7777777

FACULTAD DE INGENIERA
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERA AGROINDUSTRIAL

LABORATORIO: MICROBIOLOGA

DOCENTE: LUZ AZUCENA TORRES GARCA

CURSO: MICROBIOLOGA

ALUMNO: LUIS ALBERTO PAREDES AGUILAR

1. Introduccin.

Existen diversos mtodos para cuantificar el nmero de microorganismos

presentes en muestras lquidas y slidas. Dentro de las tcnicas ms comunes
se encuentra el recuento directo por microscopia de fluorescencia, as como
los procedimientos basados en diluciones en serie, haciendo crecer
microorganismos en medios de cultivo sintticos slidos o lquidos, como el
recuento en placa de Unidades Formadoras de Colonias
(UFC) o la estimacin por el mtodo del Nmero Ms Probable (NMP).
El mtodo del nmero ms probable fue descrito por McCrady en 1915 y
actualmente sigue siendo ampliamente utilizado. En un principio este mtodo
fue empleado para estimar el nmero de microorganismos en muestras
de alimentos y aguas. Sin embargo, se ha demostrado que tambin puede ser
aplicado para la determinacin de microorganismos aerobios y anaerobios en
lodos, sedimentos marinos y suelos contaminados, por tanto este mtodo es
aplicable para estimar el nmero de microorganismos en muestras
de suelo y agua, tanto para bacterias aerobias como anaerobias.
Los Coliformes Fecales son un subgrupo de los Coliformes totales, capaces de
fermentar la lactosa a 44 C en vez de 37 C como lo hacen los totales.
Aproximadamente el 95% del grupo de los Coliformes presentes en heces
estn formados por Escherichia coli y ciertas especies de Klebsiella. Ya que los
Coliformes Fecales se encuentran casi exclusivamente en las heces de
los animales de sangre caliente, se considera que reflejan mejor la presencia
de contaminacin fecal. stos ltimos se denominan termotolerantes por su
capacidad de soportar temperaturas ms elevadas. Esta es la caracterstica
que diferencia a Coliformes Totales y Fecales. La capacidad de los Coliformes
fecales de reproducirse fuera del intestino de los animales homeotrmicos es
favorecida por la existencia de condiciones adecuadas
de materia orgnica, pH, humedad. Desde hace mucho tiempo se han utilizado
como indicador ideal de contaminacin fecal. Su presencia se interpreta como
una indicacin de que los organismos patgenos pueden estar presentes y su
ausencia indica que el agua o el alimento estudiado se hallan exentos de
organismos productores de enfermedades.

2. Objetivos
Determinar el nmero ms probable de coliformes totales y fecales
presentes en una muestra de agua o alimentos y bebidas.
Interpretar las actividades bioqumicas realizadas por los coliformes en
el caldo verde brillante bilis lactosa.
Determinar el recuento en la placa de echerichchia coli y bacterias
aerobias.
3. Marco terico

La denominacin genrica coliformes designa a un grupo de especies

bacterianas que tienen ciertas caractersticas bioqumicas en comn e
importancia relevante como indicadores de contaminacin del agua y los
alimentos.
Coliforme significa con forma de coli, refirindose a la bacteria principal del
grupo, Escherichia coli, descubierta por el bacterilogo alemn Theodor von
Escherich en 1860. Von Escherich la bautiz como bacterium coli ("bacteria
del intestino", del griego , kolon, "intestino"). Con posterioridad,
la microbiologa sistemtica nombrara el gnero Escherichia en honor a su
descubridor.
4. Coliformes fecales
Son bacterias en forma de varillas (coliformes) encontradas en el intestino de
seres humanos y animales de sangre caliente. Pueden multiplicarse a
temperaturas por encima de 44C y fermentar la lactosa, el azcar y por eso
tambin se conocen como coliformes termotolerantes. Cuando estas
bacterias se encuentran en el agua, indica fuertemente que el agua estaba
contaminada con heces fecales (caca) o aguas servidas (aguas negras).
E. coli es el nombre de un tipo de bacteria que vive en el intestino. La mayora
de las E. coli no causan problemas. Pero, algunos tipos pueden producir
enfermedades y causar diarrea. Uno de ellos causa la diarrea del viajero. El
peor tipo de E. coli causa una diarrea hemorrgica y a veces puede causar
insuficiencia renal y hasta la muerte. Esto, en general, ocurre en nios y en
adultos con sistemas inmunitarios debilitados.

Se pueden adquirir infecciones por E. coli al consumir alimentos que contienen

la bacteria. Los sntomas pueden incluir:

Nuseas o vmitos

Fuertes clicos abdominales

Diarrea lquida o con mucha sangre

Cansancio

Fiebre
Bacterias aerobias mesfitas viables.

5. Materiales y mtodos.
5.1. Materiales.
1. Los requisitos necesarios para la preparacin y dilucin de la muestra de
alimentos (leche, helado, chupete, agua de consumo, jugos.)
2. Incubadora a 35-37Incubadora a 35-37 C
3. Pipetas bacteriolgicas de 1, 2, 3 y 10ml.
4. Asa de siembra en aro
5. Mechero
5.2. Medios de cultivo.
a) Caldo verde brillante (caldo brilla, volmenes de 10ml en tubos de
150x15mm. Contenido tubos de fermentacin invertidos (75 x10
mm.)
b) Caldo echerichea coli, volmenes de 10 ml en tubos de 150 x 15mm,
conteniendo tubos de fermentacin invertidos (75 x 10 mm.)
c) Solucin diluyente: agua destilada, solucin salina fisiolgica 0,9%,
agua peptona da bufferada en volmenes de 9ml en tubos de 150 x
15mm.
d) Agar cuenta grmenes (PCA)
e) Agar Mac conkey.
6. Mtodos.
6.1 coliformes totales: prueba presuntiva.
1. Preparar las muestras de alimentos segn corresponda para su
preparacin y dilucin (diluciones 10-1, 10-2, 10-3. Etc.)
 2. Pipetear 1 ml de cada una de las diluciones del homogenizado de
alimento en tubos de caldo brilla, utilizando tres tubos por
dilucin.
3. Incubar los tubos a 35-37C por 48 horas.
4. Anotar los tubos que muestran produccin de gas ( prueba
presuntiva)
-confirmar la presencia de coliformes totales por:
La formacin de gas en el caldo brilla.
5. Anotar el nmero de tubos confirmados referirse a la tabla de
NMP para expresar el resultado.

6.2 Coliformes fecales o termo tolerantes: prueba confirmativa.

6.3. Materiales.

a) Asa de siembra
b) Bao de agua regulada a 44.5 +/- 0.2C o estufa a 44.5 +/- 0.2C
c) Caldo E.C volmenes de 10 ml en tubos de 150 x 15 mm.
Conteniendo tubos de fermentacin invertidos (75 x 10mm)
d) Mechero
7. Mtodos
a) Seleccionar los tubos de caldo brilla que muestran formacin
de gas en la prueba presuntiva.
b) Inocular una o dos azadas de cada tubo gas positivo en tubos
con caldo E.C
c) Sembrar a partir de un tubo gas positivo en agar MC y SS,
incubar por 35-37C por 24 horas (colonias rosadas o rojas
son presuntivas de E:C)
d) Incubar los tubos con caldo E.C a 44.5 +/- 0.2C por 24-48
horas.
e) Los tubos de caldo E.C que muestren formando gas son
positivos para coliformes fecales.
f) Anotar el nmero de tubos gas positivo y referirse a la tabla de
NMP.

7.1 RECEUNTO EN PLACA DE echerichia coli.

- Preparar las muestras de alimentos segn corresponda para su

preparacin y dilucin (diluciones 10-1, 10-2, 10-3.etc.)
- Pipetear 1ml de cada una de las diluciones del homogenizado de
alimento en placas Petri estriles para la siembra por incorporacin,
luego agregar el medio de cultivo agar MC a temperatura de
aproximadamente 45C en cantidad adecuada para cubrir la muestra
(15 a 18ml).
- Sembrar por duplicado cada dilucin
 - Sembrar dos placas una con medio de cultivo y otra la prueba control
de diluyente. Esto para verificar la esterilidad del medio de cultivo y
del diluyente.
- Incubar a 35-37C por 24 a 48 horas.

Recuento en placa de bacterias aerobias mesofilas viables.

- Preparar las muestras de alimento segn corresponda para su

preparacin y dilucin (diluciones 10-1, 10-2, 10-3. Etc.)
- Pipetear 1 ml de cada una de las diluciones del homogenizado de
alimento en placa Petri estriles para la siembra por incorporacin.
Luego agregar el medio de cultivo agar PCA a temperatura de
aproximadamente 45C en cantidad adecuada para cubrir la muestra (15
a 18 ml)
- Sembrar por duplicado cada dilucin
- Sembrar dos placas una con medio de cultivo y otra la prueba
control de diluyente. Esto para verificar la esterilidad del medio de
cultivo y del diluyente.
- Incubar a 35-37C por 24 a 48 horas.

Resultados.
Alimentos.
- Jugo de papaya.
- Jugo de maracuy
Jugo de papaya
Frasco de primer uso esterizado y bien rotulado. Jugo de papaya
1ml, los tubos por triplicado tienen que contener 1 ml de jugo de
papaya. Una pipeta por cad dilucin los tres tubos que tienes
contener cada uno.

Jugo de maracuy.

Una gradilla con 9 tubos de ensayo triplicado y cada una de ellas

con una dilucin en laurel sulfato.
Tres tubos 10-1 en cada tubo de ensayo. Un tubo con dilucin,
jugo de maracuy 9ml de laurel sulfato en 1 ml luego se rotula en
cada dilucin despus de la siembra se rotula. Gran positivo.
Tres tubos de 10-2 en cada tubo de ensayo, un tubo de ensayo
con dilucin y el jugo de maracuy la dilucin bien cerrada del
primer tubo se reparte a cada tubo patrn 1 ml de dilucin para
luego rotular. Gran negativo.
Tres tubos de 10-3 en cada tubo de ensayo con dilucin al jugo de
maracuy la dilucin bien cerrada del primer tubo se reparte a
cada tubo patrn a 1 ml de dilucin.
8. JUSTIFICACIN.
Es importante realizar este mtodo de nmero ms probable para tener bases
para aplicarlo, saber su fundamento y su respectivo procedimiento, adems
nos permite realizar otro tipo diferente de anlisis que no necesitan agar slido.
Adems nos permite aprender las caractersticas biolgicas de los
microorganismo ya que en este tipo de siembra lo que nos indica es si fermenta
y se da una produccin de gases
9. Discusin.
Pudimos observar que la muestra en este caso yogur no presento ningn tipo
de coliforme (fecales y totales) lo cual nos indica una buena limpieza y
desinfeccin del rea de trabajo, la buena higiene e del manipulador y el
almacenamiento que tuvo el producto para evitar precisamente este tipo de
contaminacin con estos microorganismos.
10. Conclusiones

Aprendimos a realizar pruebas con mtodo de recuento de nmero ms

probable y que aspectos nos indican que hay presencia de coliformes fecales y
totales.
Pudimos determinar la inocuidad del producto en lo que se refiere a este
indicador
11. Bibliografa

Calidad microbiolgica, Coliformes

totales,http://www.calidadmicrobiologica.com/index.php?option=com_content&t
ask=view&id=6&Itemid=19 (20 de mayo del 2012)

Universidad de san carls de Guatemala facultad de medicina veterinaria y

zootecnia escuela de medicina veterinaria, determinacin de la carga
Bacteriana ms frecuente en pollo fresco, distribuido en el mercado Ciudad
real situado en la zona 12 de la ciudad de Guatemala, Ana lucia
Mazariegos Girn, Noviembre del
2004http://es.scribd.com/doc/59702732/20/Chromocult-Agar-para-
Coliformes (20 de mayo del 2012).