INTRODUCCION

La diabetes es una enfermedad crnica que se caracteriza por la incapacidad del cuerpo de
metabolizar la glucosa debido a una deficiencia en la secrecin total o parcial de la hormona
insulina provocando una elevacin en el nivel de glucosa en la sangre. Segn la Organizacin
Mundial de la Salud (OMS) actualmente se reportan 62 millones de personas con esta
enfermedad; en Colombia existen 2.2 millones diagnosticadas y se cree que existen 1 milln ms
sin ser diagnosticadas [1]. Los efectos a largo plazo conducen a fallas en los rganos debido a que
no se conoce una cura hasta el momento por lo que es una enfermedad con la que se vive toda la
vida [1].Los pacientes con diabetes tipo 1 ms conocidos como insulinodependientes se tratan con
dosis diarias de insulina. En Colombia se tratan 300.000 pacientes con ampolletas de insulina
importada de la cual solo se cubre el 8% de la demanda lo que implica una problemtica inmediata
de salubridad nacional [2].

Hasta 1983 toda insulina utilizada para los tratamientos de pacientes insulinodependientes se
obtena del pncreas de los porcinos y bovinos, sin embargo el uso prolongado de esta causa una
respuesta inmune en la mayora de los casos [3], por lo cual se buscaron alternativas para la
sntesis y obtencin de la misma.

La biotecnologa y la ingeniera gentica fue la solucin para la problemtica mediante la

manipulacin, aislamiento y caracterizacin del material gentico humano se logr realizar
molculas de ADN recombinante que sirvi para la produccin de insulina humana entre otros [3];
en 1978 se clonaron las primeras bacterias capaces de producir insulina.

La produccin de insulina humana por Escherichia coli recombinante se realiz por primera vez en
1982 mediante el trabajo de Genentech y Eli Lily [4]; esta es la manera que se ha sintetizado hasta
el da de hoy obteniendo grandes cantidades aunque no lo suficiente para cubrir la demanda
mundial que aumenta peridicamente.

En este artculo se desea comparar la produccin de insulina comercial a partir de E. Coli

recombinante en bio-reactores Batch y continuo mediante la determinacin de parmetros
cinticos y productividad alcanzada.

La insulina humana es un polipptido de 51 aminocidos que consiste en dos cadenas separadas,

la cadena A (21 aminocidos) y la cadena B (30 aminocidos) unidas por un patrn caracterstico
de puentes de disulfuro [4]. Es sintetizada a partir de un precursor conocido como proinsulina,
esta accin adems de su almacenamiento se realizan en el pncreas [7].
 Figura 1. Insulina Humana [5].

Como tcnica general se utilizan enzimas para insertar el gen humano que produce la insulina en
el ADN del microorganismo a utilizar, en la mayora de los casos ser la E. coli, la nueva
codificacin de las bacterias se encargara de elaborar un nuevo material que antes no era capaz de
generar. Con este mtodo y en condiciones adecuadas de cultivo los microorganismos crecern de
manera acelerada para generar una gran cantidad de la nueva sustancia en cortos periodos de
tiempo. Despus, la insulina ser extrada del cultivo de bacterias y mediante tratamientos
especficos se prepara para su uso comercial en los pacientes [6].

El plsmido de la bacteria el cual posee su ADN se interviene por accin enzimtica y es insertado
el gen de la insulina obtenido anteriormente, ahora se devuelve a la bacteria de origen para que se
reproduzca as cuando la bacteria se divide, el plsmido se comparte entre las dos clulas hijas
para seguir reproducindose, de esta manera el cultivo de bacterias codifica la insulina humana y
proporciona una manera segura para su obtencin.

Figura 2. Produccin de Insulina Recombinante [7].

METODOLOGIA

ESTEQUIOMETRIA DEL PROCESO

Para un proceso en Batch o por Lotes

Para nuestro balance estequiomtrico lo primero que se realizara ser encontrar la frmula
molecular de la bacteria a utilizar en el proceso para lo cual se consiguieron datos de la
composicin elemental de la E. coli de manera general y se tomara esta como aproximacin
debido a que cada proceso utiliza una cepa diferente pero esta frmula se acerca lo suficiente para
utilizarla en nuestros clculos.

ELEMENTO PORCENTAJE DEL PESO SECO

Carbono 50
Oxgeno 20
Nitrgeno 14
Hidrgeno 8
Fsforo 3
Azufre 1
Potasio 1
Sodio 1
Calcio 0,5
Magnesio 0,5
Cloro 0,5
Hierro 0,2
Todos los dems 0,3
Tabla 1. Composicin elemental aproximada de a E.coli [8]

Para determinar la composicin del microorganismo:

1. Se suma el porcentaje solo para los elementos mayoritarios o CHON

C: 50, H: 8, O: 20, N: 14

La suma de estos compuestos corresponde a = 92 % p/p

2. Se normalizan los valores

%
=

50
C: 92
100 = 54,3478 g de Carbono
8
H: 92 100 = 8,6957 g de Hidrgeno
20
O: 100 = 21,7391 g de Oxgeno
92

14
N: 92 100 = 15,2174 g de Nitrgeno
 3. Calculan el nmero de moles despus de la normalizacin

=

54,3478
C: 12 /
= 4,529 moles de Carbono

8,6957 2
H: 1 = 8,6957 moles de Hidrogeno
2 /

21,7391 2
O: 16 = 1,3587 moles de Oxgeno
2 /

15,2174 2
N: = 1,087 moles de Nitrgeno
14 2 /

4. Se divide entre el nmero de moles del Carbono

4,529
C: =1
4,529

8,6957 2
H: = 1,92
4,529

1,3587 2
O: 4,529
= 0,3

1,087 2
N: = 0,2
4,529

As nuestra frmula molecular de la E.coli ser: 1,92 0,3 0,2

En la literatura encontramos una frmula semidesarrollada para la insulina que es la que se

utilizara para los clculos pertinentes: 264 404 78 72

La ecuacin general de nuestro proceso conociendo la fuente de carbono, la de nitrgeno y

encontrando que es un proceso aerobio se obtiene

+ + , , , + + +

Para encontrar los valores de los coeficientes estequiomtricos se realizaran balances elementales
y adems utilizaremos datos adicionales encontrados en la literatura para la produccin de este
compuesto en particular. Para el bioreactor Batch se considerar el valor de Yxs=0,453 g
biomasa/g de sustrato consumido [9] y el valor de RQ= 1,02 [4] obtenidos de experimentos
anteriores y reportado en la literatura como relaciones adicionales.
Los balances elementales sern:

C: 6=c+d+264*f {1}

H: 12+3*b=1,92*c+2*e+404*f {2}

O: 6+2*a= 0,3*c+2*d+e+78*f {3}

N: b= 0,2*c+72*f {4}

Con las relaciones adicionales:

= {5}

= {6}

PM clulas= 21,52 g/mol

PM sustrato= 180 g/mol

Se resuelve el sistema de ecuaciones para obtener los valores de los coeficientes

Con la ecuacin (5) d=1,02*a {7}

21,52
Reemplazando los valores en la ecuacin (6) 0,453 = se encuentra el valor de c=3,78 mol
180
biomasa/mol sustrato

Cambiando en las ecuaciones el valor de d y el de c las nuevas ecuaciones a resolver sern:

2,22=1,02*a+264*f {8}

4,74=2*e+404*f-3*b {9}

4,87=78*f+0,04*a+e {10}

0,76=b-72*f {11}

Despejando f de la ecuacin (8) f= 0,0084-0,0039*a, reemplazando el valor de f en la ecuacin (11)

se obtiene el valor de b= 1,36-0,28*a y en la ecuacin (10) el valor de e= 4,21-0,34*a

De la ecuacin (9) se obtiene el valor de a= 2,11, con el valor de a se obtienen todos los
coeficientes.

a= 2,11 d= 2,15

b= 0,77 e= 3,49

c= 3,78 f= 0,00017

Como nuestro proceso es aerobio se necesita la cantidad de oxgeno demanda para lo cual
realizamos un balance de oxgeno, encontramos los grados de reduccin para el sustrato, la
biomasa y el producto.
 Grado de reduccin del sustrato:
4 + 2 3 4(6) + 12 2(6)
= = =4
6
Grado de reduccin de la biomasa:

(4 + 2 3)
= = 4 + 1,92 2(0,3) 3(0,2) = 4,72

Grado de reduccin del producto:

(4 + 2 3) 4(264) + 404 2(78) 3(72)
= = = 4,12
264
La demanda terica de oxgenos ser igual a:

= = 1,54 2
4

ECUACION ESTEQUIOMETRICA

La ecuacin del proceso para la produccin de insulina en un bioreactor Batch es:

+ , + ,
, , , , + , + , + ,

De la cual se necesitan 1,54 moles tericas para realizar el proceso se le agrega un exceso de aire
para que sea efectivo ya que debe mantener una aireacin constante.
Referencias

[1] http://www.who.int/topics/diabetes_mellitus/es/

[3] Produccin de insulina humana por tcnicas de ADN recombinante, Beatriz Flores, Instituto de
Fisiologa Celular, UNAM

[2] http://www.el-nacional.com/noticias/salud/dotacion-insulina-solo-cubre-demanda-
nacional_207605

[4] Temperature-induced production of recombinant human insulin

in high-cell density cultures of recombinant Escherichia coli
[5] https://es.dreamstime.com/fotograf%C3%ADa-de-archivo-libre-
de-regal%C3%ADas-insulina-humana-image24404257
[6] Kuxulkab, Revista de divulgacion division academica de
ciencias biolgicas
[7] Revista:
http://apps.elsevier.es/watermark/ctl_servlet?_f=10&pident_articulo=13128906&pident_usuario
=0&pident_revista=4&fichero=4v27n10a13128906pdf001.pdf&ty=39&accion=L&origen=dfarmacia
&web=www.dfarmacia.com&lan=es

[8]Libro: https://books.google.com.co/books?id=2u-
6Q2XCMDgC&pg=PA24&lpg=PA24&dq=escherichia+coli+compo
sicion+de+carbono&source=bl&ots=4Vdnt8xINw&sig=8tytpfFBNf
XhQ2-NeGsX3owIf-k&hl=es-
419&sa=X&ved=0ahUKEwjLua2Yi6bXAhUG5yYKHU6SCxkQ6
AEIPzAH#v=onepage&q=escherichia%20coli%20composicion%20
de%20carbono&f=false
[9] Production of tilapia insulin-like growth factor-2 in high cell density cultures of recombinant
Escherichia coli

[10]