ANALISIS DE MEZCALINA EN TRICHOCEREUS PERUVIANUS

VARIEDAD: PUQUIENSIS

MUESTREO:

El muestreo de sta variedad de

cctus lo realiz una comisin
integrada por tres alumnos y el
profesor del curso, Mgt. Carlos
Serrano Flores. Para ello hicieron
un viaje a la provincia de Lucanas
(Ayacucho) y tomaron muestras de
Chavia (3,100 3,300 msnm);
Chumpi (3,020 - 3,050 msnm) e
Estructura qumica de la mezcalina
Incuyo (3,330 msnm).
La finalidad es la extraccin del 3,4,5-Trimetoxi-
alcaloide mezcalina de dichas fenetilamina o
Nomenclatura IUPAC
muestras, para comprobar la 2-(3,4,5-trimetoxifenil)
presencia del mismo en los cctus etanamina
de esa zona.
Frmula qumica C11H17NO3
Mezcalina Peso molecular 211.26 g/mol
(trimetoxifeniletilamina)
Punto de fusin 128129 C

Conceptos Generales de la Mezcalina:

La mezcalina (trimetoxifeniletilamina) es un alcaloide vegetal con propiedades
psicodlicas y alucingenas. Fue aislado del peyote y est tambin presente en algunas
otras cactceas como el San Pedro. Las formas vegetales suelen tomarse tras secar el
cactus, ya que sus principios activos no son voltiles.
La molcula de mezcalina es una fenetilamina, relacionada estructuralmente con el
neurotransmisor noradrenalina. La sntesis qumica de esta molcula es posible, pero es
relativamente costosa.
La mezcalina ha sido utilizada con fines diversos. Tradicionalmente tuvo un rol esencial
en rituales religiosos, entre nativos americanos, quienes consideran esta sustancia como
promotora de apertura espiritual. Habiendo penetrado en otras culturas, la mezcalina fue
utilizada con propsitos recreativos, pero tambin, como entactgeno, para facilitar la
psicoexploracin.
Entre los efectos que produce su ingestin estn visiones y alucinaciones, distorsin de
las coordenadas espacio-temporales, y alteraciones del esquema corporal. Sus efectos
varan en funcin del nimo del consumidor, sus expectativas, y el medio que le rodea,
por lo que tradicionalmente se ha destacado la importancia de que el uso de esta droga
fuera unido a preparativos muy concienzudos: los efectos podran resultar
impredecibles.

EXTRACCIN CLOROFORMICA:

Procedimiento:

En ste caso se trabaj con la muestra procedente de Chumpi, que fue sub-dividida en
Chumpi I y Chumpi II; en nuestro caso trabajamos con la muestra Chumpi I.
1) Se troza la muestra (cctus) en pequeos pedazos, desechando previamente la
parte central.
2) Se coloca los trozos en el horno de secado a 60 grados C., durante 48 horas
aprox.
3) Luego del secado se pes 50,0094 gr. de muestra y se procedi a macerar
(extraccin cida); para lo cual se coloc la muestra en un erlenmeyer con 500
ml. de HCl 0.5 N, previamente hervido. Se deja macerar por 24 horas.
4) Pasadas las 24 horas, se filtr el macerado, se guarda el lquido de filtrado y se
procedi a repetir la operacin con otros 500 ml. de HCl 0.5 N., previamente
hervido. Se deja macerar igualmente por 24 horas.
5) Transcurrido ese tiempo, se filtra como el procedimiento anterior, se guarda el
lquido filtrado y se procede a repetir el procedimiento, pero ste vez usando 500
ml. agua previamente hervida, por un tiempo similar de 24 horas.
6) Pasado ese tiempo se procede a neutralizar el lquido de maceracin, ya que se
trata de un extracto cido que hace soluble la mezcalina en agua al convertirla en
sal. Para neutralizar hacemos el siguiente clculo:

VHCl X NHCl = VNaOH X NNaOH

Reemplazando valores:

1 lt. (500 ml. x 2) X 0.5 N = VNaOH X 6

 VNaOH = 0.083 lt. = 83,3 ml.

Se procedi a agregar sta cantidad de NaOH en partes, verificando que el pH llegue a

12.
Se agreg primero 70 ml., notndose un cambio de coloracin del lquido de color
verdoso a marrn, dando un pH de 3,8.
Se agrega 10 ml. y se tiene un pH de 9,87.
Se agrega 2 ml. y se tiene un pH de 11,27.
Se agrega 2 ml. y se tiene un pH de 11,46.
Se agrega 2 ml. y se tiene un pH de 11.60.
Se agrega 1,5 ml. y se tiene un pH de 12,26.

7) Se mide 30 ml. de cloroformo (para extraccin) y se agrega al lquido de

maceracin ya neutralizado. Se tapa hermticamente y se homogeniza. Se nota
la formacin de una mezcla inmiscible donde el cloroformo va al fondo. Se
retira la parte superior de la solucin y el extracto clorofrmico se coloca en una
pera de decantacin. Bajo sta pera de decantacin se coloca otra pera ms
grande para recibir el extracto. A la solucin retirada se le agrega otros 30 ml. de
cloroformo y se repite el procedimiento. En total se hace 6 veces la misma
operacin. Se observa que el decantado en la pera tiene tres fases, la inferior
incolora (extracto clorofrmico), la intermedia cremosa y la superior amarilla.
Se deja en reposo por 24 horas.
8) Luego de este tiempo, se pasa la parte inferior (extracto clorofrmico) a un vaso
de precipitado y se le agrega sulfato de magnesio para desecar y quitar
impurezas.
9) Se filtra, utilizando algodn, a un baln y se procede a destilar el cloroformo.
Despus del destilado queda en el baln una solucin amarillo-dorada.
10) Se pasa a un erlenmeyer, previamente tarado, se pesa, obtenindose 1,090 gr.
11) Se agrega unas gotas de ter (HCl en Et20) para precipitar los cristales de
mezcalina. Se deja reposar para la formacin del precipitado.
12) Se observ poco precipitado; se hizo un anlisis preliminar cromatogrfico para
confirmar la presencia de mezcalina; se consider como referencia otra muestra
de mezcalina para hacer la comparacin. Se confirm la presencia de mezcalina
al haber dos corrimientos similares.
 ANALISIS CROMATOGRAFICO DE LA
MUESTRA

INTRODUCCION
La cromatografa, es la tcnica de anlisis qumico utilizada para separar sustancias
puras de mezclas complejas. Esta tcnica depende del principio de adsorcin selectiva
(no confundir con absorcin). La cromatografa fue descubierta por el botnico ruso, de
origen italiano, Mijal Tswett en 1906, pero su uso no se generaliz hasta la dcada de
1930. Tswett separ los pigmentos de las plantas (clorofila) vertiendo extracto de hojas
verdes en ter de petrleo sobre una columna de carbonato de calcio en polvo en el
interior de una probeta. A medida que la disolucin va filtrndose por la columna, cada
componente de la mezcla precipita a diferente velocidad, quedando la columna marcada
por bandas horizontales de colores, denominadas cromatogramas. Cada banda
corresponde a un pigmento diferente.

FUNDAMENTO TEORICO
Se llama cromatografa a una tcnica que permite separar (o fraccionar, en lenguaje de
laboratorio) los componentes de una mezcla de substancias biolgicas. El trmino
deriva de chrma, color, ya que los primeros ensayos del mtodo tuvieron por objeto
separar compuestos que eran naturalmente coloreados. En un principio se utiliz la
cromatografa para fraccionar e identificar molculas pequeas, como aminocidos o
azcares. En estos casos, se us la cromatografa de particin, que consiste en aplicar
una gota de la solucin con la mezcla de substancias a separar en la parte inferior de una
tira de papel (cromatografa en papel) o en una delgada capa de un material inerte,
como silicagel o celulosa (cromatografa en capa delgada). Luego, el papel o material
inerte (los denominaremos soportes) se colocan en un recipiente con un solvente, de
manera que, poco a poco, este los vaya impregnando. Dicho solvente es una mezcla de
dos lquidos (por ejemplo, agua y etanol), que se eligen de manera tal que uno de ellos
se adsorba ms al soporte que el otro; as, a medida que el solvente avance a lo largo del
soporte -los lquidos suben espontneamente por capilaridad-, aquellos componentes de
la muestra que sean ms solubles en el lquido que queda adsorbido sern retenidos, y
los que tengan mayor afinidad por el que no se adsorbe sern arrastrados por este. Una
vez finalizado el proceso, el soporte se seca y se tie con un colorante conveniente, para
revelar los compuestos separados, los que se identifican colocando, sobre el mismo
soporte, muestras de substancias conocidas.
Una pequea cantidad de la muestra en disolucin se evapora cerca del borde del ngulo
de una tira de papel

La cromatografa en columna utiliza un amplio espectro de adsorbentes slidos,

incluidas la slice, la almina y la slice gelatinosa. Tambin los lquidos pueden ser
adsorbidos en estos slidos y a su vez sirven como adsorbentes (un proceso denominado
cromatografa de reparto) permitiendo al qumico elaborar columnas de diferentes
propiedades para diversas aplicaciones. En la cromatografa con lquidos de alto
rendimiento, una variante de esta tcnica de uso frecuente hoy en da, se utilizan
lquidos adsorbidos en partculas muy pequeas y uniformes, lo cual proporciona una
sensibilidad bastante alta. Para llevar la mezcla a travs de la columna se precisa una
bomba. La cromatografa de capas finas es otra forma de cromatografa en columna en
la cual el material adsorbente reposa en un cristal o en una pelcula de plstico.

En la cromatografa en papel, una muestra lquida fluye por una tira vertical de papel
adsorbente, sobre la cual se van depositando los componentes en lugares especficos.
Otra tcnica conocida como cromatografa gas-lquido permite la separacin de mezclas
de compuestos gaseosos o de sustancias susceptibles de vaporizarse por calor. La
mezcla vaporizada es conducida mediante un gas inerte a travs de un estrecho tubo en
espiral que contiene una sustancia, por la que los componentes fluyen en diferentes
proporciones, siendo detectados al final del tubo. Otro mtodo es la cromatografa por
infiltracin gelatinosa, basado en la accin filtrante de un adsorbente poroso de tamao
uniforme. Con este mtodo se consigue separar y detectar molculas de mayor masa
molecular.

El uso de la cromatografa est ampliamente extendido en el anlisis de alimentos,

medicinas, sangre, productos petrolferos y de fisin radiactiva.

Procedimiento Experimental:

1) Se analiza la muestra del precipitado obtenido, para lo cul se toma con esptula
un poco de muestra y se coloca en un frasco, se le agrega tres gotas de etanol
para disolver.
2) Se prepara el solvente eluente (fase mvil) en la siguiente proporcin:

- Cloroformo : 18 ml.
- Metanol : 2 ml.
- Amoniaco : 0,2 ml.

3) Se corta el papel cromatogrfico (fase estacionaria) en la medida adecuada y se

coloca con un micro-capilar la muestra, se coloca en la cmara con el solvente
preparado.
4) Al estar el papel cromatogrfico totalmente impregnado por el solvente se retira
y se deja secar para evaporar el solvente.
5) Se coloca el papel cromatogrfico en el revelador (solucin yodo-platinato de
potasio) unos segundos. Se retira el papel cromatogrfico y se deja secar para
hacer las mediciones correspondientes.
 ANALISIS UV

FUNDAMENTO TEORICO

Espectroscopia ultravioleta-visible
La espectroscopia ultravioleta-visible o espectrofotometra ultravioleta-visible
(UV/VIS) es una espectroscopia de fotones y una espectrofotometra. Utiliza radiacin
electromagntica (luz) de las regiones visible, ultravioleta cercana (UV) e infrarroja
cercana (NIR) del espectro electromagntico. La radiacin absorbida por las molculas
desde esta regin del espectro provoca transiciones electrnicas que pueden ser
cuantificadas.
La espectroscopia UV-visible se utiliza para identificar algunos grupos funcionales de
molculas, y adems, para determinar el contenido y fuerza de una sustancia.
Se utiliza de manera general en la determinacin cuantitativa de los componentes de
soluciones de iones de metales de transicin y compuestos orgnicos altamente
conjugados.
Se utiliza extensivamente en laboratorios de qumica y bioqumica para determinar
pequeas cantidades de cierta sustancia, como las trazas de metales en aleaciones o la
concentracin de cierto medicamento que puede llegar a ciertas partes del cuerpo.

Introduccin
Una diferencia obvia entre ciertos compuestos es su color. As, la quinona es amarilla; la
clorofila es verde; los 2.4 derivados del dinitrophenylhydrazone de aldehdos y de
cetonas se extienden en color de amarillo brillante a de color rojo oscuro, dependiendo
de la conjugacin del enlace doble; y el aspirin es descolorido.

Longitud de onda: se define como la distancia entre los picos adyacentes y

puede ser medida en metros, centmetros, o nanmetros (10-9 meters).
Frecuencia: es el numero de ondas por ciclos usualmente sus unidades estn
dadas en Hertz que son ciclos por segundos (Hz).

La luminiscencia ocurre debido a la emisin de luz por una sustancia determinada y esto
ocurre cuando un electrn regresa a su estado inicial despus de haber sido excitado y
libera una energa como un fotn. Podemos encontrar tres tipos de nombres para la
espectroscopia de luminiscencia, para diferentes tcnicas:

Espectroscopia de fluorescencia molecular

Espectroscopia de fosforescencia molecular
Espectroscopia de quimiluminiscencia

Principio fsico
El principio de la espectroscopia ultravioleta-visible involucra la absorcin de
radiacin ultravioleta - visible por una molcula, causando la promocin de un electrn
de un estado basal a un estado excitado, liberndose el exceso de energa en forma de
calor. La longitud de onda () comprende entre 190 y 800 nm.

La luz visible o UV es absorbida por los electrones de valencia, stos son promovidos a
estados excitados (de energa mayor). Al absorber radiacin electromagntica de una
frecuencia correcta, ocurre una transicin desde uno de estos orbitales a un orbital
vaco. Las diferencias entre energas varan entre los diversos orbitales. Algunos
enlaces, como los dobles, provocan coloracin en las molculas ya que absorben energa
en el visible as como en el UV, como es el caso del -caroteno.

Cuando un haz de radiacin UV-Vis atraviesa una disolucin conteniendo un analito

absorbente, la intensidad incidente del haz (Io) es atenuada hasta I. Esta fraccin de
radiacin que no ha logrado traspasar la muestra es denominada transmitancia (T) (T =
I/Io). Por aspectos prcticos, se utizar la absorbancia(A) en lugar de la transmitancia (A
= -logT), por estar relacionada linealmente con la concentracin de la especie
absorbente segn la Ley de Beer-Lambert: A = lc (: coeficiente de absortividad
molar, l: camino ptico, c: concentracin de la especie absorbente).

Modos de excitacin electrnica

Cuando un fotn UV-Visible de energa adecuada incide en una especie absorbente, un
electrn es promovido desde su estado fundamental a un estado electrnico excitado. En
absorcin UV-Visible, pueden observarse las distintas transiciones electrnicas:

Transiciones *
<150 nm . Este tipo de transiciones se dan sobre todo en hidrocarburos que nicamente
poseen enlaces C-H o C-C. La energa requerida para que tenga lugar esta transicin
es relativamente grande, perteneciente a la regin espectral denominada ultravioleta de
vaco.
Transiciones n *
entre 150-200 nm . Correspondientes a hidrocarburos que poseen tomos con pares de
electrones no compartidos (electrones de no enlace). La energa necesaria para que se
produzca esta transicin sigue siendo alta (aunque menor que en las * )
perteneciendo stas a la regin espectral UV Lejano.

Transiciones n *y *
entre 200-700 nm. La mayora de las aplicaciones de espectroscopia UV-Visible estn
basadas en transiciones que ocurren en esta zona. Se requiere que las especies
participantes aporten un sistema de electrones (grupos cromforos: compuestos con
insaturaciones, sistemas aromticos multicclicos, etc.). Las energas de excitacin en
las transiciones * son medianamente altas, correspondiendo a la regin UV Lejano
y Prximo, mientras que las n * son considerablemente menores, correspondiendo a
la regin visible del espectro.
En espectroscopia UV-Vis se irradia con luz de energa conocida suficiente como para
provocar transiciones electrnicas, es decir promover un electrn desde un orbital de
baja energa a uno vacante de alta energa.

Transiciones electrnicas posibles entre orbitales n: orbital que contiene par de

electrones no compartidos (ejemplo en: O, N, Cl)

Las transiciones ms favorecidas son entre el orbital ocupado de energa ms alta

(HOMO) y el orbital desocupado de energa ms baja (LUMO)

el espectrmetro UV-Vis registra las longitudes de onda donde se registra absorcin y

cuantifica la absorcin.

El espectro se registra como absorbancia (A) Vs. longitud de onda (), las bandas del
espectro UV son anchas por que incluyen la estructura fina de transiciones vibracionales
y rotacionales de menor energa.

El espectrofotmetro ultravioleta-visible
El espectrofotmetro es un instrumento que permite comparar la radiacin absorbida o
transmitida por una solucin que contiene una cantidad desconocida de soluto, y una
que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia.
Todas las sustancias pueden absorber energa radiante. El vidrio, que parece ser
completamente transparente, absorbe longitudes de onda que pertenecen al espectro
visible; el agua absorbe fuertemente en la regin del IR. La absorcin de las radiaciones
UV, visibles e IR depende de la estructura de las molculas, y es caracterstica para cada
sustancia qumica. El color de las sustancias se debe a que absorben ciertas longitudes
de onda de la luz blanca que incide sobre ellas y slo dejan pasar a nuestros ojos
aquellas longitudes de onda no absorbida.
Esta espectrofotometra utiliza radiaciones del campo UV de 80 a 400 nm,
principalmente de 200 a 400 nm (UV cercano) y de luz visible de 400 a 800 nm, por lo
que es de gran utilidad para caracterizar las soluciones en la regin ultravioleta-visible
del espectro. Se rige por una ley muy importante: la ecuacin de Beer-Lambert.

Ley de Beer-Lambert
Una expresin para la ecuacin de Beer-Lambert es la siguiente: It / I0 = 10 klc donde:

It es el rango de luz captado por el tubo de fotocolorimetra,

I0 es el rango de luz que sale del tubo de fotocolorimetra y que va a
llegar a la celda fotoelctrica donde es captada y medida
k es la capacidad de captacin del has del campo electromagntico,
l es la longitud del tubo de fotocolorimetra en cm,
c es la concentracin de la muestra ya ubicada en el tubo de
fotocolorimetra.

La ley de Beer permite cuantificar la concentracin de una muestra por UV, tambin
puede ser expresada de la siguiente manera: A = Cl

A : Absorbancia
: Coeficiente de extincin (Caracterstico de cada sustancia).
l : Largo del paso de la cuba (cm).
C : Concentracin (moles/l).

La zona de longitudes de onda que se registra en un espectro UV-Vis es de entre 200 y

800 nm. En esta zona no absorben dobles ni triples enlaces aislados.

Slo van absorber enlaces pi conjugados y heterotomos con pares de electrones no

compartidos (O, N), como los grupos cromforos.

Caractersticas del sistema

Las muestras en solucin se ponen en
una pequea celda de Si.
Se utilizan dos lmparas: una de H o deuterio para la regin UV, y una de W /
halgeno para la regin visible
Se utiliza tambin una celda de referencia que contiene slo solvente.
La luz pasa simultneamente por la celda de muestra y la celda de referencia.
El espectrmetro compara la luz que pasa por la muestra con la que pasa por la
celda de referencia.
 La radiacin transmitida es detectada y el espectrmetro obtiene el espectro de
absorcin al barrer la longitud de onda de la luz que pasa por las celdas.

Consideraciones generales
La espectroscopia ultravioleta-visible es la ms limitada para la informacin de
compuestos. Los compuestos que tengan un cromforo o instauraciones son visibles en
esta regin. Un cromforo es cualquier grupo de tomos que absorben luz
independientemente de que presente color o no, aunque tambin puede presentar un
grupo auxcromo que es el que amplia la conjugacin de un cromforo mediante la
comparticin de electrones de no enlace.

La mxima absorcin se debe a la presencia de cromforos en una molcula. Este tipo

de espectroscopia sirve principalmente para el anlisis de compuestos aromticos y
cidos carboxlicos ( y ) insaturados.

Para el anlisis de catalizadores suele utilizarse una variante de esta espectroscopia

llamada espectroscopia de reflectancia difusa

Espectroscopia de Reflectancia Difusa

La reflectancia difusa tiene lugar en todas las direcciones como consecuencia de los
procesos de absorcin y dispersin como se muestra en la figura, y predomina cuando
los materiales de la superficie reflectante son dbiles absorbentes a la longitud de onda
incidente y cuando la penetracin de la radiacin es grande en relacin a la longitud de
onda.

Ventajas y desventajas del DRIFTS

Ventajas

Preparacin mnima muestra.

Posibilidad anlisis mayora materiales no reflectores, incluyendo materiales
muy opacos o poco absorbentes.
Anlisis de superficies irregulares y materiales duros.
Alta sensibilidad (pocos ppm).

Desventajas

Adems de los problemas de la reflexin en la superficie nos encontramos con otros

problemas:

Est limitada principalmente a muestra en polvo.

Si la muestra contiene agua y debido al calentamiento producido por el rayo de
luz infrarrojo, sta se puede evaporar dando lugar a vapor de agua que causa
fuertes interferencias en el espectro.
El llenado de la celda es poco reproducible sobre todo cuando se quiere trabajar
en anlisis cuantitativo.
Procedimiento Experimental:

1) Se disuelve un poco de muestra en etanol.

2) Se hace una lnea base con el alcohol en el equipo.
3) Se coloca la muestra en la cmara.
4) Se obtuvo un espectro caracterstico de la mezcalina.

RESULTADOS
1) EXTRACCION CLOROFORMICA:

Rendimiento

Muestra Peso (gr.) pH Base libre Alcaloide Alcaloide %

(mg.) + HCl (mg.) Alcaloide
(mg.)
Chumpi I 50,0094 12,26 1090 32 27,3 0,05

Clculo de rendimiento:

(27.3 mg. / 50009.4 mg.) X 100 = 0,05 %

2) ANALISIS CROMATOGRAFICO:

I) Se hizo el anlisis por cuadruplicado, obtenindose los siguientes resultados

del corrimiento:

a. - 1,75 cm.
b. - 1,85 cm.
c. - 1,30 cm.
d. - 1,65 cm.

Promedio = 1,64 cm.

II) Corrimiento del solvente: 4,90 cm.

========== Rf = 1,64 cm. / 4,90 cm. = 0,33

3) ANALISIS UV:

Espectro de la muestra.

4) ANALISIS IR:
Espectro de la muestra.