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DEPARTAMENTO DE BIOLOGÍA
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA
"CUANTIFICACIÓN
ESPECTROFOTOMÉTRICA DE
AMINOÁCIDOS Y PROTEÍNAS"
𝐴=𝜀∙𝑐∙𝑙
Para esto, los tubos fueron colocados sobre una gradilla y mediante una micropipeta de
1000[µL] se agregaron los compuestos en las proporciones indicadas en la tabla 2.1. La
seroalbúmina bovina (SAB) se agregó de forma lenta y sin agitar para evitar la formación
de espuma.
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La muestra problema del tubo 7 correspondió a saliva de la estudiante Francis González y
la del tubo 8 a saliva del estudiante Lawrence Lackey. Estas fueron depositadas sobre un
tubo Eppendorf y posteriormente extraídas con la micropipeta.
Ya habiendo añadido todos los reactivos a los tubos, se mezclaron las soluciones
suavemente para luego ser llevados a baño termorregulado de agua a 50[°C] por 5 minutos.
Pasado este tiempo se agregaron 200[µL], utilizando micropipetas del mismo volumen, de
cada muestra y con duplicado a una placa de plástico de 96 pocillos que posteriormente se
llevó al Tecan (modelo infinite M200 pro) para leer la absorbancia de las muestras a
540[nm] de longitud de onda.
3.- RESULTADOS
Las concentraciones de proteína (SAB) utilizadas en la tabla 2.1 son recalculadas para el
nuevo volumen en dilución de 2[mL] de la solución final ,los cuales se indican en la tabla
3.2 y fueron graficados respecto a la absorbancia correspondiente en la figura 3.1.
Tubo
Reactivo 1 2 3 4 5 6
SAB [mg/mL] 0,000 0,250 0,625 1,250 1,875 2,500
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Figura 3.1: Curva de calibración de proteínas para una longitud de onda de 540[nm].
0,5
0,45
0,4
Absorbancia 0,35
0,3
0,25
0,2
0,15
0,1
0,05
0
0 0,5 1 1,5 2 2,5
Concentración proteína[mg/mL]
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4.- DISCUSIÓN
Los valores clínicos de la concentración de proteínas salivales totales en adultos con edad
promedio de 25 años se encuentran entre 3,2±1,7[mg/mL] según Castro, Guzmán y
Giacaman (1). A partir de esto la muestra 8 se ajusta al rango de concentración y etario,
mientras que la muestra 7 cumpliendo el rango etario sólo se ajusta la concentración en la
segunda corrida experimental.
Por otra parte, la concentración de SAB por absorbancia a 280[nm] fue de 1,065[mg/mL]
que corresponde a un 78,76% de error respecto a la concentración indicada en la solución
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.Un posible motivo es que la ley de Lamber-Beer se cumple hasta un cierto rango de
concentraciones, posterior a un punto límite la tendencia deja de ser lineal y no cumple la
ley. También es factible de que la muestra presentara errores en la determinación de la
absorbancia, como la celda óptica sucia lo que reduciría la absorbancia. Esta clase de
errores no pueden ser descartados al no tener un duplicado de la misma medición.
5.- CONCLUSIONES
6.- REFERENCIAS
[3] Castro RJ, Guzmán G &Giacaman RA. (2012). Comparación de la concentración total
de proteínas salivales de adultos y adultos mayores. (pp: 25). Revista clínica de
periodoncia, implantología y rehabilitación oral. Disponible en:
http://www.scielo.cl/pdf/piro/v5n1/art05.pdf Visitado el 4 de Noviembre del 2017.