UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA

FACULTAD DE INGENIERIA

ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE INGENIERIA

AGROINDUSTRIAL
INFORME DE PRCTICA
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ESPECTROFOTOMETRA

rea : Anlisis Instrumental de Productos

Agroindustriales

Docente : Ing. Ral Toro Rodrguez

Estudiantes : Alva Bazn Piero Jess

Cdigos : 0201512040

Ciclo : VI

Nvo. Chimbote Per

2017

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I. INTRODUCCION

La espectrofotometra es una de las tcnicas experimentales ms utilizadas para

la deteccin especfica de molculas. Se caracteriza por su precisin,
sensibilidad y su aplicabilidad a molculas de distinta naturaleza (contaminantes,
biomolculas, etc) y estado de agregacin (slido, lquido, gas). Los
fundamentos fsico-qumicos de la espectrofotometra son relativamente
sencillos. Las molculas pueden absorber energa luminosa y almacenarla en
forma de energa interna. Esto permite que se inicien ciclos vitales de muchos
organismos, entre ellos el de la fotosntesis en plantas y bacterias.
Un espectrofotmetro es un aparato electrnico que se utiliza para medir las
proporciones de luz de diferentes longitudes de onda, que son absorbidas y
trasmitidas por una solucin usualmente coloreada.
La luz visible es el segmento de energa ms importante para la vida y posee
una banda estrecha de longitudes de onda que van desde los 400 nm a los 700
nm. Esta radiacin es conocida como la luz visible porque el ojo humano puede
detectarla en la forma de diversos colores. En el espectro de luz visible el color
violeta corresponde al extremo de longitud de onda ms corta y el color rojo
corresponde al extremo de longitud de onda ms larga.
Debemos recordar algunos aspectos fundamentales de fsica de la luz y el color:
La energa del sol y la de una bombilla encendida incluye al total de la energa
luminosa. Si un rayo de esa luz pasa por un prisma, se descompone: es el origen
del arco iris.
Cuando la energa incide en un objeto que no absorbe energa luminosa, lo
vemos de color blanco porque refleja toda la energa: El blanco es la suma de
todos los colores. En contraste, a un objeto que absorbe la totalidad de la energa
luminosa, lo vemos negro (no refleja nada de la energa luminosa) y se recalienta
muy rpido: el negro es la ausencia de color. En este momento recuerde el
experimento del disco de Newton: coloreado con los colores primarios y
secundarios: Al girar a alta velocidad se ve blanco porque rene a todos los
colores del espectro luminoso. Los objetos coloreados absorben una parte del
espectro luminoso y reflejan lo dems. Lo que perciben nuestros ojos es la
energa que es reflejada.

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II. OBJETIVOS

- Determinar la longitud de onda adecuada (longitud de onda de mxima

absorcin) y los niveles de concentracin tambin adecuados para el
anlisis cuantitativo por espectrofotometra

III. FUNDAMENTO TERICO

La luz blanca que emite la lmpara, se hace pasar a travs de un prisma, el cual
descompone la luz, separndola en sus colores constituyentes (segn su
longitud de onda), formando un abanico de colores, como en los experimentos
de fsica de la luz. El espectrofotmetro tiene un mecanismo que modifica la
posicin del prisma de acuerdo a la cifra de longitud de onda que se programa.
Para cada cifra programada corresponde diferente color. El rayo de luz es
dirigido hacia una rejilla metlica (monocromador), por la cual podr pasar la luz
del color que en ese momento se haya escogido. Simultneamente, cuando
cambia el color, aparece en la ventana de lectura la longitud de onda del color
que estamos usando.

Despus de la rejilla, est el espacio donde se colocan los tubos de ensayo con
las sustancias que se estn estudiando. El tubo de ensayo (denominado en estos
casos cubeta ptica) recibe un rayo de luz monocromtica que posee una
determinada longitud de onda, en funcin de su color (*Io = luz incidente), con
100% de intensidad. El contenido de la cubeta ptica (que tendr solvente y
soluto) podr absorber alguna parte de la energa de ese rayo luminoso a su

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paso a travs de la misma, y la luz que logre atravesar la solucin (**I = luz
emergente), llevar una intensidad menor. Este rayo ms dbil seguir su curso
hasta chocar contra un dispositivo (foto celda o tubo fotoelctrico) sensible a la
cantidad de energa que logra pasar, convirtindola en electricidad y
trasladndola, por medio de un galvanmetro, a una pantalla, donde aparece la
cifra que demuestra la cantidad de energa que logr llegar a la foto celda. Si el
rayo luminoso no hubiera encontrado ningn obstculo en su camino, impactara
la foto celda con toda su potencia y la pantalla mostrara su energa en el 100%.
En la figura anterior se ejemplifica el caso de una sustancia que absorbe la mitad
de la energa del rayo luminoso: en la pantalla veramos la cifra correspondiente
al 50%.
La mayora de los compuestos biolgicos, tales como las protenas, las grasas,
los carbohidratos y los cidos nucleicos, absorben energa en alguna parte de
las regiones ultravioleta, luz visible e infrarroja.(4) Cuando el rayo de luz llega a
la cubeta ptica lleva el 100% de su energa. A medida que penetra en la
sustancia, las molculas presentes gradualmente absorbern cada vez ms
energa por lo que la intensidad de la energa del rayo luminoso progresivamente
ir perdiendo su potencia, en funcin de tres variables: a) el grado de
concentracin de solutos en la sustancia que se analiza, b) la longitud del medio
absorbente o sea la distancia que el rayo debe recorrer que depende del ancho
del tubo que se est utilizando y Absorbancia Transmitancia A mayor
concentracin PGINA 5 DE 14 c) la longitud de onda (o color) del rayo que se
est usando, porque si la sustancia que se analiza tiene un color determinado,
se comporta de forma diferente (en cuanto a la cantidad de energa que puede
absorber) frente a los diferentes colores de luz que se puedan hacer pasar a
travs de ella. En eso se basa la afirmacin de que la fraccin de la luz incidente
(Io) absorbida por una solucin, a una determinada longitud de onda, est
relacionada con la concentracin de la especie que absorbe y con el espesor de
la capa absorbente. (4) Las relaciones anteriores se expresan en las Leyes de
Beer y Lambert de la manera siguiente: LEY DE BEER: Cuando un rayo de luz
monocromtica pasa a travs de un medio absorbente, su intensidad disminuye
exponencialmente a medida que la concentracin del medio absorbente
aumenta. LEY DE LAMBERT: Cuando un rayo de luz monocromtica pasa a
travs de un medio absorbente, su intensidad disminuye exponencialmente a
4
medida que la longitud del medio absorbente aumenta. La combinacin de
ambas leyes puede expresarse en forma integral de la manera siguiente:

Donde Io es la intensidad de la luz incidente (que va llegando a la cubeta

ptica), I es la intensidad de la luz emergente o transmitida (que atraves la
cubeta ptica y se dirige a la foto celda), e es el coeficiente de absorcin molar
(en unidades de litros por mol por cm.) el cual vara segn la naturaleza
especfica de cada sustancia (por esto, un gramo de sal y un gramo de azcar
se comportan molecularmente tan diferentes a la hora de usarlos como
reactivos), c la concentracin de la especie absorbente en moles por litro y l
(longitud = 1cm), el espesor de la muestra absorbente en centmetros. La Ley
de Beer-Lambert supone que la luz incidente es paralela y monocromtica y que
las molculas del solvente y el soluto estn orientadas al azar, de manera
uniforme. La expresin log (Io / I) se denomina ABSORBANCIA y se designa
por A. Es la base matemtica que permite calcular cunta energa puede haber
sido absorbida por la sustancia que se estudia. Es importante observar que cada
milmetro de espesor de una solucin absorbente en una cubeta ptica de 1.0
cm. (medida estndar de todas las cubetas que usaremos en nuestras prcticas
de laboratorio) no absorbe una cantidad constante de la luz incidente. Sin
embargo, con una capa absorbente de espesor constante (como ser nuestro
caso cada vez que hagamos uso del procedimiento fotomtrico), la absorbancia
(A) es directamente proporcional a la concentracin de la solucin absorbente.
El coeficiente de absorcin molar vara tanto con la naturaleza del compuesto
absorbente, como con las propiedades del solvente, la longitud de onda del rayo
utilizado, el pH de la solucin, y del estado de oxidorreduccin de los
componentes, los cuales pueden presentar prdida o ganancia de protones o
electrones al asociarse. Con el uso del Espectrofotmetro se pueden obtener los
datos para elaborar una grfica del espectro de absorcin de cualquier sustancia,
en la cual podemos comparar objetivamente las diferencias de cada sustancia
en funcin de su coeficiente de absorcin molar y de la longitud de onda del rayo
5
empleado. Esta grfica, que nos muestra la absorbancia a diferentes longitudes
de onda, nos proporciona la informacin necesaria para saber cul es la longitud
de onda a la que absorbe ms luz un compuesto en solucin. Cuando
necesitemos hacer un anlisis de ese compuesto en especial, tendremos que
ajustar nuestro fotmetro a la longitud de onda de mxima absorbancia, porque
en esa calibracin obtendremos las determinaciones ms exactas ante cualquier
variacin de la concentracin de las muestras que obtengamos, conteniendo ese
compuesto.

IV. MATERIALES Y MTODOS

Para la preparacin de los reactivos, se prepar una solucin de cido oxlico

al 0.4% y se pes 4 gr. De este cido y se llev a 1000ml, con agua destilada.
Para soluciones estndar (madre) de cido ascrbico; se prepar una solucin
de 0.1% de cido ascrbico y se llev a un volumen de 100ml con una solucin
de cido oxlico al 0.4%. Para estndares de trabajo (ET); se tom 1, 2, 3, 4 y
5ml de la solucin madre de cido ascrbico y se llev a 100ml con una solucin
de cido oxlico al 0.4%. Esta solucin numerada del 1 al 5 result conteniendo
1, 2, 3,4 y 5mg de cido ascrbico por 100ml respectivamente. Para una solucin
coloreada (colorantes); se pes 6mg de 2-6 DFIF, se disolvi y se llev a 500ml
de volumen con agua destilada.

Para la construccin de la curva estndar, se tom 4 tubos de ensayo y

enumeradas del 1 al 4 se agreg lo siguiente:

En el tubo 1 se aadi 10ml de agua destilada. En el tubo 2 se aadi 1ml de

cido oxlico al 0.4%. En el tubo 3 se aadi 1ml de estndar de trabajo N1+
9ml de agua. En el tubo 4 se aadi 1ml del (ET) N1. Se ajust a cero la
absorbancia usando el tubo 1 y el filtro seleccionado. El tubo 2 se le aadi 9ml
de colorante y exactamente despus de 15 segundos, ley la absorbancia. Se
ajust a cero la absorbancia con la solucin del tubo 3. Se aadi 9ml del
colorante al tubo 4 y exactamente despus de 15 segundos, se ley la
absorbancia (L2). Se repiti el paso 3, para cada E.T y se registr los
correspondientes valores de L1 Y L2. Luego se construy la curva estndar con
6
las concentraciones de cido ascrbico en la abscisa y la ordenada la
absorbancia, (L1 L2) para cada E.T.

Fig. 1 Espectrofotmetro UV-VISIBLE

Fig. 2 cido oxlico (C2H2O4) a diferentes concentraciones

V. RESULTADOS

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Tabla N 01. Colorante medido a una longitud de onda de 524 nm. ndice de
Absorbancia vs Concentracin

Concentracin Absorbancia
1 2 0.0112
2 4 0.0238
3 6 0.0359
4 8 0.0471
5 10 0.0634

L1 L2 Absorbancia
1 0.0401 0.0289 0.0112
2 0.0312 0.0074 0.0238
3 0.0423 0.0064 0.0359
4 0.0462 -0.0009 0.0471
5 0.0477 -0.0157 0.0634

Grfica N 01. Curva de Calibrado. Absorbancia vs Concentracin

Absorbancia vs Concentracin
Absorbancia Linear (Absorbancia)

0.07
y = 0.0064x - 0.002
0.06 R = 0.9959

0.05
absorbancia

0.04

0.03

0.02

0.01

0
0 2 4 6 8 10 12
concentracion

8
Informacin obtenida del Grupo B para comparar y tomarlo como
referencia:

Concentracin Absorbancia
2 0.0209
4 0.0258
6 0.0359
8 0.0471
10 0.0527

Grfica N 02. Absorbancia vs Concentracin

Absorbancia vs Conentracin
0.06
y = 0.0042x + 0.011
0.05 R = 0.9833

0.04

0.03

0.02

0.01

0
0 2 4 6 8 10 12

Datos obtenidos en la experimentacin:

Concentracin Absorbancia
2 0.003
4 0.0032
6 0.0043
8 0.0031
10 0.0057

9
Grfica N 03. Absorbancia vs Concentracin

Absorbancia vs Concetracin
0.006

0.005 y = 0.0003x + 0.0023

R = 0.5268
0.004

0.003

0.002

0.001

0
0 2 4 6 8 10 12

VI. DISCUSIN

Segn Benton, D. & Parker, P. En cuanto a la curva de calibrado determinado

por espectrofotometra, la estabilidad y el rango lineal se ven afectados por la
naturaleza del disolvente como se muestra en la curva para la solucin, es
imprescindible utilizar el mismo disolvente cuando se comparan espectros de
absorcin con fines de encontrar la concentracin de la muestra problema.

Para Andersen y col. (1995), la sustancia problema puesta en el

espectrofotmetro, antes de los 460nm la cantidad de energa radiante o flujo
radiante que es absorbido como funcin de la longitud de onda de dicha energa
presenta una Absorbancia menor y despus de los 460nm la Absorbancia vuelve
a caer. En nuestros resultados tenemos un colorante de longitud de onda de
524nm lo cual nos indica que es mayor que los 460nm esto nos quiere decir que
la absorbancia vuelve a caer.

Segn (Harris, D. 2007), El espectro de absorcin del colorante asignado

muestra una creciente al comenzar porque la concentracin es muy parecida a
la del blanco, entonces comienza a separarse poco a poco del rango inicial y
alcanza su punto mximo de absorbancia, para as, entonces, permitir asegurar
que la concentracin es la que juega el papel ms importante dentro de la
solucin, puesto que si tiene muy poca, va a ser una absorbancia baja, porque
se absorben aquellas frecuencias que son capaces de producir excitacin

10
electrnica, pero luego desciende debido a que ya no existe un equilibrio en la
solucin que le permita al colorante absorber la intensidad incidente optimizando
la transmitancia mucho ms que la absorbancia.

VII. CONCLUSIONES

En base a la prctica y las mediciones que se obtuvieron en el espectrofotmetro,

se puede concluir que la absorbancia es la capacidad que tiene algunos
compuestos para absorber la radiacin electromagntica, pudimos observar
cmo, dependiendo de la concentracin y la longitud a la cual se le aplique un
rayo, puede alcanzar un punto mximo de absorcin.

En base a la experimentacin, desafortunado obtuvimos un R2 = 0.5268, el cual

es inaceptable en cuanto al campo analtico, ya que como debe ser ms cercano
a la unidad. Esto, debido a factores como el mal manejo de instrumentacin,
variaciones de volumen y descoordinacin grupal; por lo tanto, tomamos como
referencia los datos del grupo anterior ya que este grupo present un R2= 0.9833,
el cual nos muestra como la absorbancia aumenta con relacin a la
concentracin, en este caso cido Ascrbico.

As mismo, se determin que la absorbancia de longitud de onda es una

propiedad fsica que nos permite identificar semejanzas entre ciertos
compuestos. Esta caracterstica fsica depende de las concentraciones de las
soluciones. En esta prctica, la absorbancia de longitud de onda se deba a la
diferente concentracin de una misma solucin.

A partir de la experimentacin se puede concluir que, segn la concentracin

que se tenga en la sustancia problema, vara la absorbancia del compuesto.

VIII. REFERENCIA BIBLIOGRFICA

Chang, R (2013) Qumica undcima edicin Editorial McGraw-Hill, Mxico.

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Denhisse Guilln, Carlos E. Zarate Ibarra. GUIA DE TRABAJOS PRCTICOS
DE QUIMICA ANALITICAII. Edicin 2011 Facultad de Ciencias Qumicas,
Universidad Nacional de Asuncin. San LorenzoParaguay, 2011. 55 Paginas.

QUIMICA ORGANICA, L.G.Wade, Jr.Pearson Educacion S.A.Madrid,2004.

Quinta Edicion.

VAN DER LAAT, J.1954.Estudio comparativo de cido ctrico y vitamina c en

el jugo de algunas variedades de Citrus de uso popular. Rev. Biologa
Tropical.Vol. 2.ppt 45-58

Link recuperado de internet:

https://es.slideshare.net/vegabner/determinacin-de-la-vitamina-c-por-
espectrofotometra
http://www.academia.edu/18546682/Determinacion_de_Vitamina_C

https://issuu.com/kathpinzon/docs/determinaci__n_de___cido_asc__rbico

http://es.slideshare.net/jestval/actividad-experimental-no-11

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