GUA DE PRCTICAS DE LABORATORIO

INSTITUCIN: UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO

FACULTAD: CIENCIAS DE LA SALUD

CARRERA: LABORATORIO CLNICO E HISTOPATOLGICO

PERODO ACADMICO: ABRIL AGOSTO 2017

DOCENTE: Mgs. XIMENA ROBALINO
ASIGNATURA: HEMATOLOGA II
SEMESTRE: CUARTO
FECHA DE LA PRCTICA: NMERO DE LA PRCTICA: 1
01 de noviembre de 2017
HORA: 10:00 13:00 horas DURACIN: 3 HORAS

GRUPO N 2

NOMBRE DE LOS ALUMNO OROZCO COELLO KARLA LISSETE

SERIE ROJA
TITULO DE LA UNIDAD:

DETERMINACIN DE HEMOGLOBINA EN SANGRE

TEMA DE LA PRCTICA:

OBJETIVO GENERAL: Determinar hemoglobina en sangre por el mtodo de la cianmetahemoglobina

Realizar la toma de muestra por puncin venosa en un tubo con anticoagulante

OBJETIVOS ESPECFICOS: Manejar correctamente pipetas de Sahli.

Aprender a utilizar el espectofotmetro e interpretar sus resultados, midiendo la

concentracin de hemoglobina en sangre.

FUNDAMENTO TERICO O CONTENIDO CIENTFICO:

HEMOGLOBINOMETRA

La capacidad de combinacin del oxgeno de la sangre es directamente proporcional a la concentracin de hemoglobina ms que al
nmero de hemates. Por lo tanto la hemoglobinometra, una de las determinaciones de laboratorio ms frecuentes, es importante
como prueba para descartar las enfermedades asociadas con anemia y para seguir la respuesta de estas enfermedades al tratamiento.

La concentracin normal de hemoglobina expresada en gramos/100 ml de sangre varia ampliamente segn el estndar de
Hemoglobina utilizado, la edad, sexo del paciente y la altitud del lugar.

Muchos son los mtodos para determinar la concentracin de la Hemoglobina, los ms comnmente utilizados se basan en uno de
los cuatro procedimientos siguientes: medida de la capacidad de combinacin de la sangre con el oxgeno (mtodo gasomtrico);
medida del contenido en hierro en la sangre (mtodo qumico), medida colorimtrica de la densidad de la sangre total en soluciones
de sulfato de cobre de densidad conocida y la determinacin posterior de la hemoglobina y medida colorimtrica de un derivado
coloreado de la hemoglobina por ejemplo la oxihemoglobina, la hematina acida, la hematina alcalina y la cianmetahemoglobina y
comparacin de la muestra desconocida con una estndar, mediante un mtodo espectrofotomtrico.

MTODO DE LA CIANMETAHEMOGLOBINA (ICSH-OMS)

Principio:
1.- La Hemoglobina de la sangre se une al ferricianuro de potasio y se forma la metahemoglobina.
2.-La metahemoglobina se une al cianuro de potasio y se forma la cianmetahemoglobina,
La reaccin bsica en la produccin de Cianmetahemoglobina es la conversin de la hemoglobina por el ferrocianuro y la subsiguiente
combinacin de la metahemoglobina con cianuro potsico para formar el pigmento cianmetahemoglobina. Todos los tipos de
hemoglobina, con excepcin de la Suifohemoglobina se transforman en cianmetahemoglobina. Las soluciones de este pigmento son
muy estables. La tcnica que se utiliz es la que se usa en los labora torios clnicos de la C.C.S.S

MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS MUESTRA: SANGRE DESFIBRINADA Y SANGRE

ANTICOAGULADA
1.-Solucin de Drabkin
Bicarbonato de sodio
Cianuro de potasio
Ferricianuro de potasio
Agua destilada
 Esta solucin debe ser lmpida y colocada en frasco de vidrio oscuro resguardada de la luz. No debe conservarse ms de un mes.
2.- patrn o Estndar de cianmetahemoglobina.

Materiales

1) Fotocolormetro o Espectrofotmetro
2) Tubos de 12 x lOOmm
3) Sangre venosa total, mantenida incoagulable con EDLA- K3 o con heparina. Puede emplearse tambin sangre capilar.
4) Pipetas volumtricas calibradas de cristal de 5mi.
Pipetas automticas de 0,02 mi (20 ul) o pipeta de Sahli.

PROCEDIMIENTO:

1.-Toma de muestra de sangre

2.-Determinacin de hemoglobina

1) - Conectar el espectrofotmetro segn las especificaciones de la casa comercial.

2) Homogenizar bien la sangre mediante agitacin suave durante un tiempo mnimo de 5 minutos o por inversin del tubo 20 veces.
3) - Pipetear 5ml de solucin de Drabkin en un tubo.
4) - Mediante micropipeta aadir 0,02 ml de sangre o 20 ul de sangre Homogenizada en el tubo con solucin de Drabkin. Al realizar
esta operacin, es fundamental eliminar el exceso de sangre que puede quedar en las paredes externas del capilar antes de
introducirlo en el reactivo y procurar as mismo que no quede sangre adherida a las paredes internas de la pipeta.
5) -Agitar el tubo mediante inversin (4o5 veces) con el fin de homogenizar bien la mezcla sangre-reactivo y esperar mnimo 5 minutos
para que se produzca la hemolisis total y se completa la transformacin de toda la hemoglobina en
6) - Leer la absorbancia de la solucin a 540mm o 546mm con blanco de reactivo.
Para calcular la concentracin de hemoglobina es recomendable disponer de una grfica o curva de calibracin o aplicando la siguiente
formula:

Hemoglobina g/dl = A (muestra) x Concentracin de Standard

A (Standard)

A: absorbancia o densidad ptica

Cuando utilizamos factor:

Hemoglobina g/dl = A (muestra) x Factor (36.7)

GRFICOS Y RESULTADOS:

PIPETA DE SAHLI TUBOS CON REACTIVO Y MUESTRA

MEZCLA DE LA MUESTRA Y REACTIVO LECTURA

VALORES DE REFERENCIA: HOMBRES DE 14 a 18 g/dl MUJERES DE 12 a 16 g/dl

CONCLUSIONES
- Determinamos la hemoglobina en sangre por el mtodo de la cianmetahemoglobina. Esta compar la intensidad de la luz y
midi tambin cantidad de metahemoglobina que se calcul por medicin de su poder de combinacin con el oxgeno o con
el monxido de carbono y tambin por su contenido en hierro
- Se realiz la toma de muestra por puncin venosa con los debidos procedimientos, teniendo en cuenta que el tubo que
utilizamos contena anticoagulante, por lo cual se deba homogenizar con inmersiones de al menos 20 veces
aproximadamente.
- Al Manejar las pipetas de Sahli se debe tener mucha precaucin con nuestro absorbedor ya que necesitaremos para la
determinacin de hemoglobina una cantidad exacta para realizar las diferentes soluciones y analizarlas en el
espectrofotmetro.
- Aprendimos a utilizar el espectrofotmetro con nuestro objetivo que fue el calculo de la hemoglobina en sangre, el
espectrofotmetro arrojar 3 resultados que son la absorbancia, el estndar y el factor, con estos tres parmetros y mediante
un efectivo calculo tendremos lo que es en s la concentracin de la hemoglobina.

RECOMENDACIONES

- Previamente se deber rotulas todos los tubos para evitar confusiones

- La solucin de Dranking debe estar preservado en un envase de color ambar
- Todos los tubos una ves que se los a aadido las diferentes muestras se los debe homogenizar y taparlos con papel parafin
- Al momento de hacer uso del espectofotmetro, deberemos fijarnos en todos los parmetros que nos pregunta el equipo.

CLCULOS

Modo Absorbancia Modo Standar Modo Factor

B= 0,172 B=0,714 B=0,713

St=0,455 St=16.7 St=20,1
M= 0,422 M=14,4 M=14,6

Hemoglobina

Hemoglobina g/dl = A (muestra) x Concentracin de Standard

A (Standard)

Hemoglobina g/dl = 0,422 x 16,7

0,455

Hemoglobina = 15,49 g/dl

Factor

Hemoglobina g/dl = A (muestra) x Factor (36.7)

Hemoglobina g/dl = 0,422 x 36.7

Hemoglobina = 15,49 g/dl

Nombre: Veln Josselyn

Fecha: 1 de noviembre 2017

Edad: 21 aos

Cdigo: 012

HEMOGLOBINA

Hemoglobina 15,49 gr/dl 12 a 16 g/dl

PREGUNTAS

Diagrama de la estructura de la hemoglobina

Sntesis y catabolismo de la hemoglobina

Sntesis de la hemoglobina
La hemoglobina se sintetiza en una compleja serie de pasos. La parte heme se sintetiza en una serie de pasos en la mitocondria y
elcitosol de los glbulos rojos inmaduros, mientras que las partes globina son sintetizadas por los ribosomas en el citosol.La produccin
de hemoglobina contina en la clula a travs de su desarrollo temprano de eritroblasto a reticulocitos en la mdulasea. En este
punto, el ncleo se ha perdido. La hemoglobina tiene una caracterstica estructura cuaternaria de muchas protenas globulares
similares. La estructura cuaternariade la hemoglobina proviene de sus cuatro subunidades en unadistribucin tetradrica. Cada
subunidad (4 en total) se compone de una cadena protenica estrechamente asociada con un grupo heme. Cada cadena de la protena
organiza en un conjunto de segmentos estructurales conectados entre s (Ascrib, s.f.).

Este plegamientomodelo contiene un bolsillo que se une fuertemente al grupohemo. Un grupo heme consiste en un tomo de hierro
(Fe) en un anilloheterocclico, formando una estructura conocida como Porfirina.Los iones de hierro, que es el sitio de unin del oxgeno
seencuentran todos en un mismo plano. El hierro se une fuertemente ala parte protenica globular a travs de la histidina proximal.
Los iones de hierro pueden estar en estado Ferroso (Fe2 +) o en elestado Frrico (Fe3 +). Cuando se transforma en Frrico (Fe3 +)
pasa a llamarse METAHEMOGLOBINA y no puede unir oxigeno, locual es letal. En tales casos, la enzima metahemoglobina reductasa
debe activarse y ser capaz de hacer a la molcula volver a Fe2 +.2F F3.

Catabolismo de la Hemoglobina.

Cuando los eritrocitos envejecen y no cumplen su funcin a cabalidad deben ser degradados y es aqu cuando se da e catabolismo
de la hemoglobina a travs de los macrfagos tisulares, pertenecientes al sistema reticulo endotelial. En este proceso las globinas se
separan de la molcula de hemoglobina, dejando al grupo hemo solo, el cual se convierte en biliverdina, sta es transformada en su
mayora en bilirrubina y es excretada por la bilis. El Fe del grupo hemo es reutilizado para la sntesis de nueva hemoglobina.

La Hemoglobina es una protena globular, que se encuentra en grandes cantidades dentro de los glbulos rojos y es vital importancia
fisiolgica, para el aporte normal de oxgeno a los tejidos. Varios son los genes que determinan su biosntesis.Protena pigmentada
de color rojo transportadora de oxgeno que se encuentra solo en los eritrocitos de los vertebrados (Curso de BIOQUIMICA, s.f.) . Es
un tetrmero con dos pares de cadenas polipeptdicas diferentes. Cada una de ellas posee un derivado de la porfirina llamado grupo
hemo, que a su vez contiene hierro. Las dos principales funciones de la hemoglobina son el transporte de oxgeno y amortiguador del
pH.

Las concentraciones de hemoglobina estn influidas por variaciones fisiolgicas como la edad, sexo, deshidratacin, postura y altitud,
y por procesos patolgicos. Se encuentran valores patolgicos en anemias y en policitemias.
La determinacin de la concentracin de hemoglobina se ha convertido en una de las pruebas ms importantes en el diagnstico y
tratamiento de la anemia. Las tres causas principales de anemia son: alteracin en la sntesis de los eritrocitos en la mdula sea,
prdidas de sangre excesivas y transporte alterado de eritrocitos hacia sangre perifrica.

Se observan valores de hemoglobina elevados en policitemia vera, eritrocitosis, deshidratacin, recin nacidos, cianosis congnita o
adquirida, enfermedad renal y pulmonar crnica, quistes renales y en una serie de tumores productores de eritropoyetina.

El diagnstico clnico no debe realizarse teniendo en cuenta el resultado de un nico ensayo, sino que debe integrar los datos clnicos
y de laboratorio.

BIBLIOGRAFA:
CAMPAL, Faustina. Fundamentos y Tcnicas de Anlisis Hematolgicos y Citolgicos. Thompson-Paraninfo
2004.Pag.35,36
GARCA ESPINOZA, Benjamn. Hematologa II, Citologa, Fisiologa y Patologa de hemates y leucocitos. Paraninfo.
VIVES CORRONS, Joan Llus. Manual de Tcnicas en Laboratorio de Hematologa. Tercera edicin. Masson.

Ascrib, C. (s.f.). Scribd. Obtenido de https://es.scribd.com/doc/96889761/Sintesis-de-Hemoglobina

Curso de BIOQUIMICA. (s.f.). Obtenido de Curso de BIOQUIMICA: http://www.iqb.es/cbasicas/bioquim/cap11/c11s05.htm

Lic. Franklin Ramos

MsC. Patricia Mio Orbe Mgs. Ximena Robalino RESPONSABLE DEL LABORATORIO
DIRECTOR DE CARRERA DOCENTE