María Camila Sinisterra Sierra

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Plásmidos
(Organismos Procariontes)
Los plásmidos son secuencias circulares de DNA que se encuentran
de manera natura principalmente en bacterias y su replicación es
autónoma al DNA nuclear.
Naturalmente, estos plásmidos dan beneficios para sobrevivir como
En la naturaleza resistencia a antibióticos, degradación de otros compuestos o
virulencia.
La transferencia de información de los plásmidos, es horizontal, es
Características

decir, los plásmidos se comparten entre miembros de una misma

especie que no tienen una relación madre-hijo.

Los plásmidos permiten introducir DNA extraño en otros organismos,

así como nuevas características.
El hecho de que los plásmidos se repliquen autónomamente y
En el laboratorio permitan la transferencia horizontal, los hace de gran interés en la
biotecnología molecular.
Se necesita cortar con la misma enzima de restricción para poder
formar el plásmido.

Permite que se dé el inicio de la

Origen de Replicación replicación y se sintetizan todas
las proteínas necesarias.
La expresión del gen permite
Elementos identificar las bacterias que
contiene el plásmido con el
Gen selectivo
inserto. Usualmente es la
resistencia a antibióticos o la
síntesis de otra proteínas.

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Pequeño segmento de DNA que

Polylinker o Sitio de Clonación
contiene diferentes sitios de
Múltiple (MCS)
restricción.
Gen, promotor u fragmentos de
Inserto DNA externo que será agregado
en el plásmido.
Regula la transcripción del gen.
Región promotora Delimita el tipo de célula el gen
es expresado y la cantidad.
Garantiza que el inserto esté en
Gen reportero
el plásmido.
Pequeño segmento de ssDNA
que sirve como punto para iniciar
Unión de primers
la amplificación por PCR o su
secuenciación.
Capacidad de
almacenamiento 10000 pb – 20 kb
genético
Usos Permiten la síntesis de una gran variedad de proteínas, como antibióticos o insulina. Esto permite una manera
barata y fácil de obtener una producción en masa de estos productos, cualidad necesaria en el sector industrial.

Los plásmidos también se pueden clasificar según su función:

- Plásmidos F, que contiene el gen tra: Permite la conjugación y expresión del pilli.
- Plásmidos de resistencia: Da resistencia a los antibióticos o venenos.
- Plásmidos Col: Contienen gene que expresan bacteriocinas, proteínas que pueden matar otras
bacterias.
- Plásmidos para la degradación: permiten la digestión de sustancias inusuales, como el tolueno.
- Plásmidos de virulencia: Convierten a la bacteria en un patógeno.

Ejemplos pBR322
pUC18
pUC19

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Fagos
(Organismos Procariontes)
Los virus son moléculas de DNA o RNA
rodeadas por una envoltura proteica que
necesitan células viables para poder
En la naturaleza replicarse, es decir, utilizan la maquinaria
metabólica de las células para sintetizar su
material genético y proteínas de la
envoltura.
En el laboratorio
El tercio central del cromosoma del
(Se usan principalmente bacteriófagos λ, que se hospedan en E.
Características

bacteriófago λ es prescindible y puede

coli.
reemplazarse por DNA exógeno sin afectar
Este fago inyecta su DNA de forma lineal es primeramente
la capacidad del fago de infectar y
circularizado para ser posteriormente integrado al cromosoma
hospedarse.
bacteriano con la propia replicación de E. coli. Su genoma consta
de 49 000 pb)
Para clonar el fago, se corta su DNA con
una enzima de restricción, lo que produce
fragmentos cos del lado izquierdo, derecho
y una región central.
Se aíslan los brazos y se ligan usando la
Elementos DNA ligasa al segmento de DNA exógeno
cortado previamente con la misma enzima
de restricción.

A través de la transducción (inyección del

DNA recombinante), se obtiene la

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infección y por tanto el acoplamiento de

DNA

Capacidad de
De 8-25 kb
Almacenamiento
Terapia fágica como alternativa a la ingesta de antibióticos para tratar infecciones bacterianas.
Terapia génica
Usos Generación de genotecas, ya que cada bacteria puede expresar una parte diferente del DNA recombinante de
los fagos.
bacterias.

Fago de cadena sencilla M13

Ejemplos fago λ Es un virus con un DNA en forma de anillo de una
única hebra (también denominada hebra +).

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El virus penetra E. coli a través del pilus, que posibilita

el intercambio de DNA entre bacterias.
M13 es muy útil por la posibilidad de obtener DNA en
forma de hebras simples. Las hebras simples de los
genes clonados se necesitan especialmente para la
secuenciación del ADN y la mutagénesis in vitro

EMBL3 y EMBL4

Cósmidos
(Organismos Procariontes y Eucariontes)
En la naturaleza No existen
r
e
t
c
a
r
a
C

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Son plásmidos recombinantes que combinan

En el laboratorio
características útiles de plásmidos y del bacteriófago λ
Elementos Los cósmidos se replican
Ori
como bacterias
Permite saber en cuales
Gen selectivo células se incorporó el
cósmido
Gen que codifica para el
Sitio cos empaquetamiento del DNA
en su cubierta proteica
Sitio que cuenta con varios
MCS
sitios de restricción

Capacidad de
Hasta 50 kb
almacenamiento
Secuenciación de genomas (el genoma de las levaduras fue secuenciado usando este tipo de vectores)
Requieren mucho trabajo de clonar y procesar debido a su tamaño tan grande.
Usos En células eucariontes puede generar recombinaciones entre el mismo clon.
En procariontes pueden ser bastante inestables.
Permiten transportar insertos de DNA entre E. coli y otras células huésped y viceversa
pJB8
Ejemplos
c2XB

Faguémidos (Bacterial Artificial Chromosome)

(Organismos Procariontes)

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En la naturaleza No existen
Son plásmidos construidos con el ori de
plásmido F de E. coli para que
mantengan una copia por cada célula.

El plásmido F está involucrado en la

Características

transferencia de información genética

durante la conjugación bacteriana (hasta
1 Mb de transporte).

En el laboratorio Contiene dos sitios Ori (oriV que da la

replicación bidireccional y oriS, que da la
.

replicación unidirrecional).
OriV está regulado por un TRF. La
expresión de ese gen está controlada por
un promotor fuertemente regulado e
inducible, haciendo que existan pocas
copias de DNA.

Elementos Origen de
OriS replicación del
plasmido F

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Controla la
replicación del
repE
plásmido

También regulan la
parA, B, C replicación

Gen de resistencia
CMr a cloranfenicol

Permite colocar el
inserto junto con
LacZ’ con un regiones
polilinker promotoras como
T7 y Sp6

Capacidad de almacenamiento Hasta 300 kb

Usos Se desarrollan para analizar genomas eucarióticos complejos y generar genotecas.
Fueron utlizados para lograr el Proyecto del Genoma Humano
Ejemplos pBAC 108L
pCC1 BAC

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Yeast Artificial Chromosomes (YAC)

(Organismos Eucariontes principalmente)

En la naturaleza No existen

Constan de una molécula de

ADN humano obtenido por ingeniería
genética que son utilizados para clonar
secuencias de ADN en células de
En el laboratorio
levadura
Características

Elementos Telómeros
.

TEL

Secuencias de
Replicación
Autónoma (Origen
ARS de la replicación).
A veces también
pueden tener oriC
bacteriano

Gen reportero

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Gen selectivo

Sitios de restricción para hacerlo lineal

Centrómetro
CEN

DNA exógeno

Capacidad de almacenamiento 200 kb - 3.000 kb

Usos Permite la formación de genotecas.
Son más inestables que los BAC.
Mapeo y la secuenciación de genomas
Ejemplos pYAC4

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