Especies Reactivas del Oxígeno

(EROS)
Prof. Dr. Héctor Coirini

Radicales libres definición

Principales radicales asociados a la toxicidad del oxígeno
Fuentes celulares de radicales libres
Acción de los radicales libres sobre los tejidos
Sistemas de defensa celulares
Estrés oxidativo
El óxido nítrico como radical libre
Especies reactivas de oxígeno y su relación con patologías

Definición

Los radicales libres son:

especies químicas de existencia
independiente que poseen un
electrón no apareado,
es decir poseen un solo electrón
en el orbital mas externo
Estas especies químicas pueden formarse
de tres maneras diferentes

1.- Por ruptura homolítica de un enlace covalente de una molécula

normal, siendo este el mecanismo mas común.

X : Y !X . + Y .

2.- Por la pérdida de un electrón de una molécula normal

A ! A+. + e-

3.- Por la adición de un electrón a una molécula normal

A + e- ! A-.

Reducción del oxígeno molecular en

la cadena de transporte de electrones
O2 + 4 H+ + 4 e- ! 2 H2O
Como fue explicado en clases anteriores, la reacción se hace en cuatro
pasos univalentes:

O2 + e- ! O2.-
O2.-+ 2 H+ + e- ! H2O2
H2O2 + H+ + e- ! .OH + H2O
.OH + H+ + e- ! H O
2
e- = electrón
H+ = hidrogeniones
O2.- = radical anión superóxido
H2O2 = peróxido de hidrógeno
.OH = radical hidroxilo
H2O = agua
Primera reducción del oxígeno molecular

O2 + e- ! O2.-

** ** ** ** -
* O O*
**
*
*
**
+e * * O O **
**
*
*
**
OXÍGENO Molecular electrón Anión SUPEROXIDO

Ganancia de un segundo electrón

2 O2.- + 2 H+ ! H2O2 + O2

PERÓXIDO DE HIDRÓGENO
** **
** ** -
* O O *
*
*
*
H ** O ** O ** H
** **
**
**
**
** -
+ 2H+ +
* O ** O ** ** **
** ** * O ** O *
** **
2 Anión SUPEROXIDO
OXÍGENO Molecular
 Un tercer electrón entra en juego

El peróxido de hidrógeno reacciona fácilmente en presencia de

metales de transición, para producir un radical libre de oxígeno muy
reactivo y dañino: el radical HIDROXILO (.OH)

H2O2 + Fe 2+ ! .OH + -OH + Fe 3+

(Reacción de Fenton)

O2.- + H2O2 ! .OH + -OH + O2

(Reacción de Haber- Weiss)

Fe3+
Anión Oxidrilo
PERÓXIDO DE HIDRÓGENO
** ** ** - **
H ** O ** O ** H * O ** H
**
+ ** O
**
*H
*
** **
Fe2+ Radical
HIDROXILO

Anión Oxidrilo
PERÓXIDO DE HIDRÓGENO
** ** - **
+ O
**
H ** O ** O ** H * O H *
* *H
**
*

+
** ** ** **
Radical HIDROXILO
** **
** ** -
* O O *
*
* * O ** O *
* ** **
** **
Anión SUPEROXIDO OXÍGENO Molecular
 O hv
1O
(ozono) O3 O2 2 (oxígeno singulete)
e-
.- (radical
O2 superóxido)
4H+ + 4e- 2H+ + e-

FSII COX H2O2 (peróxido de

hidrógeno)

e- e-

HO. + HO- (radical + ión

H+ + e- hidroxilo)

H+
2 H2O

NOS
Arg NO. (óxido nítrico) NO. + O2-. ONOO-
+ citrulina (peroxinitrito)

Fuentes celulares de radicales libres

Cadena de transporte de electrones a nivel mitocondrial

(respiración celular).

Otros sistemas de transporte de electrones,

citocromos P450 y b5
Oxidasas presentes en peroxisomas

Células involucradas en la actividad fagocítica

La enzima xantino oxidasa representa otra fuente de

radicales libres
Cadena de transporte de electrones

Citocromos P450 y b5
Oxidasas presentes en peroxisomas

Estas organelas contienen enzimas

(OXIDASAS) involucradas en el acorta-
miento de los ácidos grasos de cadena muy
larga, la oxidación de la cadena lateral del
colesterol, y la oxidación de aminoácidos,
ácido úrico y otros sustratos utilizando
oxígeno molecular con formación de agua
oxigenada.

RH2 + O2 ! R + H2O2

Células involucradas en la actividad fagocítica

N ADP H + H +
NADPH O2

NADPH
NA DPH o xid asa
oxidasa

ADP +
NADP
N O 2-
SOD
Bacter ia
H 2O 2 Fe2+
Reacción de Fenton
HOCl
Cl-
Fe3+
MIEL OPEROXID A SA

OH

Invaginación
Inva
vaa ginación de la memb
membrana
brana Bacter ia
de un NEUTROFILO
 La enzima xantino oxidasa

O xantina
N
HN
+ S-Fe2+ O2
N N MoVI
O H H H2O

O
.-
N O2
HN MoIV S-Fe3+
O -

N
O N
H H +
2 H+

urato

Acción de los radicales libres

sobre los tejidos

Lípidos

Proteínas

Hidratos de carbono

Ácidos nucléicos
 Formación de Radicales Libres de Lípidos
y Lipoperóxidos
Iniciación LH + .OH ! L. + H2O

L. + O2 ! LOO.
LOO. = radical peroxilo,
Propagación LOOH = hidroxiperóxido lipídico

LOO. + LH ! LOOH + L.

Terminación

LOO. + L. ! LOOH + LH con una nueva insaturación

L. + vitamina E ! LH + vitamina E.
L. + vitamina E. ! LH + vitamina E oxidada

Radicales Libres de Lípidos y Lipoperóxidos

Lipoperoxidación del ácido araquidónico

Productos de degradación de lipoperóxidos

X
o O
o OH

Ma
Ma lo
lo n dia
d ia ldehido
l d e h id o L iip
pope ró x
eró id o
xido
d e g rradado
deg ada do

O
CH3
H
OH

4-hidroxi-2-nonenal
Lipoperoxidación en fosfolípidos

Daño oxidativo a proteínas

O
e++
Me
M e++
Fe
F e++
Fe
F H2O2
=

Inactivación de glutamino sintetasa

glucosa-6-fosfato-deshidrogenasa,
actividad de proteasas
 D
a
ñ
o

s
o
b
r
e

l
a

m
e
m
b
r
a
n
a

Acción de radicales libres sobre la membrana

 Daño oxidativo a ácidos nucleicos

3' 3'
R R

O O

-O -O P O
P O

O O

CH 2 - COO - H BASE
H 2C
O
BASE
C
Radicales
Libr es H C
C H
O O
O-
-O P O -O P O
O O
R' R'
5' 5'

Daño oxidativo a ácidos nucleicos

O NH 2 O
CH 3 N N
HN N HN

O N N H 2N N N
N H H
H
Timina A d enina Guanina

Especies
Es
species R
React
Re
e
eact ivas de Oxígeno

O O
NH 2 H
H O N
CH 3 N C HN
HN HN
OH H O
OH
O NH H 2N N N
N H N H

Timina glicol f ormamido pirimidina 8 - o xo g uanina

 Daño oxidativo a hidratos de carbono

La glucosa puede servir como un atrapador de radicales .OH,

siendo así oxidada.

El manitol y deoxiazúcares reaccionan fácilmente con

radicales libres.

El ácido hialurónico, (principal proteoglicano que mantiene la

viscosidad del fluido sinovial en las articulaciones) es un
glicosaminoglicano que contiene unidades repetidas de
glucurónico y N-acetil-glucosamina el cual puede fragmentarse
por acción de radicales libres

Sistemas de defensa contra el daño oxidativo

Sistemas primarios de defensa

Antioxidantes

Sistemas enzimáticos que intervienen en

el metabolismo de las EROs

Sistemas secundarios de defensa

Enzimas de degradación y/o enzimas reparadoras

Sustancias exógenas atrapadores de radicales libres

 Antioxidantes

Vitamina E

Vitamina C
LOO. + vitamina E ! LOOH + vitamina E.
vit E. + ascorbato ! ! semi-dehidro-ascorbato + vitamina E

vitamina E. + CoQH2 ! vitamina E + CoQH.

Antioxidantes

Vitamina A

retinol
vitamina E. + GSH ! vitamina E + GS. 2GS. ! GSSG
Glutation GSSG + NADPH + H+ ! 2 GSH + NADP+
 Antioxidantes

hemo + O2 + NADPH + H+ ! Fe3+ + CO + NADP+ + biliverdina

(hemo-oxigenasa)
Bilirrubina
biliverdina + NADPH + H+ ! bilirrubina + NADP+
(biliverdina reductasa)

bilirrubina + agente oxidante ! biliverdina + agente oxidante inactivado

biliverdina + NADPH + H+ ! bilirrubina + NADP+

Biliverdina reductasa

Melatonina

Sistemas enzimáticos

Superóxido dismutasa (SOD)

2 O2-. + 2 H+ ! H2O2 + O2
mitocondria (Mn SOD, tetrámero)
citoplasma (Cu/Zn SOD, dímero)
Catalasa

2 H2O2 ! 2 H2O + O2

Glutation Peroxidasa (soluble dependiente de selenio)

2 GSH + H2O2 ! GSSG + 2 H2O

2 GSH + LOOH ! GSSH + H2O + LOH
 Sistemas enzimáticos

Antioxidantes
Su
Supperó xid
e ró xido Fe2+
Fe3+
D is m u ttasa
Dis a sa
2 O2-. H2O2 .OH

2 H+ O2 2 GSH NADP+
G llu
u tta
a ttio
io n
Glu
G lu tta
a ttio
io n
Pe
eroro x id a s a
xidasa
2 H2O + O2 R e d u c ta s a
Reductasa
GSSG
+ NADPH
C a tta
a la
la sa
sa
2 H2O

Sistemas secundarios de defensa

1- Enzimas Lipolíticas:

2- Enzimas Proteolíticas:

3- Enzimas reparadoras del ADN:

4- Sustancias exógenas atrapadores de radicales libres

flavonoides
flavo

antocianos
Estrés Oxidativo

Especies Reactivas
del Oxígeno Defensa Celular

El estrés oxidativo ocurre cuando las

especies reactivas del oxígeno son
producidas mas rápido de lo que son
removidas por las defensas celular

El Óxido Nítrico NO

* **
*
* N ** ** O **
** **

Nº de electrones en la ultima capa

Electrones N = 7
Electrones O = 8
Total = 15
 Síntesis del Óxido Nítrico

L-Arg + NADPH + H+ + O2 ! NHO-L-Arg + NADP+ + H2O

NHO-L-Arg + ½ NADPH + ½ H+ + O2 ! L-citrulina + ½ NADP+ + NO + H2O

2 ARGININA + 3 O2

NADPH + H+

NADP+

2 CITRULINA +
2 NO + 3 H2O

Síntesis del Óxido Nítrico

Las óxido nítrico sintasas (NOS)

2 arginina + 3 O2 se clasifican en tres grandes grupos

NADPH + H+
NOS 1.- endotelial (eNOS)
NADP+
2.- macrofágica (mNOS o iNOS)

2 citrulina + 2 NO 3.- neuronal (nNOS)

+ 3 H2O
 Reacciones del Óxido Nítrico

Reacciones con diferentes compuestos,

en general las metaloproteínas

Guanilato ciclasa (que es una hemoproteína)

citocromo oxidasa mitocondrial,

citocromo P-450 microsomal y a
proteínas que contienen hierro como la aconitasa del ciclo de Krebs.

Oxihemoglobina

hemoglobina Fe2+_O2 + NO ! NO3- + hemoglobina Fe3+

Reacciones del Óxido Nítrico

Con sulfhidrilos de proteínas,

formando nitrosotioles (RSNO)

Con el anión superóxido,

formando peroxinitrito (ONOO-)

Con otros radicales orgánicos

como el radical peroxilo.
 Especies reactivas del NO

nitrito

nitrato

Funciones biológicas del Óxido Nítrico

El NO es una molécula no polar y por lo tanto es soluble en medio

hidrófobo. Esta propiedad le permite difundir fácilmente a través
de las membranas biológicas y así cumplir un rol de mensajero
intercelular

En el endotelio vascular, el NO participa como factor de relajación

NO también puede participar como molécula efectora citotóxica

sobre bacterias, virus y células tumorales a nivel los de macrófagos y
neutrófilos del sistema inmune.

Tiene una participación tanto fisiológica como patológica en el

sistema nervioso
Acción del Óxido Nítrico en el Endotelio
músculo liso
endotelio subendotelial

NO
Guanilato
NO Ciclasa
soluble
NO

Acciones del Óxido Nítrico

 Especies reactivas de oxígeno y
su relación con patologías

La radiación ionizante genera .OH por ruptura de moléculas de agua

daño causado por los radicales libres sobre el ADN, lípidos y proteínas

La deficiencia dietaria crónica en selenio (ej. la enfermedad de Keshan -

Glutation Peroxidasa) o de tocoferoles

En el infante prematuro, la exposición de la retina incompletamente

vascularizada a altas concentraciones de oxígeno, pueden llevar a la
retinopatía del prematuro,

Especies reactivas de oxígeno y

su relación con patologías
En la mayoría de las patologías el estrés oxidativo
es un efecto secundario

Pacientes con artritis reumatoidea, en el cual en el fluido sinovial de la

rodilla se observan grandes cantidades de neutrófilos activados.

Deficiencia en la enzima glucosa-6- fosfato deshidrogenasa afecta a los

eritrocitos. Esta enzima que forma parte de la vía de las pentosas-fosfato,
genera NADPH, el cual es utilizado por la glutation reductasa para generar
glutation reducido.

Fenómeno de reperfusion: La enzima responsable de dicho proceso

parecería ser la xantino deshidrogenasa que se transforma en anoxia en
una xantino oxidasa
 Especies reactivas de oxígeno y
su relación con patologías
Ateroesclerosis basada en la hipótesis de la
modificación oxidativa de las lipoproteínas.
Aumento en los niveles plasmáticos de LDL y de colesterol provocan
depósitos grasos en la pared arterial, formando la lesión primaria
aterogénica.

La injuria tisular produce hemorragias con liberación de hemoglobina por lisis

de los eritrocitos,

LDL oxidadas son captadas por monocitos y macrófagos, las cuales son
transformados en células espumosas.

Por otro lado, las LDL oxidadas dañan la íntima de la arteria, contribuyendo al
proceso aterogénico por disrupción del endotelio.

Ateroesclerosis basada en la hipótesis de la

modificación oxidativa de las lipoproteínas.
Especies reactivas de oxígeno y
su relación con patologías
Otros ejemplos de estados patológicos asociados
con injuria por radicales libres

Efisema / Bronquitis

Enfermedades neurodegenerativas
Parkinson
Huntington
Alzheimer

Preclamsia

Cáncer

Diabetes

Alteraciones Cardiovasculares

Envejecimiento