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Mdm mehamdi
1. Introduction.
2. Recherche et dénombrement des coliformes totaux et fécaux.
3. Méthodes classiques de détection des coliformes.
3.1. Les méthodes de dénombrent.
3.2 . Méthode en milieu solide.
3.2.1. Méthode par filtration:
3.2.2. Méthode par incorporation:
3.2.3. Méthode par étalement
3.3. Technique de dénombrement en milieu liquide :
4. La nouvelle méthode pour l’étude des bactéries fécales
appliquées au bassin de la Seine .
4 .1. Développements méthodologique.
4.2. Objectif.
4.3. Méthode enzymatique pour le dénombrement d’ Escherichia coli.
4.3.1. Principe de la méthode enzymatique.
4.3.2. Interprétation.
5. Conclusion.
Les coliformes sont des micro-organismes que nous
retrouvons partout dans notre environnement, dans notre
corps, de même que dans celui de tous les êtres vivants.
L'ensemble de ces coliformes se nomme coliformes
totaux. Certains groupes de coliformes se retrouvent
dans les excréments des animaux à sang chaud; ce sont
les coliformes fécaux.
2.Recherche et dénombrement des
coliformes totaux et fécaux
Définitions:
Les coliformes totaux : bacilles Gram négatif, non sporulé,
oxydase négatif, aérobie et anaérobie facultatifs, capables de
se multiplier en présence de sels biliaires et de fermenter le
lactose avec production de d’acide et de gaz en 48h à une
température de 35- 37°C.
Ils se répartissent en fait en deux catégories :
Méthode de
Méthode par incorporation détermination du
nombre le plus
Méthode par étalement
probable (NPP)
Méthode par filtration
3.2Méthodes en milieu solide
Principe:
L’échantillon d’eau à analyser est filtré à
Travers une membrane qui retient les
micro organisme. La membrane est ensuite
placée sur un milieu Mac conkey ou
chapman TTC. Durant l’incubation, les
colonies se forment à la surface de la
Membrane.
Protocole expérimental:
Principe:
L’échantillon d’eau à analyser est
mélanger au milieu de culture
solide(milieu VRBL ou DCL)
préalablement fondu et refroidi une à
T proche de la T de solidification.
Après incubation, les colonies qui se
développent à la surface et à
l’intérieur du milieu sont comptées.
Mode opératoire
3)faire un mouvement
de rotation
2) Incorporer le
milieu en
surfusion
(VRBLOU DCR)
1) volume d'eau à
ensemencer ( 1 ml)
Incuber
Faire le dénombrement
MÉTHODE PAR ÉTALEMENT:
Principe:
L’échantillon d’eau à analyser est étaler à
la Surface d’un milieu (VRBL ou DCL) sans
trace d’humidité: après incubation, les
colonies qui se développent à la surface
sont dénombrées.
Mode opératoire
Incuber
Dénombrer les colonies développer à la surface
GÉLOSE VRBL
DOMAINE D’UTILISATION:
ne comporte
un long temps
aucune étape de
de réponse
mise en culture
ne permettent
pas de détecter permet un gain de
les pollutions temps d’incubation
fécales en milieu considérable par
naturel rapport aux
méthodes classiques
sur milieu gélosé
ne permettent pas (réponse en 20 à 30
d’y détecter les minutes)
bactéries ‘actives
mais non
cultivables
•L’intérêt de la détection des coliformes, à titre
d’organismes indicateurs, réside dans le fait que leur
survie dans l’environnement est généralement équivalente
à celle des bactéries pathogènes et que leur densité est
généralement proportionnelle au degré de pollution
produite par les matières fécales