GUÍA DE PRÁCTICAS

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FR-FAC-PAC-GLB-010 Versión: 01 Fecha: 02/03/2017

ASIGNATURA: MICROBIOLOGIA GENERAL

Nivel: Segundo
INGENIERÍA AMBIENTAL
TEMA: Bioseguridad en el Laboratorio de Microbiología Práctica Nº: 1

1. INTRODUCCIÓN:

Un laboratorio de Microbiología es un área convenientemente habilitada donde se

pueden manejar y examinar microorganismos. Es esencial familiarizarse con la
organización de este tipo de laboratorios y las normas de seguridad antes de realizar
cualquier ejercicio práctico para garantizar la seguridad de los usuarios y lograr el uso
eficaz del tiempo y de los recursos.
El trabajo debe ser llevado a cabo con una buena técnica aséptica por lo que se
requiere un ambiente limpio y ordenado, para ello debe trabajarse en condiciones de
esterilidad. En un laboratorio de microbiología se pueden lograr estas condiciones en
cámaras de seguridad biológica (cámaras de flujo laminar), o bien en la proximidad de
la llama de un mechero de alcohol o de gas.
Nunca debe olvidarse la necesidad de cumplir con estos dos requisitos básicos:
1. Restringir la presencia de los microorganismos en estudio a sus recipientes y
medios de cultivo para evitar el riesgo de contaminación
2. Evitar que los microorganismos ambientales presentes en la piel, pelo, aire,
ropa, etc., contaminen sus muestras

BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA:

Bioseguridad es el conjunto de normas o actitudes que tienen como objetivo prevenir

los accidentes en el área de trabajo, es decir, a disminuir el potencial riesgo
ocupacional.
Durante el trabajo diario en la sección de microbiología, se dan situaciones de
potenciales riesgos que varían según el agente infeccioso y los procedimientos
utilizados. Las Normas de Bioseguridad pretenden reducir a un nivel aceptable el riesgo
inherente a la manipulación de material peligroso.

La peligrosidad de un agente está directamente relacionada con el tipo de

microorganismo y la manipulación a la que es sometido. Por ello es básico:
1. Conocer los agentes, sustancias y productos peligrosos que existen en el
laboratorio.
2. Conocer la metodología de trabajo del laboratorio.
3. Conocer el equipamiento del laboratorio.
4. Conocer las medidas a tomar en caso de emergencia.
5. Conocer las leyes relacionadas con la seguridad biológica.
6. Respetar y hacer cumplir todo lo anterior.

Para que se produzca un accidente por agente biológico deben concurrir básicamente
cuatro elementos:

a. Un huésped susceptible
b. Un agente infeccioso
c. Una concentración suficiente de éste
d. Una ruta de transmisión apropiada.

De todos ellos, el que mejor se puede controlar en el laboratorio es la ruta de

transmisión. Las rutas de transmisión más comunes en el laboratorio son la aérea y la
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inoculación directa, muy por encima de todas las demás, aunque la oral, la percutánea
y el contacto directo con la piel o las mucosas también son posibles.

CLASIFICACIÓN DE LOS AGENTES BIOLÓGICOS POR GRUPO DE RIESGO:

Según la capacidad que tienen los microorganismos para causar enfermedades en

humanos se clasifican en cuatro grupos de riesgo

Riesgo de
Grupo
propagación Profilaxis o
de Riesgo infeccioso Ejemplo
a la tratamiento eficaz
riesgo
colectividad

1 Microorganismos que No Innecesario B. subtilis,

tienen pocas Naegleria, E.
probabilidades de coli,
provocar enfermedades Saccharomyces
en el ser humano o en sp.
animales.

2 Agentes patógenos que Poco Generalmente Actinomyces sp,

pueden provocar probable posible Enterobacterias,
enfermedades humanas Candida sp,
o animales pero que Cryptococcus
tienen pocas neoformans.
probabilidades de
entrañar un riesgo grave
para el personal de
laboratorio, la población,
animales o el medio
ambiente. La exposición
en el laboratorio puede
provocar una infección
grave, pero existen
medidas preventivas y
terapéuticas eficaces y
el riesgo de propagación
es limitado.

3 Agentes patógenos que Probable Generalmente Mycobacterium

suelen provocar posible tuberculosis,
enfermedades humanas Histoplasma
o animales graves, pero capsulatum,
que de ordinario no se Neisseria
propagan de un meningitidis,
individuo a otro. Existen Chlamydia
medidas preventivas y trachomatis
eficaces.

4 Agentes patógenos que Elevado No conocido en la Virus

suelen provocar actualidad
enfermedades graves
en el ser humano o los
animales y que se
transmiten con facilidad
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de un individuo a otro,
directa o indirectamente.
Por lo regular no existen
medidas preventivas y
terapéuticas eficaces.

NIVELES DE BIOSEGURIDAD:

1. Nivel de Bioseguridad 1
En este nivel se trabaja con agentes del grupo 1. El acceso al laboratorio no es
restringido y el trabajo se realiza por lo regular en mesas estándar de laboratorio.

2. Nivel de Bioseguridad 2
Es similar al nivel 1 y en él se manejan agentes de peligro moderado hacia el personal
y el ambiente, pero difiere del nivel 1 en las siguientes características:
 El personal de laboratorio tiene entrenamiento específico en el manejo de
agentes patógenos
 El acceso al laboratorio es restringido cuando se está realizando algún
trabajo.

3. Nivel de Bioseguridad 3
Este nivel es el que se encuentra en los laboratorios clínicos, de diagnóstico, algunos
laboratorios universitarios y también de investigación, en el cual se realiza trabajo con
agentes exóticos o que pueden causar un daño serio y potencialmente mortal como
resultado de la inhalación o exposición a los mismos (por ejemplo, el Ántrax).

4. Nivel de Bioseguridad 4
Este nivel es el que se utiliza para trabajar con agentes biológicos que representan un
alto riesgo individual de contagio y que además son un riesgo para la vida.

NIVELES DE CONTENCIÓN:
1. De las técnicas de laboratorio:
El elemento más importante para contener los riesgos biológicos es el
seguimiento estricto de las prácticas y técnicas microbiológicas. (Manual de
Seguridad Biológica).

2. De los equipo de seguridad (barreras primarias): son la primera línea de defensa

cuando se manipulan materiales biológicos que puedan contener agentes
patógenos. El ejemplo más claro de contención primaria lo constituyen las
cabinas de seguridad biológica y mecheros, además se incluyen también
dispositivos o aparatos que garantizan la seguridad como elementos de
protección personal (guantes, mascarillas, batas, calzado, etc.).

MECHERO DE GAS:
La zona de esterilidad es de 30cm a la redonda del mechero. Normalmente los
mecheros de Bunsen tienen un regulador de entrada de la cantidad de aire con el que
hay que obtener una mezcla aire-gas, de forma que la llama tenga la temperatura
suficiente. Las llamas <<frías>> son anaranjadas y se ven bien pero no esterilizan; las
llamas muy <<calientes>> son de un azul prácticamente invisible, lo cual supone un
riesgo si no se trabaja con cuidado, pero esterilizan.

CABINAS DE SEGURIDAD:
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Son una barrera primaria cuando se trabaja con agentes peligrosos o infecciosos, sin
embargo ellas no proveen un completo aislamiento, por ejemplo en el control de
aerosoles.

La campana de gases (o vitrina extractora de gases) es un recinto ventilado que

captura los humos y vapores procedentes de la manipulación de los productos químicos
en el laboratorio. No ofrece protección alguna frente a riesgos biológicos.

Las cabinas de flujo laminar emplean un ventilador para forzar el paso del aire a
través de un filtro HEPA barriendo la superficie de trabajo. El flujo de aire puede ser
vertical u horizontal. Estas cabinas ofrecen protección únicamente al material que se
maneja en su interior, pero nunca al operador.

Las cabinas de Seguridad Biológica (CSB) son recintos ventilados diseñados para
limitar al máximo el riesgo del personal de laboratorio expuesto a agentes infecciosos.
Proporcionan una zona de trabajo que minimice la probabilidad que una partícula
transportada por el aire tienda a escapar hacia el exterior de la cabina y contaminar así
al operario y a la zona que le rodea. Además, algunas de ellas, ofrecen protección al
material que se manipula.

AEROSOLES BIOLÓGICOS:
Son la causa más frecuente e importante de accidente biológico y su origen es muy
variado. Muchas veces pasan inadvertidos, por lo que siempre hay que dar por hecho
que existen cuando se producen derrames o salpicaduras.
La mala práctica es la fuente más común de los aerosoles: enfriar asas calientes
hundiéndolas en el agar, utilizar centrífugas no herméticas, centrifugar con tubos
abiertos o mal cerrados, agitar cultivos con el asa dentro del tubo, pipetear con
demasiada fuerza, oler las placas, etc.

NORMAS DE TRABAJO EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

El laboratorio de microbiología cuenta con las respectivas instalaciones para manejar y

examinar microorganismos, pero es necesario tener en cuenta la posibilidad de riesgos
asociados con el manejo de muestras biológicas (microorganismos) y reactivos
químicos. Todos los microorganismos que se manipulen deben ser manejados
con precaución por su potencial patogenicidad dependiendo de la muestra.

 Los estudiantes y personal que trabajen en el laboratorio deben cumplir con

todas las normas de seguridad.
 El acceso al laboratorio estará limitado a estudiantes con la presentación del
carnet estudiantil.
 Una vez que ingrese al laboratorio se deben colocar las mochilas, gorras,
chompas, libros y demás objetos, en los casilleros para evitar un posible
accidente y NUNCA sobre los bancos o mesones.
 Los estudiantes con cabello largo deben recogerlo para trabajar dentro del
laboratorio; así como usar todos los implementos necesarios para la protección
según el nivel de riesgo biológico (mandil, cofia, mascarilla)
 No se debe aplicar rimel u otro tipo de maquillaje porque deteriora los oculares
del microscopio.
 Se debe colocar un calzado cerrado para las prácticas en el laboratorio, así
como mantener las uñas cortas, limpias y sin esmalte.
 Está prohibido comer, beber, fumar y maquillarse, dentro de las instalaciones
del laboratorio.
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 Es obligatorio el uso de mandil largo, abotonado y limpio con el nombre, sello

de la Universidad Tecnológica Equinoccial UTE, el logotipo de Ingeniería de
Alimentos / Ingeniería Ambiental y el pictograma de riesgo biológico, este será
de uso exclusivo para el laboratorio de Microbiología; además de utilizar
guantes quirúrgicos y mascarilla para la realización de prácticas, revisión de
resultados y lavado de material sucio. Estos implementos personales serán
destinados exclusivamente para el trabajo en el Laboratorio de Microbiología.
Podrán retirarse el mandil al terminar la práctica, para el respectivo aseo y
protegiéndolo con una bolsa de plástico, se recomienda lavar individualmente
con jabón estas prendas. (No podrá usarse en otras áreas de la facultad como
aulas de clase o corredores).
 Las puertas y ventanas deben permanecer cerradas durante la práctica de
laboratorio para evitar la contaminación por corrientes de aire.
 Nunca comience el trabajo en el laboratorio sin el permiso previo del encargado
del laboratorio, instructor o supervisor.
 Al iniciar y finalizar la práctica el estudiante lavará sus manos escrupulosamente
con agua y jabón.
 El lugar de trabajo debe estar siempre limpio y ordenado; para iniciar las
siembras microbiológicas es conveniente desinfectar la superficie de trabajo con
alcohol antiséptico (al 70%).
 Se deben evitar los desplazamientos innecesarios por el Laboratorio, debido a
que los microorganismos deben manejarse cerca de la flama del mechero.
 Cuando se manipulen microorganismos evite hablar sin necesidad o llevarse las
manos a la nariz, boca, ojos etc.
 Utilice los basureros con la funda de color rojo para depositar los residuos
peligrosos biológicos infecciosos que se generen en la realización de la práctica,
no tirar nada en los lavabos y en la funda de color negro se deben depositar los
desechos inorgánicos no contaminados (papel kraff, etc).
 Incubar las siembras microbiológicas el tiempo que se indique, caso contrario
desecharlas.
 No almacenar material en el refrigerador, solo en el caso de que se requiera un
mayor espacio en las incubadoras, y no por mucho tiempo.
 Esta estrictamente prohibido retirar del Laboratorio cultivos o cepas a menos
que así lo indique el profesor.
 Emplee los equipos según las instrucciones o procedimientos operativos.
 Apagar los instrumentos eléctricos antes de manipular las conexiones, y
desconectarlos después de su uso.
 Por seguridad del personal y protección del ambiente, nunca se usará la
fregadera, papelera o basura para deshacerse del material contaminado. Los
desechos contaminados deberán ser esterilizados en el laboratorio antes de
procesarlos como residuos.
 Cuando se trabaje con luz ultravioleta debe tenerse en cuenta que la exposición
a este tipo de radiación es peligrosa, puede producir graves quemaduras e
incluso tiene poder mutagénico
 Las mascarillas para cada práctica, la cofia, mandil y guantes deben ser traídos
obligatoriamente por cada estudiante.
 Al finalizar la práctica entregar el material empleado debidamente limpio,
ordenado y completo en las bandejas dadas para cada grupo.
 En el caso de derrame de cultivos o ruptura de recipientes con cultivos activos,
tratar de conservar la calma e inmediatamente informar al encargado del
laboratorio o al profesor, y /o realizar el siguiente procedimiento:
a. Colocar toallas de papel sobre el material derramado para evitar su dispersión
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b. Agregar abundante solución desinfectante sobre las toallas (alcohol 70%)

c. Dejar transcurrir al menos 15 minutos, retirar las toallas y tirarlas en el tacho de
color rojo (materiales contaminados)
d. Operar un instrumento solo cuando se sabe hacerlo, caso contrario solicitar
ayuda al profesor o ayudante.

OBJETIVO GENERAL:

Concienciar al estudiante con los principios del trabajo en el laboratorio de

microbiología y proporcionar orientación práctica sobre las normas de bioseguridad y
el uso correcto del equipo de seguridad.
2.

2.1 OBJETIVOS ESPECÍFICOS Nivel*

Conocer los riesgos potenciales a los que están expuestos M
al trabajar en el laboratorio de microbiología
Identificar el Nivel de Riesgo Biológico de los agentes con M
los que se trabaja en el laboratorio de microbiología de la
Universidad
Aplicar cada una de las normas de trabajo en el M
laboratorio de microbiología
*Alto(A), Medio (M), Bajo (B)

3. DEFINICIONES:

 Microorganismo: es un ser vivo, o un sistema biológico, que solo puede

visualizarse con el microscopio.
 Agente patológico: es todo agente que puede producir enfermedad o daño a
la biología de un huésped, sea humano, animal o vegetal.
 Pictograma: Dibujo o signo gráfico que expresa un concepto relacionado
materialmente con el objeto al que se refiere.

4. PRERREQUISITOS:

Biología

5. PREGUNTAS INICIALES:

1. ¿Por qué está prohibido ingresar al laboratorio de microbiología con

accesorios como joyas, relojes, anillos, etc.?
2. ¿Indique la importancia de trabajar cerca de un mechero cuando se trabaja
en con microrganismos en el laboratorio de microbiología?
3. ¿Para contener riesgos biológicos que es necesario seguir?
6. MÉTODO/PROCEDIMIENTO

NO APLICA

7. EQUIPOS Y MATERIALES:
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NO APLICA

8. CONDICIONES DE SEGURIDAD:

NO APLICA

9. CUESTIONARIO DE INVESTIGACIÓN:

1. Según la OMS describa los procedimientos de manejo y eliminación de material

contaminado en el laboratorio.
2. Enumerar los requisitos básicos para trabajar en el Laboratorio de Microbiología
(Use bibliografía diferente a la que se presenta en la guía de prácticas).
3. Indique los procedimientos de manipulación y eliminación de material y
desechos contaminados en el Laboratorio de Microbiología.
¿Qué se utiliza en el proceso de desinfección en el laboratorio de
Microbiología?

10. RESULTADOS DE APRENDIZAJE: Añadir cuadros u hojas de resultados

conforme la necesidad de cada práctica (para estudiantes)

Resultados de Resultados de Resultados de Nivel del

aprendizaje de la aprendizaje de la aprendizaje de la aprendizaje de
carrera asignatura práctica la práctica
Colocar lo que Colocar lo que está Genera conciencia M
está en el silbo en el silbo de la importancia de
trabajar con normas
en el laboratorio al
manipular muestras
de agentes
biológicos
Aplica todas las M
normas de trabajo en
el laboratorio de
microbiología en las
prácticas posteriores
*Alto(A), Medio (M), Bajo (B)

11. RESULTADOS OBTENIDOS:

Resultados obtenidos de la práctica SI NO Observaciones

Conocer los riesgos potenciales a los que están
expuestos al trabajar en el laboratorio de
microbiología
Identificar el Nivel de Riesgo Biológico de los
agentes con los que se trabaja en el laboratorio
de microbiología de la Universidad
Aplicar cada una de las normas de trabajo en el
laboratorio de microbiología

12. CONCLUSIONES: señalar si se cumplió los objetivos propuestos de la

práctica con el grupo de trabajo.
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13. RECOMENDACIONES: Indicar en que se debe reforzar y trabajar con los

estudiantes

14. BIBLIOGRAFÍA:

- OMS (2005) Manual de bioseguridad en el laboratorio. Tercera Edición.

Ginebra. ISBN 92 4 354650 3
- Yousef A., Carlstrom C. (2003). Microbiología de los alimentos: Manual de
laboratorio. Editorial Acribia, S.A. Zaragoza España
- Gamazo C., López-Goñi I, Díaz R. (2009). Manual práctico de Microbiología.
Tercera edición. Elsevier Masson.

Elaborado por: Revisado por: Aprobado por:

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Nombre. Nombre. Nombre.
DOCENTE RESPONSABLE DE COORDINADOR DE
ÁREA CARRERA
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