Genoma nuclear en plantas

.- Organizado en cromosomas discretos ,

descondensados en interfase,
condensados en metafase
.– Citogenética , clásica y molecular,
permite comprender estructura de
cromatina y su organización en entidades
discretas.

CITOGENÓMICA

ANÁLISIS DE LA ESTRUCTURA Y FUNCIÓN DEL GENOMA

DENTRO DE SUS COMPARTIMENTOS (CROMOSOMAS,
BANDAS DE HETEROCROMATINA, ETC.) ESTA “NUEVA
“CITOGENÉTICA COMBINA LOS CONOCIMIENTOS DE LA
BIOLOGIA MOLECULAR CON LA CITOGENÉTICA
TRADICIONAL PARA UN MEJOR CONOCIMIENTO DE LA
ESTRUCTURA Y MECANISMOS IMPLICADOS EN EL
FUNCIONAMIENTO DEL GENOMA .
 CITOGENÓMICA
ANÁLISIS DE LA ESTRUCTURA Y FUNCIÓN DEL GENOMA DENTRO DE
SUS COMPARTIMENTOS (CROMOSOMAS, BANDAS DE
HETEROCROMATINA, ETC.) ESTA “NUEVA “CITOGENÉTICA COMBINA
LOS CONOCIMIENTOS DE LA BIOLOGIA MOLECULAR CON LA
CITOGENÉTICA TRADICIONAL PARA UN MEJOR CONOCIMIENTO DE
LA ESTRUCTURA Y MECANISMOS IMPLICADOS EN EL
FUNCIONAMIENTO DEL GENOMA .

 Deducir número básico

 Parámetros cariotípicos.
 Comportamiento cromosómico (mitosis, meiosis).
 Identificación de cromosomas particulares (CSCDM
chromosome specific cytogenetic DNA marker), FISH de alta
resolución en paquitene.
 “Comparative chromosome painting” es una herramienta
 Mecanismos de aislamiento reproductivo postcigóticos
 Detección de zonas híbridas
 Formación de nuevas subespecies por hibridación e introgresión
 Modos de especiación preponderantes:
- híbrida homoploide
- híbrida poliploide
- por fijación de rearreglos cromosómicos

poderosa para estudiar la sintenia y la evolución cromosomica CAMBIOS DISPLOIDES

(microdisección).
 Conocer el impacto de la hibridación natural en la formación de
 “Comparative genome hybridization:origen y la estructura de los
COMPLEJOS HÍBRIDOS
genomas de híbridos y poliploides HOMOPLOIDES Y/O POLIPLOIDES

.-ANALIZAR DEL IMPACTO DE LOS REARREGLOS CROMOSÓMICOS

COMO EVENTOS ESPECIOGÉNICOS.
.- POSTULAR MODELOS DE ESPECIACIÓN CROMOSÓMICA E HÍBRIDA
HOMOPLOIDE Y POLIPLOIDE
 ANÁLISIS CITOGENÉTICOS( CLÁSICOS Y MOLECULARES ( ISH E INMUNOCITOGENÉTICA) Y SU
IMPORTANCIA EN PROYECTOS GENOMA

.-Análisis y conservación de la biodiversidad

.-Mejora genética
.- Organización y expresión de los genomas vegetales
.-Ingeniería genética

En especial las técnicas de citogenética molecular en vegetales permitieron resolver

.-la localización de secuencias específicas: mapeo y comparación de mapas físicos.

.-la identificación de cromosomas particulares,
.- el estudio del origen y la estructura de los genomas
de híbridos y poliploides,
.- la comparación de regiones genómicas homólogas,
.- el estudio del comportamiento cromosómico
.- el análisis de la expresión génica :relacion entre funcionalidad genómica , arquitectura
cromosomica y organización espacio temporal de las secuencias en el núcleo interfásico
.- Detección de transferencia al núcleo de genes de organelas ( mitocondrias,
cloroplastos), o secuencias virales.
.-analizar del impacto de los rearreglos cromosómicos como eventos especiogénicos.
.- postular modelos de especiacion cromosómica e híbrida ( homoploide y poliploide)
 Los cromosomas son guías de afinidades filogenéticas
e indicadores de las clasificaciones sistemáticas

 La división del ADN genómico en cromosomas independientes es una característica

fundamental de la arquitectura del genoma.

 El Nº cromosómico tiene una consecuencia genética y es que los genes están

ligados o segregan al azar en meiosis si están en distintos cromosomas .

 Los estudios de secuenciación no nos dicen nada del empaquetamiento de la 1R

5R cromatina ni de la organización tridimensional del núcleo y estos son tópicos
esenciales para comprender el genoma.
6R

3R
5R

Cariotipo: apariencia fenotípica de los cromosomas

Algunas características:
 Número básico (X), número gamético (N), número somático
 Tamaño absoluto de los cromosomas
 Tamaño relativo
 Número, tipo y posición de satélites
 Cantidad y distribución de heterocromatina
 Bandeos cromosómicos
 Contenido de ADN
 Localización mediante FISH de secuencias
 En Angiospermas se ha encontrado un amplio rango de variación independientemente del nivel de ploidía
(0,1-128 pg)

Diversidad intergenérica, interespecífica e intraespecífica.

Esta variación no está relacionada con la complejidad organísmica, ni es explicable por diferencias en el
número de genes funcionales

“PARADOJA” O “ENIGMA” DEL VALOR C

2x (0,7 pg)
Bulnesia sarmientoi
8x (2,9 pg)
Bulnesia
bonariensis

2x (4,5 pg)
Bulnesia retama

Arabidopsis thaliana Fritillaria assyriaca

125 Mb 120000 Mb

0.5 pg

 ¿Origen, Función y Significado?

 ¿Dirección-Distribución- Extensión ?
 ¿Beneficiosas Neutras o Deletereas a sus portadores?
 ¿Hay esterilidad si se cruzan taxa con diferencias en
heterocromatina?
 ¿La heterocromatina facilita la existencia de otras roturas?
128 pg  ¿ADN altamente repetido puede tener funciones regulatorias?
 PARADOJA DEL VALOR C - ENIGMA DEL VALOR C
El contenido de ADN es un carácter clave en Biología y Biodiversidad

Valor C: contenido de ADN de la gameta haploide no replicada

AA A 1 pg= 10-12gr
1Mb=10 6 pares de
AAAA AA nucleotidos
1pg= 965 Mb

Valor Cx: contenido de ADN del genoma básico AAAA A

 El valor C, en un contexto filogenético, permite analizar los mecanismos involucrados en la

evolución cromosómica.
 El tamaño del genoma permite predecir situaciones ya que muestra correlaciones a nivel celular
y organísmico, con características fenotípicas y fenológicas (v.g.: volumen cromosómico, tamaño
nuclear , diámetro del polen. Además en varios grupos esta relacionado con :período vegetativo,
características ecológicas, ambientales, y distribución geográfica fenologia, biomasa, sensibilidad de
crecimiento en condiciones variables tales como temperaturas elevadas o congelamiento

 Conservación de la biodiversidad :identificación de especies con grandes genomas y con mayor

riesgo de extinción.

 Es esperable que en varios grupos, durante una ola de extinción, aumente la proporción de
poliploides pero disminuya el contenido de ADN medio por genoma.
 TASA TAMAÑO COMPLEJIDAD TASA DE
METABOLICA CORPORAL ORGANISMICA DESARROLLO

TAMAÑO DIVISIÓN
CELULAR CELULAR

La diversidad en Angiospermas esta

TAMAÑO DEL asociada a variación en el número
cromosómico y tamaño del genoma
GENOMA
MUTACIONES DUPLICACIONES
CROMOSOMICAS

INSERCIONES ELEMENTOS
DELECIONES TRANSPONIBLES

OTROS
MECANISMOS
MOLECULARES
 Impactos Fenotípicos paralelos a la variación del tamaño del genoma en
plantas (Genome size and the phenotype)

Tamaño Celular
(Cromosomas/
Núcleo/célula)

Volumen cromosoma (14 angiospermas) Quiasmas, meiosis (6 angiospermas) Masa seca nuclear (6 angiospermas)

Tasa División Celular

(duración)

Genomas largos retrasan el proceso

de división = células grandes

Ciclo Corto Ciclo Largo

TAMAÑO DEL GENOMA POSEE CORRELATOS

FENOTÍPICOS ¿ESTÁN RELACIONADOS CON
AISLAMIENTO REPRODUCTIVO?

Polen y semillas
 EL TAMAÑO DEL GENOMA NO AUMENTA CON LA COMPLEJIDAD

Menor
Complejidad

Mayor Teosinte Maíz

Complejidad

CAUSAS DE LA VARIACIÓN EN EL TAMAÑO DEL GENOMA

FACTORES DE STRESS
Arabidopsis
(CITOPLASMATICOS, EXTERNOS, GENÓMICOS)
Human Una pequeña porción
Incremento .-Aumento en el número de copias de del genoma posee
secuencias repetidas (TE), dispersas o en genes funcionales
(Obesidad tandem Moss
Genómica) .-Poliploidía Rice
.-Cromosomas B
Tomato DNA repetido
Disminución .-Recombinación homóloga desigual Soy

Canola
Genomic DNA
Potato
Mb
3000 TE DNA
2500 Protein-coding
2000 DNA Grass
1500
a
1000 Corn
500 Genes
0 funcionales

Wheat
Feschotte & Pritham 2006
La cantidad de TE se relaciona positivamente
con el tamaño del genoma

 Incremento en Valor C
(Obesidad Genómica)
Cromosomas B
Aumento en el numero de
copias de secuencias
Repetidas (TE)

Poliploidia

Recombinacion homologa desigual

 Disminucion del Valor C
Recombinacion ilegitima

Se desconoce como se distribuye la variacion generada con los cromosomas y en

Que medida afecta su funcionalidad

VARIACION DEL CONTENIDO DE ADN POR

VARIACION DEL CONTENIDO DE ADN POR
AMPLIFICACION y/o DELECION DE
POLIPLOIDIA
SECUENCIAS REPETIDAS
CAUSAS DE LA VARIACIÓN EN EL TAMAÑO DEL
GENOMA
FACTORES DE STRESS (CITOPLASMATICOS, EXTERNOS, GENÓMICOS)

VARIACIÓN EN EL CONTENIDO DE ADN REPETIDO (Nivel diploide-

poliploide)

POLIMORFISMO / POLITIPISMO NUMÉRICO PARA CROMOSOMAS

ACCESORIOS, SUPERNUMERARIOS (B) (Nivel diploide o poliploide )

POLIPLOIDÍA
 Variacion Intra e interespecifica en el Contenido de ADN ( Valor C)
0.05 pg Cardamine amara 127.4 pg Fritillaria assyriaca
-Disperso ( a lo largo del cromosoma) ( elementos transponibles,
retroelementos).
-Repetido en tandem ( localizado en lugares particulares )
Variación ADN repetido ;Microsatélites( 2-5 pb rep.)
-Minisatélites (6-100 pb rep.) Satélite ( secuencias mayores, rDNA,
telómeros, centrómeros).

Arabidopsis Una pequeña porción

Human del genoma posee
genes funcionales
Moss
Rice
Tomato
Soy DNA repetido
Canola
Potato
Grass

Corn Genes
funcionales

Gonzalez y Poggio 2011 Wheat

Zea luxurians Maíz (Raza Amarillo Chico)
 TECNICAS DE BANDAS C, Ag-NOR, DAPI, CMA

El grado en el cual los motivos repetidos varían y su relación con la

función cromoómica deber ser analizado. Las secuencias de un particular
motivo pueden variar en Nº de copias y en secuencias.

De los motivos altamente repetidos ,algunos son muy conservados entre

especies. Otras secuencia repetidas son muy variables, aun entre
localidades.

El estudio de los motivos repetidos de ADN y su distribución

cromosómica en un contexto comparativo tiene gran potencial para
entender la evolución del genoma.

Variacion en
bandas C en el
género Zea
ADN ALTAMENTE REPETIDO
VARIACION INTRA ESPECIFICA BANDEO C
EN PLANTAS

BULNESIA TRITICALE
 DAPI en Centeno

7R
7R
7R
5R 3R
1R 1R
5R 3R
3R 6R
7R
6R 2R 4R 6R
2R 2R
4R 6R
1R 4R 3R
5R
5R
4R
2R 1R
A B

Individualización de los 7 pares de cromosomas (ambos cultivares

2n=14).
Heterocigosis: cromosoma 7R “Cultivar 1” (figura A); cromo
somas 1R y 5R “Cultivar 2” (figura B).
HETEROCROMATINA CONSTITUTIVA: ¿Tipo de secuencias?
 COMPORTAMIENTO MEIÓTICO EN HÍBRIDOS ENTRE PARENTALES CON
DIFERENTE TAMAÑO DEL GENOMA ¿Aislamiento reproductivo
postcigótico?

Paquitene
II heteromórfico

Z. mexicana
2C= 5-7 pg

II heteromórfico

Z. parviglumis
2C= 5-7 pg I de distinto tamaño

Z. mays
2C= 4-6 pg

Z. mays x Z. luxurians

Z. luxurians II heteromórfico
2C= 9 pg

Neocentrómeros
 SIGNIFICADO ADAPTATIVO DEL TAMAÑO DEL GENOMA
ADAPTIVE SIGNIFICANCE OF GENOME SIZE

-How is the C value related to ecogeographic characters

.-¿Como se relaciona el valor C con caracteres ecogeográficos (latitud,
altitud, temperatura, precipitaciones, etc); tiene significado
adaptativo?¿cuál es el rango de distribución espacial en localidades
ecológicamente contrastantes?
.- El contenido y el orden de los genes esta altamente conservado en grandes
grupos (ej. gramíneas), sin embargo hay gran divergencia en cantidad,
distribución y composición de ADN repetido
.-¿qué papel juegan estas secuencias en la biodiversidad?
.- ¿son importantes a nivel de expresión genica?
.- ¿pueden relacionarse con aislamiento reproductivo?
(latitude, altitude, temperature, precipitation, etc)? Do
such changes have adaptive significance?
.- Gene content and order are highly conserved in large
groups but there is high divergence in amount,
distribution and composition of repeated DNA sequences.
.- what is the role played by these sequences in
biodiversity?
.- are they important at the gene expression level?
.- are they related to reproductive isolation?
.-There is no consistent evidence that heterochromatin
differences affect meiosis of the hybrid, but they do
appear to facilitate the occurrence of other
rearrangements.

.-Fenómenos recurrentes de amplificación EL PORCENTAJE DE

podrían ser responsables de aislamiento HETEROCROMATINA
reproductivo (reengarce genómico y/o DISMINUYE CON LA
RAZAS DE MAIZ
incompatibilidad mecánica del genoma ). ALTITUD.
(NOA)
A-ADN esta 3000 msm
correlacionado
.-No hay pruebas definitorias que indiquen negativamente con
que las diferencias en heterocromatina afecten altitud de cultivo
la meiosis del híbrido, aunque puede facilitar
la ocurrencia de otros rearreglos . 100 msm
.-MAYOR CONTENIDO DE ADN EN LOS
CROMOSOMAS A
.-ALTO PORCENTAGE DE
HETEROCROMATINA
Poggio et al, 1998
 Valor 1C medio por género de la Familia Leguminosas Poggio, Gottlieb & Fortunato,

en realizacion.
OG
Bauhinia
Saraca
Tamarindus
0,75-1,1pg Gleditsia
0,5-1,1pg / Caesalpinia
1,48-2,94 pg Cassia
Parkinsonia
Peltophorum
Adenanthera
0,75-1,1pg / Prosopis
1,48-2,94 pg
Acacia
< 0,49-1,47pg Mimosa
Inga
Albizia
Crotalaria
Arachis
Dalbergia
Lonchocarpus
Millettia
Tephrosia
Cajanus
1,48- 2,94 pg
Dunbaria
Flemingia
Paracalyx
Rhynchosia
Psophocarpus
Pueraria
0,75-1,1pg Lablab
Phaseolus
Vigna
Robinia
Sesbania
Anthyllis
Lotus
Scorpiurus
0,5- 0,74 pg Colutea
Caragana
Hedysarum
Cicer
1,11- 1,47 pg
Medicago
L = 23 CI = 21 RI = 41 Melilotus
Trigonella
< 0,49 pg
0,5-0,74 pg
El valor C, en un contexto Trifolium
0,75-1,1 pg filogenético, permite analizar los Lens
1,11-1,47 pg
Vicia
mecanismos involucrados en la Lathyrus
1,48-2,94 pg >2,95 pg
Pisum
>2,95 pg evolución cromosómica.
Reconstrucción ambigua
Género con único registro
 EN ANGIOSPERMAS
Tamaño del genoma varía independientemente del número cromosómico.
BIDIRECCIONALES

La mayoría han experimentado

.-Ciclos de poliploidía
.-Expansión y disminución del genoma por movimiento de elementos retrotransponibles.

Soltis et al 2005
En árboles filogenéticos realizados en base a
datos moleculares:

Eventos comunes :
aumento del número cromosómico por
poliploidía y
disminución por rearreglos
(disploidía )

Genomas “grandes” es un carácter

derivado y en general, se encuentran en
grupos de distribución restringida (mayor
riesgo de extinción).
 Variación en la actividad de TE desencadena cambios rápidos en el
tamaño del genoma en gramíneas

~50 myr

~10 myr

4800 Mb
430 Mb 750 Mb 2500 Mb

TEs
BANDAS C

BANDAS DAPI-CMA

HETEROCROMATINA CONSTITUTIVA:
¿Tipo de secuencias?
 HIBRIDACION IN SITU

Marcó la transición entre la

citogenética clásica y la era de la
citogenética molecular

Dra. L. Poggio 2011

 Fundamento del FISH-GISH

Dra. L. Poggio 2011

 Dra. L. Poggio 2011

Pasos de la técnica
• Secuencias de ADN de una Preparación de los
extendidos cromosómicos
Preparación de la
especie son marcadas para sonda
generar una sonda.
• Los extendidos con cromosomas
son el “blanco” que se pondrá en
contacto con la sonda, ambos Desnaturalización del ADN de
cromosomas y sonda
desnaturalizados previamente.
• Las secuencias complementarias
de la sonda y del ADN de los
cromosomas hibridarán, en Hibridación
relación a su homología, en un
“sitio citológico”.
• Se realizan lavados posteriores a Lavados
esta hibridación a fin de remover
la sonda que no se unió.
• Detección de la hibridación y
visualización de la hibridación a Detección
través de fluorocromos.

Visualización
 .-EXTRACCION ADN TOTAL
.-AISLAMIENTO DE ADN SATELITE
.-CORTES CON ENZIMA DE RESTRICCION, ELUCION DE BANDAS
.-OBTENCION POR PCR A PARTIR DE ADN GENOMICO CON PRIMERS
OBTENCION ESPECIFICOS
.-SE COMPRAN SECUENCIAS ( MICROSATELITES)
.-OBTENIDAS POR MICRODISECCION O FLOW SORTING

Extracción de ADN genómico total Aislamiento de ADN plasmídico

A partir de tejidos vegetales jóvenes
(Maniatis et al., 1982), hojas, semillas,
etc.
A partir de cualquier tejido animal
(sanguineo)
Utilizando Kits de Extracción
específicos (Promega, Quiagen, etc.)
(Miniprep)
- Método de columnas y microcentrifugación.
Por Kits comerciales (Quia-Prep Kit , QuiaGen,
etc.)
Separación de la secuencia de interés con
enzimas de restricción.
Aislamiento y cuantificación de la secuencia
por elecroforesis en gel de agarosa.
Elusión del gel (por centrifugación y
microfiltrados con Kits comerciales)

Lisis celular
Suspension de proteínas y ADN
Extraccción de proteínas
Limpieza del ADN
Resuspensión
 ESTAS TECNICAS COMBINAN INFORMACION CITOLOGICA CLASICA CON INFORMACIÓN MOLECULAR DE LA
ESTRUCTURA DE LAS SECUENCIAS Y SE UTILIZAN CADA VEZ MAS
--LA GRAN DISPONIBILIDAD DE SECUENCIAS CLONADAS PARA UTILIZAR COMO SONDA

--POSIBILIDAD DE UTILIZAR ADN GENÓMICO TOTAL COMO SONDA ( GISH)

--MODERNOS SISTEMAS DE MARCACION Y DETECCION NO RADIOACTIVOS

.- ADN GENÓMICO
.-PLASMIDOS +ADN

.-AMPLIFICADAS POR PCR

.-ADN REPETIDO EN TANDEM ( 5S, 45 S, TELOMEROS,
CENTROMEROS)
.-ADN DISPERSO O INTERCALADO
(RETROTRANSPOSONES)
.-SECUENCIAS UNICAS O DE POCAS
SONDAS COPIAS ( PCR o clonadas)
.-SONDAS GENÒMICAS ( GISH)
SI LAS ENVIAN SECAS, CLONAR .-SONDAS CROMOSÓMICAS (microdisección)
SI LAS ENVIAN EN LB, CRECER Y
.-MICROSATELITES, RAPDS, AFLP, CLONADAS EN
MINIPREP
PLASMIDOS, BACs, YACs
HIBRIDACION IN SITU:
TECNICA QUE COMBINA INFORMACION
CITOLOGICA CLASICA CON INFORMACIÓN
MOLECULAR DE LA ESTRUCTURA DE LAS
SECUENCIAS Y SON UTILES
--ESTUDIOS DE MAPEO
--ANALISIS DE RELACIONES ENTRE ESPECIES
--ORGANIZACIÓN DEL GENOMA Y ARQUITECTURA
NUCLEAR
APLICACIONES FISH
MAPAS CROMOSOMICOS: INTEGRACION DE MAPAS FISICOS
( ASOCIADOS A ORDENAMIENTO DE SECUENCIAS Y ASOCIACION DE CONTIGUOS) Y
MAPAS GENETICOS ( DERIVADOS DE ANALISIS DE LIGAMIENTO). RELACIONAR LAS
ESTIMACIONES DE DISTANCIA POR RECOMBINACION CON LA DISTANCIA FISICA
REAL
VER POSICIONES DE GENES O MARCADORES LIGADOS A ESTOS CON RESPECTO A
MARCADORES ESTRUCTURALES PROPIOS DE LOS CROMOSOMAS ( TELOMEROS,
CENTROMEROS, ETC) O A OTROS MARCADORES DESARROLLADOS POR FISH.
LA DISTANCIA ENTRE LOCI EN MAPAS GENETICOS ( NO EL ORDEN) PUEDE DIFERIR
DE LA ESTABLECIDA EN MAPAS FISICOS (DISTRIBUCION NO AL AZAR DE CO A LO
LARGO DEL CROMOSOMA)
• ELABORACIÓN DE MAPAS
CROMOSÓMICOS FISICOS UTILIZANDO
SECUENCIAS DE DISTINTO ORIGEN .
• ANALISIS DE PROGENIES EN
PROGRAMAS DE MEJORAMIENTO
VEGETAL
• LOCALIZACIÓN DE SECUENCIAS
PARTICULARES ( TRANSGENES,
RETROVIRUS, EST, ETC).
 Dra. L. Poggio

ORGANIZACION DE LAS UNIDADES r

DNA EN LAS REGIONES
ORGANIZADORAS DEL NUCLEOLO ( En
tandem en múltiples copias)

A: Interfase. Unidades rDNA

condensadas en la periferia del
nucleolo.
B. Metafase. El dominio del Nor distal al
centrómero da señal Ag +, indicando
expresión previa

A
Constricción secundaria
En maíz señal en el brazo corto del par 6(
sonda ADN r)(FISH)
 Sonda rDNA 45S ( rojo ) y 5S ( verde )
en organismos con distinto contenido de
ADN

Sondas
telómeros

a) sonda retrotransposòn, distribución dispersa.

b) retrotransposón , distribución agrupada,
c) sonda telomérica
d) sonda 45S ( amarillo) y ADN repetido
( rojo)
Beta vulgaris ( 2n=18)

Dra. L. Poggio2014
 FISH REVELA SECUENCIAS REPETIDAS EN TANDEM

Secale cereale, 2n = 2x = 14 after

fluorescent banding with 4¢,6-diamidino-2-
phenylindole (DAPI)

Chromosomes of Rumex acetosa 2n = 12 + XY1Y2. After FISH

with the simple sequence repeat (AAC)5. The sequence is
amplified on the two Y chromosomes

FISH with simple sequence repeats (red)

and tandemly repeated satellite DNA
sequences (green; Cuadrado
andSchwarzacher, 1998). HESLOP-HARRISON, 2011
 FISH : HERRAMIENTA PARA IDENTIFICAR CROMOSOMAS

Se suele hacer un cóctel de sondas ( únicas o

repetidas) de un determinado cromosoma. Este
método suele ser más preciso que bandeos.

Se pueden usar varios ADN repetidos a la vez para

caracterizar todos los cromosomas. ( Importa la
composición y/o posición de las secuencias)

CSCDM chromosome specific cytogenetic DNA

marker
Clones largos insertos en BAC (se buscan los que generen
marca solo sobre un cromosoma )
(Kim et al. 2002)

En este caso : Se distinguen distintos cromosomas por

posición de distintas sondas, pero no marcan un solo
cromosoma

Dra. L. Poggio 2011

FISH : LOCALIZACION DE SECUENCIAS TRICEPIRO
DE ADN REPETIDO CORRESPONDIENTE Sonda p SC 119.2 ( ADN
A LA SECUENCIA KNOB( maiz)( 180 pb) repetido)

Poggio et al, 2010

Sondas teloméricas y subteloméricas

a) sonda que hibrida centrómeros de trigo; b) sonda que hibrida centrómeros

de centeno en una línea de adición.
 Los telómeros ( amarillo) ocurren en la
periferia del núcleo interfásico
(amarillo fuerte : superposición de verde
y rojo)

CENTENO
Hibridación con distintas sondas
e idiograma
Idiogramas de subgenomas de Nicotiana tabacum.

Sondas ADN
repetido

Se indica la
divergencia entre
los progenitores y
el evento de
hibridación
a)FISH con un BAC clone
de 100Kpb .
b) Sonda derivada de
micro disección de una
banda cromosòmica
c) Sonda derivada de
micro disección de un
brazo cromosómico
d) Dos sondas
especificas de dos
cromosomas de otra
especie.
En todos los casos se
efectuó supresión de
secuencias repetidas
 FISH DE ALTA RESOLUCIÓN EN PAQUITENE :
CROMOSOMA 4 DE A. THALIANA. SONDAS BAC CONTIGUOS MARCADOS CON BIOTINA Y
DIGOXIGENINA

Cromosomas de Arabidopsis son chicos ( aprox. 1um)

gran condensación (15 Mpb por um , impide la resolución
de secuencias separadas por menos de 3Mpb
En paquitene los cromosomas son 10 a 40 veces mas
largos que en metafase mitótica, miden 50-80um. Se
pueden resolver secuencias separadas por 75kb

9.-FISH CON 18 BACs , PAQUITENE

10.- EL MISMO CROMOSOMA EN MITOSIS, MENOR
RESOLUCION
11.-12 .-FISH CON DISTINTOS GRUPOS DE BACS EN PAQUITENE
 APLICACIONES DEL FISH

A. Identificación de los cromosomas somáticos de maíz usando 9 sondas de ADN

repetitivo ( Kato et al. 2004)
B. Cromosoma 9 de maíz ( Paquitene) FISH simultaneo de 9 secuencias de copia simple ,
centrómero y telómeros ( Wang et al , 2006)
C. Representación de la imagen B
 Hibridación in situ usando como sonda secuencias especificas de
determinados cromosomas.
( Microdisección o cromosomas obtenidos por flow sorting) Es necesario
bloquear con fracción enriquecida en ADN repetido
( CISS).

MICRODISECCION Y CLONADO DE CROMOSOMAS EN PLANTAS

LA MICRODISECCION DE CROMOSOMAS Y CLONADO SON HERRAMIENTAS QUE COMBINAN

LA CITOGENETICA Y LA GENETICA MOLECULAR.

EN VEGETALES HA SIDO UTIL COMO

.-FUENTE DE SONDAS PARA ANALIZAR GENOMAS DE PLANTAS
.-ESTABLECER RELACIONES ENTRE CROMOSOMAS Y GRUPOS DE LIGAMIENTO ESPECIFICOS
.- LOCALIZAR Y CLONAR GENES DE INTERES
.- INTEGRAR ZONAS FISICAS A MAPAS GENETICOS.
HIBRIDACION IN SITU
2011
DRA LIDIA POGGIO
 TRANSGENES:
.-ASPECTOS RELACIONADOS CON EXPRESION GENICA Y REGULACION
.-EFECTOS DE POSICION
.-CORRELACION ENTRE NUMERO DE COPIAS, POSICION DE LAS MISMAS, Y EXPRESION
.-SELECCIÓN DE PRESENCIA Y POSICION DE TRANSGENES EN MATERIALES DE IMPORTANCIA ECONOMICA EN EL
SECTOR AGROPECUARIO Y FARMACOLOGICO

VARIACIONES DE TECNICAS ISH PERMITEN LOCALIZACIÓN FÍSICA Y GENÓMICA DE LOCI TRANSGÉNICOS

.-NÚMERO DE COPIAS INSERTAS

.-LOCALIZACIÓN FÍSICA DE LOS TRANSGENES
.-ANALISIS DE SU EXPRESION

EXPRESION DE TRANSGENES
SEGÚN SU LOCALIZACION
FISH EN NUCLEOS INTERFASICOS
.- en cortes de tejidos
.- en núcleos aislados
.- mapeo de sec separadas a distancias
menores a 500-1000 kb ( en metafase señales
en distancias cortas se superponen)
.- organización y disposición de centrómeros,
telómeros, y distintos cromosomas en núcleos
interfásicos en distintos órganos y tejidos.
.- cambios que se producen durante el ciclo
celular en distintas estructuras.
Secuencias knob en Zea

A-D: Interfase ( centeno) En rojo regiones

centroméricas, en verde regiones
subteloméricas. Note orientacion Rabl.
 Aplicaciones
de GISH
• RESOLUCIÓN DEL ORIGEN DE
HIBRIDOS Y POLIPLOIDES NATURALES
• ANÁLISIS DE AFINIDADES GENÓMICAS
INTERESPECÍFICAS
• ORGANIZACIÓN DEL GENOMA Y
ESTRUCTURA NUCLEAR
• DETECCIÓN DE REESTRUCTURACIONES
CROMOSÓMICAS
• IDENTIFICACIÓN DE SEGMENTOS
INTRODUCIDOS POR INTROGRESIÓN

Las relaciones obtenidas por GISH no son afectadas por genes que producen
C
disturbios en el apareamiento meiotico (asinapsis, desinapsis, apareamiento
homeologo o heterologo
 Hay distintas situaciones que se describen como pintado
cromosómicos:

.- Se hibrida con una ( varias ) sonda/s que pinta un solo cromosoma

.-GISH que distingue cromosomas distintos sobre la base de

secuenciasrepetidas de ADN divergentes dispersos

.-CISS “chromosomal in situ supression”

Hibrida con sondas derivadas de cromosomas y bloquea con repeticiones
dispersas usando ADN genomico total o cot -1

.-FISH usando clones contiguos con insertos largos

PINTADO CON REPETICIONES CROMOSOMICAS ESPECIFICAS

.-CROMOSOMAS MICRODISECTADOS DE CROMOSOMAS B DE ALLIUM
SCHOENOPRASSUM HIBRIDO MAS INTENSO SOBRE LOS B QUE SOBRE LOS A.
CROMOSOMA Y MICRODISECTADO DE RUMEX ACETOSA TIENE SECUENCIAS
ESPECIFICAS
 C.P.: Chromosome Painting
Se usa sonda de un cromosoma sobre la
misma especie

C.C.P. :Comparative chromosome painting (

Cross species chromosome painting, Zoo-Fish
)
Se comparan distintas especies ( sonda
cromosoma obtenido por micro disección o
flow)

CGH: Comparative genome hybridization

ADN genómico de una especie sobre otra
(unidireccional o bidireccional)
 REPOSICIONAMIENTO
Alteraciones Estructurales DEL CENTRÓMERO
Cambia la razón de brazos, pero no el
orden de genes (marcadores) a lo largo del
cromosoma

Fusión céntrica Fisión céntrica

INACTIVACIÓN Y

NEOCENTRÓMERO

REARREGLOS Inversión
pericéntrica
Inserción CROMOSÓMICOS
PRIMARIOS

INVERSIÓN PERICÉNTRICA

Translocación
Translocación
recíproca intracromosómica

Inversión paracéntrica Deleción

intersticial
DELECIÓN Y REINSERCIÓN
 .- Técnicas convencionales
DETECCIÓN DE Complemento de mapeo
.- FISH-GISH
REARREGLOS genómico comparativo
.- Pintado cromosómico

Cromosoma 9 –maiz

Cr. 4 Arabidopsis

Elymus-GISH
Triticeae-GISH

EVOLUCIÓN CROMOSÓMICA
DE Arabidopsis thaliana
mediante PINTADO CROMOSÓMICO
n=8 n=5

LYSACK, ET AL. 2010

.-ORGANIZACIÓN DEL GENOMA
.-ORGANIZACIÓN CROMOSÓMICA
Técnicas clásicas
MODELOS DE
ORGANIZACIÓN
CROMOSOMICA
ORIGEN Y ORGANIZACIÓN GENÓMICA EN HIBRIDOS

HORDEUM X SECALE
En Triticale se encontro una
disposicion diferente

Sonda pSc 199.2 ( rojo),

contra tinción DAPI

Poggio et al 2009
NUCLEO INTERFASICO: TRIGO + 1 PAR DE CROMOSOMAS DE CENTENO
 Ordenamiento cromosómico según convenciones.

EL CARIOTIPO NATURAL PROVEE UN NUEVO SISTEMA DE

NOMENCLATURA CON BASES BIOLOGICAS.

EXISTE UNA ORGANIZACION SUPRACROMOSOMICA EN LOS

NUCLEOS EUCARIOTICOS.

LA INFORMACION GENETICA NO ESTA CONTENIDA

CAOTICAMENTE EN EL NUCLEO SINO QUE ESTA ORDENADA
DE ACUERDO A SU FUNCIONALIDAD.
 HIBRIDACIÓN
AB INTERACCIONES
AAB
AA X BB B -Genoma A x Genoma B
-Citoplasma A x Genoma B
Citoplasma A Citoplasma B Citoplasma A -Citoplasma A x Genoma A x Genoma B

CONSECUENCIAS GENÓMICAS MEIOSIS

.-Perdida o ganancia de secuencias LOS CROMOSOMAS DE DISTINTOS .-Diferencias en tamaño del genoma
repetidas TAXA PUEDEN SER: .-Falla de apareamiento (I)
.-Activación de transposones
.-Falla en formación quiasmas (asinapsis)
.-Cambios en la expresión génica (no
aditivos, transgresivos)  HOMÓLOGOS .-Diferencias en condensación cromosómica
(asincronía)
.-Cambios epigenéticos(silenciamiento
.-Errores en la formación del huso
genico)
 HOMEÓLOGOS .-Roturas cromosomicas
.-Se restaura la fertilidad removiendo .-Perdida de homeólogos.
incompatibilidades entre parentales,  NO HOMÓLOGOS
.-Ocurre apareamiento meiótico ASINCRONÍA
diploidizado
.- Se restaurarían incompatibilidades
núcleo-citoplasma

ASINAPSIS B
A
.-La hibridación es el proceso que produce
mayor impacto en la expresión génica; la
poliploidía impacta en menor grado.
.-Estos cambios fueron recapitulados en híbridos
artificiales. C D
UNIVALENTES
54
 DETECCIÓN DE HIBRIDOS
(MORFOLOGÍA, MARCADORES MOLECULARES,
CITOGENETICA CLÁSICA Y MOLECULAR)

Milium vernale Solanaceas

Festuca x Vulpia

Triticeae

Nicotiana Hordeum x Secale

A

Gibasis Croccus
Hibrido ( 2n=38) involucrando Tripsacum ( rojo)- Zea mays ( verde ) y
Zea diploperennis . GISH ( sonda ADN genómico )
 POLIPLOIDÍA: ORIGEN Y POSIBLES CONFIGURACIONES MEIÓTICAS

IV II II AAxBB
AA AAAA AA BB
Autopoliploide estricto Alopoliploide típico AB
IV
II II
A 1 A 1 x A 2A 2 AzAzxAwAw
A1A1 A2A2
AwAwAzAz A wA z
A 1A 2 II II
IV
Autopoliploide intervarietal Alopoliploide segmentario

APAREAMIENTO ENTRE HOMEÓLOGOS DISMINUYE LA FERTILIDAD

La estabilidad de los poliploides depende de su regularidad meiótica.

LOS POLIPLOIDES TOLERAN ANEUPLOIDÍAS

Las líneas blancas indican trisómicos y
PSEUDOEUPLOIDE : monosómicos

Tragopogon mirus Cariotipo subgenoma T . dubius

(T. dubius x T. porrifolius)
( 2n=4x=24+1-1)

Cariotipo subgenoma T. porrifolius

 Cambios revolucionarios (involucrados en procesos de diploidización)

 Eliminación no al azar de secuencias codificantes y no

codificantes (non random sequence loss)

 Cambios epigenéticos (cambios en patrones de

metilación asociados con silenciamientos o activación
La hibridación y de TE) (epigenetic changes).
la poliploidía
 Reorganización cromosómica, pérdida y/ o ganancia
de zonas cromosómicas o de cromosomas enteros.

Rápida amplificación (no al azar) de secuencias no

codificantes de ADN (Linum)
Poliploidía
Eliminación (no al azar) de secuencias no codificantes
(triticale)

El contenido de ADN (Cx) disminuye

con el nivel de ploidía
Bulnesia bonariensis Bulnesia bonariensis
2n=104 2n=104
2C= 2,4 pg 2C= 2,4 pg
Cx=0,3

Bulnesia retama
2n=26 El Valor C no
2C= 4.5 pg
Cx=2,5 refleja el nivel de
ploidía
Bulnesia sarmientoi

2n=26
2C= 0,7 pg
 ÉXITO POLIPLOIDE ES COMPORTARSE COMO DIPLOIDE, TANTO
GENÉTICA COMO CITOLOGICAMENTE
PROCESOS DE DIPLOIDIZACIÓN INVOLUCRAN

 Eliminación/ganancia no al azar de secuencias repetidas

codificantes y no codificantes. 2n=14
2n=12
Cambios  Cambios epigenéticos. 1C= 2.3 pg
1C=3.4 pg
18S
revolucionarios  Activación de genes y retroelementos. 5S
TR1
 Reorganización cromosómica, pérdida TR2

y/ o ganancia de cromosomas o genomas enteros 2n=12 2n=14

1C=8 pg 1C=7.3 pg

TRITICEA MAIZ

 Transferencia intergenómica horizontal de segmentos cromosómicos entre genomas.

Cambios  Producción de genomas recombinantes a través de introgresión, hibridación y
evolutivos poliploidía secundaria.
 Mutación. La genómica comparada mostró rondas ancestrales de
poliploidía no detectadas actualmente por la citogenética
 Variación disploide.

LA GENÉTICA MOLECULAR Y LA CITOGENÉTICA PERMITEN COMPRENDER ASPECTOS DE LA

DINÁMICA DE LOS POLIPLOIDES
 MECANISMOS DE DIPLOIDIZACIÓN

Controlan la formación de II:

 Restringiendo la sinapsis a homólogos

ABD
 Previniendo la formación de quiasmas
Ph1: 1II+19 I ph1:2III+2II+8I

Trigo polihaploide (2n=3x=21)

 ELIMINACIÓN DIFERENCIAL DE L. multiflorum (LM), L. perenne (LP)
SECUENCIAS: AUMENTO DE DIVERGENCIA
ENTRE HOMEÓLOGOS

 Ph :suprime apareamiento homeólogo

LP LM LM 7 III (gen Ph ausente)

 Aplicaciones de GISH
.-RESOLUCIÓN DEL ORIGEN DE HIBRIDOS Y
POLIPLOIDES NATURALES

.-ANÁLISIS DE AFINIDADES GENÓMICAS

INTERESPECÍFICAS

.-ORGANIZACIÓN DEL GENOMA Y ESTRUCTURA

NUCLEAR
Cromosomas de maíz con sonda de Z. perennis.
.-DETECCIÓN DE REESTRUCTURACIONES Hibridación débil o parcial en cromosomas y knobs (flechas). González et
al. 2010.
CROMOSÓMICAS

.-IDENTIFICACIÓN DE SEGMENTOS Las relaciones obtenidas por GISH no son afectadas por
INTRODUCIDOS POR INTROGRESIÓN genes que producen disturbios en el apareamiento meiótico

Tricepiro (2n=42)

Bromus pictus (2n=70) Elymus breviaristatus

14 cromosomas hibridados con 28 cromosomas hibridados con Hibridación con Hordeum (putativo progenitor)
centeno. B. setifolius (2n=28) Translocaciones intergenómicas de brazos enteros
-Mínimos rearreglos intergenómicos Tomas et al. 2012.
-García et al. (en prep)
Papa con INTROGRESIÓN de S.brevidens. Se hibridó con ADN genómico de
S. brevidens y con un clon-Bac específico de papa ( da señal en S.
brevidens)

Dong et al 2005
S. esculentum ( tomate ) con introgresión de S. lycopersicoides

Ji chetelat
 REPOSICIONAMIENTO
Alteraciones Estructurales DEL CENTRÓMERO
Cambia la razón de brazos, pero no el
orden de genes (marcadores) a lo largo del
cromosoma

Fusión céntrica Fisión céntrica

INACTIVACIÓN Y

NEOCENTRÓMERO

REARREGLOS Inversión
pericéntrica
Inserción CROMOSÓMICOS
PRIMARIOS

INVERSIÓN PERICÉNTRICA

Translocación
Translocación
recíproca intracromosómica

Inversión paracéntrica Deleción

intersticial
DELECIÓN Y REINSERCIÓN
PARA CONOCER EL PAPEL QUE SUFRE UN REARREGLO EN LA ESPECIACIÓN
HAY QUE CONOCER SU IMPACTO MEIÓTICO EN LOS HETEROCIGOTAS
ESTRUCTURALES EL ESTUDIO MEIÓTICO EN LOS HÍBRIDOS
PERMITE DETECTAR DIFERENCIAS
ESTRUCTURALES EN LOS PROGENITORES:
ESTERILIDAD DE LOS HÍBRIDOS INVERSIONES, TRANSLOCACIONES
.-SEGREGACIONAL O CROMOSÓMICA DEFICIENCIAS, DUPLICACIONES

Translocaciones múltiples
IV Metafase I
Agropiro. B
Hunziker et al .

A
IV paquitene maíz

2 P y F, Zea
Rezagados, AI, Zea
C D
Verbena. 3II, 1IV, 4 Bs

.- GÉNICA O DE DESARROLLO

-HIBRIDEZ ESTRUCTURAL CRÍPTICA:

*Rearreglos estructurales pequeños
“Diferencias en número y localización de ADN

E F
repetido. Se dificulta la detección citogenética
(mapeo genómico)
Husos multipolares Asinapsis, 20 I , Zea
 .- Técnicas convencionales
DETECCIÓN DE Complemento de mapeo
.- FISH-GISH
REARREGLOS genómico comparativo
.- Pintado cromosómico

Cromosoma 9 –maiz

Cr. 4 Arabidopsis

Elymus-GISH
Triticeae-GISH

EVOLUCIÓN CROMOSÓMICA
DE Arabidopsis thaliana
mediante PINTADO CROMOSÓMICO
n=8 n=5

LYSACK, ET AL. 2010

 MEIOSIS:

Cual es el origen de las

configuraciones
meioticas?
De que progenitor
provienen los
univalentes?
Los bivalentes que origen
tienen?
alo-autosinsesis?

Que cromosomas
se pierden
durante la división
celular?
PORQUE SE FORMAN PSEUDOBIVALENTES?

Cual es la distribución de
las secuencias/l
cromosomas/ genomas en
el núcleo?
 LOGRAR UN MAPA FISICO, FUNCIONAL Y ESTRUCTURAL DEL GENOMA
PARA SER UTILIZADO EN ESTUDIOS DE SISTEMÀTICA, FILOGENIA
BIODIVERSIDAD ,EVOLUCIÒN, MEJORAMIENTO, BIOTECNOLOGIA

DETECTAR PRESENCIA, DISTRIBUCIÒN, Y POSICIÒN

DE MATERIAL CROMOSÒMICO EXTRAESPECÌFICO Y
REARREGLOS CROMOSÒMICOS.
¿Variaciones en la expresiòn gènica?

ORGANIZACIÒN FISICA DE SECUENCIAS

APORTES DE LA REPETIDAS, GENES, SECUENCIAS
CLONADAS(BACS) EST, ETC..
CITOGENÈTICA
IDENTIFICAR CROMOSOMAS
MOLECULAR
ARQUITECTURA NUCLEAR DEL GENOMA

¿ Relacion entre posiciòn y funciòn?

ANALIZAR APAREAMIENTO MEIÒTICO, OCURRENCIA DE

APAREAMIENTO INTERGENÒMICO,RECOMBINACIÒN
SEGUIR LA SEGREGACIÒN DE DETERMINADOS
CROMOSOMAS EN ESTUDIOS EVOLUTIVOS Y PLANES DE
MEJORA
¿Existe segregaciòn preferencia o meiotic drive?
 PERSPECTIVAS FUTURAS
.-EN PROGRAMAS DE INTEGRACION DE MAPEO GENOMICO, FISH
APORTARA LA RELACION ENTRE SECUENCIAS Y BIOLOGIA DEL
CROMOSOMA.
.-FISH PERMITIRA CARACTERIZAR REGIONES NO
RECOMBINANTES QUE NO LOGRAN RESOLVERSE CON MAPAS
GENETICOS.
.-INMUNOFISH: LOCALIZACION DE LA SECUENCIA DE ADN Y SUS
PROTEINAS ASOCIADAS.
RELACION DE REGIONES GENOMICAS ESPECIFICAS Y
MODIFICACION DE HISTONAS
ASOCIACION DE PROTEINAS ESPECIFICAS DE CENTROMERO
CON SECUENCIAS REPETIDAS ESPECIFICAS.
 ANALIZAR ASOCIACION ENTRE EXPRESION/ REGULACION
GENICA Y CARACTERISTICAS EPIGENETICAS A NIVEL DE LA
CROMATINA
ASOCIACION DE LA ESTRUCTURA DE LA CROMATINA Y
DIFERENCIACION Y EXPRESION A NIVEL CELULAR.
 PINTADO CROMOSOMICO ESPECÍFICO Y SU APLICACIÓN EN ESTUDIOS
GENOMICOS.

GISH “ pinta” genomas y ha dado resultado en poliploides pero el pintado

cromosómico aun es difícil en plantas.

En mamíferos se puede pintar cromosomas con sondas hechas por flow o

Microdisección, lo que permite individualizar un solo cromosoma.

Comparative chromosome painting es una herramienta poderosa para estudiar la

sintenia y la evolución cromosomica en primates y otros mamíferos.

En plantas la sonda obtenida de un cromosoma tiene mucho ADN repetido que esta
en otros cromosomas y que son difíciles de bloquear.

En Arabidopsis ( bajo valor C, bajo % heterocromatina) se conoce el dominio que

ocupa cada cromosomas en el núcleo interfasico. Se compararon especies
relacionadas
LOGRAR UN MAPA FISICO, FUNCIONAL Y ESTRUCTURAL DEL GENOMA DETECTAR PRESENCIA, DISTRIBUCIÒN, Y POSICIÒN DE
PARA SER UTILIZADO EN ESTUDIOS DE SISTEMÀTICA, FILOGENIA MATERIAL CROMOSÒMICO EXTRAESPECÌFICO Y REARREGLOS CROMOSÒMICOS.
BIODIVERSIDAD ,EVOLUCIÒN, MEJORAMIENTO, BIOTECNOLOGIA ¿Variaciones en la expresiòn gènica?

ORGANIZACIÒN FISICA DE SECUENCIAS REPETIDAS, GENES,

SECUENCIAS CLONADAS(BACS) EST, ETC..

APORTES DE LA IDENTIFICAR CROMOSOMAS

CITOGENOMICA ARQUITECTURA NUCLEAR DEL GENOMA
¿ Relacion entre posiciòn y funciòn?

ANALISIS DE EXPRESION GENICA EN TEJIDOS

ANALIZAR APAREAMIENTO MEIÒTICO, OCURRENCIA DE
ARN-ISH
APAREAMIENTO INTERGENÒMICO,RECOMBINACIÒN
Se describen patrones temporales y espaciales de un
determinado Gen ( sobre cortes de tejidos u Órganos enteros). SEGUIR LA SEGREGACIÒN DE DETERMINADOS
Se comparan niveles y sitios de expresión génica de secuencias
CROMOSOMAS EN ESTUDIOS EVOLUTIVOS Y PLANES DE
MEJORA
¿Existe segregaciòn preferenciaL o meiotic drive?

IDENTIFICACION DE MODIFICACIONES CROMATINICAS POR INMUNOGENETICA

ESTUDIO DE LA REGULACION EPIGENETICA:

LA IDENTIDAD CELULAR ESTA DETERMINADA POR UN PROGRAMA CELULAR ESTABLECIDO POR UN

PATRON COMPLEJO DE INTERACCIONES ENTRE ADN Y PROTEINAS •LA CITOGENETICA PERMITE ANALIZAR
LA ORGANIZACIÓN DEL ADN EN LA CROMATINA REGULA LA EXPRESION Y MANTENIMIENTO DE LA
EXPRESION GENETICA (REPLICACION, RECOMBINACION, SEGREGACION) EN FORMA DINAMICA
ESTOS PROCESOS YA QUE UNE LAS
MODIFICACIONES DE HISTONAS QUE CONFORMAN EL NUCLEO DE LOS NUCLEOSOMAS ESTRUCTURAS NUCLEARES CON
(FOSFORILACION, ACETILACION, METILACION , ETC) JUNTO CON METILACION DEL ADN CONTROLAN EL CARACTERISTICAS BIOQUIMICAS DE LA ACT
EMPAQUETAMIENTO DE LOS NUCLEOSOMAS EN ARREGLOS DE ORDEN SUPERIOR Y PROVEEN SEÑALES TRANSCRIPCIONAL, REPLICACION DEL
PARA DISTINTOS PROCESOS CELULARES. ADN, MODIFICACION DE HISTONAS ,
AUNQUE LAS HISTONAS Y SUS MODIFICACONES SON ALTAMENTE CONSERVADAS LA DISTRUBUCION DE
LAS MISMAS EN LOS CROMOSOMAS PUEDE VARIAR A LO LARGO DE LOS PROCESOS DE DIFERENCIACION
METILACION DE ADN , MEDIANTE
Y DEL CICLO CELULAR, ASI COMO ENTRE Y DENTRO DE GRUPOS EUCARIOTAS. INMUNODETECCION DE DISTINTOS
BLANCOS NUCLEARES.