See

discussions, stats, and author profiles for this publication at: https://www.researchgate.net/publication/275032111

DELIGNIFIKASI AMPAS TEBU DENGAN

LARUTAN NATRIUM HIDROKSIDA SEBELUM
PROSES SAKARAIFIKASI SECARA...

Article · January 2011

CITATION READS

1 2,438

4 authors, including:

Ida Bagus Wayan Gunam Ni Made Wartini

Udayana University Udayana University
24 PUBLICATIONS 65 CITATIONS 3 PUBLICATIONS 1 CITATION

SEE PROFILE SEE PROFILE

Anak Agung Made Dewi Anggreni

Udayana University
4 PUBLICATIONS 2 CITATIONS

SEE PROFILE

Some of the authors of this publication are also working on these related projects:

The Comparison of Media on The Microalgae Nannochloropsis sp. Culture View project

Beeswax View project

All content following this page was uploaded by Ida Bagus Wayan Gunam on 16 April 2015.

The user has requested enhancement of the downloaded file.

 Teknologi
Indonesia Volume 34, Edisi Khusus 2011
© LIPI Press 2011

DELIGNIFIKASI AMPAS TEBU DENGAN LARUTAN NATRIUM

HIDROKSIDA SEBELUM PROSES SAKARAIFIKASI SECARA
ENZIMATIS MENGGUNAKAN ENZIM SELULASE KASAR
DARI ASPERGILLUS NIGER FNU 6018

Ida Bagus Wayan Gunam, Ni Made Wartini, Anak Agung Made Dewi Anggreni
dan Pande Made Suparyana
Jurusan Teknologi Industri Pertanian, Fakultas Teknologi Pertanian, Denpasar, Bali
Telp. (0361) 222006, E-mail: ibwgunam@yahoo.com

ABSTRAK
Selulosa merupakan sumber daya terbarukan yang paling banyak, dan telah mendapat banyak perhatian sebagai
sumber energi potensial dan karbon untuk memproduksi produk yang bermanfaat seperti glukosa, etanol dan bahan
bakar. Kemungkinan mengkonversi selulosa ampas tebu secara enzimatis menjadi glukosa, setelah mengendurkan
struktur kimia yang kompleks menjadi struktur primer dengan menggunakan sodium hidroksida telah dipelajari.
Ampas tebu direndam dalam sodium hidroksida 6% selama 12 jam pada suhu kamar. Perlakuan ini dapat melong-
garkan beberapa struktur berkas selulosa ditunjukkan dengan terlepasnya lignin dan hemiselulosa, masing-masing
sampai 32,11 dan 42,87%, dan nilai retensi air yang tinggi 15,90 (b/b). Dalam kondisi ini, ampas tebu terdelignifikasi
dapat disakarifikasi oleh enzim selulase kasar dari Aspergillus niger. Sakarifikasi secara enzimatis 2 g ampas tebu
terdelignifikasi pada suhu 50oC pH 4,8 selama 120 jam menghasilkan gula reduksi sebanyak 54.47 mg/100 ml.
Kata Kunci: Ampas tebu, Delignifikasi, Natrium hidroksida, Selulase, Aspergillus niger, Sakarifikasi

ABSTRACT
Cellulose, the most abundant renewable resource, has received much attention as potential energy and carbon
source for the production of useful products such as glucose, ethanol and fuels. The possibility of converting cellulose
in bagasse enzymatically into glucose, after being loosened its complex structure chemically into primary one by
using sodium hydroxide was studied. Bagasse was soaked in 6% sodium hydroxide for 12 hours at room temperature.
This treatment resulted in loosening some cellulose bundle structure shown by release of lignin and hemicelluloses
up to 32.11 and 42.87%, respectively and high water retention value of 15.90 (w/w). In this condition the delignified
bagasse could be saccharified by crude cellulase enzym from Aspergillus niger. Saccharification enzimatically of 2
g delignified bagasse at 50oC pH 4,8 during 120 hours produced reducing sugar of 54.47 mg/100 ml.
Keywords: Bagasse, Delignification, Sodium hydroxide, Crude cellulase enzym, Aspergillus niger, Saccharification

PENDAHULUAN Ada tiga cara pemanfaatan energi biomassa

Kebutuhan energi dunia akan terus meningkat
sejalan dengan pertambahan penduduk dan
pertumbuhan ekonomi yang diperkirakan akan
tumbuh rata-rata 1,7% hingga 2030. Permintaan
energi tumbuh sangat pesat, sedangkan pasokan
minyak bumi berkurang dan tidak stabil, dan
munculnya pemanasan global dengan penggunaan
bahan bakar fosil telah menghidupkan kembali
minat yang kuat dalam mencari sumber-sumber
energi alternatif dan terbarukan.[1] Energi baru
terbarukan yang cukup potensial dikembangkan
di masa mendatang adalah energi biomasa.
atau disebut juga bioenergi, yaitu pembakaran
langsung, pemanfaatan gas biomassa, dan
konversi menjadi bahan bakar cair (bioetanol
dan biodiesel).[2] Di antara ketiganya, bioetanol
merupakan komoditas yang dibutuhkan pada
masa kini dan masa mendatang serta akan
mengalami peningkatan produksi yang signifikan
karena banyaknya bahan baku yang dapat
digunakan untuk pembuataan bioetanol. Etanol
telah diterima sebagai salah satu bahan bakar
cair untuk transfortasi yang dapat menggantikan
bahan bakar minyak bumi.[3]

Off print request to: Ida Bagus Wayan Gunam, Ni Made Wartini, Anak Agung Made Dewi Anggreni dan Pande Made Suparyana

24
 Delignifikasi Ampas Tebu dengan ... | Ida Bagus Wayan Gunam, dkk.
Bioetanol dapat diproduksi dari bahan
yang mengandung gula, bahan berpati, dan ba-
han berselulosa. Konversi gula-gula sederhana
menjadi etanol cukup mudah, sedangkan untuk
bahan berpati dan berselulosa lebih sulit. Namun,
khususnya limbah lignoselulosa tersedia sangat
melimpah, mudah didapat, murah, tidak dapat
dimakan dan belum dimanfaatkan secara optimal,
potensial untuk digunakan sebagai bahan baku
produksi energi terbarukan di masa mendatang.
Ampas tebu merupakan hasil samping
dari proses ekstraksi tebu. Hasil penelitian
pendahuluan menunjukkan bahwa ampas tebu
merupakan bahan baku pembuatan bioetanol
terbaik dibandingkan dengan jerami padi, jerami
jagung, dan serbuk gergaji kayu.[4,5]
Biomassa lignoselulosa, seperti residu
pertanian, limbah kehutanan, kertas bekas, dan
tanaman energi, telah lama diakui sebagai sumber
gula yang potensial dan berkelanjutan untuk bi-
otransformasi ke biofuel dan nilai tambah produk-
produk berbasis-bio.[1,6] Biomassa lignoselulosa
sangat sulit untuk dibiotransformasi, baik dengan
mikroba maupun enzim. Hal ini yang membatasi
penggunaannya dan menghambat konversinya
menjadi produk bernilai tambah.[1] Pada limbah
lignoselulosa terdapat lignin yang berperan
sebagai pelindung selulosa terhadap serangan
enzim pemecah selulosa. Komposisi kimia dan
struktur yang demikian membuat bahan yang
mengandung selulosa bersifat kuat dan keras,
sedangkan adanya ikatan hidrogen menyebabkan
selulosa tidak larut dalam air.[7, 8]
Lignoselulosa perlu diberi perlakuan delig-
nifikasi untuk mengurangi atau menghilangkan
hambatan-hambatan tersebut. Perlakuan pen-
dahuluan pada lignoselulosa dapat dilakukan
secara fisikawi, kimiawi, dan biologis. Perlakuan
pendahuluan secara kimiawi yang dapat dilaku-
kan adalah perlakuan dengan asam, alkali, dan
reagen pelarut selulosa. Perlakuan delignifikasi
yang digunakan dalam penelitian ini berupa
perlakuan kimiawi menggunakan NaOH dengan
pengaturan konsentrasi dan lama perendaman
substrat. NaOH dipilih karena larutan ini cukup
efektif dalam meningkatkan hasil hidrolisis, dan
relatif lebih murah dibandingkan dengan reagen
kimia lainnya.[5,9]
Hidrolisis secara enzimatis memiliki beberapa
keuntungan jika dibandingkan dengan hidrolisis
asam, antara lain: tidak terjadi degradasi gula
hasil hidrolisis, kondisi proses yang lebih lunak
(suhu rendah, pH netral), berpotensi memberikan
hasil yang tinggi, dan biaya pemeliharaan
peralatan relatif rendah karena tidak ada bahan
yang korosif. [10,11] Di sisi lain, harga enzim saat
ini mahal, untuk itu digunakan enzim kasar
dari Aspergillus niger untuk menurunkan biaya
dan meningkatkan efisiensi sakarifikasi. Enzim
tersebut digunakan sebagai biokatalis reaksi
sakarifikasi selulosa menjadi gula pereduksi.
Berdasarkan hal tersebut, perlu dilakukan
penelitian untuk mendapatkan perlakuan deligni-
fikasi selulosa ampas tebu yang terbaik sehingga
dapat digunakan dalam proses sakarifikasi
enzimatis menggunakan enzim selulase kasar
dari kapang Aspergillus niger.
BAHAN DAN METODE
Strain, kultur media, dan bahan kimia
Strain mikroba yang digunakan adalah kapang
Aspergillus niger FNU 6018 diperoleh dari
Laboratorium Mikrobiologi PAU Pangan dan
Gizi, UGM. Media untuk pemeliharaan dan
peremajaan kultur yang digunakan adalah media
Potato Dectrose Agar (PDA). Bahan baku berupa
ampas tebu diambil dari Pabrik Gula Candi Baru
Sidoarjo, Jatim. Bahan kimia yang digunakan,
yaitu NaOH, H2SO4, aquades, NaH2PO4, CaCl2,
KH2PO4, MgCl2, Urea, Dinitrosalicylic Acid
(DNS), glukosa, asam sitrat, Na-sitrat, dan buffer
sitrat.
Proses delignifikasi
Proses delignifikasi dilakukan sebagai berikut:
serbuk ampas tebu direndam sebanyak 30 g da-
lam larutan NaOH pada konsentrasi larutan 0, 2,
4 dan 6% pada gelas beker dengan perbandingan
1:15 (serbuk ampas tebu: larutan NaOH) selama
0, 4, 8, 12, dan 24 jam pada suhu kamar. Pada
delignifikasi serbuk ampas tebu untuk substrat
sakarifikasi dilakukan pada suhu kamar, tetapi
untuk delignifikasi substrat dalam pembuatan
enzim selulase kasar dilakukan pada suhu
25
 Jurnal Teknologi Indonesia, Volume 34, Edisi Khusus 2011
121oC. Perlakuan delignifikasi serbuk ampas
tebu untuk substrat sakarifikasi mengggunakan
suhu kamar bertujuan untuk mengurangi biaya.
Kemudian dilakukan pencucian sampai netral dan
pengeringan pada oven (Cole Parmer) suhu 105oC
sampai kering. Serbuk ampas tebu terdelignifikasi
dianalisis sifat fisikokimianya untuk menentukan
perlakuan terbaik yang akan digunakan pada
proses sakarifikasi. Perlakuan delignifikasi ter-
baik adalah perlakuan yang menghasilkan produk
dengan kadar selulosa dan nilai retensi air yang
tertinggi, serta kadar lignin yang terendah.
Penyiapan kultur kerja A. niger
Kultur kerja dipersiapkan dengan menginoku-
lasikan kapang A. niger yang telah diremajakan
(dari kultur stok) ke dalam media agar miring
yang telah dipersiapkan sebelumnya. Spora
biakan murni A. níger ditumbuhkan dengan cara
menggores pada permukaan media (1 ose per
tabung). Biakan murni tersebut diinkubasi pada
25–27oC selama tujuh hari.
Produksi enzim selulase
Sebanyak 10 ml aquades steril dituangkan
masing-masing ke dalam biakan A. niger
dalam agar miring, kemudian dikocok agar
spora terlepas ke dalam fase cair. Sebanyak
2 g serbuk ampas tebu dimasukkan ke dalam
erlenmeyer 100 ml dan ditambahkan larutan
nutrien dan mineral dengan perbandingan 1:1
terhadap substrat. Larutan nutrient dan mineral
ini mengandung NaH2PO4 4,7%, CaCl 2 0,1%,
KH2PO4 1,02%, MgCl2 0,02% dan urea 0,3%.
Media yang telah berisi larutan nutrien dan
mineral diatur pH-nya dengan menambahkan
HCl 5 N sehingga menjadi pH awal 6, selanjutnya
disterilisasi pada 121oC selama 15 menit dalam
autoclave (Cole Parmer).
Suspensi spora dibuat dari A. niger yang
berumur tujuh hari, ditambahkan ke dalam
medium fermentasi pada konsentrasi 10% dan
diaduk secara aseptis di atas rotary shaker
(Gfl), selanjutnya dilakukan fermentasi selama
sembilan hari.
26
Pemanenan enzim kasar dilakukan pada akhir
fermentasi. Enzim kasar dalam erlenmeyer diaduk
dan dikocok, lalu disaring dengan kertas saring.
Filtrat yang sudah dipisahkan dari substratnya
merupakan enzim kasar yang siap digunakan
pada proses sakarifikasi. Sebelum digunakan,
enzim selulase kasar tersebut diuji aktivitasnya
terlebih dahulu.
Proses sakarifikasi dengan selulase kasar
dari A. niger
Serbuk ampas tebu terdelignifikasi terbaik ditim-
bang sebanyak 2 g untuk disakarifikasi dengan
enzim selulase kasar dari kapang tersebut. Sebelum
disakarifikasi substrat diberi buffer sitrat 0,05
M pH 4,8 sebanyak 100 ml dan ditambahkan
akuades sampai volumenya menjadi 200 ml.
Kemudian pH-nya diatur menjadi 4,8 dengan cara
menambahkan Na-Sitrat 0,1M. Sampel tersebut
diberi larutan enzim selulase kasar sebanyak
15 FPU/g substrat dan segera diinkubasikan
pada waterbath shaker bersuhu 50oC selama
120 jam. Kemudian sampel diambil pada akhir
sakarifikasi, hasil sakarifikasi ini disaring dan
supernatan dipindahkan ke dalam wadah khusus.
Supernatan selanjutnya dianalisis kadar gula
reduksinya (glukosa).
Analisis
Bahan baku berupa serbuk ampas tebu sebelum
dan sesudah perlakuan delignifikasi dilakukan
analisis: kadar selulosa, hemiselulosa, lignin,[7,12]
dan nilai retensi air.[13] Pada produksi enzim selu-
lase kasar dari A. niger, kultur filtratnya dilakukan
uji aktivitas filter paperase.[14] Setelah sakarifikasi
substrat ampas tebu secara enzimatis, dilakukan
analisis kadar gula reduksi equivalen glukosa
menggunakan metode Nelson-Somogyi.[15]
Penelitian ini merupakan percobaan pola
fak torial dengan menggunakan Rancangan
Acak Kelompok (RAK), yang dikelompokkan
berdasarkan waktu pelaksanaannya. Data yang
diperoleh kemudian dianalisis dengan sidik
ragam (Anova) dan apabila terdapat pengaruh
perlakuan yang nyata maka dilanjutkan dengan
uji Duncan.
 Delignifikasi Ampas Tebu dengan ... | Ida Bagus Wayan Gunam, dkk.

HASIL DAN PEMBAHASAN sumber glukosa dalam fermentasi bioetanol dan

produk-produk lainnya.
Sifat fisikokimia serbuk ampas tebu
Ampas tebu sebelum dipergunakan pada proses
Aktivitas enzim selulase
delignifikasi, terlebih dahulu dilakukan tahapan
pengecilan ukuran. Tahapan ini dilakukan Enzim yang digunakan dalam penelitian ini
dengan menghancurkan ampas tebu yang sudah diproduksi dari proses fermentasi kapang Asper-
kering menggunakan alat penggiling sampai lolos gillus niger FNU 6018. Hasil fermentasi enzim
ayakan 60 mesh sehingga diperoleh serbuk ampas yang dihasilkan bergantung pada jenis substrat,
tebu yang seragam. Serbuk ampas tebu digunakan jenis mikroba dan kondisi lingkungan yang dapat
sebagai bahan baku utama dalam penelitian ini. memengaruhi pertumbuhan dan metabolisme
Oleh karena itu, perlu diketahui sifat fisikokimia- mikroba. Selain itu, media fermentasi sebagai
nya. Sifat fisikokimia ampas tebu yang dianalisis penyedia nutrien sangat dibutuhkan oleh mikroba
meliputi: kadar air, selulosa, hemiselulosa, lignin, untuk memperoleh energi, bahan pembentukan
fraksi larut air panas (LAP), dan nilai retensi air sel dan biosintesis produk metabolisme.[19]
(NRA). Hasil analisis fisikokimia serbuk ampas Produksi enzim selulase dalam penelitian
tebu dapat dilihat pada Tabel 1. ini menggunakan substrat serbuk ampas tebu.
Serbuk ampas tebu digunakan sebagai bahan
Tabel 1. Sifat fisikokimia ampas tebu penginduksi selulase karena mengandung se-
Komponen Sampel Referensi lulosa yang dapat digunakan sebagai sumber
ampas tebu (%) (%)a[7] (%) karbon untuk pertumbuhan mikroba. Aspergillus
Air 7,92 9,67 -
niger pada proses fermentasi dalam menghasilkan
NRA 5,10 13,88 -
enzim selulase memerlukan mineral (NH4)2SO4,
LAP 25,37 7,86 -
KH2PO4, MgSO4, Urea, CaCl2.7H2O, FeSO4,
MnSO4.H2O. Proses fermentasi dilakukan pada
Selulosa 40,59 42,67 37,65 –52[17]
[16]

suhu 50oC pH 4,8 selama sembilan hari dengan

Hemiselulosa 15,91 26,26 15[16]–29[18]
menggunakan shaker pada kecepatan 120 rpm.
Lignin 17,50 17,65 13[18]–30[16]
Enzim selulase kasar dari kapang Aspergillus
Abu - 5,57 8,80[17]
niger yang dihasilkan memiliki aktivitas filter
Sumber: 7Gunam (1997); 16Husin (2007 dalam Anwar paperase sebesar 0,747 U/ml.
(2008) 17Blackburn (1984); 18Marsden dan Gray (1986);

Komponen serat kasar ampas tebu yang Proses delignifikasi

diperoleh dari penelitian terdiri dari selulosa
sebesar 40,59%, hemiselulosa 15,91%, dan lignin
17,50%. Kandungan komponen serat tersebut
hampir sama dengan data pada referensi (Tabel
1). Selulosa merupakan polimer glukosa dengan
ikatan β-1,4 glikosidik yang jika dihidrolisis akan
menghasilkan glukosa, sedangkan hemiselulosa
akan menghasilkan campuran gula yang terdiri
dari glukosa, xilosa, galaktosa, arabinofiranosa,
arabinofuranosa dan manosa.[1] Glukosa, manosa
dan galaktosa merupakan gula dari golongan
heksosa, sedangkan xilosa dan arabinosa merupa-
kan gula dari golongan pentosa.[19] Oleh karena
itu, ampas tebu berpotensi bila dijadikan produk
bernilai ekonomis yang berbasis selulosa sebagai
Variabel yang diamati pada hasil proses delig-
nifikasi, yaitu nilai retensi air dan kadar komponen
serbuk ampas tebu terdelignifikasi (hemiselulosa,
selulosa, dan lignin).
Nilai Retensi Air (NRA)
Nilai retensi air merupakan perbandingan berat
basah dan berat kering bahan setelah direndam air
selama 12 jam. Nilai retensi air meningkat pada
semua serbuk ampas tebu yang diberi perlakuan
delignifikasi. NRA pada bahan baku yang belum
didelignifikasi adalah 7,24. Nilai rata-rata NRA
serbuk ampas tebu terdelignifikasi dapat dilihat
pada Tabel 2.

27
 Jurnal Teknologi Indonesia, Volume 34, Edisi Khusus 2011

Tabel 2. Nilai rata-rata NRA serbuk ampas tebu ter- Kadar komponen serbuk ampas tebu
delignifikasi terdelignifikasi
Lama Konsentrasi NaOH (%) Kadar komponen serbuk ampas tebu terdeli-
Perendaman gnifikasi meliputi: selulosa, lignin, dan hemise-
(jam) 0 2 4 6
lulosa. Tabel 3 menunjukkan bahwa nilai rata-
4 8,06 g 12,48 f 13,27 de 14,62 c
rata selulosa serbuk ampas tebu terdelignifikasi
8 8,25 g 12,53 f 13,72 d 15,38 b
dengan perlakuan perendaman pada konsentrasi
12 8,33 g 12,64 f 14,29 c 15,90 ab
NaOH 4% selama delapan jam tidak berbeda
24 8,32 g 12,84 ef 14,45 c 16,24 a
dengan perlakuan perendaman pada konsentrasi
Keterangan: huruf sama di belakang nilai rata-rata menun- NaOH 4% selama 12 dan 24 jam. Pada kondisi
jukkan perbedaan tidak nyata (P>0,05)
tersebut, juga tidak berbeda dengan perlakuan
perendaman pada konsentrasi NaOH 6% selama
Data pada Tabel 2 terlihat bahwa NRA 4, 8, 12, dan 24 jam. Nilai rata-rata kadar selulosa
semakin meningkat dengan meningkatnya serbuk ampas tebu terdelignifikasi dapat dilihat
konsentrasi dan lama perendaman dengan larutan pada Tabel 3.
NaOH. Nilai rata-rata NRA serbuk ampas tebu
terdelignifikasi dengan perlakuan perendaman
Tabel 3. Nilai rata-rata kadar selulosa serbuk ampas
pada konsentrasi NaOH 6% selama 24 jam tidak tebu terdelignifikasi
berbeda dengan perlakuan perendaman pada
konsentrasi NaOH 6% selama 12 jam. Lama Konsentrasi NaOH (%)
Perendaman
Larutan NaOH dapat meningkatkan penggem- (jam) 0 2 4 6
bungan dan menurunkan derajat kristalinitas 4 43,00 f 67,83 bc 64,08 de 69,41 a
selulosa pada tingkat tertentu, karena NaOH 8 42,90 f 60,45 e 69,34 ab 70,20 a
dapat memutuskan ikatan hidrogen terutama 12 42,67 f 66,38 cd 72,31 a 72,49 a
ikatan inter-molekul selulosa. Putusnya ikatan 24 42,91 f 68,46 b 72,64 a 72,21 a
hidrogen terutama ikatan inter-molekul selulosa Keterangan: huruf sama di belakang nilai rata-rata menun-
menyebabkan air yang diserap lebih banyak jukkan perbedaan tidak nyata (P>0,05)
sehingga NRA meningkat. Nilai retensi air yang
tinggi menunjukkan bahwa penyerapan air lebih Nilai rata-rata kadar hemiselulosa serbuk
banyak, hal ini berarti akan dapat meningkatkan ampas tebu setelah proses delignifikasi dapat
penyerapan enzim selulase ke dalam substrat dilihat pada Tabel 4. Sementara itu, nilai rata-rata
selulosa.[7] Disamping itu, enzim selulase sendiri kadar lignin disajikan pada Tabel 5 dan untuk
sangat membutuhkan air dalam menghidrolisis lebih jelasnya perubahan nilai rata-rata kadar
selulosa menjadi gula-gula sederhana. Kondisi lignin serbuk ampas tebu terdelignifikasi dapat
ini akan dapat membantu meningkatkan hasil dilihat juga dalam bentuk grafik (Gambar 1).
sakarifikasi selulosa tersebut.

Tabel 4. Nilai rata-rata kadar hemiselulosa serbuk ampas tebu terdelignifikasi

Lama Konsentrasi NaOH (%)
Perendaman Rerata
(jam) 0 2 4 6

4 19,76 11,40 10,93 10,06 13,04 a

8 19,28 11,65 10,29 9,77 12,75 ab
12 16,26 10,87 9,39 9,09 11,41 c
24 17,00 10,77 10,24 9,96 11,99 bc
Rerata 18,07 a 11,17 b 10,21 cd 9,72 d

28
 Delignifikasi Ampas Tebu dengan ... | Ida Bagus Wayan Gunam, dkk.

Tabel 5. Nilai rata-rata kadar lignin serbuk ampas tebu terdelignifikasi

Lama Perendaman Konsentrasi NaOH (%) Rerata

(jam) 0 2 4 6
4 17,64 14,67 13,61 12,21 14,53 a
8 17,28 15,21 12,88 13,52 14,73 a
12 17,65 13,75 11,13 11,88 13,60 a
24 17,68 12,93 13,99 11,90 14,12 a
Rerata 17,56 a 14,14 b 12,90 bc 12,38 c
Keterangan: Huruf sama di belakang nilai rata-rata pada baris dan kolom menunjukkan per-
bedaan tidak nyata (P>0,05)

20
Konsentrasi
NaOH
16
0%
2%
Kadar Lignin (%)

12 4%
6%
8

0
0 5 10 15 20 25 30
Lama Perendaman (jam)
Gambar 1. Kadar lignin ampas tebu terdelignifikasi pada perlakuan konsentrasi
NaOH dan lama perendaman yang berbeda

Besarnya kehilangan hemiselulosa dan
lignin mengakibatkan persentase selulosa serbuk
ampas tebu yang diberi perlakuan delignifikasi
menjadi meningkat dari 40,59% pada bahan baku
menjadi 42,67–72,64% (data tidak diperlihatkan).
Semakin tinggi konsentrasi dan lama perendaman
dengan NaOH maka semakin tinggi kadar
selulosa, sedangkan hemiselulosa, dan lignin
semakin rendah (Tabel 3, 4 dan 5). Perlakuan
ini dapat melonggarkan struktur berkas selulosa
yang ditunjukkan dengan terlepasnya lignin dan
hemiselulosa, masing-masing sampai 32,11%
dan 42,87%, dan nilai retensi air yang tinggi
15,90 (b/b). Molekul hemiselulosa yang larut
dalam alkali adalah rantai pendek dan rantai
cabang serta terjadi asetilasi gugus substituen
pada hemiselulosa, sedangkan ikatan glikosidik
intra-molekul hemiselulosa sulit dihidrolisis.
NaOH mampu menghilangkan sebagian lignin
dan hemiselulosa yang melindungi molekul
selulosa serbuk ampas tebu, sekaligus mampu
memutuskan ikatan hidrogen terutama ikatan inter
molekul selulosa sehingga selulosa berada dalam
keadaan tidak terikat. Keadaan ini menyebabkan
selulosa menjadi longgar baik terhadap ikatan
dengan komponen non-selulosa maupun pada
selulosanya sendiri sehingga enzim selulase
dapat lebih mudah kontak dengan selulosa yang
akhirnya hidrolisis selulosa menjadi gula-gula
sederhana dapat berjalan lebih sempurna.[18]

29
 Jurnal Teknologi Indonesia, Volume 34, Edisi Khusus 2011
Pengaruh alkali terhadap penghilangan lignin
terutama disebabkan oleh labilnya ikatan ester
antara selulosa dan kompleks lignin. Lignin
yang terlepas kemudian berikatan dengan alkali
membentuk kompleks lignin-alkali yang larut
dalam.[20] Penghilangan lignin pada lignoselulosa
yang kadar ligninnya sama, tetapi sumbernya
berbeda membutuhkan kepekatan larutan NaOH
yang berbeda. Sebaliknya, jenis lignoselulosa
yang sama, tetapi kadar ligninnya yang berbeda
membutuhkan kepekatan larutan NaOH yang
berbeda pula. NaOH dapat memutus ikatan antara
selulosa dengan hemiselulosa dan lignin. Di
samping itu, dapat pula memutus ikatan-ikatan
yang ada pada masing-masing komponen, seperti
ikatan hidrogen dan ikatan kovalen. Hal ini terli-
hat dari perubahan kadar senyawa tersebut yaitu
persentase selulosanya meningkat, sedangkan
hemiselulosa dan ligninnya menurun.[18]
Penentuan kondisi perlakuan yang optimal
dalam penelitian ini dilakukan untuk memperoleh
perlakuan kimiawi yang paling optimal dengan
menggunakan NaOH untuk delignifikasi sebelum
proses sakarifikasi. Dalam menentukan perlakuan
yang paling optimal dibandingkan nilai analisis
selulosa, nilai retensi air dan lignin menggunakan
hasil uji Duncan. Bila dibandingkan nilai
analisis tersebut dapat dilihat perlakuan dengan
konsentrasi NaOH 6% dan waktu perendaman
12 jam memberikan kondisi yang paling optimal
(data tidak diperlihatkan).
Proses sakarifikasi
Sakarifikasi secara enzimatis dalam penelitian
ini bertujuan untuk menghasilkan glukosa
yang nantinya dapat digunakan dalam proses
fermentasi pembuatan bioetanol. Pada dasarnya,
prinsip sakarifikasi adalah memutuskan rantai
polimer bahan menjadi unit-unit monomer yang
lebih sederhana. Pemutusan rantai polimer
tersebut dapat dilakukan secara kimiawi (asam)
dan enzimatis. Sakarifikasi enzimatis memiliki
beberapa keuntungan dibandingkan sakarifikasi
asam, antara lain: tidak terjadi degradasi gula
hasil hidrolisis, kondisi proses yang lebih lunak
(suhu rendah), berpotensi memberikan hasil yang
tinggi, dan biaya pemeliharaan peralatan relatif
30
rendah karena tidak ada bahan yang korosif.[10,11]
Enzim selulase yang digunakan dalam proses
sakarifikasi pada penelitian ini, yaitu enzim kasar
yang diproduksi dari proses fermentasi kapang
Aspergillus niger. Enzim selulase kasar dari
kapang Aspergillus niger yang dihasilkan memiliki
aktivitas filter paperase sebesar 0,747 FPU/ml.
Penelitian pendahuluan menunjukkan bahwa
laju peningkatan gula reduksi semakin berkurang
dengan meningkatnya waktu sakarifikasi,
terutama setelah 120 jam sakarifikasi. Dalam
penelitian ini, tahap sakarifikasi dilakukan
pada suhu 50oC, pH 4,8 selama 120 jam, 120
rpm. Penambahan enzim selulase pada proses
sakarifikasi sebanyak 15 FPU/g substrat. Enzim
selulase yang ditambahkan dapat menghidrolisis
fraksi serat terutama selulosa yang mempunyai
ikatan β-1,4 glikosida untuk menghasilkan
glukosa. Peningkatan konsentrasi gula pereduksi
dapat disebabkan oleh serangan selulase secara
sinergis antara endoglukanase, selobiohidrolase,
dan β-glukosidase. Pada tahap awal endogluka-
nase menghidrolisis ikatan β-1,4 secara acak dan
bekerja pada bagian amorf dari serat selulosa.
Selanjutnya, selobiohidrolase menghidrolisis
ujung rantai selulosa menghasilkan selobiosa, di
mana selobiosa ini dihidrolisis oleh β-glukosidase
menjadi glukosa.[19] Hasil sakarifikasi enzimatis
menggunakan 2 g serbuk ampas tebu terdeligni-
fikasi terbaik memiliki kadar gula reduksi
sebesar 54,47 mg/100 ml. Grafik kadar gula
reduksi sakarifikasi enzimatis serbuk ampas
tebu terdelignifikasi terbaik dapat dilihat pada
Gambar 2.
60
50
Gula Reduksi (mg/100 ml)
40
30
20
10
0
0 20 40 60 80 100 120 140
Waktu Inkubasi (jam)
Gambar 2. Grafik kadar gula reduksi hasil sakarifikasi en-
zimatis selulosa ampas tebu terdelignifikasi terbaik
 Delignifikasi Ampas Tebu dengan ... | Ida Bagus Wayan Gunam, dkk.
KESIMPULAN
Berdasarkan hasil penelitian dapat disimpulkan
bahwa konsentrasi larutan NaOH 6% dan lama
perendaman 12 jam, menghasilkan serbuk
ampas tebu terdelignifikasi terbaik dengan
kadar selulosa, hemiselulosa, lignin, dan nilai
retensi air berturut-turut adalah 72,49%, 9,09%,
11,88%, dan 15,90 (b/b). Perlakuan ini dapat
melonggarkan beberapa struktur berkas selu-
losa ditunjukkan dengan terlepasnya lignin dan
hemiselulosa, masing-masing sampai 32,11 dan
42,87%. Sakarifikasi enzimatis menggunakan
enzim selulase kasar dari A. niger pada ampas
tebu terdelignifikasi dengan perlakuan terbaik
sebanyak 2 g selama 120 jam menghasilkan gula
reduksi sebesar 54,47 mg/100 ml.
UCAPAN TERIMA KASIH
Penulis mengucapkan terima kasih kepada
Universitas Udayana yang telah membiayai pene-
litian ini melalui skema Hibah Penelitian Strategis
Nasional Nomor kontrak No: 0229.0/023-04.2/
XX/2009.
DAFTAR PUSTAKA
[1] Lee, S.H., T.V. Doherty, R.J. Linhardt, J.S.
Dordick. (2009). Ionic Liquid Mediated Selec-
tive Extraction of Lignin From Wood Leading
to Enhanced Enzymatic Cellulose Hydrolysis.
Biotechnology and Bioengineering, 102(5):
1368–1376.
[2] Prihandana, R. dan R. Hendroko. (2007). Energi
Hijau. Jakarta: Penebar Swadaya.
[3] Khalil A.M., Al-Shawabkeh A.F., Mazahreh
A.S., Al-Damanhoory M.S. and Quasem J.M.
(2009). Utilization of Soft Wood Wastes as a
Feed Stock to Produce Fuel Ethanol. J. of Engi-
neering and Applied Sciences, 2(2): 451–455.
[4] De Garmo E.P., Sullivan W.G. and Canada J.R.
(1984). Engineering Economy. Seventh Edition.
New York: Macmillan Publishing Company.
[5] Gunam I.B.W., Antara N. S., dan Ang-
greni A.A.M.D.. (2009). Pemanfaatan limbah
lignoselulosa sebagai bahan baku pembuatan
bioetanol dengan teknik sel terimobilisasi.
Denpasar: Laporan Penelitian Hibah Strategis
Nasional, Universitas Udayana.
[6] Himmel M.E., Ding Shi-You, Johnson D.K,
Adney W.S, Nimlos M.R., Brady J.W. and
Foust T.D. (2007). Biomass Recalcitrance:
Engineering Plants and Enzymes for Biofuels
Production Science 315, 804 DOI: 10.1126/
science.1137016
[7] Gunam I.B.W. (1997). Perlakuan kimiawi ampas
tebu tanpa pencucian sebagai perlakuan penda-
huluan untuk hidrolisis enzimatis selulosanya.
Tesis Master. Yogyakarta: Program Studi Ilmu
dan Teknologi Pangan, Program Pasca Sarjana,
Universitas Gadjah Mada.
[8] Ingram L. O., Gomez P. F., Lai X. Moniruz-
zaman M., Wood B. E., Yomano L. P., York S.
W. (1997). Metabolic Engineering of Bacteria
for Ethanol Production. Biotechnology and
Bioengineering, 58: 2–3.
[9] Gunam I.B.W., Buda K., dan Guna I M.Y.S.
(2010). Pengaruh perlakuan delignifikasi den-
gan larutan NaOH dan konsentrasi substrat
jerami padi terhadap produksi enzim selulase
dari Aspergillus niger NRRL A-II, 264. Jurnal
Biologi, 14(2): 55–61.
[10] Hamelinck C.N., Hooijdonk G.V., and Faaij
A.P.C. (2005). Ethanol from lignocellulosic bio-
mass: techno-economic performance in short-,
middle- and long-term. Biomass and Bioenergy,
28: 384–410.
[11] Taherzadeh M. J. and Karimi K. (2007).
Enzyme-based hydrolysis processes for etha-
nol from lignocellulosic materials: a review.
BioResources, 2: 707–738.
[12] Datta R. (1981). Acidogenic Fermentation of
Lignocellulose-Acid Yield and Conversion of
Component. Biotechnol. Bioeng., P: 2167–
2170
[13] Browning B.L. (1967). Methods of Wood Chem-
istry. New York: Inter-science Publishers,
[14] Darwis A.A. dan Sukara T. (1990). Isolasi, Pu-
rifikasi dan Karakteristik Enzim. Bogor: PAU
Bioteknologi IPB.
[15] Sudarmadji S., Haryono B. dan Suhardi. (1984).
Prosedur Analisa untuk Bahan Makanan dan
Pertanian. Yogyakarta: Penerbit Liberty,
[16] Blackburn F. (1984). Sugar-cane. New York:
Published in The United States of America by
Longman Inc.
[17] Anwar S. (2008). Ampas Tebu. http://bioindus-
tri.blogspot.com/2008/04/ ampas- tebu.html.
Diakses tanggal 27 November 2009.
[18] Marsden W.L and Gray P.P.. (1986). Enzymatic
Hydolysis of Cellulase in Lignocellulosic Mate-
rial. CRC. Critical Review in Biotechnology 3:
235–267.
31
 Jurnal Teknologi Indonesia, Volume 34, Edisi Khusus 2011

[19] Arnata I W. (2009). Pengembangan Alternatif [20] Dale B. E. and Moreira M. J. A. (1982). freeze-
Teknologi Bioproses Pembuatan Bioetanol explosion technique for increasing cellulose
dari Ubi Kayu Menggunakan Trichordema hydrolysis. Biotechnol. Bioeng. Symp. Ser., 12:
viride, Aspergillus niger dan Saccharomyces 31–43.
cerevisiae. Tesis Master. Bogor: Program Studi
Teknologi Industri Pertanian, Program Pasca
Sarjana, Institut Pertanian Bogor.

Diterima: 30 Mei 2011 Revisi: 9 Agustus 2011 Disetujui: 16 Agustus 2011

32

View publication stats