Terapi Nanopartikel Ekstrak Kulit Kacang Tanah (Arachis hypogea) terhadap Histopatologi dan

Ekspresi TNF- Ginjal Tikus (Rattus norvegicus) Diabetes Melitus Induksi Multiple Low Dose
Streptozotocin
Expression of TNF- and Histopathology Features of Kidney on Diabetic Rats (Rattus norvegicus)
Induced by Multiple Low Dose Streptozotocin After Peanut Hull (Arachis hypogea) Extract
Nanoparticles Teraphy

Deasy Andini Ersya Putri*, Aulanniam Aulanniam*, Herawati.

Program Studi Kedokteran Hewan, Fakultas Kedokteran Hewan, Universitas Brawijaya.
*Ersyadeasy@gmail.com, *aulani@ub.ac.id

ABSTRAK

Prevalensi diabetes melitus pada pet animal (anjing dan kucing) mencapai 1:100-500 kejadian di dunia.
Hiperglikemia pada diabetes melitus dapat memicu pembentukan keadaan stres oksidatif. Stres oksidatif memiliki
kontribusi dalam komplikasi diabetes melitus. Ekspresi tumor necrosis factor alfa (TNF-) juga meningkat pada
sel-sel ginjal pada pasien diabetik nefropati. Ekstrak kulit kacang tanah memiliki zat aktif luteolin yang berfungsi
sebagai antioksidan yang dapat menetralisir kondisi stres oksidatif dan dapat menurunkan ekspresi tumor necrosis
factor alfa (TNF-). Partikel dalam ukuran nano akan meningkatkan bioavaibilitas obat. Tujuan dari penelitian ini
adalah mengetahui potensi terapi nanopartikel ekstrak kulit kacang tanah (Arachis hypogea) terhadap perbaikan
histopatologi dan penurunan ekspresi TNF- ginjal tikus (Rattus norvegicus) yang diinduksi MLD-STZ. Hewan
coba yang digunakan adalah tikus yang dibagi menjadi lima kelompok perlakuan: kontrol negatif; kontrol positif
yang diberi induksi MLD-STZ sebanyak 20 mg/kgBB/hari; perlakuan (1), (2) dan (3) diberi induksi MLD-STZ
sebanyak 20 mg/kgBB/hari diberi terapi nanopartikel ekstrak kulit kacang tanah 250 mg/kgBB/hari, 500
mg/kgBB/hari, 1000 mg/kgBB/hari. Ekspresi TNF- ginjal dihitung dengan progran Immunoratio dan dianalisis
secara kuantitatif dengan One Way ANOVA dengan uji lanjut tukey =0,05. Gambaran histopatologi ginjal
dianalisis secara kualitatif menggunakan mikroskop cahaya. Hasil penelitian menunjukkan nanopartikel ekstrak
kulit kacang tanah (Arachis hypogea) dapat memperbaiki lesi tubular dan ekspansi mesangial glomerulus ginjal
tikus diabetes melitus induksi MLD-STZ dan secara signifikan (P<0,05) menurunkan ekspresi TNF- dengan dosis
efektif 1000 mg/kgBB/hari sebanyak 88,5% terhadap kontrol positif. Kesimpulan penelitian ini adalah nanopartikel
ekstrak kulit kacang tanah (Arachis hypogea) dapat digunakan sebagai terapi alternatif kerusakan ginjal akibat
diabetes melitus.

Kata kunci : Diabetes melitus, MLD-STZ, TNF-, kulit kacang tanah, ginjal

ABSTRACT

The prevalence of diabetes mellitus in pet animal, especially dogs and cats reached 1: 100-500 in the world.
Hyperglycemia in diabetes mellitus could trigger the formation of reactive oxygen compounds lead to oxidative
stress. Oxidative stress contributed to the complications of diabetes mellitus. Tumor Necrosis Factor Alpha (TNF-)
expression also increased in renal cell in diabetic nephropathy patients. Peanut hull extract has luteolin active
substances that act as antioxidants that can neutralized oxidative stress, also could decrease the amount Tumor
Necrosis Factor Alpha (TNF-) expression. Nanoparticles would increase drug bioavailability. The aim of this
study was to determine therapeutic effects of peanut hull nanoparticles extract (Arachis hypogea) for histopathology
improvement and supression of TNF- expression kidney in rats (Rattus norvegicus) MLD-STZ-induced. The rats
used in this research divided into five groups: negative control; positive control (induced by MLD-STZ 20 mg /
kgBW / day); treatment (3), (4) and (5) given induction MLD-STZ 20 mg / kgBW / day and after that treated by
peanut hull extract nanoparticle 250 mg / kgBW / day, 500 mg / kgBW / day , 1000 mg / kgBW / day. TNF-
expressions in the kidney were calculated by Immunoratio program and quantitatively analyzed by One Way
ANOVA continued with Tukey test =0,5. Histopathologic features of renal qualitatively analyzed using a light
microscope. Results showed that nanoparticles of peanut hull extract (Arachis hypogea) suppressed mesangial cells
expansion and tubular damage in diabetic MLD-STZ-induced rat kidneys; and significantly (P <0.05) decreased the
expressions of TNF- with the effective dose of 1000 mg / kgBW / day as much 88,5 % compare to positive
control. It is concluded that peanut hull (Arachis hypogea) extract nanoparticle can be used as an alternative therapy
for renal damage induced by diabetes mellitus.
Keywords : Diabetes mellitus, MLD-STZ, TNF-, peanut hull, kidney

1
PENDAHULUAN
Diabetes Melitus adalah penyakit
kelainan metabolik yang dikarakteristikkan
dengan hiperglikemia kronis dalam tubuh
diakibatkan oleh kelainan sekresi insulin, kerja
insulin maupun keduanya. Hiperglikemia kronis
pada diabetes melitus akan disertai dengan
kerusakan dan komplikasi gangguan fungsi
beberapa organ tubuh salah satunya ginjal atau
diabetik nefropati (World Health Organization,
2006). Diabetes melitus merupakan penyakit
yang serius pada hewan khususnya pet animal
atau hewan kesayangan. Rasio kejadian diabetes
melitus pada anjing yaitu 1:100 (Nelson, 2010),
sedangkan pada kucing menurut Reusch (2010)
yaitu 1:500.
Tipe diabetes melitus secara umum yaitu
diabetes melitus tipe 1 atau Insulin Dependent
Diabetes (IDD) dan diabetes melitus tipe 2 atau
Insulin Resistance Diabetes (IRD). Diabetes
melitus tipe 1 disebabkan karena adanya
kerusakan pada sel beta pannkreas dan dapat
menyebabkan komplikasi pada berbagai organ
salah satunya ginjal (diabetik nefropati).
Komplikasi disebabkan oleh tingginya
konsentrasi glukosa darah (hiperglikemia) karena
glukosa tidak bisa masuk ke dalam sel untuk
dimetabolisme menjadi energi.
Hiperglikemia secara in vivo
menyebabkan meningkatnya berbagai modifikasi
molekuler sehingga terjadi peningkatan radikal
bebas, kondisi ini disebut dengan stres oksidatif
yang memiliki kontribusi dalam komplikasi
diabetes melitus (Setiawan dkk., 2005).
Hiperglikemia menyebabkan terjadinya
peningkatan Advanced Glycation End Products
(AGEs) yang dapat menyebabkan peningkatan
permiabilitas kapiler glomerulus sehingga protein
lolos selama proses filtrasi yang ditandai dengan
adanya proteinuria dan albuminuria (Schrier,
2007). Sitokin pro-inflamatori juga dilaporkan
meningkat pada pasien diabetes dan jumlahnya
bertambah seiring dengan nefropati karena
diabetes, hal ini ditunjukkan dengan
meningkatnya sitokin Tumor Necrosis Factor
Alpha (TNF-) yang dapat diproduksi oleh sel-sel
ginjal (Navarro et al., 2005).
Herbal medicine saat ini sedang pesat
berkembang di masyarakat. Kandungan
antioksidan pada tanaman herbal dapat mencegah
timbulnya stres oksidatif sehingga dapat
meminimalisir komplikasi yang diakibatkan oleh
diabetes melitus. Berdasarkan penelitian Win et
2
al. (2011) kulit kacang tanah (Arachis hypogea)
memiliki aktifitas antioksidan yang tinggi yaitu
61,09% dengan kandungan zat aktif yang
tertinggi yaitu luteolin. Luteolin memiliki efek
antioksidan yang dapat menetralisir Reactive
Oxygen Species (ROS) dan inhibisi pembentukan
Advanced Glycation End Products (AGEs) yang
merupakan penyebab kerusakan ginjal pada
kondisi hiperglikemia. Luteolin juga memiliki
efek antiinflamasi yang dapat menurunkan
ekspresi Tumor Necrosis Factor Alpha (TNF-)
yang merupakan sitotoksik terhadap sel ginjal
melalui inhibisi pembentukan AGEs (Jain et al.,
2005; Wang, 2016; Wang et al., 2011).
Pemanfaatan kulit kacang tanah sebagai terapi
diabetes melitus tentu akan menekan biaya
karena merupakan sifatnya berupa limbah atau
hasil samping.
Pengubahan ukuran partikel ekstrak
menjadi berukuran nano dapat meningkatkan
efisiensi penyerapan dalam tubuh. Senyawa
bahan aktif ekstrak dengan ukuran nano (50
500 nm), dengan mudah terserap vili usus
sehingga meningkatnya bioavabilitasnya
(Kammona, 2012). Menurut Rosiyana (2012),
partikel dengan ukuran nano yang dilakukan
enkapsulasi atau penyalutan dengan kitosan
menyebabkan ekstrak lebih akurat dalam
mencapai target. Maka dari itu, pengubahan hasil
ekstraksi untuk terapi atau obat menjadi ukuran
yang lebih kecil akan lebih efisien dari sisi
bioavaibilitas dan dosis terapi. Melihat potensi
kulit kacang tanah (Arachis hypogea) sebagai
terapi diabetes melitus maka diperlukan
penelitian untuk mengetahui pengaruh kulit
kacang tanah terhadap penyakit diabetes melitus.
MATERI DAN METODE
Alat dan Bahan
Alat yang digunakan dalam penelitian ini
yaitu ayakan, magnetic stirrer TOMY, timbangan
digital, mikrotom, staining jar, vortex, freeze
dryer, gelas ukur, cahaya OLYMPUS BX51,
DEPs (Dako Envision Peroksidase System),
yellow tip, spuit 1 mL, mikropipet, micro tube,
tissue, gunting tajam-tajam, labu erlenmeyer,
corong kaca, sonde lambung, gelas objek, cover
glass, blender, rotary evaporator, kertas saring
Whatman No. 1, spuit 1 mL injeksi
streptozotocin, glukometer Easy Touch, stick
glucometer Easy Touch.
Bahan yang digunakan dalam penelitian
ini antara lain tikus (Rattus norvegicus) galur
Wistar jantan dengan berat badan 150-200 gram
berumur dua bulan, pakan tikus, kulit kacang
tanah yang didapat dari pasar di Kota Malang,
metanol 96%, asam asetat 1%, kitosan, sodium
tripoliphospat (STPP) 0,1%, akuades, tween 80,
NaCl fisiologis, Paraformaldehyde (PFA) 4%,
parafin, pewarna hematoxylin dan eosin, xylol,
alkohol absolut, Phospate Buffer Saline (PBS)
pH 7,4, hidrogen peroksida (H2O2),
streptozotocin, bufer sitrat, Bovine Serum
Albumin (BSA) 1%, Mayers hematoxylin,
antibodi primer rat anti-TNF-, Antibodi
sekunder rabbit anti rat berlabel biotin,
Strepavidin Conjugated Horseadish Peroxidase
(SAHRP) dan diaminobenzidine (DAB).
Persiapan Hewan Coba
Hewan coba menggunakan tikus (Rattus
norvegicus) berusia 2 bulan dengan jenis kelamin
jantan. Tikus diaklimatisasi selama tujuh hari
dengan pemberian ransum basal berasal standar
American Institution of Nutrition (AIN) 93 pada
Speciality Feeds (2013) dan diberi air minum air
suling. Hewan coba dibagi menjadi lima
kelompok dengan masing- masing kelompok
terdiri dari empat ulangan antara lain: kontrol
negatif; kontrol positif yang diberi induksi MLD-
STZ sebanyak 20 mg/kgBB/hari; perlakuan (1),
(2) dan (3) diberi induksi MLD-STZ sebanyak 20
mg/kgBB/hari diberi terapi nanopartikel ekstrak
kulit kacang tanah 250 mg/kgBB/hari, 500
mg/kgBB/hari, 1000 mg/kgBB/hari. Penggunaan
hewan coba sudah mendapatkan sertifikat laik
etik dari Komisi Etik Penelitian Univeristas
Brawijaya No:464-KEP-UB.
Induksi Multiple Low Dose Streptozotocin (MLD-
STZ)
Tikus diabetes melitus diperoleh dengan
cara injeksi MLD-STZ dengan dosis 20 mg/kg
berat badan secara intraperitoneum selama lima
hari berturut-turut (Aulanniam et al., 2005).
Penggunaan dosis rendah berulang atau multiple
low dose streptozotocin dilakukan untuk
meminimalisir toksistas pada ginjal hewan coba
(Breyer et al., 2005). Sebelumnya, dibuat buffer
sitrat sebagai pelarut streptozotocin. Tikus
selanjutnya diinkubasi selama 14 hari. Hewan
coba yang diberikan induksi streptozotocin
dikatakan mengalami diabetes melitus ketika
sudah terjadi hiperglikemia pada tubuh dengan
kadar gula darah 180 500mg/dL (Etuk, 2010).
3
Pembuatan Ekstrak Kulit Kacang Tanah
Kulit kacang dibersihkan dengan air
mengalir untuk membilas tanah yang menempel
kemudian dikering-anginkan pada suhu ruangan
sampai kering seluruhnya (Win et al., 2011).
Kulit kacang tanah kemudian diblender dengan
kecepatan sedang hingga menjadi serbuk. Serbuk
kemudian diayak untuk memisahkan bagian yang
masih kasar dengan yang sudah halus. Bagian
yang masih kasar kemudian diblender kembali
dengan kecepatan sedang. Serbuk kulit kacang
ditimbang dan dimasukkan ke dalam gelas beker
kemudian ditambahkan metanol 96% dengan
rasio 1:10, kemudian dihomogenkan dengan
magnetic stirrer. Sampel disaring dan diambil
filtratnya untuk dilakukan proses penguapan
metanol yang terkandung dalam sampel dengan
rotary evaporator dengan suhu 60oC selama 24
jam (Win et al., 2011).
Pembuatan Nanopartikel Ekstrak Kulit Kacang
Tanah
Pembuatan nanopartikel ekstrak kulit
kacang tanah memodifikasi metode Hermanus
(2012). Hasil ekstrak kemudian dilakukan
penyalutan kitosan lalu dilakukan pengecilan
partikel dengan ultrasonikator. Sebanyak 1 gram
kitosan dilarutkan dalam 100 mL asam asetat 1%
dalam labu erlenmeyer sehingga diperoleh
konsentrasi kitosan 1% (b/v), diaduk dengan
pengaduk magnet. Sodium tripolipospat (STPP)
kemudian ditambahkan sebanyak 50 mL 1% larut
dalam akuades, ditambahkan tween 80 0.1%
sebanyak 1 mL dan ditambahkan dengan 1 mL
ekstrak yang larut dalam akuades. Larutan
kitosan-STPP kemudian dipecah dengan
ultrasonikator dengan daya 130 W, frekuensi 20
KHz selama 60 menit, kemudian dikeringkan
dengan freeze dryer pada suhu -121C.
Terapi Nanopartikel Ekstrak Kulit Kacang tanah
pada Hewan Coba
Terapi dilakukan 14 hari pasca induksi
MLD-STZ pada hewan coba. Pemberian terapi
dilakukan melalui sonde modifikasi lambung
sebanyak 2 mL dengan menggunakan pelarut
aquades dengan konsentrasi yang berbeda pada
kelompok tertentu perlakuan hewan coba.
Pemberian terapi berlangsung selama 14 hari
berturut-turut dengan dosis yang sama yang
ditentukan pada masing-masing kelompok
perlakuan.
Euthanasia Hewan Coba
Euthanasia Hewan coba dilakukan
dengan cara dislokasi leher. Euthanasia dilakukan
pada semua kelompok perlakuan hewan coba
keesokan harinya setelah pemberian terapi.
Hewan diletakkan rebah dorsal dan dilakukan
pembedahan pada daerah abdomen untuk
pengambilan organ ginjal yang terletak pada
dorsal tulang vertebrae. Organ ginjal kemudian
dicuci dengan natrium klorida 0,9 % dan
dimasukkan dalam larutan paraformaldehyde
(PFA) 4% pada pot yang berbeda untuk semua
hewan coba.
Pembuatan dan Pengamatan Preparat
Histopatologi Ginjal
Pembuatan preparat histopatologi ginjal
dilakukan pada semua kelompok perlakuan
hewan coba. Pembuatan preparat histologi terdiri
dari beberapa tahap yaitu fiksasi, dehidrasi,
penjernihan, infiltrasi parafin, embedding,
sectioning, pewarnaan dan penempelan
(Junquiera and Carneiro, 2005). Preparat
histopatologi ginjal diamati dibawah mikroskop
cahaya Olympus BX51 perbesaran 1000 dengan
mengamati glomerulus dan tubulus ginjal
sebanyak lima lapang pandang.
Pembuatan dan Pengamatan Preparat
Imunohistokimia TNF- Ginjal
Preparat jaringan ginjal sebelum diwarnai
harus melalui proses deparafinasi dan rehidrasi,
kemudian reaksi antara antigen dan antibody
Tumor Necrosis Factor Alpha (TNF-)
divisualisasikan dengan diberi substrat kromagen
yaitu Diaminobenzidine (DAB) sehingga
menghasilkan warna coklat. Preparat
immunohistokimia ginjal diamati dibawah
mikroskop cahaya Olympus BX51 perbesaran
1000 dengan mengamati ekspresi TNF- pada
glomerulus dan tubulus ginjal. Hasil ekspresi
diproses dengan program Immunoratio dari
rataan lima lapang pandang ekspresi TNF-.
Analisa Data
Data gambar histopatologi ginjal diamati
secara kualitatif dengan cara deskriptif. Data
persentase ekspresi TNF- dianalisis secara
kuantitatif dengan analisis statistika one way
ANOVA menggunakan aplikasi SPSS for
Windows 16 dan dilanjutkan dengan uji Tukey
atau Beda Nyata Jujur (BNJ) = 0,05
(Kusriningrum, 2012).
HASIL DAN PEMBAHASAN

Pengaruh Terapi Nanopartikel Ekstrak Kulit Kacang Tanah (Arachis hypogea) terhadap
Perbaikan Histopatologi Ginjal Tikus (Rattus norvegicus) Induksi Multiple Low Dose
Streptozotocin (MLD-STZ).
A

Gambar 1. Gambaran Histopatologi Ginjal Tikus (Rattus norvegicus) Perbesaran 1000x.

Keterangan gambar 1: (A) kontrol negatif, (B) tikus kontrol positif, (C) terapi dosis 250mg/kgBB (P1), (D) terapi dosis
500mg/kgBB (P2), (E) terapi dosis 1000mg/kgBB (P3). ( ) menunjukkan adanya ekspansi sel mesangial karena
adanya akumulasi extracellular matrix (ECM) dan proliferasi sel mesangial glomerulus. ( ) menunjukkan adanya
penyempitan lumen endothel kapiler glomerulus. ( ) menunjukkan adanya lesi sel epitel tubulus ginjal.

4
 Gambaran histopatologis glomerulus
yang terkena hiperglikemia yaitu adanya
akumulasi extracellular matrix (ECM) mesangial,
proliferasi sel mesangial. Hasil pemotretan
histopatologi ginjal tikus induksi multiple low
dose streptozotocin (MLD-STZ) terdapat pada
gambar 1. Pada tikus kontrol negatif (Gambar
1.A) terlihat gambaran histologis glomerulus dan
tubulus ginjal normal. Glomerulus ginjal terdiri
dari Kapsula Bowman yang membungkus kapiler
glomerulus dan hasil tampungan urin primer
yaitu Space Bowman (Mescher, 2013).
Glomerulus terdiri dari kapiler darah dilekati oleh
sel podosit yang berfungsi sebagai pengatur
barier filtrasi darah pada membran basalis kapiler
glomerulus (Kubiak and Niemir, 2006). Sel
podosit bersamaan dengan sel mesangial
membentuk struktur glomerulus (Mescher, 2013).
Gambar 1.B merupakan gambaran
histopatologis ginjal tikus diabetes melitus
induksi MLD-STZ. Pada Gambar 1.B terdapat
ekspansi sel mesangial akibat akumulasi
extracellular matrix (ECM) yang ditandai dengan
pewarnaan Hematoxylin-Eosin (HE) yang
berwarna eosinofilik karena matriks terdiri atas
kompleks protein yang mengikat pewarna eosin.
Selain itu erjadi proliferasi sel mesangial yang
dan terdapat penyempitan lumen endothel akibat
ekspansi ECM, serta terdapat kerusakan sel-sel
tubulus ginjal yang ditandai oleh batas antar sel
yang tidak jelas dan adanya erosi epitel tubulus.
Ahn et al. (2004) mengatakan bahwa diabetik
nefropati dikarakteristikan dengan adanya
akumulasi extracelullar matrix (ECM) dan
proliferasi sel mesangial yang dapat mendesak
lumen kapiler glomerulus. Kanwar et al. (2012)
dan Wang et al. (2011) mengatakan diabetes
melitus menyebabkan terjadinya kerusakan pada
sel-sel ginjal yaitu sel glomerular dan sel tubular.
Hiperglikemia menyebabkan peningkatan
tiga jalur utama penyebab abnormalitas sel ginjal
yaitu aktivasi jalur poliol-sorbitol, glikasi protein
dan autooksidasi glukosa. Akumulasi fructose-3-
phosphate karena peningkatan jalur poliol
menyebabkan terbentuknya Advanced Glycation
End Products (AGEs) yang apabila berikatan
dengan Receptor of Advanced Glycation End
Products (RAGE) menyebabkan terbentuknya
Reactive Oxygen Spesies (ROS) (Setiawan dkk.,
2005). Glikasi protein juga dapat menyebabkan
pembentukan AGEs. Reactive Oxygen Spesies
(ROS) merupakan radikal bebas yang dapat
memecah rantai Deoxyribose Nucleic Acid
(DNA) pada mitokondria dan memicu reaksi
5
peroksidasi lipid yang keduanya berkontribusi
dalam gangguan metabolisme sel dan modifikasi
DNA yang berujung pada kerusakan
histopatologis sel-sel ginjal (Gambar 1.B)
(Kashihara et al., 2012).
Akumulasi extracellular matrix (ECM)
pada sel mesangial glomerulus ginjal pada
Gambar 1.B terjadi karena peningkatan AGEs.
Sel mesangial memiliki kemampuan dalam
pembentukan matriks yang diregulasi oleh
Plasminogen Activator Inhibitor 1 (PAI-1),
plasminogen, plasmin dan plasminogen activator.
Akumulasi AGEs pada sel mesangial glomerulus
menyebabkan peningkatan PAI-1 dan penurunan
plasminogen activator sehingga terjadi
penekanan aktivitas plasmin dalam mendegradasi
matriks mesangial yang berakibat pada
pembentukan matriks pada sel mesangial secara
ekspansif seiring dengan semakin parahnya
tingkat hiperglikemia (Yu et al., 2007).
Proliferasi sel mesangial diakibatkan karena
peningkatan ekspresi Transforming Growth
Factor Beta (TGF-) karena hiperglikemia yang
menyebabkan aktivasi ekspresi gen p21Cip1 dan
p27Kip1 yang memicu proliferasi sel mesangial
(Wolf, 2002).
Gambaran histopatologi tikus terapi 250
mg/kgBB (Gambar 1.C) masih terlihat ekspansi
sel mesangial dan kerusakan sel tubulus namun
tidak separah pada gambaran histopatologis tikus
kontrol positif. Pada histopatologis tikus terapi
500 mg/kgBB (Gambar 1.D), ekspansi sel
mesangial hanya terjadi pada satu area saja dan
telah terjadi regenerasi sel epitel tubulus.
Gambar 1.E (terapi 1000mg/kgBB) memiliki
kesamaan struktur glomerulus dan tubulus ginjal
dengan gambaran histologis kontrol negatif
dimana tidak ditemukan adanya kerusakan epitel
tubulus ginjal yang ditandai dengan batas antar
sel yang jelas, tidak adanya erosi epitel tubulus,
tidak ditemukan adanya ekspansi sel mesangial
yang ditandai dengan ukuran lumen kapiler
glomerulus menyerupai kapiler glomerulus
gambar kontrol negatif.
Berdasarkan penelitian Win et al. (2011)
kulit kacang tanah memiliki senyawa flavonoid
yang tertinggi yaitu luteolin. Luteolin adalah
turunan flavonoid yang memiliki aktivitas
antioksidan yang berperan penting dalam terapi
komplikasi diabetes melitus (Wang et al., 2011).
Luteolin sebagai antioksidan mampu mencegah
inisiasi Reactive Oxygen Species (ROS) untuk
berikatan dengan berbagai macam struktur sel
melalui kemampuan luteolin untuk
menyumbangkan gugus hidroksil, sehingga tidak (2012), luteolin mampu meningkatkan level
terjadi reaksi autooksidasi glukosa (Han et al., enzim antioksidan endogen secara signifikan
2012) sehingga memicu regenerasi sel-sel glomerulus
Wang (2016) mengatakan bahwa luteolin dan tubulus. Unit nefron ginjal mampu
mampu menginhibisi terbentuknya Advanced melakukan regenerasi dan perbaikan terhadap sel-
Glycation End Products (AGEs), sehingga tidak sel nya (sel glomerulus dan tubulus) selama tidak
terjadi pembentukan Reactive Oxygen Species terjadi kerusakan seluruhnya melalui bone
(ROS) dan terjadi penurunan Plasminogen marrowderived cells (BMDC). bone marrow
Activator Inhibitor-1 (PAI-1), penurunan derived cells (BMDC) berasal dari sumsum
aktivitas PAI-1 meningkatkan aktivitas tulang yang dapat berdiferensiasi menjadi epitel
plasminogen activator sehingga extracelullar tubulus, sel mesangial, endothel glomerulus dan
matrix (ECM) pada sel mesangial dapat sel podosit (Little, 2006).
didegradasi. Berdasarkan penelitian Han et al
Pengaruh Terapi Nanopartikel Ekstrak Kulit Kacang Tanah (Arachis hypogea) terhadap
Penurunan Ekspresi Tumor Necrosis Factor Alpha (TNF-) Ginjal Tikus (Rattus norvegicus)
Induksi Multiple Low Dose Streptozotocin (MLD-STZ).

Gambar 2. Ekspresi Tumor Necrosis Factor Alpha (TNF-) pada Gambaran Immunohistokimia
Ginjal Tikus (Rattus norvegicus) Perbersaran 1000x
Keterangan gambar 2: (A) tikus kontrol negatif, (B) tikus kontrol positif, (C) tikus terapi nanopartikel ekstrak
kulit kacang tanah dosis 250mg/kgBB, (D) tikus terapi nanopartikel ekstrak kulit kacang tanah dosis
500mg/kgBB, (E) tikus terapi nanopartikel ekstrak kulit kacang tanah dosis 1000 mg/kgBB. Tanda panah
( ) menunjukkan ekspresi Tumor Necrosis Factor Alpha (TNF-).
Tabel 1. Ekspresi Tumor Necrosis Factor Alpha (TNF-) pada Ginjal Tikus (Rattus norvegicus) yang
Diinduksi Multiple Low Dose Streptozotocin (MLD-STZ) dan Terapi Nanopartikel Ekstrak Kulit
Kacang Tanah (Arachis hypogea)
Ekspresi TNF- (%)
Rata-Rata Persentase Peningkatan Penurunan
Kelompok
Ekspresi TNF- Terhadap Kontrol Terhadap Kontrol
Negatif Positif
Kontrol Negatif 0.7950 0.2374a - -
Kontrol Positif 15.1275 0,4924d 1802,8 -
Terapi 250mg/kgBB 11.9200 1,2926c - 21,2
Terapi 500mg/kgBB 5.3300 0,5965b - 64,7
Terapi 1000mg/kgBB 1.7250 0,2972a 88,5
Keterangan tabel 1: notasi a,b,c,d menunjukan bahwa ada perbedaan signifikan tiap kelompok (p<0,05)

6
 Gambar 2.A merupakan gambaran
immunohistokimia ginjal kontrol negatif, terdapat
ekspresi Tumor Necrosis Factor Alpha (TNF-)
pada kontrol negatif. Adanya ekspresi TNF-
pada kelompok kontrol negatif karena TNF-
secara normal terdapat pada ginjal dalam jumlah
relatif sedikit sebagai komponen imunitas. Tumor
Necrosis Factor Alpha (TNF-) merupakan suatu
sitokin yang dihasilkan oleh leukosit yang
berfungsi untuk merangsang dan mengaktifkan
sistem imun terhadap respon inflamasi, dimana
dalam keadaan normal, antigen yang masuk
memicu reaktivitas imun pada imunitas
nonspesifik maupun spesifik (Baratawidjaja,
2004).
Peningkatan ekspresi Tumor Necrosis
Factor Alpha (TNF-) pada kontrol positif
(Tabel 1) sangat tinggi hingga 1802,8% lebih
banyak dari kontrol negatif. Peningkatan ekspresi
TNF- kontrol positif berbeda signifikan
(p<0,05) terhadap kontrol negatif, yang
menandakan bahwa hiperglikemia pada kondisi
diabetes melitus meningkatkan ekspresi TNF-.
Selain dihasilkan oleh leukosit, sel intrinsik
ginjal seperti sel mesangial, glomerular,
endothelial dan sel tubulus renal dapat
memproduksi TNF- pada glomerulus dan
tubulus ginjal. Tumor Necrosis Factor Alpha
(TNF-) dapat disimpan pada sel dalam bentuk
proaktif dan TNF- converting enzyme dapat
secara cepat menaikkan level dari sitokin aktif
(Wang et al., 2004).
Tingginya AGEs yang berikatan dengan
RAGE akibat aktivasi jalur poliol sorbitol dan
glikasi protein pada kondisi hiperglikemia
meningkatkan faktor transkripsi Nuclear Factor
Kappa Beta (NF-k). Nuclear Factor Kappa Beta
(NF-k) meningkatkan produksi Monocyte
Chemoattractant Protein 1 (MCP-1) yang
menginduksi migrasi transendothel dan maturasi
makrofag sehingga terjadi overekspresi dari
sitokin proinflamatori salah satunya adalah TNF-
(Gu et al., 2005; Lopez-Varra and Mallavia,
2012). Tumor Necrosis Factor Alpha mengubah
distribusi reseptor adhesi pada perlekatan antar
sel dan mencegah pembentukan F-actin stress
fiber yang mengakibatkan perubahan struktur
intercellular junction sehingga terjadi
peningkatan permiabilitas pada endothel. Tumor
Necrosis Factor Alpha (TNF-) juga secara
langsung dapat menginduksi ROS salah satunya
pada sel mesangial glomerulus. Pengikatan TNF-
pada reseptor permukaan sel menyebabkan
7
terjadinya perubahan metabolik intraselular yang
dapat memediasi apoptosis dan nekrosis sel ginjal
(Navarro-Gonzales and Mora-Fernandez, 2008).
Ekspresi TNF- terapi nanopartikel kulit
kacang tanah (Arachis hypogea) pada tikus
diabetes melitus induksi MLD-STZ dosis 250
mg/kgBB (Gambar 2.C), dosis 500 mg/kgBB
(Gambar 2.D) dan dosis 1000 mg/kgBB
(Gambar 2.E) menunjukkan adanya penurunan
persentase secara signifikan bila dibandingkan
dengan kontrol positif (Gambar 2.B) dengan
persentase penurunan berturut-turut yaitu 21,2%,
64,7% dan 88,5%. Penurunan yang signifikan
(p<0,05) ditandai dengan perbedaan notasi huruf
(Tabel 1) antara kelompok kontrol positif dengan
kelompok perlakuan terapi nanopartikel kulit
kacang tanah berdasarkan analisis statistika.
Kandungan luteolin pada kulit kacang
tanah memiliki aktivitas biologis yaitu
antiinflamasi dan antioksidan yang berperan
penting dalam terapi komplikasi diabetes melitus
(Wang et al., 2011). Luteolin memiliki
kemampuan untuk menginhibisi TNF- dengan
mencegah transkrispsi NF-k (Ruiz and Haller,
2006). Wang (2016) mengatakan bahwa luteolin
mampu menginhibisi terbentuknya AGEs yang
dihasilkan pada jalur poliol dan glikasi protein,
melalui inhibisi pembentukan AGEs; secara
tidak langsung produksi TNF- diturunkan
karena AGEs dapat meningkatkan faktor
transkripsi NF-k.
Berdasarkan hasil analisis statistika,
perlakuan terapi nanopartikel ekstrak kulit kacang
tanah (Arachis hypogea) pada ginjal tikus
diabetes melitus induksi multiple low dose
streptozotocin (MLD-STZ) dosis 1000 mg/kgBB
tidak berbeda signifikan (p<0,05) terhadap
kontrol negatif yang ditunjukkan dengan samanya
notasi huruf kontrol negatif dengan perlakuan
terapi dosis 1000 mg/kgBB (Tabel 1). Hal ini
menunjukkan bahwa terapi nanopartikel ekstrak
kulit kacang tanah dosis 1000 mg/kgBB dapat
menurunkan ekspresi TNF- pada ginjal tikus
diabetes melitus induksi MLD-STZ hingga
mendekati nominal persentase ekspresi TNF-
ginjal tikus kontrol negatif. Berdasarkan ekspresi
TNF- ginjal tikus diabetes melitus induksi
multiple low dose streptozotocin (MLD-STZ)
maka nanopartikel ekstrak kulit kacang tanah
dosis 1000 mg/kgBB memiliki hasil penurunan
ekspresi TNF- terbaik bila dibandingan dengan
terapi nanopartikel ekstrak kulit kacang tanah
dosis 250 mg/kgBB dan 500 mg/kgBB.
KESIMPULAN
Pemberian terapi nanopartikel ekstrak
kulit kacang tanah (Arachis hypogea) mampu
menurunkan ekspresi Tumor Necrosis Factor
Alpha (TNF-) dan memperbaiki kerusakan
histopatologi ginjal tikus (Rattus norvegicus)
diabetes melitus induksi multiple low dose
streptozotocin (MLD-STZ) dengan dosis terapi
efektif yaitu 1000 mg/kgBB.
UCAPAN TERIMAKASIH
Terimakasih kepada seluruh staff
Laboratorium Biosains Universitas Brawijaya,
Laboratorium Patologi Anatomi Kessima Medika
Malang, Laboratorium Fisiologi Hewan
Universitas Brawijaya, UPT Materia Medika
Batu dan Politeknik Negeri Malang.
DAFTAR PUSTAKA
Ahn, J. D. R. Morishita and Y. Kaneda. 2004.
Transcription Factor Decoy for AP-1
Reduces Mesangial Cell Proliferation and
Extracellular Matrix Production in Vitro and
in Vivo. Gene Therapy, vol. 11, no. 11, pp.
916923, 2004.
Aulanniam, D.W. Soeatmadji, F. Fatchiyah, and
B.S. Sumitro. 2005. Detection of GAD 65
Auto Antibodies of Type 1 Diabetes Using
GAD 65-abs Reagen Produce from Bovine
Brain Tissue. Medical Journal of Indonesia
14:197-205.
Baratawidjaja, K.G. 2004. Imunologi Dasar:
Sitokin. Balai Penerbit Fakultas Kedokteran
Universitas Indonesia. Jakarta.128-131.
Breyer, M. D., E. Bttinger, F. C. Brosius, T. M.
Coffman, R. C. Harris, C. W. Heilig and K.
Sharma. 2005. Mouse Models of Diabetic
Nephropathy. JASN January 1, 2005 vol.
16no. 1 27.
Etuk, E.U. 2010. Animals Models for Studying
Diabetes Mellitus. Agriculture And Biology
Journal Of North America ISSN Print: 2151-
7517, ISSN Online: 2151-7525.
Gu, L., S. Hagiwara, Q. Fan, M. Tanimoto, M.
Kobata, M. Yamashita, T. Nishitani, T.
Gohda1, Z Ni, J. Qian, S. Horikoshi and Y.
Tomino. 2005. Role of Receptor for
Advanced Glycation End-Products and
Signalling Events in Advanced Glycation
End-Product-Induced Monocyte
8
Chemoattractant Protein-1 Expression in
Differentiated Mouse Podocytes. Nephrol
Dial Transplant (2005) 1 of 15.
Han, J.Y., S.Y. Ahn, C.S. Kim, S.K. Yoo, S.K.
Kim, H.C. Kim, J.T. Hong and K.W. Oh.
2012. Protection of Apigenin Against
Kainate-Induced Excitotoxicity by Anti-
Oxidative Effects. Biol. Pharm. 813 Bull.
2012, 35, 1440-1446.
Hermanus, D. K. N. 2012. Sintesis dan
Karakterisasi Nanopartikel Ekstrak Kulit
Kayu Mahoni (Swietenia macrophylla King.)
sebagai Bahan Suplemen
Antihiperkolesterolemia [Skripsi]. Fakultas
Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam.
Institut Pertanian Bogor.
Jain, P., R. Pandey and S. Shankar. 2015.
Inflammation: Natural Resources and Its
Applications. New Delhi: Springer.
Junqueira, L.C. and J. Carneiro. 2005. Basic
Histology Text and Atlas, 11 Ed. USA:
McGraw Hills.
Kammona, O. and K. Costas. 2012. Recent
Advances in Nanocarrier-Based Mucosal
Delivery of Biomolecules. Journal of
Controlled Release. 161: 781-794.
Kanwar, Y.S., Wada, J, Sun, L, Xie, P,
Elisabeth,W. 2012. Diabetic Nephropathy :
Mechanisms of Renal Disease Progression.
Experimental and Biology Medicine. Vol 233
: 4-11
Kashihara, N. Y. Haruna, V.K. Kondeti and Y.S.
Kanwar. 2010. Oxidative Stress in Diabetic
Nephropathy. Curr Med Chem. 2010 ;
17(34): 42564269.
Kubiak, A. and Z. Niemir. 2006. The Role Of
Podocytes in Normal Glomerular Function
and in The Pathogenesis of
Glomerulonephritis. Part I. Phenotypic and
Functional Characteristics of Podocytes
During Their Differentiation and Maturity
[Abstract]. Postepy Hig Med Dosw
(Online). 2006;60:248-58.
Kusriningrum, R.S. 2012. Perancangan Percobaan
untuk Penelitian Bidang Biologi, Pertanian,
Peternakan, Perikanan, Kedokteran,
Kedokteran Hewan dan Farmasi. Surabaya:
Airlangga University Press.
Little, Melissa H. 2006. Regrow or Repair:
Potential Regenerative Therapies for the
 Kidney. JASN September 2006 vol. 17no. <http://www.specialtyfeeds.com/data/sf_ain9
9 2390-2401. 3g.pdf> [Diakses tanggal 30 Oktober 2015].
Lopez-Parra, Virginia and B. Mallavia. 2012. Wang, G. G., H.L. Xiao, L. Wei, Z. Xue, and Z.
Immunoinflammation in Diabetic Cui. 2011. Protective Effects of Luteolin on
Nephropathy: Molecular Mechanisms and Diabetic Nephropathy in STZ-Induced
Therapeutic Options. Virginia: InTech. Diabetic Rats. Hindawi Publishing
Corporation Evidence-Based Complementary
Mescher, A. 2013. Junqueira's Basic Histology:
and Alternative Medicine Volume 2011,
Text and Atlas, Thirteenth Edition. New
Article ID 323171, 7 pages
York: McGraw Hill Professional.
doi:10.1155/2011/323171.
Navarro, J.F., F.J. Milena, C. Mora, C. Len, F.
Wang, Victor. 2016. Handbook of Research on
Claverie, C. Flores, and J. Garca. 2005.
Advancing Health Education through
Tumor Necrosis Factor-Alpha Gene
Technology. Pennsylvania: IGI Global.
Expression in Diabetic Nephropathy:
Relationship With Urinary Albumin Wang, X., G.Z. Feuerstein, L. Xu, H. Wang, W.A.
Excretion and Effect of Angiotensin- Schumacher, M.L. Ogletree, R.Taub, J.J.
Converting Enzyme Inhibition. Kidney Int Duan, C.P Decicco, and R.Q. Liu. 2004.
Suppl. 2005 Dec;(99):S98-102. Inhibition of Tumor Necrosis Factor-Alpha-
Converting Enzyme By a Selective
Navarro-Gonzlez, J.F. and C. Mora-Fernndez.
Antagonist Protects Brain from Focal
2008. The Role of Inflammatory Cytokines in
Ischemic Injury in Rats. Mol Pharamcol 65:
Diabetic Nephropathy. J Am Soc
890 896, 2004.
Nephrol. 2008 Mar;19(3):433-42. doi:
10.1681/ASN.2007091048. Epub 2008 Feb Win, M. M., A. A. Hamid, B. S. Baharin, F. Anwar,
6. M. C. Sabu, and M.S. Pak-dek. 2011.
Phenolic Compounds and Antioxidant
Nelson, R.W. 2010. Canine Diabetes Mellitus. In:
Activity of Peanuts Skin, Hull, Raw Kernel
Ettinger SJ, Feldmen EC, eds. Textbook of
and Roasted Kernel Flour. Pak. J. Bot., 43(3):
Veterinary Internal Medicine. 7th ed. St.
1635-1642, 2011.
Louis, MO: Saunders; 2010: 1782-1796.
Wolf, Gunter. 2002. Molecular Mechanisms of
Reusch, C. E. 2010. Update On Feline Diabetes
Diabetic Mesangial Cell Hypertrophy: A
Mellitus. Zuerich: Clinic for Small Animal
Proliferation of Novel Factors.
Internal Medicine University of Zuerich.
World Health Organisation. 2006. Diabetes mellitus
Rosiyana, A. 2012. Aktivitas Antioksidan dan
: Report of a WHO Study Group. World
Penghambatan -Glukosidase Ekstrak dan
Health Organisation. Geneva-Switzerland.
Nanopartikel Ekstrak Kulit Kayu Mahoni
2006. S5-36.
(Swietenia Macrophylla King) [skripsi].
Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Yu, X.,C. Li, X. Li and L. Cai. 2007. Rosiglitazone
Alam. Institut Pertanian Bogor. Prevents Advanced Glycation End Products
Induced Renal Toxicity Likely through
Ruiz, P A. and D. Haller. 2006. Functional
Suppression of Plasminogen Activator
Diversity of Flavonoids in the Inhibition of
Inhibitor-1. toxicological sciences 96(2),
the Proinflammatory NF-B, IRF, and Akt
346356. JASN October 1, 2002 vol. 13.
Signaling Pathways in Murine Intestinal
Epithelial Cells. J. Nutr. March 2006.
Schrier, R. W. 2007. Diseases of the Kidney and
Urinary Tract. Philadelphia: Lippincot
William and Wilkins.
Setiawan, B. dan Suhartono. 2005. Stres Oksidatif
dan Peran Antioksidan pada Diabetes
Melitus. Maj Kedokt Indon, Volum: 55,
Nomor 2.
Speciality Feeds. 2013. Standard AIN93G Rodent
Diet.