MICROBIOLOGIA

PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO

INTRODUCCION

Los microorganismos patógenos son organismos que no pueden ser observados si no

es con la ayuda de un microscopio. En el agua tienen unas características que lo
diferencian de los contaminantes químicos. Los medios de cultivo son sustratos donde
los microorganismos encuentran condiciones favorables para multiplicarse.

Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que, en concentraciones

adecuadas y en condiciones físicas óptimas, permiten el crecimiento de los
microorganismos. Estos medios son esenciales en el Laboratorio de Microbiología por
lo que un control en su fabricación, preparación, conservación y uso, asegura la
exactitud, confiabilidad y reproducibilidad de los resultados obtenidos.

En los laboratorios de microbiología se utilizan diferentes tipos de medios de cultivo que

pueden ser preparados en forma líquida o en forma sólida. Usualmente para preparar
un medio sólido, se parte de un medio líquido al que se le añade un agente solidificante
como el agar, la gelatina o la sílicagel.

El medio de cultivo constituye el aporte de nutrientes indispensables para el crecimiento

de los microorganismos. La composición precisa dependerá de la especie que se quiera
cultivar, porque las necesidades nutricionales varían considerablemente. Hay
microorganismos muy poco exigentes que crecen bien en medios de laboratorio
normales y microorganismos muy exigentes que necesitan determinadas sustancias
como vitaminas, suero o sangre para crecer.

Las bacterias en la naturaleza, según sus necesidades nutricionales, ocupan distintos

nichos ecológicos que satisfacen las mismas. En el laboratorio, para conseguir que una
determinada especie bacteriana se desarrolle adecuadamente es necesario
proporcionarle un ambiente artificial que las satisfaga igualmente. Esto se consigue
mediante el uso de los llamados “medios de cultivo”. Un medio de cultivo es cualquier
sustancia líquida o sólida que puede utilizarse en el laboratorio para que crezcan los
microorganismos. Cualquiera que sea el medio debe incluir todo lo necesario para el
crecimiento, lo cual varía según el organismo que se quiere cultivar, pero que
comprende: agua, compuestos nitrogenados, una fuente de energía y otros factores de
crecimiento. Los requerimientos nutricionales de las bacterias varían desde los sencillos
compuestos inorgánicos de las autótrofas hasta las complicadas vitaminas y factores

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de crecimiento de algunas heterótrofas. Algunos medios, como por ejemplo el “agar

nutritivo” son capaces de soportar el crecimiento de muchas bacterias.

Objetivos

 Preparar medios de cultivo como soporte y fuente de nutrientes para el desarrollo de

los microorganismos.
 Aprender a preparar correctamente los principales medios de cultivo que se utilizan en
el laboratorio de microbiología.
 Conocer los diferentes tipos de cultivo, su calcificación y su importancia en la
diagnosticación.
 Manejar los instrumentos de uso rutinario, a la vez que imprescindibles, en el
laboratorio de microbiología.
 Hacer un primer acercamiento a la manipulación de microorganismos. Adquirir la idea
de la importancia del trabajo en condiciones de esterilidad y las técnicas más comunes
para realizarlo.

CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

A. MEDIOS SOLIDOS. También se le denomina Agar El agar es un elemento

solidificante muy empleado para la preparación de medios de cultivo. Se licúa
completamente a la temperatura del agua hirviendo y se solidifica al enfriarse a 40
grados. Con mínimas excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento de las bacterias
y no es atacado por aquellas que crecen en él.

La Gelatina es otro agente solidificante pero se emplea mucho menos ya que bastantes
bacterias provocan su licuación.

En la práctica realizada se ha utilizado el agar nutritivo que es un medio de cultivo usado

normalmente como rutina para todo tipo de bacteria. Es muy útil porque permanece
solido incluso a relativas altas temperaturas. Además, el crecimiento bacteriano en este
agar lo hace en la superficie, por lo que se distinguen mejor las colonias pequeñas.

Un ejemplo de medio solidos es agar de patata y dextrosa (APD ) y el caldo de patata

y dextrosa son medios comunes de cultivo microbiológico que se preparan a partir de
infusión de patata y dextrosa. El agar de patata y dextrosa es el medio más utilizado
para el crecimiento de hongos y levaduras que atacan a las plantas vivas o materia
vegetal muerta en descomposición. El agar de patata y dextrosa puede ser

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suplementado con antibióticos o ácidos para inhibir el crecimiento bacteriano. Este

medio es recomendado para realizar el recuento colonial. También puede ser utilizado
para promover el crecimiento de hongos y levaduras de importancia clínica. La base
del medio es altamente nutritiva y permite la esporulación y la producción de pigmentos
en algunos dermatofitos. Algunos procedimientos señalan bajar el pH del medio a 3.5
± 0.1 con ácido tartárico al 10 %, para inhibir el crecimiento bacteriano. La infusión de
patata promueve un crecimiento abundante de los hongos y levaduras y el agar es
adicionado como agente solidificante.

 Cuando son bacterias la cantidad de Agar debe ser de 13- 15 gramos y para hongos
de 18-20 gramos por un litro de medio de cultivo.

TIPOS DE AGAR

1. Agar McConkey
Medio diferencial para la detección, aislamiento y enumeración de bacterias
coniformes y patógenas intestinales en aguas, productos lácteos y
muestras biológicas. Su acción diferencial está basada en que los
microorganismos capaces de fermentar lactosa producen una caída de pH, junto
con una absorción del colorante, apareciendo en la colonia el color rojo,
las colonias de microorganismos que no fermentan la lactosa permanecen
incoloras.

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2. Agar Hektoen
Es un medio más diferencial y menos selectivo que el agar SS. Se utiliza para
facilitar el aislamiento de las enterobacterias. La presencia de tres azúcares
(lactosa, sacarosa y salicilina ) permiten ampliar el poder diferencial de este
medio. Este medio es capaz de detectar los gérmenes formadores de SH2, igual
que el SS. Las cualidades del agar Hektoen se deben a su riqueza en peptonas y
azúcares, que neutralizan el efecto inhibidor de las sales biliares respecto a ciertos
gérmenes de cultivo delicado (Shigella en particular).El crecimiento de Salmonella
es excelente, igual que el de Shigella, obteniéndose colonias más numerosas y
voluminosas que en los medios selectivos usuales. La inhibición tiene lugar,
esencialmente, sobre E. coli y en menor medida sobre Proteus y Citrobacter. Hay
que señalar que el vibrión colérico crece bien en este medio.

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3. Agar Nutriente
Medio para fines generales que promueve el crecimiento de la mayoría de los
microorganismos poco exigentes.
Composición por Litro:
1. Extracto de Carne de buey- 3g
2. Peptona trípsica de gelatina- 5g
3. Agar- 15g
4. Pequeñas cantidades de cloruro sódico y glucosa
5. Agua destilada hasta 1000 ml

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4. Agar levine
El Agar Levine o Agar EMB Levine es un medio de cultivo usado para el
aislamiento y diferenciación de E.coli, tiene un aspecto purpúreo, aunque naranja
tras su esterilización, es semisólido, y está destinado al cultivo en placa.
Es un medio selectivo y diferencial, adecuado para el crecimiento
de enterobacterias, que inhibe el crecimiento de bacterias Gram positivas y
permite la diferenciación de bacterias fermentadoras y no fermentadoras de
lactosa, dando lugar a colonias incoloras, las no fermentadoras, y colonias de
color azulado-negro con cierto brillo metálico, las fermentadoras.
Las colonias de E.coli sobre agar Levine miden 2-3mm de diámetro, con centros
oscuros, casi negros, y pueden presentar o no cierto brillo verde metálico.

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5. Agar Mueller-Hinton: Es el medio universalmente aceptado para la realización de

los antibiogramas o pruebas de sensibilidada los antimicrobianos. A él nos
referiremos más ampliamente en el capítulo correspondiente

6. Agar Tripticase de soja: Es un medio utilizado para el crecimiento de gérmenes

exigentes, como Brucella, Neisseria o Streptococcus. Es un medio muy enriquecido,

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pero no es diferencial. Caldo tioglicolato con resazurina: Es un medio recomendado

para controles de esterilidad. Permite el cultivo de aerobios, anaerobiosy
microaerófilos. Tiene un bajo potencial redox que, al aumentar, se manifiesta por un
color rosa del medio.
7. Agar Chapman
Es un medio selectivo para el aislamiento de estafilococos. Su elevado contenido
en cloruro sódico permite la inhibición de la mayoría de los otros gérmenes. La
presencia de manitol y rojo fenol convierten a este medio en diferencial: así se
puede identificar presuntivamente el Staphylococcus aureus, ya que estegérmen
crece bien en medios salados y fermenta el manitol (colonias amarillas).

Ilustración muestra de staphilococcos aureus

8. Agar Baird-Parker
Permite el crecimiento de estafilococos coagulasa positivos, a la vez que los
diferencia del resto.

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Colonias típicas de S. aureus

9. Medio de Loeffler
Es un medio específico para el cultivo de Corynebacterium difteriae.
10. Agar Desoxicolato Citrato Lactosa Sucrosa (DCLS)
Similar al agar SS. Es un medio diferencial e inhibidor a la vez.
11. Agar Kligler
Medio específico para pruebas de identificación de enterobacterias. Aunque de él
hablaremos con más detenimiento en el capítulo de pruebas de identificación
bacteriana, podemos ir adelantando que se trata de un medio diferencial que
permite conocer el comportamiento del microorganismo ante dos azúcares
(glucosa y lactosa), investigar la formación de gas y comprobar si el
microorganismo puede producir sulfatoferroso a partir del tiosulfato sódico.

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12. . Agar King

Permiten el crecimiento de Pseudomonas, inhibiendo Gram positivos y la mayoría
de enterobacterias.El segundo pone además de manifiesto la pigmentación
fluorescente de Pseudomonas bajo luz UV.

Pseudomna fluorescens
feeefffffluorescensluoresce
ns

13. Agar Schaedler: Es un medio con sangre y vitamina K muy adaptado para el cultivo
de anaerobios.
14. Agar Gardnerella
Agar con sangre humana más una mezcla de antibióticos que permiten la observación
de colonias betahemolíticas características de Gardnerella vaginalis.

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15. Campylosel: Se utiliza para el aislamiento de Campylobacter intestinales creciendo

a 42º C en microaerofilia.

B. MEDIOS LÍQUIDOS (CALDO). Son los que se presentan en este estado,

denominándose por esta razón caldos. El medio líquido más utilizado es el llamado
caldo nutritivo, compuesto principalmente de extracto de carne, peptona y agua. Se
utiliza fundamentalmente cuando se pretende la obtención de una suspensión
bacteriana de una determinada concentración.

C. MEDIOS SEMISÓLIDOS

Se preparan a partir de los medios líquidos, agregando a éstos un agente solidificante

en una proporción menor que para preparar medios sólidos. Uno de sus usos es la
investigación de la movilidad de las bacterias.

COMPOSICION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

A. QUIMICAMENTE DEFINIDOS

Son los medios que tienen una composición química definida cuali y cuantitativamente.
Generalmente se usan en trabajos de investigación.

El medio debe proveer una fuente de energía para que el microorganismo pueda crecer,
debe de tener carbono, nitrógeno, azufre, fósforo y factores de crecimientos orgánicos
que el microorganismo no pueda sintetizar. Un medio químicamente definido es aquel
donde se conoce exactamente la composición química.

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Es uno del que se conoce la composición química exacta, en el caso de un organismo

quimioeterotrofo, el medio químicamente definido debe contener factores de
crecimiento organicos que actúen como fuente de carbono y energía. Por ejemplo
agregar glucosa al medio para favorecer el crecimiento de bacteria quimioeterógrafa
E.coli.

B. NO QUIMICAMENTE DEFINIDOS

Los medios que contienen algunos ingredientes cuya composición química se

desconoce se denominan medios complejos. En los medios complejos, la energía, el
carbono, nitrógeno y azufre son provisto principalmente por las proteínas. Las vitaminas
y otros factores de crecimientos orgánico son provisto por extracto de res o extracto de
levadura. Estos medios son muy útiles, pues un único medio complejo puede ser
suficientemente rico para satisfacer las necesidades nutricionales de diversos
microorganismos. Además, los medios complejos se necesitan porque a menudo se
desconocen los requerimientos nutricionales de un microorganismo en particular, por lo
que no se puede elaborar un medio definido.

USO O UTILIDAD

1. COMUNES. Escasa cantidad y diversidad de nutrientes. Ejemplos:

Peptona 10gr
Nacl 5 gr
Estrato de carne 3 gr
Agua destilada 1000 ml

2. ENRIQUECIDOS. Es mejorar lo medios comunes.

Al agregar agar agar al cultivo se pasa del medio liquido ( caldo) a medio solido ( Agar).

3. MEDIOS SELECTIVOS. son parecidos a los de enriquecimiento, se diferencian por ser

medios sólidos y están diseñados para el aislamiento de microorganismos específicos.
Para ser medio selectivo tiene que tener una sustancia en su composición que permite
dar nutrientes a un microorganismo, Ejemplo. En un medio que tenga Nitrógeno
desarrollaran todos los microorganismos que requieren nitrógeno para tener que
multiplicarse.

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El medio selectivo está designado para suprimir el crecimiento de bacterias indeseadas

y promover el crecimiento de microorganismos deseados. Las sales biliares o
colorantes como la fucsina básica y el cristal violeta favorecen el crecimiento de
bacterias gran negativas, al inhibir el crecimiento de las gram positivas sin afectar a las
primeras. El agar MacConkey se emplea para detectar E. coli y bacterias próximas en
suministros de agua y otros medios, contiene colorantes que inhiben el crecimiento de
las bacterias gran positivas. También se pueden aislar las bacterias incubándolas con
nutrientes que pueda utilizar de forma específica. Un medio que contenga solamente
celulosa como fuente de carbono y energía es bastante eficaz para aislar bacterias que
digieren celulosa.

4. MEDIO DIFERENCIAL. Sirve especialmente para diferenciar lo que hacer un

microorganismo de otro.
El medio diferencial diferencia entre grupos distintos de bacterias e incluso permiten
una identificación tentativa de los microorganismos, según sus características
biológicas.
El agar sangre es tanto un medio diferencial como medio enriquecido. Sirve para
distinguir entre bacterias hemolíticas y no hemolíticas. El agar MacConkey es tanto
diferencial como selectivo. Como contiene lactosa y el colorante rojo neutro, las
colonias fermentadoras de la lactosa aparecen de color rosa a rojo y son fácilmente
distinguibles de las colonias no fermentadoras. son medios que contienen indicadores
de productos derivados de la actividad microbiana de los microorganismos. No
contienen ningún tipo de sustancia con actividad antimicrobiana. Permiten revelar
características fisiológicas de los microorganismos.

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ANEXOS

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REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

 Medina A.2012. Medios de cultivo en el laboratorio de microbiología. (en línea).

Consultado el 16 May. 2014 Disponible en:
http://libroslaboratorio.files.wordpress.com/2012/09/medios-de-cultivo-en-un-
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http://www.quia.com/files/quia/users/cmontelara/2201/Medios_de_Cultivo

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http://www.slideshare.net/WendyBalam/prctica-de-medios-de-cultivo

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