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EN HISTOLOGIE HUMAINE
Les cellules ne sont pas visibles lil nu
(pouvoir de rsolution 0;2 mm)
forme et laspect
des cellules,
de leur noyau
des espaces entre les cellules
Microscope lectronique
filament de tungstne faisceau dlectrons
pouvoir de rsolution 0.2 nm
forme et laspect
des cellules,
de leur noyau
des espaces entre les cellules
+ ultrastructure
du noyau
de la membrane cytoplasmique
des organites intra-cellulaires
des espaces intercellulaires
Les chantillons biologiques
obtenus par le clinicien en consultation, au lit du
patient hospitalis, au bloc opratoire.
Echantillons cellulaires
-> talement sur lame (frottis) si forte cellularit
cytocentrifugation si faible cellularit
pas de coupe
fixation sur lame
coloration (MGG pour les frottis sang/moelle)
Echantillons tissulaires
-> fixation immdiate
dshydratation, inclusion et coupe
coloration
Echantillons cellulaires
Liquide biologique
(sang, moelle hmatopotique, LCR, urines)
Liquide pathologique (panchement
dans la plvre, le pritoine, une articulation)
Liquide dexploration
(lavage bronchoalvolaire)
Brossage ou grattage (frottis vaginal)
Cytoponction
Echantillons tissulaires
Biopsies, obtenues
au bistouri lame
au bistouri circulaire (punch)
Organes entiers
(ganglion lymphatique par ex)
obtenus chirurgicalement
La prparation des chantillons
Elle dpend des rsultats attendus :
- description morphologique des structures,
- caractrisation biochimique in situ,
- localisation dARN, dADN, dune protine
et donc
des colorations mettre en uvre :
standards
ou particulires :
histochimie, hybridation in situ
immunofluorescence, immunohistochimie
de loutil de lecture qui sera utilis
microscope optique (MO)
microscope lectronique (ME)
( transmission ou balayage)
Prparation des chantillons tissulaires
pour la MO standard
Fixation (formol, Bouin, AFA)
Dshydratation (alcool, tolune dissolution des
graisses)
Inclusion en paraffine
Coupes au microtome (5 dpaisseur)
Montage entre lame de verre et lamelle
Dparaffinage
Coloration par HE ou HES
hmatine -> noyau violet
osine -> cytoplasme rose
safran -> fibres de collagne jaune orang
Prparation des chantillons tissulaires
pour la ME transmission standard
Peut se faire
sur coupes au cryostat ou lultracryomicrotome
aprs conglation
sur coupes en paraffine
en bloc avant inclusion standard
pour la ME transmission
sur coupes ultrafines aprs inclusion
en rsines hydrosolubles
Culture cellulaire
Microscope contraste de phase
examen de cellules vivantes, non colores
Microscope cofocal
Cytomtrie de flux..
A ne jamais oublier
La qualit dune image et son
interprtation dpendent autant
de la prparation de lchantillon
que de loutil utilis pour la visualiser.