DETERMINACIÓN DE CONDICIONES DE CRECIMIENTO DE UN MICROORGANISMO Y CONTEO DE

COLONIAS
Curso de biotecnología
Ingeniería de Procesos
Universidad Mariana

1.2. Objetivo General

1.2.2. Realizar el conteo de colonias a través de la sembradura en placa, mediante la técnica de
estrías, con diluciones sucesivas de la muestra de microorganismos.
Introducción
Resumen
3. Materiales
Medio de cultivo líquido Caldo Nutritivo, Medio de cultivo sólido PDA (Potato Dextrosa Agar),
Tubos de ensayo esterilizado, Placas Petri esterilizadas, Asas de metal, Mechero, Guantes de
Nitrilo, Tapabocas, Alcohol 70% (v/v), Agua destilada, Pipetas de 1 – 10 ml, Gradilla para tubos de
ensayo, Papel filme.
4. Metodología
Determinación de condiciones de crecimiento de microorganismos 4.1.1. Esterilizar el asa en el
mechero hasta que se coloque de color rojo incandecente. 4.1.2. Tomar 1 ml de la solución madre
de cultivo microbiano de E. Coli y S. Aureus, 4.1.3. Diluir el volumen tomado en el paso anterior (1
ml) en 9 ml de agua destilada. 4.1.4. Con el asa esterilizada, retirar una cantidad de muestra (paso
4.1.2) y adicionarla al medio de cultivo de caldo nutritivo. 4.1.5. Tapar los tubos de ensayo con
papel filme y vedarlos con resortes elásticos. 4.1.6. Coloca los tubos de ensayo, con la boca hacia
arriba en la cámara de cultivo a 30 °C. 4.1.7. Verificar el crecimiento de forma visual, a las 24 h de
incubación. 4.2. Conteo de colonias 4.2.1. De la solución madre de microorganismos, tomar 1 ml
de cada una y diluirla en 9 ml de agua destilada. 4.2.2. Diluir el volumen tomado en el paso
anterior (1 ml) en 9 ml de agua destilada. 4.2.3. Repetir el paso 4.2.2 cinco veces hasta alcanzar
una dilución de 1x10-6 . 4.2.4. Para cada una de las soluciones obtenidas en el paso 4.2.3. inocular
en placa de medio PDA mediante la técnica de sembrado por estría. 4.2.4.1. Esterilizar el asa en el
mechero. 4.2.4.2. Con el asa esterilizada, tomar una muestra del cultivo de microorganismos, y
sembrarlo en placa mediante estriado, comenzando por la parte superior de la placa y siguiendo
en el sentido de las manecillas del reloj. 4.2.4.3. Vedar las placas de Petri con papel filme 4.2.4.4.
Colocar las placas de Petri invertidas en la estufa de cultivo a 30 °C. 4.2.4.5. Realizar el conteo de
unidades formadoras de colonia después de 24 h de crecimiento.

5. Análisis y resultados
El crecimiento microbiano es el incremento de número de células microbianas o aumento de masa
microbiana (Anónimo 2001). En este procedimiento se busca poner en evidencia la presencia de
microorganismos vivos el cual requieren al menos 24 horas de cultivo y como factor principal el
medio de cultivo.
Los microorganismos utilizados son E. Coli y Estafilococo, el medio de cultivo usado es PDA (Agar
de papa y dextrosa) y debe tener características específicas para que el microorganismo crezca de
forma adecuada.
 Formulación PDA
Infusión de papa 4g
Dextrosa (Dextrose) 20 g
Agar 15g
*4,0 g de extracto de papa es equivalente a 200 g de infusión de papas. pH Final: 5,6 ± 0,2 a 25°C

Anteriormente hubo inconvenientes con el PDA ya que su composición no fue la adecuada, eso trajo
como problema que el microorganismo no logro crecer.
Al realizar por segunda vez el laboratorio, con un medio de cultivo adecuado se realizó una dilución
decimal en 7 tubos de ensayo por cada tipo de microorganismo, para ello, se añade 1 ml de la
solución madre donde se encuentra la E.coli y Estafilococo a 9 ml de diluyente; es decir de cada 10
ml de esta dilución 1/10, 1 ml corresponde a la muestra. Expresándolo mediante una ecuación:

Donde se obtuvo los siguientes resultados:

AQUÍ VA EL DIBUJO

Tubo de ensayo #1 1*10^-1

Tubo de ensayo #2 1*10^-2
Tubo de ensayo #3 1*10^-3
Tubo de ensayo #4 1*10^-4
Tubo de ensayo #5 1*10^-5
Tubo de ensayo #6 1*10^-6
Tubo de ensayo #7 1*10^-7
https://ocw.ehu.eus/pluginfile.php/1654/mod_resource/content/1/Tema_1._Diluciones_y_conce
ntraciones.pdf

http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/U4b_MedicionCrecimiento_19837.pdf

http://www.biologia.edu.ar/microgeneral/micro-ianez/14_micro.htm#num