE MUESTRAS
Se recomienda la recolección seriada de una pequeña porción (tamaño de una uña) de cada una
de las deposiciones, durante 3 a 5 días seguidos, las cuales son colocadas en un mismo
recipiente, de boca ancha con cierre hermético, conteniendo la solución conservadora, respetando
las normas de bioseguridad.
Se deberá identificar correctamente el frasco y se enviará con su correspondiente protocolo.
Formol 5% es uno de los fijadores más usados en donde los huevos y quistes se conservan por
tiempos prolongados.
Preparación del formol al 5%: se parte del formol al 40% (al cual se considera como 100%) y se
mezclan 5cc de formol al 40% con 95cc de agua de la canilla.
EXAMEN COPROPARASITOLOGICO
1- Examen macroscópico
2- Examen microscópico
1) EXAMEN MACROSCOPICO:
Permite identificar a simple vista partes de parásitos, tales como proglótidos de cestodes y
formas adultas de nematodes.
Para realizarlo simplemente con la ayuda de una espátula vamos separando las distintas
porciones de materia fecal para poner en evidencia cualquier proglótido o parásito adulto que
pueda contener la misma
Parásitos adultos
Segmentos de tenias
2) EXAMEN MICROSCOPICO:
- Cuantitativos
- Cualitativos
-Métodos cualitativos: estos son los métodos de elección en pequeños animales. Pueden
dividirse en:
2- Métodos de enriquecimiento
Consiste en colocar directamente materia fecal en un portaobjetos (por ejemplo obtenida con el
termómetro en el momento de medir la temperatura corporal), diluyéndola con solución fisiológica
para una mejor observación. Colocar un cubreobjetos y mirar al microscopio.
Posee la ventaja de ser un método rápido y con un mínimo de equipamiento, pero el mismo es
impreciso ya que se debe tener en cuenta que la probabilidad de hallar formas parasitarias es muy
baja, y el resultado negativo no es concluyente.
2- MÉTODOS DE ENRIQUECIMIENTO
Son aquellos en los cuales se trata de concentrar en pequeños volúmenes la mayor cantidad de
huevos.
Hay dos métodos de enriquecimiento utilizados en medicina veterinaria:
a) Flotación
b) Sedimentación.
Estos métodos se basan en la diferente densidad o peso específico de los huevos, quistes y larvas
de los parásitos con respecto a la concentración de la solución diluyente utilizada.
a) FLOTACIÓN:
Estos métodos se caracterizan porque utilizan diluyentes que tienen mayor peso específico que los
huevos de parásitos, por lo tanto éstos tienden a flotar. Con estos métodos se pueden identificar
la mayoría de los huevos de helmintos, como así también quistes y ooquistes.
La mayoría de los huevos tienen un peso específico que oscila en los 1.100 a 1.200 , por lo tanto
las soluciones a emplear tienen que tener uno mayor . Existen distintas soluciones a emplear:
La solución azucarada tiene la ventaja de ser económica y no modificar la morfología de
los huevos.
La solución de cloruro de sodio es la menos deseada porque corroe los equipos de
laboratorio y forma cristales que deforman los huevos. No se puede alcanzar pesos específicos
mayores a 1.200, por lo tanto los huevos más pesados no flotan.
La solución de Sulfato de zinc es otro método que se puede utilizar aunque no es el que
utilizamos habitualmente en pequeños animales.
4 5
Solución de Benbrook
Azúcar.................454 g
Agua....................355 ml
Posee mayor eficiencia porque recupera mayor cantidad de huevos y quistes porque posee mayor
peso específico (p.e.1250)
Homogeneizar la materia fecal que viene en el frasco con Formol al 5% al mismo tiempo que
vamos buscando formas parasitarias macroscópicas. Paso siguiente se debe filtrar la materia
fecal con un colador de malla fina.
La porción que fue filtrada se la coloca en un tubo cónico y es centrifugada durante 5 minutos a
1500 rpm.
Una vez centrifugada la muestra se retiran los tubos de la centrífuga, descartando el sobrenadante
(al descartar el sobrenadante se eliminan deshechos de bajo peso específico) y reemplazándolo
con solución de Bembrook (solución saturada de azúcar en agua). Homogeneizar y
centrifugar nuevamente 5 minutos a 1500 r.p.m.
Se toma con un ansa una gota de la superficie y se la coloca entre porta y cubre para su
observación microscópica, primero a 10X y luego a 40X
1 2
3 4
5 6
7 8
Trichuris Coccidios
Ancylostoma 80u x 40u 10u x 15u
60u x 40u
b) SEDIMENTACIÓN
Estos métodos se caracterizan porque utilizan diluyentes que tienen menor peso específico que
los huevos de parásitos, por lo tanto éstos tienden a sedimentar.
- Sedimentación simple
Utiliza agua corriente como diluyente, dado que el peso específico del agua es 1000 por lo tanto al
tener los huevos de parásitos mayor peso tienden a sedimentar.
Dipilidium
150u x 200u
Tenias sp.
45u
- Método de Telleman
Este método es especialmente útil para poner en evidencia quistes de giardias
Reactivo de Telleman:
5gr. De cloruro de sodio
50 ml de formol 40%
950 ml de agua destilada
Técnica:
En un tubo de centrífuga se colocan:
3 ml de materia fecal mortereada y filtrada
4 ml de reactivo de Telleman
2 ml de éter sulfúrico
Se homogeiniza la muestra y luego se centrifuga por un minuto a 1500 r.p.m.
Se tira el sobrenadante y se toma una porción del culote de la muestra.
Se toma una pequeña muestra del sedimento y se coloca sobre un portaobjetos, al cual se le
agrega además una gota de lugol, el cual tiñe de un color amarronado a las giardias y permite
diferenciarlas de las levaduras las cuales no se tiñen con lugol.
Se observa a 40 X dado que las giardias son de muy pequeño tamaño (9x12u) lo cual hace que
sea imposible reconocerlas a menor aumento
1 2
3
4 5 6
7 8 9
10 11
METODO DE TELLEMAN:
Huevos de Giardias
I NTRODUCCIÓN
El análisis de orina es una de las herramientas de diagnóstico más importantes de las que se
dispone en la clínica de pequeños animales. Cuando se realiza correctamente, puede
proporcionar abundante información diagnóstica y ser utilizado para evaluar la respuesta al
tratamiento de las infecciones del tracto urinario inferior
Un análisis completo de orina consta de cuatro componentes principales:
Examen físico: color, transparencia/turbidez, densidad.
Examen químico: tiras reactivas, método de Heller.
Examen microscópico: sedimento.
Examen microbiológico: urocultivo.
1. Sin aditivos: Siempre que el tiempo de almacenamiento sea superior a los 30 minutos,
las muestras deben refrigerarse entre 2°C y 8°C. La muestra debe tornar temperatura
ambiente antes de ser procesada, dado que puede alterar datos de reacciones enzimáticas
tanto como la densidad (que es mayor en la orina fría)..
2. Con aditivos:.
a. Acido bórico al 1%, sólo es útil para cultivo y citología. Los resultados de pH y
densidad, no son válidos. También hay que tener presente que se pueden disolver los
cristales que precipitan en medios alcalinos como los de estruvita y uratos de amonio.
b. Formaldehído el cual impide el crecimiento bacteriano, ayudando a la
conservación del sedimento (1 gota de formalina concentrada por cada 30 ml de orina).
Esta forma de conservación permite tinciones histológicas como hematoxilina y eosina,
pero las tinciones Romanovsky no son recomendadas para las células así
conservadas.
EXAMEN FÍSICO DE LA ORINA
- Color
El color normal de la orina fresca es amarillo pálido o ámbar (resultado de los urocromos:
urobilina+urobilinógeno+péptido), pero como depende de otros factores, para la correcta
interpretación del análisis, debe observarse conjuntamente con el resto de los resultados
obtenidos en la muestra. Puede haber enfermedad con orinas de color normal, y el color
anormal puede ser un dato relativamente inespecífico.
Los pigmentos que interfieren en la orina normal son los urocromos (producto de la
degradación de la hemoglobina) y la urobilina (producto de la oxidación del urocromógeno,
incoloro, que contiene azufre).
La intensidad del color depende de otros factores: del volumen de orina recogida, de la
concentración de la misma y por lo tanto de la densidad urinaria de la muestra en cuestión.
Las causas de coloración anormal deben ser investigadas con pruebas de laboratorio
apropiadas y examen del sedimento. Estas alteraciones pueden provenir del alimento,
medicamentos, ambiente y de las técnicas de recolección.
Los colores más frecuentes que se presentan en la prática diaria son:
amarillo o ámbar: urocromos, urobilina
amarillo oscuro: alta concentración urinaria
azul: azul de metileno
verde: azul de metileno, cristaluria de uratos, ditiazanina.
rojo, rosa, marrón rojizo, rojo anaranjado, naranja: hematuria, hemoglobinuria, mioglobinuria,
porfirinuria, rojo congo, fenolsulfonftaleína (después de la alcalinización)
naranja amarillento: orina muy concentrada, exceso de urobilina, bilirrubina
amarillo-marrón, marrón verdoso: pigmentos biliares
marrón a negro: melanina, metahemoglobina, mioglobina, pigmentos biliares
marrón: metahemoglobina, melanina, heces (fístula rectourinaria)
incolora: orina muy diluida
blanco lechoso: lípidos, piuria, cristales
- Transparencia/turbidez
La orina normal tanto en perros como en gatos suele ser transparente, . Los cambios térmicos
y de pH pueden producir variaciones en la turbidez.
Según el grado de turbidez lo informaremos de la siguiente manera: límpido, ligeramente turbio,
turbio, intensamente turbio. Estos grados dependerán de la interferencia que nos brinde la
muestra al colocarle por detrás una hoja impresa.
- Densidad ()
La densidad es la proporción de la masa de una solución comparada con la masa de un
volumen igual de agua.
Si bien no mide directamente la cantidad de partículas de un soluto en una solución como la
osmolalidad, las dos determinaciones están relacionadas. La densidad es una prueba de
utilidad clínica porque indica el grado de resorción tubular y consecuentemente, la capacidad
renal de concentrar; la pérdida de la capacidad de concentración es uno de los primeros
signos de la enfermedad renal.
El valor diagnóstico de la densidad urinaria depende del estado hídrico del paciente.
Los Intervalos de referencia normales son:
Perro: 1025-1050
Gato: 1035-1060
El filtrado glomerular es un proceso físico y tiene una densidad de 1008-1012 (o sea la
densidad del plasma). Los riñones normales pueden producir orinas más o menos
concentradas lo que dependerá de la cantidad total de agua y solutos en el organismo. En
general la mayoría de los solutos nitrogenados se reabsorben, produciendo los valores
referenciales de densidad urinaria.
La concentración de distintas sustancias afecta la densidad en forma diferente. Las sales la
afectan considerablemente por su bajo peso molecular (PM) y el alto número de moléculas
presentes en solución, mientras que las proteínas son moléculas de mayor tamaño y presentes
en menor número, lo que hace que su efecto sobre la densidad sea menor.
Debemos considerar la ocurrencia de períodos cortos de deshidratación lo que puede generar
una concentración importante de la orina, con densidades en el orden de 1065 en el perro y
1080 en el gato. Estas situaciones son mucho más habituales que las de sobrehidratación
donde la densidad puede ser tan baja como 1001 en ambas especies.
En general se puede decir que existe una relación inversa entre el volumen urinario y la
densidad: a mayor volumen menor densidad y viceversa, Esto se cumple con una sola
excepción que se da en pacientes con diabetes mellitus, los cuales tienen micciones con
grandes volúmenes de orina pero la densidad urinaria es alta, esto se debe a que la molécula
de glucosa tiene una alta incidencia en la determinación de la densidad (Figura 1)
Figura 1:
1- Refractómetro: este instrumento mide el índice de refracción que sufre la luz el cual se
correlaciona con la densidad. Es el método más preciso (de los aquí mencionados) y requiere
una a dos gotas de orina. (Figura 3)
Figura 5:
- pH:
Es un parámetro muy importante que debe analizarse en la orina reciente. El pH indica la
acidez o alcalinidad de la orina. El rango total de pH es de O a 14 (ácido fuerte-base fuerte),
con 7 como valor neutro, siendo el rango observado en la clínica de perro y gatos algo más
acotado: -entre 4,5 y 8,5-.
Los Intervalos de referencia normales son:
Perro y gato: 5,5-7, si bien normalmente se encuentran entre 6 y 7 (con más frecuencia en
perros 6,5 y en gatos 6-6,5.
El pH es un reflejo grosero del estado ácido/base y está altamente relacionado con la dieta,
enfermedad y momento de la toma de muestra. Los carnívoros (alta ingesta proteica) tienen
orinas ácidas; con incrementos de alimentos de origen vegetal en la dieta (sales orgánicas) es
esperable una disminución de la acidez hasta una leve alcalinidad. También varía a lo largo del
día, siendo menor la acidez luego de comer (“marea alcalina”).
Si bien, el pH por si solo, no permite inferir un diagnóstico específico, colabora en la
orientación al proceso patológico concurrente.
El incremento de la acidez urinaria (pH < a 7) puede deberse a: inanición, fiebre, acidosis
metabólica o respiratoria, hipoxemia, shock, diarrea intensa, vómitos intensos (aciduria
paradójica), cetoacidosis diabética, azotemia grave ejercicio muscular intenso, intoxicación con
etilenglicol, dietas acidificantes o administración de drogas que contengan sales ácidas (como
NH4Cl). Mientras que el incremento de la alcalinidad (pH > a 7) se puede deber a: cistitis
bacteriana, retención urinaria, tendencia alcalina postprandial, alcalosis metabólicas o
respiratorias, vómitos, dietas bajas en proteínas y ricas en vegetales, acidosis tubular renal
(rara) o fármacos alcalinizantes. En el caso de orinas alcalinas la primer causa que debe ser
descartada es una mala conservación de la muestra. Recordar que la orina es un excelente
medio de cultivo, por lo cual si la muestra no es refrigerada hasta el momento de ser analizada,
las bacterias ureasa positivas contenidas en la orina se multiplican y desdoblan a la urea
presente en la muestra liberando amoníaco que alcaliniza el medio. El sedimento urinario es
fundamental para diferenciar una muestra con una conservación incorrecta de una con
infección urinaria, ya que si bien en ambas se observará un número muy importante de
bacterias, en la que no fue bien conservada no se detectará la presencia de leucocitos los
cuales nos indican la existencia de un proceso infeccioso.
- Proteínas:
Recordatorio fisiopatológico
El endotelio de los capilares glomerulares se caracteriza por presentar poros de un tamaño
aproximado de 70.000 daltons (Da) y estar recubierto por una sialoproteína con carga eléctrica
negativa. Esta estructura de la membrana filtrante determina que el pasaje de las proteínas
sea inversamente proporcional al tamaño, forma y carga eléctrica de las moléculas proteicas.
La Ig A, proteína de alto peso molecular, puede estar presente en la orina normal por que es
secretada por las células epiteliales del tracto urinario. Baja cantidad de albúmina, es filtrada y
parcialmente reabsorbida por las células tubulares en condiciones normales, constituyendo el
40 a 60 % de las proteínas de la orina. En contraste, las proteínas con PM < 70.000 Da luego
de filtrar libremente son totalmente reabsorbidas en forma activa (endocitosis) por las células
tubulares proximales (regresando a sangre como aminoácidos). Las células epiteliales del asa
de Henle, del túbulo distal y colector agregan una glicoproteína, denominada de Tamm Horsfall
o uromucoide a la orina en cantidades no detectadas (0,5 a 1 mg/dl).
La proteinuria se clasifica según su origen en:
a) Pre-renal
b) Posrenal
c) Renal
(1) Glomerular
(2) Tubular
(3) Benigna o funcional
- Cuantitativos
- Semicuantitativos
- Cuantitativos:
- Proteinuria de 24hs: este método muy utilizado en medicina humana no es
empleado en veterinaria debido a que resulta casi imposible recolectar la orina producida por
un canino o felino en las 24hs. Este método es reemplazado en medicina veterinaria por la
relación Proteina urinaria/creatinina urinaria: en caninos normales esta relación es < 0,3,
dudoso entre 03 – 0,5 y > a 0,5 es anormal. Esta relación permite establecer en que fase de la
enfermedad renal se encuentra el paciente, y hacer un control de la evolución de la respuesta
al tratamiento.
a- Técnica de Heller
Es una de las técnicas de precipitación de las proteínas urinaria por ácidos. Se trata de un
método semicuantitativo dado que el operador mide la cantidad de precipitado o turbidez,
subjetivamente, otorgándole valores entre 0 y 4. Debe realizarse en orinas límpidas o con el
sobrenadante para que la turbidez no interfiera con la interpretación.
Se coloca aproximadamente un 1 ml de ácido nítrico concentrado en un tubo de ensayo y luego
por las paredes del tubo inclinado se coloca 1ml de orina. Las proteínas forman un anillo
blanquecino y algodonoso en la interfase. , El espesor del halo da una idea subjetiva de la
cantidad de proteínas. Debe diferenciarse del halo blanco escamoso y refringente que
corresponde a la precipitación de cristales (y que no tienen valor diagnóstico). Este sencillo
método puede realizarse en el consultorio para tener una primera aproximación a la proteinuria
Figura 6:
Métodos para cuantificar la proteinuria
1) Mé
Métodos semicuantitativos:
semicuantitativos:
Acido nítrico
TIRAS REACTIVAS
Proteí
Proteína de Bence Jones
- Glucosa:
La glucosa es filtrada en el glomérulo y luego totalmente reabsorbida por las células tubulares,
por lo tanto no se la detecta en orinas normales. Aparece glucosuria cuando la glucosa en
sangre es superior al umbral renal, en los perros: 180 mg/dl y en los gatos: 290mg/dl (en los
gatos diabéticos podría ser menor, alrededor de los 200 mg/dl).
La glucosuria puede estar asociada a procesos:
- No patológicos: por ejemplo: excitación o stress en felinos o a la administración de soluciones
glucosazas.
- Patológicas: dentro de los mecanismos anormales asociados a proteinuria es muy importante
verificar si cursa con o sin hiperglucemia:
- Sin hiperglucemia: en este caso el problema primario radica en el riñón el cual no puede
reabsorber la glucosa que filtró por el glomérulo (necrosis tubular aguda, sindrome de Fanconi)
- Con hiperglucemia: la causa más importante y frecuente de glucosuria con hiperglucemia
es la Diabetes Mellitus, pero también se debe tener en cuenta el hiperadrenocorticismo y la
pancreatitis aguda.
Se mide con tiras reactivas, la mayoría de las mismas se basan en el método de glucosa
oxidasa. Es muy específico y sensible.
- Cuerpos cetónicos:
Los cuerpos cetónicos no deberían estar presentes en la orina de pacientes normales. La
excesiva formación de cetonas proviene de la oxidación acelerada de los ácidos grasos como
fuente de energía. Por lo tanto es posible encontrarlos en orinas de animales diabéticos con
descompensación metabólica, pero también en perros y gatos en estado de inanición o ayuno
prolongado.
Se mide con tiras reactivas, es más sensible para el ácido acetoacético y débilmente sensible
para la acetona, no reacciona con el ácido β-hidróxibutírico.
- Sangre:
Mediante la utilización de tiras reactivas podemos obtener una reacción positiva de distinta
intensidad, cuando tengamos en orina, hematuria (sangre entera), hemoglobinuria o bien
mioglobinuria (hemoglobina o mioglobina libres en orina).
Se puede establecer la diferencia entre presencia de glóbulos rojos o pigmentos con la
centrifugación de la muestra, donde dicho procedimiento permite la sedimentación de los
eritrocitos, mientras que los pigmentos no precipitarán (Figura 8)
Figura 8:
Sangre /Hemoglobina:
Hematuria Hemoglobinuria
Causas de hematuria pueden ser, patologías que asienten en cualquier punto del tracto urinario
como: inflamación, litiasis, traumas, neoplasias; patologías a nivel renal como: leptospirosis
aguda, parásitos (dioctophyma renale), necrosis tubular aguda, glomerulopatías, etc.
La hemoglobinuria estará presente cuando haya lisis de los glóbulos rojos, por lo tanto puede
acompañar a la hematuria. Patológicamente el proceso por el cual puede detectarse
hemoglobinura es la anemia hemolítica con lisis intravascular de los eritrocitos; recordar que en
condiciones normales la hemoglobina no filtra por el glomérulo dado a que circula unida a una
proteína de alto peso molecular (haptoglobina), pero en procesos de hemólisis intravascular la
destrucción masiva de los eritrocitos dentro de los vasos sanguíneos libera una excesiva
cantidad de hemoglobina, la cual satura la cantidad de haptoglobina circulante y ese exceso
que no puede ligarse a la proteína filtra por el glomérulo, siendo en parte reabsorbida a nivel
tubular, pero el exceso que no puede reabsorberse aparecerá en orina, dando positiva la
hemoglobinuria.
La presencia de mioglobina en sangre es consecuencia de la rabdomiólisis debida a isquemias,
traumatismos o toxemias.
- Bilirrubina:
La bilirrubina no conjugada o indirecta (según al reacción de Van den Bergh) circula unida a
albúmina y no es filtrada por el glomérulo. La bilirrubina conjugada (o directa), soluble en agua,
es la que aparece en orina. En perros sanos, y sobretodo machos, es posible detectar 1 o 2
cruces en orinas de ≥1020; mientras que en felinos, la bilirrubinuria es siempre patológica.
Estas diferencias entre las especies son debidas a que los caninos poseen sistemas
enzimáticos capaces de degradar la hemoglobina en las células tubulares renales y a esto se le
suma que los túbulos renales tiene un umbral resortivo reducido para la bilirrubina. Los felinos,
en cambio, carecen de tal capacidad y además la resorción tubular es 9 veces mayor (que en
los perros).
Las causas de bilirrubinuria pueden ser por cuadros de emaciación y fiebre, hemólisis
intravascular, pérdida de la función hepática, obstrucción del flujo biliar. Tener presente que los
metabolitos de la clorpromazina pueden dar falsos positivos, en cambio la presencia de niveles
elevados de ácido ascórbico o de nitritos (en casos de infección del tracto urinario), pueden dar
falsos negativos.
Se mide con las tiras reactivas mediante una reacción colorimétrica, que se basa en la
formación de una sal con la bilirrubina en un medio ácido.
- Urobilinógeno:
La bilirrubina conjugada que se excreta por el intestino, es convertida a urobilinógeno incoloro
por las bacterias anaerobias. Una pequeña porción (10- 15%) de este urobilinógeno, es
reabsorbida llegando al hígado a través de la vena porta; de esta, la mayoría es reexcretada en
la bilis, mientras que el resto (20% de lo reabsorbido) es lo que finalmente se elimina por orina.
Algunos autores consideran que esta determinación, carece de utilidad diagnóstica. El
urobilinógeno es muy inestable, oxidándose a urobilina en orinas expuestas a la luz dando un
resultado falso negativo, por lo que es muy importante que las muestras sean frescas, y por su
puesto, correctamente remitidas. Otras causas de su disminución en orina será la obstrucción
biliar, poliuria. Se puede hallar un incremento del mismo en orinas alcalinas (falso positivo), en
hemólisis intravascular, pérdida de la función hepática, también como incremento de la
fermentación bacteriana intestinal.
E XAMEN DEL SEDIMENTO URINARIO :
El sedimento en condiciones ideales debe ser observado dentro de los 30 minutos de obtenida
la muestra. De no ser posible, se recomienda que la misma sea refrigerada por un tiempo no
mayor a las 4 horas. Esto evitará los cambios producidos por las alteraciones de pH debido a la
pérdida de CO2, la proliferación bacteriana y la consecuente lisis de células y de cilindros, y la
disolución o precipitación de cristales.
A- CÉLULAS:
- Epiteliales
- Eritrocitos
- Leucocitos
- Neoplásicas
Células epiteliales renales: Son células pequeñas, redondas con un solo núcleo, algo más
grande que los leucocitos. Son difíciles de identificar, es más fácil hacerlo cuando se incorporan
a los cilindros epiteliales. Las células renales aumentan en nefritis intersticial aguda (pero
generalmente son poco reconocibles).
Figura 9:
Células escamosas ó Células transicionales Células renales Células pelvis renal
descamativas 20 -30u 10 -40u 20 -30u
50 – 60u
2- Eritrocitos:
La forma de los glóbulos rojos (GR) varía de acuerdo a la densidad de la orina. En orinas
frescas con una densidad de 1010 - 1020 se observan como células pequeñas (6 -7 u de
diámetro), de color amarillo pálido. En orinas muy concentradas los GR se crenan y se ven
con bordes erizados. En orinas muy diluidas o alcalinas los GR se hinchan, se lisan y liberan
la hemoglobina por lo cual aparecen incoloros viéndose como formas fantasmales.
Los GR deben diferenciarse de los glóbulos blancos, gotas de grasa y levaduras. Los eritrocitos
son más pequeños que los leucocitos y no poseen estructura interna. Los GR no varían de
tamaño, mientras que las gotas de grasa son de tamaños variables y normalmente se
encuentran justo por debajo del cubreobjetos. Las levaduras por lo general no se observan en
orinas frescas, pero cuando están presentes son de forma variada pueden encontrarse en
gemación.
El sedimento de orina contiene habitualmente menos de 2 - 3 eritrocitos por campo de mayor
aumento. Cuando superan ese número indican sangrado de alguna porción del tracto
urogenital.
3- Leucocitos:
Tienen dos veces el tamaño de los glóbulos rojos y son más pequeños que las células
epiteliales. Puede distinguirse el núcleo, pero generalmente está degenerado observándose
granulado (piocitos). Normalmente podemos encontrar de 0-1 por campo de 40x; más de 2-3
leucocitos indica inflamación en algún punto del tracto urinario o genital. La presencia de
glóbulos blancos no localiza la lesión, a menos que se observen cilindros leucocitarios que son
indicativos de origen renal. Cuando el número de glóbulos blancos es alto se recomienda
realizar el cultivo de la orina.
4- Células neoplásicas:
Son de forma y tamaño variables. Si se observa gran cantidad de células epiteliales con
diferentes formas y tamaños se deben hacer extendidos del sedimento, secarlos al aire,
teñirlos con tinciones hematológicas y luego observarlas al microscopio.
B- CILINDROS:
Se forman en la luz de los túbulos distales y colectores de los riñones , .La concentración
aumentada y la acidez de la orina en los túbulos promueven la precipitación de proteinas
secretadas a este nivel. Los cilindros se pueden clasificar de acuerdo a su contenido, lo que
puede ayudar a caracterizar el tipo de lesión renal.El tamaño está determinado por el diámetro
de la luz de los túbulos. Por ello, los cilindros formados en la luz de los colectores suelen ser
de mayor tamaño que los formados en el Asa de Henle o en los túbulos distales. Al ser
retenidos en los túbulos por un tiempo variable previo a su eliminación, las células y
estructuras que se les han adherido suelen encontrarse en proceso de desintegración.
El pH urinario y la densidad alteran la morfología de los cilindros, es por ello que son difíciles
de observar en orinas alcalinas. El procesamiento de la muestra también puede afectar el
diagnóstico de cilindruria puesto que una excesiva centrifugación puede destruir aquellos muy
frágiles y confundir sus fragmentos con cristales amorfos, los cuales generalmente son menos
cilíndricos más refráctiles.
Las orinas normales no contienen cilindros o los presentan en muy poca cantidad. Más de uno
por campo de 40x en orinas moderadamente concentradas, es un signo de localización de una
enfermedad renal activa.
La cantidad de los mismos no es indicativo de la gravedad, duración, reversibilidad o
irreversibilidad de la enfermedad. Un alto número siempre implica enfermedad renal activa
generalizada que puede ser reversible o no, no obstante, un número escaso de los mismos
puede representar enfermedad renal generalizada crónica.
Podemos encontrarlos ante una leve irritación renal, en cuadros febriles, ejercicio intenso o
perfusión renal escasa.
Teoría de la formación de los cilindros:
Las células epiteliales del Asa de Henle, túbulos contorneados distales y túbulos colectores
producen una mucoproteína llamada de Tamm Horsfald, la cual dadas las condiciones de
máxima acidez y concentración de la orina precipita en la luz de los túbulos conformando una
matriz mucoproteica sobre la cual se depositan distintos elementos que puedan estar presentes
en la luz tubular (leucocitos, células epiteliales, proteinas filtradas, etc) dando lugar a los
distintos tipos de cilindros presentes en la orina. (Figura 10)
Figura 10:
Formació
Formación de los Cilindros
Matriz mucoproteica secretada por las cé
células
epiteliales del Asa de Henle,
Henle, TCD y tubos colectores
PROTEINA DE TAMM-
TAMM-HORSFALL
Máxima acidez y A.Henle
concentració
concentración de T.C.D
orina T.Colect.
Proteí
Proteína precipita
C- MICROORGANISMOS:
Los microorganismos que con frecuencia se encuentran en la orina son bacterias , hongos y
levaduras . La orina normal está libre de microorganismos, pero puede contaminarse durante la
micción por contacto con la vagina, vulva o prepucio .
La orina normal recogida por cistocentesis o cateterización no contiene bacterias.
Las bacterias se registran como escasa , moderado o abundante cantidad. Un gran número de
bacterias acompañado por un número importante de leucocitos indica una infección del tracto
urinario o genital con inflamación .Cuando las bacterias se encuentran sin leucocitos
acompañantes se considera muestra contaminada ya sea por mal manejo en el método de
recolección de la orina o su mala conservación .
Bacterias: A mayor aumento las bacterias se ven como pequeños objetos que efectúan
movimientos verdaderos o movimientos brownianos. Tienen escasa importancia si la orina
se recolectó en forma séptica. Si se observa gran cantidad en orinas obtenidas por
cateterización, chorro medio o paracentesis, sugiere una infección bacteriana en alguna
parte del aparato urinario, generalmente en vejiga urinaria. También pueden observarse
bacterias por metritis, vaginitis o prostatitis.
Levaduras: Son estructuras redondas u ovoides de tamaño variable, más grandes que
bacterias pero más pequeñas que leucocitos, incoloras. Existen en la orina como
contaminantes.
Hongos: Hifas definidas, segmentadas y pueden estar coloreadas. Son contaminantes
frecuentes.
D- PARÁSITOS:
Los huevos de parásitos encontrados en el sedimento urinario , pueden ser parásitos que
afecten al sistema urinario o contaminación fecal de la muestra de orina. Pueden encontrarse
huevos de:
Dioctophyma renale
Capillaria plica
Dirofilaria immitis
Por contaminación con materia fecal pueden encontrarse Giardias y otros parásitos.
E- ESPERMATOZOIDES:
Son fácilmente reconocibles por su estructura característica y tienen poca significancia. La
presencia de estas células indica contaminación urinaria con semen y no es inusual encontrar
una pequeña cantidad de proteína en muestras de orina que contengan espermatozoides.
F- GRASA
Las gotas de grasa se ven redondas, altamente refringentes y de diferentes tamaños. Se tiñen
de naranja o rojo con el colorantes Sudan III.
En la mayoría de los gatos se encuentra cierto grado de lipuria, la cual puede deberse a la
metamorfosis de los túbulos renales.
Pueden estar presentes por obesidad, dieta rica en grasas, hipotiroidismo, diabetes mellitus
G- CRISTALES:
La mayoría de ellos no tiene significación diagnóstica. Su clasificación puede basarse en su
morfología, su solubilidad en álcalis ó ácidos, su solubilidad al calor, y más específicamente,
por pruebas químicas.
La refrigeración de la orina tiende a promover la formación de cristales, puesto que la
solubilidad de algunos tipos está estrechamente relacionada con la temperatura.
La evaluación de la cristaluria puede aportar datos que adhieran a:
- La detección de desórdenes predisponentes a la génesis de una urolitiasis.
- Estimación de la composición mineral de los urolitos.
- Evaluación de la efectividad de los protocolos médicos instaurados para disolver o prevenir
la urolitiasis.
Los cristales se forman en orinas que se han saturado con sustancias cristalogénicas.
Representan un factor de riesgo para la formación de urolitiasis, no obstante su detección no
es sinónimo de la misma, puesto que en pacientes con función renal normal son eliminados
antes de que adquieran un tamaño que implique daño patológico.
Los más comunes son: Acido úrico, Uratos amorfos y Oxalato de calcio .
Uratos amorfos: son similares a los fosfatos amorfos , aparecen como precipitado granular
pero los diferencia el pH
Cristales de Cistina: se los encuentra en orinas ácidas de animales con cistinuria debido a un
defecto metabólico en el transporte de la cistina y otros aminoácidos a través de los túbulos
renales. Poseen forma de platos planos hexagonales.
Los animales quedan propensos para el desarrollo de urolitos de cistina.
Cristales de Tirosina y Leucina: los cristales de tirosina aparecen como finas, refráctiles e
incoloras o amarillentas agujas agregadas. Los de leucina son esferas grandes con
estriaciones concéntricas. Son raros de hallar en orinas de perros y gatos. Ambos sólo se
observan en orinas patológicas asociadas a hepatopatías severas.
Carbonatos de calcio: se presentan en formas de esferas ovaladas con líneas que irradian
desde el centro y en forma de pesas de gimnasia .
Uratos ó biurato de amonio : son marrones y redondos con espículas largas , éstas pueden
romperse y verse pequeños cristales con líneas de radiación. Aparecen en los shunt porto
cava.
Figura 11:
Cristales que precipitan en orinas ACIDAS
Leucina
Tirosina
Cistina
Bilirrubina
Figura 12:
Biurato de
Carbonato calcio amonio
.
Cuadro que resume las características principales de las cristalurias:
Sulfonamidas Nefrosis