USP 30 lnfonnacin General / (1Jt6) Evaluacin Microbiolgica de Cuartos Limpios 649

m~yor pre~cupacin acerca de las partculas viables ( e~ decir,

(1116) EVALUACIN m1croorgan 1smos) que sobre el total de partculas segn los
especificados en la Nonna Federal 209E. En la industria farmacu-
MICROBIOLGICA DE tica existe una preocupacin especfica por el recuento de partculas
totales en productos inyectables (ver Partculas en lnvectables
CUARTOS LIMPIOS Y OTROS (788) ). .
AMBIENTES CONTROLADOS Se acepta la idea de que cuanto menor sea la cantidad de partculas
presentes en un cuarto limpio, menor es la probabi lidad de hallar
microorganismos en el aire y esto puede suministrar estndares de
ingeniera a los fabricantes fannacuticos y constructo res de cuartos
limpios y otros ambientes contro lados para establecer una instalacin
El propsito. dde este c ap1'tulo monnat1vo
es revisar
. los d .iversos que fun cione adecuadamente.
temas 1 os, co11 ~ _procesanuento
., re ac1ona
fi aseptJco de fnnacos La Nonna Federal 209E, como se aplica en la industria
3 _gdrane 1, onnas 1annaceuncas y en ciertos casos dispositivos farmacuti ca, se basa en los ln,jtes de todas las partculas con
d 1cos. dcomo
me d .tambin . , e. es
t bl ecim1ento,
. .'
manten101Jento y control tamaos iguales o mayores a 0,5 m. La Tabla 1 describe la
e 13 ca 1 '!'1crobiologica de ambientes controlados. Clasificacin d e Limpieza del Aire con respecto a Partculas de la
st
En e e capitulo se mcluyen anlisis sobre ( 1) la clasificacin de Nonna Federal 209E adaptada a la industria farmacutica. Eo la
un cuarto lunp10 basada en lmites de recuentos de partculas (2) industria fa1macuti ca se emplea la C lase M 3.5 y superiores. Las
dprogramas
.( ) de .evalu micro
. , acion b.10 og1ca
para ambientes contrnla-'
C lases MI y M3 se relacionan con la industria electrnica y se
o_s, 3 capacit~cion del personal; (4) factores crticos en el diseiio muestran en la Tabla 1 con fines comparativos. En general se acepta
~ llllp1~re~tac,on de programas de evaluacin mjcrobiolgica (5) que cuanto menos partculas se encuentren presentes en un cuarto
~saiTO_ . e un plan de muestreo; (6) establecimiento de lh~ites limpio operati vo u otro ambiente controlado, menor ser el recuento
nuc_robiologicos de Alerta y Accin: (7) metodologa e instrumental microbiano en condiciones operativas, siempre que no existan
utilizados _para el muestreo. 1;nicrobiolgico: (8) medios y diluyentes cambios ea el flujo de aire, temperatura y humedad. Los cuartos
ut1 !izado~, (9) 1d_en t1ficac1on de aislamientos microbiano; ( 1O) limpios se mantienen en un estado de control o perativo basado en
evalua_c10n o~erauva mediante el llenado de medios y ( 11) llll
datos dinmicos (operativos).
glosano de tenn1nos. Se excluye de este captulo e l anlis is de
amb iente~ contTolados usados por fannacias autorizadas para la
preparac10n de productos estriles para uso domstico el cual se
trat~ . ~n Prep~raci11 A!agistral-Preparacio11es Estrile~ (797). Tabla J. Clasificacin de Limpieza del Aire con respecto
_Ex1st_en _metodos alternativos para evaluar y contro lar la situacin a Partculas'
y m1_crob1olog1ca de ambien tes controlados para procesamiento
asept1co. Los val_ores numricos incluidos en este captulo no son Nombre de la
valores . espec1ficac1ooes absolutos, s ino que son meramente C lase Partculas iguales o mayores de 0,5 m
eus y/ mfonnatn'.os. Dada la diversidad de equipos y mtodos de muestreo Sistema
1 m1crob1olog1co, no se puede sugerir razonablemente que lograr SI estadounjdense (pies3)

1
i d1~hos ~a tores garantiza un control microbiano o que variaciones
mas alla de los valores presentados en este captulo ind ican una
prdida_ dt; c_ontrol. La ap licacin incorrecta del muestreo y anlisis
MI
Ml.5
10,0
35,3
0 ,283
1,00
M2 100 2,8
rmcrob1olog1co puede causar una variabilidad sigrficativa y ser el
M2.5 10 353 10,0
o:1gen. ~otenc1al de una contaminacin inadvertida. Los medios y M3 1000 28,3
d1spos1t1vos de muestreo, as como los mtodos indicados en este M3.5 100 3530 100
captulo, no son especi.ficaciones sino que slo tienen un carcter M4 10 000 283
informativo. M4.5 1000 35 300 1000
Una gran proporcin de productos estriles se fab rica por M5 100 000 2830
procesamiento asptico. Como el procesamiento asptico se basa M5.5 10 000 353 000 10 000
en excluir n,jcroorganismos del flujo de proceso y en evitar que los M6 1 000 000 28 300
microorganismos ingresen en los envases abiertos mientras se llenan, M6.5 100 000 3 530 000 100 000
la biocarga del producto as como la carga microbiana del amb iente M7 10 000 000 283 000
de fabricacin son factores importantes en la garanta de esterilidad
de dichos productos.
. Adapt~do de la NomrnFederal 209E de los EE. UU., 11 de septiembre de
1992-:- Clases de L1mp1ezas del Aire con respecto a Partculas en Cuartos
L1mp1os y Zonas Limpias".
Establecimiento de Clasificaciones para Cuartos
Limpios
El diseo y construccin de cuartos limpios y ambien tes
controlados se trata en la Nonna Federal 209E. Esta nom1a de La Importancia de un Programa de Evaluacin
limpieza del aire se define mediante la concentracin absoluta de Microbiolgica en Ambientes Controlados
partculas en e l aire. Incluye los mtodos usados para la as ignacin
de la clasificacin del aire en ambientes contro lados y para e l contTOI E l contro l del recuento de partculas to ta les en ambientes
de partculas en el ai re. Este documento federa l slo se aplica contrnlados, incluso mediante e l uso continuo de instrumentos
a partculas en el aire dentro de un ambiente controlado y su e lectrnicos, no s uministra in formac in acerca d e l contenido
propsito no es caracterizar la naturaleza viable o no v iable de las mkrobiolgico del ambiente. La linutacin bsica de los contadores
partculas. de pa:tc ulas es que nuden partculas d e 0,5 m o mayores. Si bien
Los fabricantes de cuartos limpios han aplicado la Norma Federal l?s m1croorgan1s mos de l aire no son clulas individuales o que flotan
209E a cuartos limpios y otros ambientes conlTOlados en la industria libre mente, con frecuenc ia se asocian a partculas d~ Oa 20/~'_os
farmacutica para proporcionar una especificacin para la cons tru c- recuentos de partculas as como los recuentos m ic ro ianos et o de
cin, puesta en servic io y mantenim iento de dichas instalaciones. Sin am bientes controlados varan segn la loclizacin del muestreo y
embargo, los datos disponibles en la industria fannacutica no las actividades que se desarrolla n durante e l muestreo. El control de
suministran ningn acuerdo cientfi co sobre la relacin entre e l partculas y microorganismos no viables en el ambiente e~ una
n~mero de partcu las no v iab les y la concentracin de microorga- fun ci n de contro l importante puesto q ue ambos son necesario~ para
nismos viables. satisfacer los requis itos fannacopeicos de productos para Purtrnlas
La importancia crtica del n mero de partc ulas no viables en la y Esterilidad en Jnyeccio11es ( 1).
industria electrnica hace de la aplicacin de la Nom1a Fed eral 209E
una necesidad, mientras que en la ind ustria farmac utica existe una
 . . 1 ., . , 1 General USP Jr,
650 ( 1116) Evaluacin Microbiolgica de Cuartos L1mp1os n;onnac,oi
,r11'
t,' -~'J
. cable~ Luego. se generan partcu~
v> '
pl"1dfl',
11
Los programas de control microbiano en ambientes controlados o minimizar los efc~tos md ~~I camJo estrl. Esta evaluacin lo<: .\!. flt'

deben evaluar la eficacia de las prcticas de limpieza y desinfeccin cerca de la zona cn!Jcn '1 das de produccin , pero con 1 ~-'.~r11l
n:alizndas por el personal que podran afectar la biocarga del reali za en cond1c1ones s1mu 1a b 05 ~,-
10
1<'.
. . lugar de tra aJo.
arnh1en1e controlado. El control microbiano. independientemente de equipos y el pcrso_na 1 en sub adecuadas y optim izar las caractens. r . . rtll' J!'
la ~oftsticacin del siste111n. 110 debe necesariamente identificar y Es esencial realizar prue ~s d ambiente controlado antes d 1"'
11ei:~, e
cuantificar todos los conlJrninanles microbianos presentes en dichos
ambientes controlados. Sin embargo. el control mjcrobiano de rutina
ticas lsicas del cuarto limpio O ema de control microbiolg. e
, 1d ' del progra
completar 1a va I acion
1
d func iona hicn y scgu'n
biente contra Ia O
1co
sus
i;i,,
, _10>"' .
1,11

debe suministrar infomrncin suficiente para determinar que el Asegurar que e am . , da a asegurar que la bioearga d 1
ambiente controlado est funcionando en un estado de control especificaciones de mgernena aylu esamiento asptico o, he
. d . da para e proc e as tot'
adecuado. am b1ente es a .ecua rt'ificacin de rutina del c 11 nr,
El control microbiano del ambiente y el anlisis de datos por pa11e d b
pruebas e en repe
t Irse dura nte I
d
a ce
toda vez que se cambie
=O f9'prOI
limiJio o del ambiente controla O Y fl d el
de personal cal ificado pennile mantener un estado de control en
cuartos limpios y otros ambientes controlados. Debe realizarse un
muestreo del ambiente durante el funcionamiento nom1al para
. . [i a importante corno e I UJO e personal
func1onarn1ento en n,n "uJo de materiales, sistemas de manejo d~
procesamiento, operac1on,. 11
"L In pre
na
recopilar datos significativos. El muestreo microbiano debe aire o distribucin de equipos. ..ort. a
realizarse cuando los materiales estn en la zona, se estn
or1e'' .
~<'l)l
10 tt'cnCI.
desarrollando las actividades de procesamjento y est presente una si, inicl
dotncin completa de personal operativo. Capacitacin del Personal U:iJ' 0 ta
El contro l microbiano de cuartos limpios y algunos otros b1e
ambientes contro lados, cuando con-esponda, debe incluir la Los productos procesados as~pticamente requ ieren que los :)11li\t1nqu
cuantificacin del contenido microbiano del aire del cuarto. del fabricantes presten especial atenc1on_, los detal les Y 1:1antcngan .<!f:llll~
rfU~I ci(
aire del compresor que ingresa a la zona critica, de las superficies, 1ma nguro sa y Lma superv1
una d 1.sc1p . swn del personal
d estncta con el iOSll"a .
equipos. recipientes de desinfeccin, pisos, paredes y las prendas del fi n de mantener una calidad ambiental adecua a para asegurar la crobtO
llll
personal (por ejemplo batas y guantes). El objetivo del prograrna de esterilidad del producto fina l. . . soja es
control microbiano es obtener estimaciones representativas de la La capacitacin de todo el pe~son~I que_ trabaJa en _ambientes sup1erne1
biocarga del ambiente. Cuando los datos estn recopilados y controlados es critica. Esta capac1tac1on es igualmente 1mpo~te a~entes '
analizados, el personal capacitado debe evaluar las tendencias. Si para el personal responsable del programa _de _control m1:rob1ano,
dichOS al
bien es importante revisar los resultados ambientales con la donde la contaminacin de la zona de tr~baJO hmp1a podna ocumr
inadvertidamente durante el muestreo m1crob_1ano. En operac1on~ boogo,s .
frecuencia recomendada y especificada, tambin hay que revisar nucolog1
los resu ltados durante perodos prolongados para determinar altamente automatizadas, los empleados que ,tienen el contacto_mas
tendencias. Las tendencias pueden visualizarse mediante la con- directo con las zonas criticas dentro del area de procesam1emo roedio d
struccin de grficos de control estadstico que incluyen niveles de podran ser el personal de control. El control del personal . debe Pueden 1
alerta y de accin. El control microbiano de ambientes controlados realizarse antes o despus de trabaJ~r en la _zona de procesa1:1Jen_t?. de hong
puede evaluarse, en parte, mediante estos datos de tendencias. Deben E l muestreo microbiolgico podra contnbu1r a la contam111ac1on general,
emitirse infonnes o resmenes peridicos para alertar al gerente 1rucrobiana si se usan tcnicas de muestreo inapropiadas. Se requiere 1mbargc
responsable. un programa formal de capacitacin del personal para minimizar el ejemplo
Cuando se exceda el nivel microbiano especificado de un riesgo. Dicha capacitacin fonn al debe documentarse para todo el prueba
ambiente controlado, debe revisarse la documentacin y hacer una personal que ingresa a los ambientes contro lados. pruebas
investigacin. Los detalles de la investigacin podran ser distintos L a gerencia del establecimiento debe garantizar que todo el paro de
segn el tipo de producto fabricado en el cuarto y su procesamjento. personal que participa en operaciones en cuartos limpios y ambientes microae
La investigacin debe incluir una revisin de la documentacin de controlados conozca bien los principios microbiolgicos relevantes. La se
mantenimiento de la zona, de la documentacin de desinfeccin, de La capacitacin debe incluir principios bsicos del procesamiento despus
los parmetros fsicos u operativos inherentes, tales como los asptico y la relacin que tienen la fabricacin y los procedimientos usado t1
cambios de temperatura ambiente y humedad relativa, y la de manejo con las posibles fuentes de contaminacin de los coa un 1
capacitacin del personal in volucrado. Despus de la investigacin, productos. Dicha capacitacin debe incluir principios bsicos de que val
entre las acciones a tomar podran incluirse el refuerzo de microbiologa, fisiologa microbiana, desinfeccin e higiene. selec- cultivo
capacitacin del personal para enfatizar el control microbiano del cin y preparacin de medios, taxonoma y esterilizacin segn lo
ambiente; muestreos adicionales y ms frecuentes, desinfecciones esteri.lic
requiere la naturaleza del trabajo del personal en el procesa1niento
adicionales, anlisis adicionales de los productos, identificacin del asptico. El personal involucrado en la identificacin microbiana indica 1
contaminante microbiano y su origen probable y una determinacin necesita una capacitacin especializada sobre los mtodos de Promoc
de la necesidad de reevaluar los procedimientos operativos laboratorio req ueridos. Se debe proporc ionar al personal capacita- atnbien
estndares vigentes y revalidarlos, si fuera necesario. cin adicional sobre la gestin de los datos ambientales obtenidos. aislam,
La revisin de los resultados de la investigacin y de las pruebas Re~ulta crtico co~ocer y comprender los procedimientos operativos llledios
pennite determinar la importancia del nivel microbiano excedido y la estandares, especialmente aquellos relacionados con las medidas lllocula
aceptabilidad de las operaciones o productos procesados en tal con-ectivas que se toman cuando las cond iciones ambientales as lo (ufc) d,
condicin. Las investigaciones y las razones relacionadas al curso de exigen. Comprender las polticas de cumplimiento reglamentario Y . Un
accin se deben documentar e incluir como parte del sistema general las, r~sponsabi lidades, de cada persona con respecto a las buenas 1denti.ft
de gestin de cal idad. practicas _de f~bnca~1on (GMP) debe ser parte integral del programa de lllt
Un ambiente controlado, tal como una zona limpia o un cuarto de capac1ta~1?n, as1 como la capacitacin para efectuar inves!lga- los
limpio, se defin e por certificacin segn un estndar operativo de c1ones y analis1s de datos. v~~fic,
cuarto limpio. Los parmetros que se evalan incluyen la integridad La fu ente principal de contaminacin microbiana en ambientes l1lltitei
del filtro. la velocidad del aire, patrones de aire, cambios en e l aire y contro lado~ es el personal. La contaminac i n puede ocurrir por la
diferenciales de presin . Dichos parmetros pueden afectar la carga prol?agac,on de . m~croorgani smos presentes en las personas.
microbiolgica del funcionamiento de cua11os limpios. El diseo, particularmente s1 tienen infecc iones activas. Slo las personas
construccin y funcionamiento de los cuartos limpios varan mucho, sanas deben tener acceso a los ambientes controlados.
Jo que dificulta la generalizacin de requisitos para tales parmetros. Estos hechos resaltan la importancia de una buena higiene
Un ejemplo de un mtodo para realizar una prueba de partculas de personal y una _atenc in ~ui_dadosa a los detalles de los procedi-
desafo al sistema es el de Ljungquist y Rein muller, en el que se mientos de vestimenta ascpt1ca que usa e l personal que ingresa al
aumenta la concentracin de partculas ambientales cerca de las amb,en_te controlado . Una. vez ~ue ta les empleados tienen colocada
zonas de trabajo y de equipos crticos. 1 En primer trmino, se genera la vestimenta_adecuada- 1nclu1da una cobertura facial complcta-
humo para ver los movimientos de aire en todo el cuarto limpio o de?en ser cu idadosos de mantener la integridad de sus guantes )
ambiente controlado. Se puede ver si hay vrtices o zonas de traJes en todo mon~cnto. El peligro principal de contaminacin del
turbulencia y puede ajustarse el patrn del flujo de ai re para eliminar prod u~to que se esta procesando aspticamentc proviene dcl personal
' Internetion Between Air Movements and the Dispersion of Contaminants: oper~t,vo, de manera que e l control de la contaminacin 1111cn1h1an
Clean Lones with Unidircctional Air Flow, Jo ,mwl ofParen/era/ Science w ,d asociada a e llos es uno_ de los elementos ms imrortantes dl'l
Tecln,o/ogv. 47(2). 1993.
programa de contro l ambiental.
UJr Jv
lnjormacin Ge
nera/ I (ll16) Evaluacin Microbiolgica de Cuarto Limpios
Es imposible exagerar la importancia d
exhaustJ\a de,I pe~nal que trabaja en ~ una capacitacin
incluidas las tecnacas de asepsia. El pro an~: lentes controlados,
p0r s1 m1~mo no es capaz de detectar tofo de control ambiental
roce~aroiento asptico que podran s Ios acontec1m1entos del
~ 1crob10lg1ca del ambiente . Por lo tan~n~~:ometer la calidad
de llenado co11 medios estnles y de simuiacinestudios regu lares
revalidar el pro_ceso son necesarios para garantizar de procesos. para
cazmente los controles operativos y la . ~~e se mantieaen
efi capacnac1on.
factores Crticos en el Diseo e Jmplementacin de
un Programa de Control Ambiental Microbiolgico
Un programa de cont:ol _~mbiental debe ser capaz de detectar
oportunamente una desv1ac1on adversa de las co d.
,
biolog1cas e
d
mi dO I n 1c1ones m1cro-
ta que pem1ita tomar acciones correctivas
sigm~c~t!vas _y e caces. Es responsabilidad del fabricante desarro-
llar. _m1c1ar, . 1mpl_ementar y documentar tal programa de control
ambiental m1crob1ano.
Aunque se analizan las. recomendaciones generales para un
progran~a de control _ ambiental, es imperativo ajustarlo a las
instalac1o?e~ Y condiciones especficas. Un medio de cultivo
microb1ologico general tal como el Medio de Digerido de Casena-
Soja es adecuado en ! mayora de los casos. Este medio se puede
suplementar_ con ad1t1vos para reduclf o minimizar los efectos de
agentes des_mfectantes, o de_antibiticos si se usan o procesan en
dichos ambientes. Debe considerarse la deteccin y cuantificacin de
hongos filamentosos y levaduras. Son aceptables los medios
micolgicos generales tales como el medio de Sabouraud, el
medio de Sabouraud Modificado o el Agar lnhibidor de Hongos.
Pueden usarse otros medios validados para promover el crecimiento
de bongos, tales como el Agar con Digerido de Casena- Soja. En
general, las pruebas para anaerobios estrictos no son de rutina. Sin
embargo, si las condiciones o investigaciones lo justifican, corno por
ejemplo la identificacin de tales organismos en instalac_iones de
prueba de esterilidad. est indicada u.na mayor frecuencia de las
pruebas. Debe evaluarse la capacidad_ de los medios seleccionados
para detectar y cuantificar estos m1croorgamsmos anaerobios o
microaerfilos.
La seleccin del tiempo y las _temperaturas de !n?ubacin se hace
despus de seleccionar los med1.os adecuados. T1p1~amente, se ha~
usado temperaturas de incubac1on entre 22,5 2,5 _Y 32,5 2,5
con un tiempo de incubacin de 72 y 48 horas, respect1varnent~. Hay
que validar ]os procesos de esteri lizacin P?ra preparar 1~e~1os de
cultivo para el programa ambiental y ademas se de~e examin,ar su
esterilidad y su capacidad para promover el <;rec1m1ento segun se
indica en Pruebas de Esterilidad (71 ). Ademas, par~ la ~rueba de
Promoc1on . . d el Crec1m
. iento , la microflora representauva
d aislada
rt' del
de esos
ambiente controlado o las cepas ATCC prepara as pa 1~. L Los principios y conceptos de control estadstico del pn.,ceso son
aislamientos tambin pueden usarse para evaluar los _m~ ios. os
. de promover el crec1m1ento con
medios _deben ser capaces 'd d fonnadoras de colonias
moculac1ones de menos de l 00 um a es
(ufc) de los organismos de desaft decuado debe inclu ir la
. Un programa de contr~I am ienta I uestreo la validacin
identificacin y la evaluac1on de lugares, de m d amJente
I pero al menos debe dar lugar a una investigacin J e segu11111cnto
de mtodos para el muestreo 1crodbiof~~~iine de aislad~s deben
1 documentada que podra incluir modificaciones en el plan <le
Los mtodos usad?s para . eni~dicadores (ver Pruebas de
venficarse usando microorganismos
lmites Microbianos ( 61 )).
Establecimiento de Planes Y S 'ti
I os de Muestreo
icio de un cuarto limpio u otro
Durante el inic io o la puesta en serv . ubicaciones especficas
ambiente controlado, . hay que de~r~ma~ebe tenerse en cuenta lu
para el muestreo de aire Y de sup.e cies. las superficies podran
Proximidad con el producto Y 51 el aire Y rficies sensibles de los
entrar en contacto con un producto O con ~d~en considerarse como
~istemas de cierre de envases. !ales zo7as el . zonas que no tienen
reas criticas que requieren mas contro que, as de llenado de viales
eontacto con los productos. En 11na operac1
. . on
camente incluyen e1
Parenterales las zonas de operacin .d11P~; los envases abiertos
~Urnm1stro d~ cierre ?e envases, e l .re~o~ . ~omites) que el personal
Y0 tro5 objetos inanimados (por eJe P
lllaneja rutinariamente.
651
La fn.-cuenc1a de muestreo dcpc-nde de cuan <'ntico~ ...ean kv. vU06
espec1~cados y el cons1gu1ente tratamiento que rcc1~ el prodUCIO
dcspues de su proce~am,ento a,p11co La Tal>la 1 mticw-a
~rccucnc1a, de , muestre() sugendas en orden d1."Cn.x.1cnte y segun Le
importancia cnlle-a de la ,on.i mue~trea<la del am~1cntc c-0ntrolado
Tabla 2. Frecuencia dr Mue\treo Su~erida St-gm la lmporunda
del Ambiente Controlado
Frecuencia de
Zona de Muestreo M uc..tn:o
Cuartos con clasificacin de Clase 100 o Cad.l tumo opernll\o
mejor
Zonas de apoyo inmediatamente Cada rumo operat,~o
adyacentes a la Clase 100 (por
ejemplo, Clase I O 000)
Otras zonas de apoyo (Clase 100 000) Dos 1,ece,; por ~em:\IW
Zonas de posible contacto con el Dos veces por se:mJ.11a
producto o envase
Otras zonas de apoyo de zonas de Una vez por ;,emana
procesamiento asptico que no estn
en contacto con el producto
(Clase 100 000 o inferior)
A medida que aumentan las intervenciones manuales durante las
operaciones y a medida que aumenta el potencial de contacto del
personal con el producto, aumenta la importancw relativ:i de un
programa de control ambiental. El co.ntrol ambiental resulta mas
c1tico para productos procesados aspt1camente que para productos
que se procesan y se esterilizan al. final d_el proceso. La
detem1inacin y la cuantificacin de 011croorgan1smos resistentes
al tratamiento de esterilizacin posterior son ms criticas que el
control ambiental microbiolgico de los ambientes de fabricacin
circundantes. Si el ciclo de esterilizacin final no se basa en el
concepto de ciclo de sobremuerte sino que en la c~ga biolgica
previa a la esterilizacin, el valor del programa de b10carga re:.--ulta
crtico.
Los planes de muestreo tienen que sei: dinmicos. con frecu:ncia:,
de control y ubicaciones de muestreo aJustadas a_las tendencias de
funcionamiento . Corresponde aumentar o d1sm1nu1r el muestreo
segn las tendencias de desempeo observadas.
Establecimiento de Niveles Microbiolgicos de Alerta
y de Accin en Ambientes Controlados
tiles para establecer niveles de J\lerta y Accin y para reace1ooar a
las tendencias.
Un Nivel de aferra en el control ambiental microbiolgico es .1.a
concentrac in de microorganismos que muestra lll~ potcnc,a1
alejam iento de las condiciones operativas nom1ales .. ~t se excede
el Nivel de alerta no necesariamente debe tomarse acc1on con-cctwa,
muestreo.
Un Nivel de accin en el control ambiental m1crob101og11.:o e!:> a
concentracin de microorga11ismos que. cuando ~e c,ccde. n:qut<.>re
un seguimiento inmediato y. si fuera necesario, una accin
correctiva. f na m
Los Niveles de alrrla por lo general ,e b:Lsan en 11~ on ~ I\n
histrica obtenidrt del funcionamiento ele rutma del proceso t n l
ambiente controlado especfico. h<1.-..an n
En una instalacin nue\'a, .:stos mwk~ gern:rnhrn:ntc s_e_ :
la experiencia previa con instulacwne, Y proci:,oi. snntlan:h Y e
deb~n eva luar datos de yarias , emana~ ~obre nivele-, m,cm 1,100,
ambientales para e~1,1blecer una lnea base. . ,,J.i ra
Estos niveles se reexarn111an con un.1 frecuem:1a ~t-lllblcc 1;'1
detenninar s1 son apropiados. Cuanu lo~ dato~ h1i.ton~"'' mu<" ran
. . t de las comlic1!lnes lo~ OI\ ele, '>C n."Cxamman 'r
un me1omm1en o d
difican ara reflcJar la~ conu1cioncs. Las ten en~ 13:, ..u
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652 (1116} Evaluacin Microbiolgica de Cuartos L1mp1os
r'r
11'1ii
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~
11,l':,
la causa e implementar un plan de accin ~orTcctiva para dcvolvc_r lns .rabia s. e,uias
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Jurncntaria
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crsona perati Yo, en u,e pr .,,reJ
condjciones a los iJltervalos esperados. Sin embargo, hay que 1111ci:.1r
una investigacin y evaluar el efecto potencial sobre el producto.
Contro 1nd os uc 1a ~,11, rt1b'1
' 11'1 . llf
Clase ufc por Placa de Contacto ~~ r1:111
Vestimenta e ln;;;:- iJllp<1 ()fJ)11t'
Consideraciones Microbiolgicas y Niveles de
Usualmente
mentaria del personal ~t~ er os r
aplicada 1.:11 tcne de e
lnten1encin para Ambientes Controlados SI EE.UU. Guantes rtucf11rdistle 1
M3 .5 100 3 5 se 10 urJ 1
La clasificacin de cuartos limpios y otros am bientes contTOlados 10 20
se basa en la Nom1a Federal 209E, segn los recuentos de partculas M5 .5 10 000 sobre t,iorJ 0
totales para estos ambientes. Las industTias fam1acuticas y de
Ver en la Tabla 4 en () .
aii'p/actJ
' 5 ;
dispositivos mdicos en general han adoptado la clasificacin de te cofll
Clase IOO. Clase I O 000 y Clase l 00 000, especialmente para las
especificaciones de construccin de las instalaciones. ..nente lo
filen .
,,,.. posic
Aunque no se ha establecido una relacin directa entre las clases Metodologa e f nst~umental pa ra Cuantificacin ~e ex
de ambiente controlado de la norma 209E y los niveles ()dJJflentac
Microorganismos Viables Transportados por el Aire se rnin'
nucrobiolgicos, la indusnia farmacutica ha usado los niveles ,:00U1 de
microbianos corTespondieates a estas clases durante varios aos; Los cientficos en general aceptan que los organiS!710S _transporta- Joa
estos niveles han sido los usados para la eva luacin del ~jcOS
dos por el ai re en ambientes controlados p~eden 111_flu1r sobre la fil rna da. C1
cumplimiento de las GMP vigentes.2 Se ha demostrado que dichos calidad microbiolgica de los P~?ductos 1ntermed1os o . fin~l~s 10
ruveles se logran fcilmente con la tecnologa actual para ambientes ,onteng , t
ar
fabricados en dichas zonas. Tamb,en se acepta que la est1mac1on
controlados. Se han presentado i.nfom1es e inquietudes acerca de de esos organismos transportad_os. por el aire puc?e verse afectada metros ~u
ruferencias en estos valores cuando se usan diferentes sistemas de por los instrumentos y proced1m1entos usad_os para real_,zar estos )' exacutuc
muestreo, y distintos medios y temperaturas de incubacin. Hay que anlisis. Por Jo tanto, cuando se usen otros metodos o equipos, debe eeueotoS
reconocer que ningn sistema es absoluto, pero puede ayi,dar a determinarse la equi valencia gener~l de los_ resu ltados obt~1dos. Se
detectar cambios y tendencias en la calidad ambiental. Los valores riernP0 : P
espera que los avances te~n.o_lg,cos bnnden innovaciones q~e detenn1na1
mostrados en las Tablas 3. 4 y 5 representan resu ltados de pruebas mejoren la precisin y sens1b1lidad con respect_o a la metodolog1a Tpicarnen
individuales y slo se sugieren como guas. Los datos de cada actual y que puedan justificar un cambio en los numeros absolutos de
fabricante deben evaluarse como parte de un programa de control de rnuestrf
organismos que se detectan. . . . aire en su
general. En la actual idad, los muestreadores mas usados en la industna de aire, en
fannacutica y de dispositi vos n_idicos de los EE_. VU. son los Podra se,
muestrea.dores centrfugos y por impacto. A modo 111forroat1vo, se minutos P
Tabla 3. G uas de Limpieza del Aire en Unidades Formadoras de detallan algunos muestreadores disponibles en el mercado. El se ba info
Colonias (ufc) en Ambientes Controlados (Usa ndo un Mues- usuario tiene la responsabi lidad de determ inar la seleccin, de volwn
treador de Ranura-Agar o su Equiva lente) conveniencia e idoneidad de cada muestreador. considerar
Muestreador de Aire de Ranura-Agar (STA)- Las guas las zonas
ufc por metro ufc por pie microbio lgicas de la Tabla 3 para los diversos ambientes
Clase cbico de aire .. cbico de aire la probabi
controlados se basan en este muestreado r. La unidad est impulsada En los
SI Usualmente apli- por una fuente acoplada de vaco controlable. La toma de aire se han revel;
cada en hace a tra vs de una ranura estandarizada debajo de la cual se coloca
EE.UU. una placa de Petri que gira lentamente y que contiene agar nutritivo. grandes. 1
Las partcu las en el ai re que tienen una masa suficiente impactan aire supe1
M3.5 100 Menos de 3 Menos de 0, 1 debido a ,
M5 .5 10 000 Menos de 20 Menos de 0,5 sobre la superficie del agar y se permite el crecimiento de los
100 000 Menos de 100 Menos de 2,5 organismos viables. A menudo se usa una toma de aire remota para Al sele,
M6.5
no a lterar el flujo laminar. su efecto
Segn se define eo la Nonna Federal 209E, septiembre de 1992. . . Impactador de Tc1miz- EI aparato consiste en un recipiente donde se
Se deber muestrear un volumeo suficiente de aire para detectar vanac,oncs dise_ado para alojar una placa de Petri con agar nutritivo. L_a ti_po de m
que exceden los lmites especificados. cub ierta de la unidad tiene perforaciones de un tamao predeterrru- s1la tube
nado. Una bomba de vaco extrae un vo lumen conocido de aire a debe elirt
tr~vs de la cubierta y las partculas del aire que contienen con-ecci1
m1c~oorgan1smos chocan sobre el medio de agar de la placa de
Petn._ Algunos muestreadores estn disponibles con una serie de
Tabla 4. Guas de Limpieza para Superficies de Equipos e rec1p1entes en cascada, con perforaciones de tamao decreciente.
Insta laciones en Ambientes Controlados, en ufc Metodc
Estas unidades penniten detenni nar la distribucin de tamao de las Para C
ufc por Placa de Con- part<:_ulas que contiene~ microorganismos viables, basada en el
Clase tacto' ta.mano de las perforaciones que dejan pasar las partculas a las
placas de agar.
SI Usualmente apli-
cada en EE. VU. M_uestreador Centrifugo-La unidad consiste en una hlice 0
turbina que aspir~ un volumen conocido de aire hacia el interior de la
M3 .5 100 3 (incluido el piso) umd_ad Y l_uego impulsa el aire al exterior hacia una ti ra de agar
M5.5 10 000 5 nutnt,vo d ispuesta tangencialmente sobre una base plstica flexible.
10 (piso)
. Atrio Microbiolgico Es!eri/izab/e- La unidad es una variante del
1mpactador ?e _tamiz de una so la etapa. La cubierta de la unidad
Las reas de las placas de contacto varan de 24 a 30 cm'. Cuando se use el
hisopado en el muestreo, el rea cubierta debe ser igual o mayor de 24 cm' cont1e_ne onfic,os uniformemente espaciados de un tamao Je
pero no mayor de 30 cm'. apr~mmadamente 0,6 !711TI (0,25 pulgadas). La base de la unidad
aloJ~ una placa de Petn q_ue contiene agar nutritivo. Una bomba de
vac,o contro!a el _mov1m1ento de aire a travs de la unidad y se
encuentran d1spon1bles un cent ro de control de unidades mltiples Y
una sonda de muestreo remoto .
. M11es/read?r por Sislemu de Aire en Supeificie- Esta unidad
integrada esta formada por una seccin de ingreso que aloja una
placa de contacto de agar. Inmed iatamente detr'., de la placa Je
contacto hay un motor y una turbi na que aspira aire 3 tra\ s de la
2 NASA, 1967- Microbiology of Clean Rooms.
 USP 30
lnfonnacin General / ( Jl J6) E,alua.cin Microbiolgica de Cuartos l.impio,i
cubierta ~d0 rada de la umdad hacia la placa de contacto de agar y
mas alla e 1 motor, donde se expulsa. Tambin se encuentran
d1spomblcs unidades de montajes mltiples.
HuemY?ador '-~' Filtro de Gelatina-La unidad est fom1ada por
una b0mba de vac10 con una manguera de extensin que tcm1ina en
un porta~ltTo que puede ubicarse ICJOS, l'n el espacio crtico. El filtro
esca constitui_d o por fi~ra~ de gelatina dispuestas al azar. capaces de
~tener los microor~an1smo~ transponados por el aire. Despus de un
", tiempo_de exposicion especificado, se retira aspticamente el filtro y
' se lo disuel\ e en un diluyente adecuado; luego se realiza la siembra
sobre un medio de agar adecuado para estimar su contenido
!11.lCrobiano.
Placas de Sedimentacin-Este mtodo an se utiliza amplia-
mente como una . manera simple y econmica de evaluar cualitati-
\amentc los _ambientes durante tiempos de exposicin prolongados.
La c=-pos1c_i?n de placas de Petn con agar abiertas, o placas de
sed1me~tac 1.~n, no debe usarse para estimaciones cuantitativas de la
contammac1on m1crob1ana en ambientes crticos.
U~a. de las . principales limitaciones de los muestreadores
mecamcos de aire es la limitacin del tamao de muestra de aire
tomada. Cuando se espera que el aire de un ambiente controlado no
contenga ms de tres ufc por metro cbico deben evaluarse varios
metros cbicos de aire para lograr resultado's de razonable precisin
y exactitud. A rn~nudo esto no es prctico. Para demostrar que los
recuentos m1crob1anos del ambiente no estn aumentando con el
tiempo: posi?leme~te se necesite prolongar el muestreo para
determmar s1 el tiempo de muestreo es un factor lirnitante.
Tpicamente, los muestreadores de ranura-agar tienen una capacidad
de muestreo de 80 litros por minuto (la capacidad de los sistemas de
aire en superficie es un poco mayor). Si se analiza un metro cbico
de aire, entonces se exige de un tiempo de exposicin de 15 minutos.
,s: 1 Podra ser necesario usar tiempos de muestreo superiores a 15
. El 1 minutos para obtener una muestra ambiental representativa. Aunque
se ha informado de muestreadores capaces de alcanzar velocidades
ia
de volumen de muestreo muy altas, en esas situaciones se debe
considerar el potencial trastorno de los patrones del flujo de aire en
las zonas crticas o la generacin de una turbulencia que aumentara
la probabilidad de contaminacin.
En los muestreadores de aire centrfugos, varios estudios previos
han revelado que las muestras son selectivas para las partculas ms
grandes. Este tipo de muestreador puede producir recuentos en e l
aire superiores a los obtenidos con otros tipos de muestreadores,
Cllll debido a esa selectividad inherente.
l115 11 Al seleccionar un muestreador centrfugo, debe tenerse en cuenta
pall su efecto sobre la linealidad del flujo de ai re en la zona controlada
donde se coloca para realizar el muestreo. Independientemente del
tipo de muestreador, s i se usa una sonda remota hay que detenninar
si la tubera adicional altera el recuento viable del aire. Este efecto
debe eliminarse o, si no es posible, debe intrnduci rse un factor de
correccin en el informe de los resultados.
Metodologa y Equipos para Muestreo de Superficies
para Cuantificacin de Contaminantes Microbianos
Viables en Ambientes Controlados
Otro componente de l programa de control microbiano en
ambientes contrnlados es e l muestreo de las superficies de equipos,
instalaciones e indumentaria personal usados en esos ambientes. La
estandarizacin de mtodos y procedimientos de muestreo de
superficies no se ha tratado en la industria farmacutica tan
ampliamente como para el muestreo del aire.3 Para minimizar los
trastornos en las operaciones crticas, e l muestreo de sup_erfic1e se
realiza al finalizar las actividades. El muestreo de superficies puede
llevarse a cabo mediante placas de contacto o por e l mtodo de
hisopo. El control de superficies en general se realiza en reas que
entran en contacto con el producto y en reas adyacentes. Las placas
de contacto llenas con aga r nutritivo se usan al muestrear s uperficies
regulares O planas y _se incuban directamente por el tiempo In
temperatura de incubacin apro piados para recuentos de organismos
viables. Puede usarse agar especializado para la cuantificacin
CSpecitic<1 de hongos, esporas, etc.
-------------
' La Stxtemth Fd/1/on o{ Stm1dard Me1/wds for /he fu.ami11atiu11 of Dairy
f'rodu , is (de In American Heallh Associntion) sum1n ~trn unu seccin Je
mueqtreo de ~uperficie,.
653
El mtodo de hi.sopo puede u ~ para muc-.tn:M ,upc,c~
irregulare-;. espeClalmente los equipos e us.i el hbOpO ..:tJCno
complemento de las placa." ck cont.1cto >ara <;upcm<:ics rcguhan 1-1
hisopo luego se coloca en un diluyente odecuad<' y -..e n-:,lu~ el
recuento m1croh1ano e-5l1madc> mediante l.i :.1nnhra de urw alicu.,..
apropiada sobre o en agar nutntwo c9Jeoficado El .&1e;:i por JQooe
se pasa el hisopo ..e define con un.i plannlla e-;tcnl de wnaiki
adecuado. En geneml. es cntn" 24 y 30 cm Las c-<t1roo,.;1onc,
microbianas se infonnan por placa de conta.:to o ~,r h110J10
Medios de Cultivo v Diluvent es l 'sad~ para
Muestreo o Cuantifi~acin de '1icroorgani~mo~
El tipo de medio, sea lquido o lido. us.1do para muc-;tf't'(I ,~
cuantificacin de microorganismo5 en ambien te,:, contrf\l.1do-.
depende del procedimiento y equipos Cuando se nccc.-c;tta un
medio slido, un medio multifunc1onal u.,;ado ct1munmente c:-s el
Agar de Digerido de Casena- Soja. A continuacin se det.Jllan om.""
medios lquidos y slidos.
Medios Lquidos
Solucin salina trptonada Agar de digerido Je caseina-soJa
Agar nutriti vo
Agua peptonada
Solucin salina amo11i- Agar extracto glucosado de tnptona
guada
Gelatina amortiguada Agar lecitina
Ge latina amortiguada Agar infusin cerebro corazn
enriquecida
Agar para placa de cont.acto
Infusin cerebro corazn
Medio de casena-soja
Los medios lquidos y slidos se eslerilizan usando mtodos vahdado,,
Estos medios se encuentran disponibles comercialmente en forma
deshidratada. Tambin se encuentran disponibles listo~ par.1 usar i
se usan desinfectantes o antibiticos en la zona contro lada. dt."OC
considerarse el uso de medios con agentes inactiv:mtes adecuados.
Pueden usarse medios alternativos a los mencionados sii::mpre que
estn validados parn e l propsito requerido.
Identificacin de Ais lamientos de Microorganismo
del Programa de Control Ambiental
E l programa de cont rol ambiental incluye una .11.kcuada
identificacin de la flora obtenida del muestre-u. Si ~e co111,~e la
flora normal de los ambientes controlados. ayuda a dcterromar la
flora microbiana habitual prevista en la insrala.:1n que ,e
est controlando, y pennite evlluar la eficacia de lo.s procedim,entoi..
mtodos y agentes de limpieza y desinfeccin as corno los m.:to<lo,
de recuperacin. La informacin reunida mediante un programa Jt:
1dent11icacin tambin puede resul tar til para investigar la fuente de
contaminacin, especialmente cuando se e,ceden los i\'i"d<'I ""
accin .
La identificac in de microorganismos aislados <le ld, tona,
crtic'.15 y ~~gares inmediatos a ellas deben tener pnon<l.id ~obre L.i
1dent1ficac1on de microorganismos de zona, no ctitic,L, b 11cc1." !>.iIW
verificar los mtodos de idcntif:acin y e, uluai lo~ clu1x,, btu,
para usar segn su propsito previsto ( ver f 11cture1 Crit1u1->
ln vo/11crados en el Dscliu e l111ple111e11taciri de un Progn.m1a Jt'
Control A111bie111al).
Evaluacin O perativa del Estado l\1krobiolgko de
Prod uctos Llenndos Aspticamente en Cuarto
Limpios y Otros Ambientes Controlados
El lmbicme controlado se vigila mediante un pngmmii Je ,'l'fltnI
ambiental acb:uado Parn a~cgurnr un~, b11xMgt1 rninuna -.e J'Ul'lk
obtener informacin ad1l'1onal whrc d ,11nh1,nt~ t\intrnla,fo
mediante el uso del /le,wdv dt' me,l,,~1 c--tenk-, tm1.,l1J hll,1 l n
llenado de medills aceptable J e muc,tra qu r l' poMbk realv,u un.i
corrida ~1 mulada del pmducto l'n l.1 lnt.,1 de ,nl\lUl'\.llin cn 1."'4;.
 654 ( 1116) Evaluacin l\1icrobiol~ica d l' C'uarlo s Li mpios b1(or111ac11 General
momento. Srn embargo. otro~ lactorc, son importante., . t:ilcs como In
construccin adecu:11.la de 1nstabc1oncs. el co11tro l arnbrcnlal y la
capacitacin Je t personal.
Cuando se desarro lla e rn,1.113 un proceso asptrco. gcncralrncntc
es necesano calificar su cstaJn rn inobiolgrco obteniendo al menos
tTcs llenados de medios cunsc'cutivos. sin problemas. Un llenado tic
medios utili7a un metl io de cu hi vo en lugar d, productos. para
detectar el crecimiento de microorganismos. Para dcsarTol lar un
programa de llenado de ml'dios. hay que considerar: procedimientos
de llenado de mctl ios. seleccin de medios, volumen tic llenado,
incubacin. tiempo y temperatura. inspeccin de las uniJatlcs llenas,
documentacin. interpre tacin tic los resultados y posibles acciones
correctivas requeridas.
Como un llenado de medi os se diseria par:, s imubr e l
procesamiento as ptico de un producto especi ficado. es impo11antc
reproducir las condiciones J e una corrida nonnal del producto. Esto
incluye la dotacin completa de pcrsoaal y todos los pasos y
materia les del proceso que constituyen una con-ida nonnal de
produccin. Durante la realizacin cil'I llenado de medios. debe n
planearse diversas intervenciones documcntadus que se sabe que
ocurren durante las conidas rea les (por ejemplo. el cambio de tas
agujas de llenado, la reparacin de obstrucciones de cornponcnles).
De modo alternati vo. con el fin de agregar un margen de
seguridad. puede usarse w1a combinacin de condic iones posibles.
Entre los ejemplos se pueden incluir secuencias de comienzo y
detencin frecuentes, la reparacin inesperada del sistema de
procesam iento, el reemplazo de filtros, etc. No es necesario rea lizar
la calificacin de proceso asptico para cada producto, sino que debe
realizarse para cada lnea de procesamiento. Dado que la geometra
del envase (el tamao y la apertura del envase) y la velocidad de la
lnea son factores variables en una lnea de procesamiento asptico,
debe usarse una combinacin adecuada de estos factores, prefer-
entemente en situaciones exrremas. para calificar la lnea. Debe
documentarse una justificacin de los productos utilizados.
La Gua de la FDA de 1987 sobre Medicamentos Estriles
Producidos mediante Procesamiento Asptico (Stcri le Drug Products
Produced by Aseptic Processing) indica que las corridas de llenado
de medios deben cubrir todos los tumos de produccin para wdas las
combinaciones de lnea, prod ucto y e nvase. Esta gua debe tenerse
en cuenta para la calificacin de corridas de llenado de medios y
tambia para reevaluaciones o revalidaciones peridicas. Los
programas de llenado de medios deben adem:s simular prcticas
de produccin duraate corridas prolong:Jdas. Esto puede lograrse
realizando las corridas de llenado de medios a l fi nal de las corridas
de producc in.
En genera l, para niveles inferiores a 100 u fe/unidad, se ~uede us?r
un medio multifuncional rico ta l como el Caldo de Caserna - SoJa
que se ha comprobado que promueve el crecimiento de una scrie_de
organismos indicadores_(ver P111ehas_ de Es1eri_lidarl (7 t ) ). Tambin
pueden usarse ais lamie ntos de m1croorganrs_mos de l am?1e111e
controlado donde se har el procesamiento asept,co. Despucs del
procesamiento asptico del medio, los recipienles llenos se incuban a
22,5 + 2,5 o a 32,5 + 2,5 . Todos los recipientes llenos con medios
se in~ uban duran te - un mnimo de 14 dias. Si se usan dos
temperaturas para la incubacin, entonces los recipientes llenos se
incuban durante al menos 7 das a cada temperanJra. Despus de la
incubacin, los recipientes llenos con medios se revisan para. ver si
hubo crecimiento. Los ais lamientos de l lle nado de meclios se
identifican por gnero y si es posible, por especie con l'I fin de
in vestigar las fuentes de contaminacin.
El llenado de medios depende crticnmente de l nmero ele
llenados necesarios para ca lificar un proceso asptico, el nmero
de unidades llenadas con medios, In interpretacin de los resultados
y la implementac in de acciones correctivas. Histricamente. . se
realizan tTes corridas de llenado de medios durante la calrficac, n
inicial o puesta en servicio de una in~talacin pa_ra dcmost.rar la
uniformidad de la lnea de procesamiento aspt ico. El numero
mnimo de unidades para demostrnr una tasa de conlaminacin ele no
ms de O, 1%, que es e l criterio de aceptacin de una ~01Tidn de
llenado de medios, es por lo menos 3000. Debe cnfa trzarsc que
muchas compaas de los Estados Unidos y otros palses llenun ms
Una encuesta de la Parcntcrnl Orug Association (T~chni..:nl Mnn~gruph 17)
mostr que, de 27 enlrevrslodos. el 50% llcnuba m/is de 3000 unrtlndes por
corrida.
USP JO
.
J e 3000 unrdades
en una unica eomda de llenado de medios . . .._
, --
1
instalaciones de plantas piloto r adasd ~~m~~: a:m~ ~luucos
pequciios pueden usar llenado~ e m~c: ( or e ern lo ISO v ,
Diversos documentos rntcm~ciona P J / . . Et.: .
GM P) han citado una expectall\'3 de cero_rcls ud1ta o,fiposltld\os9 Por
-
3000 unidades de llenado dc med osr a un. ru ve e con.d anza .e s.
S111. embargo se reconoce que se requieren d ' com
das repetidas de
medros . para' confirma, r a va 1idez esta 1st1ca e Ia tasa de
contaminac in observada para el proc~;od PDA, 'A S
La Monogralia Tcnica Nmero_ .. e ' _u~ey of
Cunent Slerile Man u facturi ng Prac_t,ces (Encue5ta de. Pracncas de
1- abncac1
6 E 1- 1 vge
n s en es 1. .
ri tcs) indica que muchos fabncantes creen
' a aces de loorar tasas
que sus procesos aseplrcos son c P o de
conlaminacin por debajo de O, %. 1 fu . ..
Dado que el personal constituye 1a . ente mas cntJca _de
' on
conta1111nac1 , en e1 cuarto 1impio_, se
. recomienda dla documentac1a
..
visual que correlaciona las a~t1v1dades de pro ucc1on con tos
acontec imientos de contamrnac1on duran te el llenado de medio~. El
uso generalizado de sistemas aisladores para pruebas de esten h~d
ha demostrado que la exclusin de l personal reduce la contamina-
cin en el manejo asptico.
Genera lidades sobre Tecnologas Emergentes para el
Procesamiento Asptico Avanzado
Debido a la estrecha correlacin entre la panicipac!a e
intervencin humana y las posibilidades de cont~ac,on de
productos en el procesamiento ~~pli~o, se han diseado e
implementado sistemas de producc1on Slll personal ea las zoaas
crticas. Entre los mtodos desarrollados para reducrr la probabilidad
de contaminacin se incluyea la automatizacin de equipos. barreras
y sistemas aisladores. Ya se encueatran en funciona.mtento
instalaciones que emplean estas estrategias avanzadas de procesa-
miento asptico. En establecimientos donde se exclu~e el _personal
completamente de la zo na critica, puede reducirse s1gn1ficanvamente
la necesidad de clasificar el cuarto basado en el control amb1eatal
microbiolgico y de partculas.
A continuacin se definen algunos sistemas empleados actual-
mente para reducir la tasa de coa taminacin en el procesamieato
asptico:
Barreras- En e l contexto de los sistemas de procesamiento
asptico, una barrera es un dispositi vo que li ma el contacto entre el
persona l y el campo asptico encerrado por la barrera. Estos sistemas
se usan en la nnacias de hospitales, laboratorios e instalaciones para
el cuidado de animales, as como en el llenado asptico. Es posible
que las barreras no estn esteri lizadas y no siempre tienen sistemas
de trans ferencia que pem, iten el paso de materiales hacia adentro y
hacia afuera del sistema sin exposic in al ambiente circundante. Las
barreras varan desde corti nas plsticas alrededor de las zonas
crticas de produccin hasta envolturas rgidas halladas ea equipos
modernos de llenado asptico. Las barreras pueden incorporar
elementos tales como guantes de a islamiento, semi trajes y puertos
de transferencia rpida.
Soplado/Llenado/Sellado- Este tipo de sistema combina el
molde~do por soplado del envase con el llenado del producto )'. la
o~erac,_n. de sellado en u_n solo equipo. Desde el punto de ,1sta
1111crob1o log1co, la secuencia de fom,ac in de l envase llenado con ,1
producto estril y fo nnacin y aplicacin del sellado se logran
aspt ica1:1ente e n una operac in inintem 1mpida con mnima
expos1c1011 al ambiente. Estos sistemas han existido durante
aprox imadamente 30 aos y han demostrado ser capaces de lograr
lasas de contaminacin por debajo de O, l %. Se han c itado rns us tk
contaminacin de 0,00 1% para sistemas sopladorllenado sellado.
basadas en el resumen y an lisis ele datos combinados de llenado de
med ios.
Asladorcs-Esta tecnologa se usa con un doble propsito. Uno
es proteger el producto de la contaminac i n del ambiente. incluido el
personal, du ra nte e l llenado _Y cerrado, y el otro es proteger :il
personal de lo~ productos nocivos o tx icos que s1: fabrican.
La tecno logta de los aisladores se basa en e l piincipio J e colocar
componente_s previan~~nte esteri lizados (envases. productos. cierres!
en un ombtentc este~,! Estos componentes pcnnaneccn cstl!nles
clumn te todn la operac10~ ~e p~ocesam iento, dado que 11 el pcNonal
111 componentes no esicnles ingresan al nislador. La barrerJ dd
.....
aislador es absoluta Y no pennite intercamb105 .
protegido y el ambiente no protegido Lus . entre el ambiente
1
fis1camente. contra el ingreso de con. ta _ais a~orcs 11ueden sellarse
mmac1on cxte d de los requisi tos incluidos en los procedmuentm opcnll""
sellarse eticazmcnte por aplicacin de sob . ma o pue en
manipulac1on de matcnales por el personal s/~~;~~;:~iecd~~~~u!i u;i
de guantes, serm traJes o tra1es completos T d . 1
. o os os ingresos de aire
al ars 1a dor, se rea 1LZan a travs de un fi hTo 1-1EPA o U PLA y la salida '
Je aire ti p1camente es a travs de Ull filt d
ro e grado HEPA
Nom1a 1men te se ut1ltza
. .
acido peractico y ,apor d e perox1
, d o d e
.<l , ..
h1 rogeno para esten 1izar las s uperficies del amb1e11te . t d 1
urnda d. La es t en11zac1on
. del -mten.o r de los . 1 d in ernod e a
d I a1s a ores y to o su
cont~rn o por o general se valida a un ni vel de ga t' d
esten lidad de I O..,,_ ran ia e
Los equipos. componentes y materiales se t d
d ' d d' 111 :ro ucen en e
a1s da or a traves 1 e iversos .procedimientos
e l uso d t 1
e un au oc ave
de os puertas, mtroducc1on continua de componentes or cinta
transportadora ~u_e atTav1esa un tnel de esterilizacin, el u~o de un
sistema _d e recipiente de transferencia a travs de un sistema de
acoplam1e_nto a( a is lador. Ta1~bin es necesario contrnlar rigurosa-
~ente la mtegndad , calibrac1on y mantenimiento de la unidad de l
aislador.
Los r~quisi~os para los ambientes controlados que rodean estas
tecnologias mas ?uevas para el procesamiento asptico dependen del
npo de tecnologia usada.
Los equipos de Soplado/ Llenado/Sellado que limitan e l contacto
de los empleados _con el producto pueden colocarse en un ambiente
controlado, especialmente si es posible a lgun a intervencin de los
empleados durante la produccin.
Los sistemas de barrera exigen algn tipo de ambiente controlado.
Debido a los n_urnerosos tiJos de sistem as de barrera y aplicaciones
existentes, vanan los requisitos para el ambiente circundante. Los
fabrican~es deben desarrollar el diseo y las estrategias operativas de
los_ ambientes que_ rodean estos sistemas de una manera lgica y
racional. independientemente de dichas estrategias, la capacidad del
sistema de fabricar productos estriles debe validarse confonne a
criterios preestablecidos.
En los aisladores, el aire ingresa a travs de filtros integrales de
calidad HEPA o superior, y sus interiores se esterilizan tpicamente
basta una garanta de esterilidad de l Q-<i; por lo tanto, los aislado res
contienen aire estril, no intercambian aire con el ambiente
circundante y funcionan sin usuarios humanos. Sin embargo, se ha
sugerido que si un aislador est en un ambiente controlado, se reduce
la probabilidad de contaminacin en caso de una fuga por una
pinchadura en e l traje o guante.
El grado y alcance de un control ambi ental microbiolgico de
estos s istemas avanzados para procesamiento asptico depende de l
tipo de sistema. Los fabricantes deben hallar un equilibrio entre la
frecuencia de los sistemas de muestreo ambiental que req uieren
intervencin humana y el beneficio que resulta d~ tal co_ntrol. Corr,io
los sistemas de barrera se disean para una mrnJJTia intervenc1on
humana deben usarse s istemas de muestreo remoto en vez del
muestre~ por personas. En general, una vez que la valida_cin
establece la eficacia del sistema de barrera, se puede reducu la
frecuenc ia de muestreo para controlar el estado microbiolgico de la
zona de procesamiento asptico, en comparacin _con la ~ecuencia
de muestreo de los sistemas c lsicos de procesamiento_asep_t1c? ..
Los sistemas de a is ladores requieren un control m1crob1olog1co
relativamente infrecu ente. E l control continuo de partculas to tales
puede garantizar que e l s is tema de filtracin de aire d_entro de l
aislador funciona correctamente. Es posible que los metodos de
muestreo mi crobiolgico cuantitati ~o de aire descritos en . este
captulo no tengan s ufi cie nte sens1bil1dad para eva lua_r e! ambiente
dentro de un a is lador. La experiencia con aisladores indica que en
condiciones de funcionamiento normal, las fu gas por pinchaduras_ o
roturas en los guantes son el princ ipal peli~ro de contammac1on
~icrobiolgica; por Jo tanto, es esencial_examin~r frecuentemente la
tntegridad de los guantes y su superfi_c 1e . Tambin e~ ventaJoso un
control poco frecuente de las superficies dentro del a1s lado1.
GLOSARIO
Accin Correctiva- Acciones descritas en los procedimi ~ntos
operati\,os estndares y q ue hay que tomar cuando se superan cie rtas
Condiciones.
Acontecimiento Fuera de E:specffiracio b un ~,n11x1-
micnto temporal o permanente de no cumphmk!flto con unu o ~
estndares para amh,entc,, controlado,.
Aislamie nto~ Ambientales- M1croorgan1smos que ..e han
.
aislado en el programa de control ambiental.
Ambiente Controlado -Toda zona de un s1s1e1n.1 de pl"IX~-
miento asptico en la que ,e controlan nt\e(e5 espec1tkcx dr
partculas y m1croorganismm, en el am:. correspond1entc:, a las
actividades desarrolladas dentro de ese amb,enle.
Anlisis de E\'a)uacin de Riesgo---Amihs1,; de la 1denutic.ac1on
de pos ibles contaminaciones en ambiente<- cc-.ntrola<los que e-sta-
blecen prioridades segn su gravedad y frecuencia y que lle~a al
desarrolJo de mtodos y procedimientos para elunmar. reducir,
minimizar o alenuar la probabilidad de cootammac1n ma:robiana
del s istem a de producto/envase/cierre.
A n lisis de Tendencias-Datos provenientes de un programa
rutina rio de control ambiental microbiano que pueden relacional'C
con la hora, tumo de trabajo. instalacin. etc . Esta mform.:icwn se
evala peridicamente para establecer el estado o patrn de d1cho
programa, con el fin de determinar si se encucnt:r.l baJo control
adecuado. El an lisis de tendencias se usa para facilitar la,
decisiones acerca de la reca lificacio de un ambiente controlado n
del calendario de mantenimiento y desin feccin .
Biocarga, o Carga Biolgica-Nmero totaJ de m1croorgan1smos
detectados en un artcu lo.
Campo Estril-En e l procesamiento asptico o en otros
ambientes controlados, es e l espacio que est en el mismo plano o
encima de los envases abiertos, cierres o el producto en s, donde e:.
mxima la probabilidad de contaminacin microbiana.
Cuarto Limpio- Un cuarto donde se controla la concentrac1o
de partculas en el aire para que cwnpla con una Clasificacin de
Limpieza especfica. Adems, se controla la concentracion de
microorganismos en el ambiente; cada Clasificacin de Limpia.a
definida tiene asignada adems un nivel microbiano del arre. de
superficies y de indumentaria del personal.
Diagrama de la Distribucin de Equipos- Represcni:ic1on
grfica de un sistema de procesamiento asptico que muestra la
interrelacin entre los equipos y el personal. Esta distribucin se US.l
en el Anlisis de Evaluacin de Riesgo para detenninar los sitios Je
muestreo y su frecuencia basados en la posible contamtnac1n
microbiolgica de l sistema de producto/envase/cierre. Los camb10s
deben ser evaluados por los gerentes responsables. dado que los
cambios no autorizados en la distr ibucin de los equipos ) de los
puestos de l personal podran aumentar la probabilidad de contami-
nacin de l s istema de producto/envase/cierre.
Esterilidad-Segn la definicin ms estricta de esterili<la<l. LID
artculo se considera estri I en ausencia absoluta de microorgarnsmo:-
viables. La esterilidad absoluta no puede demostrarse Je manera
prctica sin evaluar todos los artculos de una partida. La estenliJ.aJ
se define estadsticamente como una probabilidad de 4uc la
contaminacin de un artculo sea aceptablemente remota
Flujo de Materiales- El flujo <le material y personal 4ue ing~
a los ambientes controlados debe seguir un camino esp~1fka<lo y
documentado e legido para reducir o minimizar la probabilidad <le
contam inacin microbiana de los sistemas de pro<lul'to/em a:.c,c1erre.
Si no se cu mpl e con el fluj0 indicado. podra aumentar la
probabilidad de contaminacin micmbiana. Sc puede rnod1f.-,lf d
flujo de material y persona l, pero ll)S gerenks respon,able:> t1lncn
que evaluar las consecuencias de los cambios dcsd<-' un punto Je
vista mi crobi o lgico; dichos camh1os ~e deben autonLar y
documentar.
Hisopos- Dispositivos usados parn muc:,trear :,uperfic1cs 1m.-gu-
lares o regulares, parn detenninar ,I esta<lu microbiano rl ht'i()fK-1,
genera lmente formado por una vanlla con 1111 c;,.tl'lmu ab~orbi:nte, -.e
humedece antes del muestreo y se lL'til para muc,trl'..ir un arci,
especificada de la superfie1i.: de la urnJmJ. El h1,upo luego ,e cn1ua~:1
en sol ucin salina estn! u ulrn d1suh cnte aJc1..u.i<lo > el contt:n1'k1
se s iembra sobre placas de agar nutnti, u p.ira c:,tin41r ta ,.~11
microbiana viable Je tal ~uperfirn:.
Integridad del Filtro - Prueba que garnnll1...1 (IUC el J.,...,cn,('Co
funci onal de un liltrn e:, ~at1sfoctono {pl)f l!Jl!mplu, l.1 pmeba di!
tlalato de Jioctilo y la prueba del punt.1.1 Je burbua)
 656 ( 1117) ptimas Prcticas de Laboratorio I,!formacin General
Llenado de Medios-Simulacin microbiolgica de un proceso
asplico 1nediante el uso de medios de crecimiento procesados de
manera similar al procesamiento del produclo y usando e l mismo
sislema de envase y cierre.
Muestreador de Aire--Dispositivos o equipos usados rarn
muestrear una cantidad medida de ai re en un tie mpo especificado
para cuantificar el estado microbiolgico o de partculas del aire en el
a mbiente controlado.
Niveles de Alerta- Son los niveles microbiolgicos. especifica-
dos eo los procedimientos operativos estndares, que cuando se
superan deben provocar una investigacin para asegurar que el
proceso todava est bajo control. Los Niveles de alerta son
especificas para una instalacin detem1inada y se establecen
confonne a una lne_a base desarrollada en un programa de control
ambiental. Estos N iveles de alerta pueden modificarse segn e l
anlisis de tendencias realizado en el programa de control. Los
Niveles de a lerta siempre son inferiores a los Niveles de accin.
Niveles de Accin-Son los niveles microbiolgicos en el
am?1entc controlado, especificados en los procedimientos operativos
estandares, que cuando se superan deben provocar una investigacin
y una accin correctiva basada en la investigaci n.
Norma Federal 209E-"Clasificacin de Limpieza del Aire con
respecto a Partculas en Cuartos Limpios y Zonas Limpias" es una
norma aprobada por el Com.isionado, los Servicios Federales de
Suministros y la Administracin General de Servicios, para su uso
por " Todas las Agencias Federales". la Nom1a establece clasifica-
ciones de limpieza del a ire segn la concentracin especificada de
partculas en el aire. Esta clasificacin de limpieza del aire se ha
desarrollado, ea general, para los ambientes controlados ' ' sper
limpios" de la industria electrnica. Ea la industria fannacutica, la
Norma Federal 209E se usa para especificar la construccin de
ambientes controlados. la Clase 100, la Clase JO 000 y la Clase
100 000 generalmente estn representadas en un sistema de
procesamiento asptico. Si e l sistema de clasi ficacin se basa en
partculas de 0,5 m o mayores. estas clases en el sistema SI
corresponden a las Clases M3.5. M5.5 y M6.5, respectivamente.
Plan de Muestreo-Plan documentado que describe los proce-
dimientos y mtodos para muestrear un ambiente contTOlado;
identifica los sitios de muestreo, la frecuencia de muestreo y el
nmero de muestras, y describe el mtodo de anlisis y cmo
interpretar los resultados.
Procesamiento Asptico-Una modalidad de procesar productos
farmacuticos y mdicos que invol ucra la esterilizacin por separado
del producto y del empaque (envases y c ierres o material de
empaque para dispositivos mdicos) y la transferencia del producto
dentro del envase y su cierre en condiciones microbiolgicas
criticamente controladas.
Procedimientos Operativos Estndares-Procedimientos escri-
tos que describen operaciones, pruebas, muestreos, interpretacin de
resultados y acciones correctivas relacionadas con las operaciones
que tienen lugar en un ambiente controlado y en ambientes
auxiliares. Los gerentes responsables deben registrar y aprobar los
procedimientos que no sean iguales a los procedimientos operativos
estndares.
Programa de Control Ambiental-Programa documentado,
implementado a travs de procedimientos opera1ivos estndares,
que describe en detalle los procedimientos y mtodos usados para
controlar partculas y microorganismos en ambientes controlados
(aire, superficies, indumentaria de l personal). El programa incluye
sitios de muestreo, frecuencia de muestreo e investigacin y acciones
correctivas que deben seguirse si se superan los Niveles de Alerta o
de Accin. Tambin se describe la metodologa usada para el anlisis
de tendencias.
Promocin del Crecimiento en Medios- Procedimiento que
hace referencia a la Promocin del Crecimiento en Pruebas de
Esterilidad (71) para demostrar que los medios usados en el
programa de control ambiental microbiolgico, o en corridas de
Uenado de medios, son capaces de promover el crecimiento de
microorganismos indicadores y de aislamientos microbiolgicos
ambientales de muestras obtenidas en e l programa de conlro l o de
sus cepas ATCC correspondientes.
Puesta en Servicio de un Ambiente Con trola do-Certificacin
brindada por ingen ieros y control de calidad que confirma que e l
ambienle se ha construido segn las especificaciones de la
clasificacin de limpieza deseada y que en las condiciones probables
USP 30
de fncionumiento (o peores condi_ci~rnes). es cap~ de lograr un
proceso asptico. La pucsrn en serv1c10 mcluye comdas de llenado
de medios y rcsullados del progr::u na de control am~1ental.
RNuento de rnrtculns del Aire (tambin denominado Recue111o
Total de Particulas)- Las partc_u las detectad~ son de 0 ,5 _m 0
ms. Cuando se especific;i un nume ro de part!culas, ~s e l numero
111 :x imo de pai1culas permitidas por metro c ubico de a1re (o por pie
cbico de aire).
Recuento de rarticulns Viab les Transportadas por el Aire
(tambin denominado Recuento Micmbiano_ Aerobio Total de/
Aire)-Cuondo se especifica un nmero de m1croorga111smos, es el
nmero mx imo de unid;ides fonnadoras de ~olo111as (_ufc) por metro
d1bico de aire (o por pie cbico de a1re) asociado con una
Clasificacin de Limpieza de ambiente controlado basada en el
Recuento de Partc11las del Aire.
Re novaciones de Aire-- La frecuencia por unidad de tiempo
(minulos, horas, etc.) con que se reemplaza el aire dentro de un
ambienle contrnlado. El aire puede rectrcularse parcialmente o
reemplazarse totalmenle.
Sitios de M uestreo- Ubicacin geogrfica documentada, dentro
de un ambiente conLrolado, donde se hace e l muestTeo para
evaluacin microbiolgica. En general, los sitios de m uestreo se
seleccionan segn su polencial de enlrnr en contacto con el producto/
envase/c ierre.
Zonas en C ontacto con los Productos- Zonas y superficies ea
un am biente controlado que estn en contaclo directo con productos,
envases o cienes y cuyo estado microbiolgico podra llevar a la
conlaminacin microbiana de l sistema de producto/envase/cierre.
Una vez identificadas dichas zonas, es necesario evaluarlas con ms
frecuencia que las zonas o superficies que no estn en contacto coa
los produclos.
Zona Limpia- Un espacio definido en el que se controla la
concentracin de partculas y mic roorgan ismos en e l aire para que
cumpla con niveles especficos de Clasificacin de Limpieza.
(1117) PTIMAS PRCTICAS DE
LABORATORJO
MICROBIOLGICO
INTRODUCCIN
las buenas prcticas en un labora1orio microbioloico consisten
en actividades que dependen de va rios principios: 1cnicas aspticas,
con_tro l de medios, control d 7 cepas de prueba, control de equipos,
reg1strn delallado y evaluac1on de datos as com o capacitacin del
personal ~e _laboratorio. Dada la conocida variabilidad de los datos
111JCr?b1ol~~1cos. la con.fiabilidad y la reproducibilidad depe nden de
la ut1hzac~on_ de los metodos aceptados y del cumplimiento de las
buenas practicas de laboratori o.
PREPARACl N DE ME DIOS Y CONTR OL DE
CALIDAD
Preparacin de Med ios
Los me?ios de c~lt ivo constituyen la base ele la mayora de las
prue~as m1crob1o lg1cas. Por lo tanto, es de suma importancia que se
protep la cahcl~d d~ esto~ me~lios a fin de lograr resultados exitosos
en e l laboratori o rn 1cro_b1olg1co. La preparac i n de los medios, el
a lmacenamiento aprop1a_d o y las pruebas de control de calidad
pueden asegurar un suministro unifonne de medios de alta calid~d.
Es 1mpo~an1c que se e lijan los medios O componentes paro
genera, medios adecuados en _bnse al empleo de fuentes O referencias
acep_tadas p~ra su fo.nm_ilac1 n. Los medios deshidratados y los
n~ed1os prev1amcn1e lab n_cados generalmen te se acompaan con la
forn~u la y las 1nstrucc1on~s . de preparacin provista~ por el
f~bn cante. Da1~ que los distintos tipos de medios pueden tener
d1crentes requ1s11os de preparac in (,_p.ej ., ca lentamiento. aditivos y