Professional Documents
Culture Documents
UNIVERSIDAD DE LA SABANA
FACULTAD DE INGENIERA
PRODUCCIN AGROINDUSTRIAL
CHA
2006
EVALUACIN DEL CRECIMIENTO DE Spirulina platensis SOBRE UN
EFLUENTE DE SUERO DE QUESERIA
Director
GERARDO GONZALEZ MARTNEZ
Ingeniero de Alimentos Ph.D.
UNIVERSIDAD DE LA SABANA
FACULTAD DE INGENIERIA
PRODUCCIN AGROINDUSTRIAL
CHA
2006
Nota de aceptacin:
Jurado
Jurado
pg.
INTRODUCCIN ...................................................................................................12
6.1 MATERIALES...............................................................................................25
8. CONCLUSIONES ..............................................................................................41
9. RECOMENDACIONES......................................................................................42
BIBLIOGRAFIA .....................................................................................................43
ANEXOS................................................................................................................47
LISTA DE TABLAS
pg.
Tabla 1. Caractersticas qumicas del suero de quesera como agua residual. ..... 15
Tabla 2: Caractersticas de un efluente de almidn de sago..................................... 16
Tabla 3. Composicin qumica del suero dulce y cido.............................................. 19
Tabla 4. Composicin detallada de suero dulce.. ........................................................ 20
Tabla 5. Composicin del Medio de Zarrouk. ............................................................... 23
Tabla 6. Caracterizacin fisicoqumica del suero clarificado para el primer
experimento................................................................................................................ 28
Tabla 7. Crecimiento de la S. platensis en los cultivos de la primera propagacin.
...................................................................................................................................... 30
Tabla 8. Crecimiento de la S. platensis en los cultivos de la segunda propagacin.
...................................................................................................................................... 31
Tabla 9. Concentracin de nitrgeno y fsforo en los tres sustratos del primer
experimento.. ............................................................................................................. 32
Tabla 10. Crecimiento de la S.platensis en los tres sustratos del primer
experimento.. ............................................................................................................. 32
Tabla 11. Caracterizacin fisicoqumica del suero clarificado para el segundo
experimento................................................................................................................ 33
Tabla 12. Concentracin de nitrgeno y fsforo en los tres sustratos del segundo
experimento................................................................................................................ 33
Tabla 13. Crecimiento de S. platensis en los tres sustratos del segundo
experimento................................................................................................................ 35
Tabla 14. Caracterizacin fisicoqumica del suero clarificado para el tercer
experimento................................................................................................................ 35
Tabla 15. Concentracin de nitrgeno y fsforo en los sustratos del tercer
experimento................................................................................................................ 36
Tabla 16. Crecimiento de S. platensis en los tres sustratos del tercer experimento
...................................................................................................................................... 36
Tabla 17. Concentracin de HMF en los sustratos evaluados. ................................. 38
LISTA DE GRFICAS
pg.
pg.
Spirulina platensis LB 2340 was cultivated at 35C, 150 r.p.m. and 1100 Klx in two
different substrates obtained from whey. Growing of Spirulina in these media was
compared against growing in a specific synthetic medium (Schlosser). Results
showed that, under the studied conditions, whey substrates did not let Spirulina
grow. This is probably due to a change of color of the substrate during the
incubation time, which reduced the amount of light available for the Spirulina
growth. This change in color was related to a non-enzymatic browing process
known as Maillard reaction, which produces hidroximetilfurfural (HMF).
Additionally, evolution of HMF levels was studied by inoculating two different
substrates with Spirulina: a) synthetic medium added with lactose and b)
alkalinized whey. These results were then compared against evolution of HMF
levels on non inoculated substrates. This study showed that for both substrates
there are significant differences (=0,05) in the levels of HMF, which supports the
hypothesis of browing reaction by the presence of lactose. Furthermore, results
demonstrated that detected levels of HMF in alkalinized whey did not have either
relation with the presence of Spirulina or its metabolic products.
INTRODUCCIN
12
Como sustrato para su cultivo se emplean medios minerales o residuos orgnicos
alcalinizados ricos en nitratos y fosfatos, tales como vinazas de la industria de la
caa o residuos de biodigestores de granjas porccolas (Pedraza, 1989).
13
1. JUSTIFICACIN DEL PROYECTO
Las microalgas y/o cianobacterias pueden ser de dos tipos segn su metabolismo,
auttrofas en las que su principal fuente de nutrientes son las sales minerales y
mixotrficas, las cuales presentan adems del metabolismo auttrofo, el
metabolismo hetertrofo, lo que les permite asimilar nutrientes de origen orgnico,
facultndolas para sobrevivir en ausencia de luz.
14
de una industria de produccin de almidn de sago en Malasia, donde para
optimizar el crecimiento de la Spirulina se enriqueci el efluente con
concentraciones variables de 4 a 13,3 mmolNL-1 en forma de urea, comparadas
con concentraciones de 14 a 28 mmolNL-1 en forma de fitrato de sodio, con la
adicin simultnea de una fuente de fsforo (1,05 y 2,10 mmolL-1 de K2HPO4),
teniendo en cuenta que el nitrgeno y el fsforo son los elementos de mayor
importancia despus del carbono para el crecimiento de la Spirulina (Morales,
2005). Estos estudios demostraron que el efluente de almidn de sago es capaz
de generar eutrificacin al ser vertido a los cauces de agua, siendo adems capaz
de soportar el crecimiento de la Spirulina. En la Tabla 2 tambin se muestra la
composicin del suero, en cuanto a contenido de fsforo, nitrgeno y DQO, los
cuales posiblemente podran soportar el crecimiento de la Spirulina, ya que el
suero de quesera tiene un mayor contenido de nitrgeno y fsforo comparado con
el efluente de almidn de sago. Estas ventajas del suero, se corroboran
comparando la composicin de un efluente de biodigestor de la industria porccola
descrito por Pedraza (1989), en el cual los valores de nitrgeno y fsforo
reportados corresponden al 0.10% y 0.03% respectivamente del efluente fresco.
Tabla 1. Caractersticas qumicas del suero de queso como agua residual
Suero de Aguas residuales Suero de queso +
Parmetro
queso (AR) AR
DBO5 (mgO2L-1) 35000 50000 1300 21400
DQO (mgO2L-1) 60000 90000 33000 33,200
pH 4,7 6,4 7,0 6,0
Conductividad (mSL-1) 4 30 1,3 5,2
Nitrgeno (mgL-1) 122-155 70 100
Fsforo (mgL-1) 300-900 25 280
Grasas 0,85-5,06 gL-1 300 mgL-1 1300 mgL-1
Fuente: Giner y Reventos, 2001
15
Tabla 2: Caractersticas de un efluente de almidn de sago.
Efluente de sago Suero de leche
Parmetro Sago Crudo
digerido
Carbohidratos
620 120 690 450
Totales (mgL-1)
Slidos
Suspendidos 2,54 0,21 0.94 0,17 5 7%
Totales (mgL-1)
16
2. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
17
3. OBJETIVO GENERAL
4. OBJETIVOS ESPECFICOS
18
5. REVISIN BIBLIOGRFICA
Como se mencion anteriormente, uno de los potenciales usos del suero es como
medio de cultivo para la produccin de levaduras debido a su principal fuente de
carbono (lactosa). Entre los productos que se pueden obtener por fermentacin
del suero estn: bacterias lcticas, cido lctico, alcohol, vinagre, cido propinico,
proteasas, pectinasas, penicilina, vitamina B2 y B12, aceite y protena unicelular
para alimento humano y de animales (Spreer, 1991).
La composicin del suero vara de acuerdo con el tipo de leche utilizada durante la
produccin del queso, la tecnologa de elaboracin, el tiempo de almacenamiento
y el tipo de coagulacin utilizada (coagulacin al cuajo, en la que se obtiene el
suero dulce, o coagulacin por acidificacin en la que se obtiene suero cido). En
la Tabla 3 se puede observar como vara la composicin de ambos tipos de suero.
Tabla 3. Composicin qumica del suero dulce y cido.
Composicin Suero dulce Suero cido
Agua (%) 93 - 94 94 - 95
Grasa (%) 0,2 0,7 0,04
Protena (%) 0,8 1,0 0,8 1,0
Lactosa (%) 4,5 5,0 4,5 5,0
Minerales (%) 0,05 4,0
Fuente: http://www.acercar.org.co/industria/manuales/
placteos/02proceso.pdf.
19
Tabla 4. Composicin detallada de suero dulce.
Sales
mgL-1 Vitamnas mgL-1 minocidos mgL-1
minerales
5.2 Spirulina
20
Algunas microalgas y cianobacterias son capaces de presentar un metabolismo
hetertrofo en ausencia de luz, el cual en conjunto con el auttrofo se denomina
mixotrfico. Un ejemplo de ellas son la Chlorella sp. y el Scenedesmus sp (Chacn
et al., 2004). Las microalgas con esta caracterstica son especialmente
recomendables para el tratamiento de aguas residuales, ya que poseen la
capacidad de remover cantidades significativas de nitrgeno y fsforo, absorber
metales y acelerar la inactivacin de bacterias patgenas maximizando su tasa de
crecimiento. En las microalgas mixotrficas se da una sumatoria de los
metabolismos, los cuales optimizan su velocidad de crecimiento (Morales, 2005)
21
Protenas y aminocidos: su contenido en protenas oscila entre el 50% y el
70%, dependiendo del tipo de cepa y del sistema de cultivo empleado. La
Spirulina tiene un alto contenido de aminocidos esenciales excepto Lisina.
Asimismo, tiene la ventaja de que sus protenas son de fcil digestin y
asimilacin por el organismo humano (Antenna Technology, 1996).
22
Tabla 5. Composicin del Medio de Zarrouk
simplificado para el cultivo de Spirulina.
NaHCO3 16,8
K2HPO4 0,5
NaNO3 2,5
K2SO4 1,0
NaCl 1,0
MgSO4 * 7H2O 0,02
CaCl2 * 2H2O 0,04
FeSO4 * 7H2O 0,01
EDTA 0,08
Fuente: Shimamatsu, 2004.
23
El pardeamiento enzimtico se presenta en sustratos orgnicos procedentes de
estructuras ricas en enzimas (frutas y hortalizas) y la reaccin de Maillard por la
presencia de azcares reductores y aminocidos a distintas condiciones de pH y
Temperatura. Uno de los productos intermedios de la reaccin de Maillard es el
hidroximetilfufural, el cual a altas concentraciones es capaz de inhibir el
crecimiento de microorganismos como Salmonella typhimurium (Ikan, 1996).
24
6. DISEO METODOLGICO
6.1 MATERIALES
Spirulina:
Durante los experimentos de crecimiento se utiliz una cepa de Spirulina platensis
LB 2340 (Aislada en 1963 por G. Laporte como M132/2b del lago natron en Chad;
depositada de SAG B 85.79, vesculas de gas; Relativos: SAG B 85.79; NIVA CYA
120), la cual fue comprada directamente al cepario de la Universidad de Texas. La
cepa se recibi en suspensin en tubo de ensayo con 15mL de medio sinttico de
Schlosser, cuya composicin se describe en el Anexo A. La propagacin se llev a
cabo por triplicado inoculando 1mL de la suspensin inicial (cepa original) en
100mL de medio sinttico estril de Schlosser (recomendado por la Universidad
de Texas) en la cabina de flujo laminar y con materiales estriles. Las muestras
inoculadas fueron cuidadosamente tapadas con gasas estriles e incubadas
durante 30 das a 30C (Eliach et al., 2004) con luz continua y agitacin magntica
constante a 150 r.p.m. (Pelizer, 2002) en una Incubadora Celmagl, con
capacidad para 5 erlenmeyers, la cual fue adaptada con una fuente de luz central
incandescente ubicada a 40cm de la superficie a irradiar. Se trabaj con esta
temperatura para tener una baja velocidad de crecimiento de la Spirulina, mientras
se realizaron los ensayos previos para la estandarizacin de la preparacin del
sustrato a base de suero. En esta primera propagacin se busc asegurar un
volumen adecuado de inculo para el siguiente experimento y no se pretendi
determinar la tasa de crecimiento.
Suero de queso:
Con el nimo de evitar la posible interferencia generada por la composicin
variable de sueros procedentes de diferentes plantas de produccin de queso, y
ante la imposibilidad de conseguir un nico proveedor de suero de queso que
garantizara un mejor control sobre la procedencia del sustrato requerido para la
realizacin de los experimentos, se decidi preparar un sustrato estndar
mediante la coagulacin enzimtica con renina. Para esto, se utiliz leche fresca
procedente del ordeo matutino de una vaca Holstein de 36 meses de edad,
primer parto, en la segunda mitad de lactacin, alimentada exclusivamente a base
de pasto Kikuyo (Penicetum clandestinum), y criada en la finca Machuma, ubicada
en Guaymaral, Cundinamarca, Colombia. El tiempo transcurrido entre el ordeo y
la coagulacin enzimtica no excedi nunca las 5 horas. Posterior a la
coagulacin, el suero fue separado del grano mediante malla plstica y mantenido
en refrigeracin a 4C hasta su utilizacin, a la maana siguiente, en los
experimentos de crecimiento.
6.2 MTODOS
25
6.2.1 Determinacin de la concentracin de S. platensis en la suspensin
inicial. La concentracin de S. platensis en la suspensin inicial proveniente de la
Universidad de Texas se determin por cuadriplicado mediante conteo en cmara
de Neubauer de los filamentos observados por microscopio, en una alcuota de
10L. La toma de muestras se realiz en cabina de flujo laminar con materiales
estriles. Para el conteo se utiliz un microscopio de contraste de fases a 25
aumentos y se tomaron nicamente en cuenta aquellos filamentos con tres o ms
espirales presentes en la totalidad de la cuadricula de la cmara. El nmero de
filamentos por mL de la suspensin se determin segn la ecuacin mostrada en
el Anexo B.
26
6.2.5 Determinacin del contenido de fosfatos. El contenido de fosfatos del
suero obtenido fue determinado en un equipo HANNA C200 Series Multiparameter
Bench Photometer, tomando como alcuota 10mL de suero clarificado en dilucin
1:100. Los resultados arrojados por el equipo se expresan como mg PO4L-1. A
partir de esta determinacin, se reportaron los resultados como moles de P. Se
realizaron dos mediciones por cada experimento.
27
7. RESULTADOS Y ANALISIS
28
Spirulina (555 filamentosmL) y se obtiene crecimiento en los tres cultivos de
propagacin. Despus del da 20 de incubacin se hace necesario diluir las
muestras para el conteo. Las altas desviaciones estndar observadas en los
resultados de estos conteos se pueden deber a la dificultad de separar los
filamentos de Spirulina pese a su dilucin, aunque estas son similares antes y
despus de diluir, indicando que posiblemente las altas desviaciones se deben a
la aplicacin del mtodo de conteo por cmara de Neubauer en microalgas
filamentosas. No se disponen de datos para comparar las desviaciones estndar
obtenidas. Las restricciones de agitacin en la incubadora unido a la cantidad de
pruebas inicialmente previstas impidi el empleo de volmenes de cultivo lo
suficientemente grandes para poder determinar el crecimiento por peso seco. No
se puede correlacionar el conteo con el peso seco, ya que en cada fase de
crecimiento la longitud de los filamentos vara. La correlacin de peso seco y
absorbancia no es aplicable para microalgas filamentosas porque el tamao de las
mismas genera interferencia en la medida. En el Anexo D se presentan la totalidad
de los datos tomados.
29
derecha. Por restricciones en la disponibilidad del luxmetro solo se midi la luz al
final del todo el periodo de experimentacin.
Tabla 7. Crecimiento de la S. platensis en los cultivos de la primera propagacin.
30
Tabla 8. Crecimiento de la S. platensis en los cultivos de la segunda propagacin.
31
todos los datos). Lo anterior puede obedecer a diferentes factores como: a)
inhibicin del crecimiento de la Spirulina por exceso de fsforo ya que como se
mencion anteriormente su concentracin es varias veces mayor a la del medio
sinttico; b) la presencia de inhibidores del crecimiento de la S. platensis en el
suero, lo cual debe ser verificado con estudios posteriores de inhibicin; c) falta de
luz ya que los sustratos a base de suero se tornan opacos e impiden la
transmisin de la luz; y d) carencia en los sustratos a base de suero de algn
micronutriente esencial para el crecimiento de la Spirulina. Las altas desviaciones
estndar de los resultados obtenidos podran obedecer a la baja concentracin de
Spirulina en el sustrato lo cual debido a las condiciones de muestreo y anlisis,
incrementa notoriamente la probabilidad de obtener muestras no representativas.
Para corregir este error sera necesario incrementar el nmero de conteos en
cmara de Neubauer.
Tabla 10. Crecimiento de la S.platensis en los tres sustratos del primer experimento.
32
obtener as una concentracin de fsforo equivalente a la del medio sinttico
(Tabla 12). Para los ensayos de crecimiento se utilizaron tres tipos de sustrato a
base de suero: a) suero alcalinizado diluido (Sustrato 1); b) suero alcalinizado
diluido y enriquecido con nitrato de sodio (Sustrato 2) y c) medio sinttico de
Schlosser (Sustrato 3). Por ltimo, los tres sustratos se inocularon de tal forma que
la concentracin inicial de S. platensis en cada uno de ellos fuera de
aproximadamente 1222 314 filamentosmL-1.
Tabla 11. Caracterizacin fisicoqumica del suero clarificado para el segundo
experimento
Tabla 12. Concentracin de nitrgeno y fsforo en los tres sustratos del segundo
experimento.
Como se puede observar en la Tabla 13, los resultados muestran que en el suero
diluido a la quinta parte tampoco hubo un crecimiento continuo de S. platensis (en
el Anexo D se presentan todos los datos). Sin embargo, es de resaltar que en
este experimento aunque no es evidente un aumento en la concentracin de
Spirulina, si fue posible detectar presencia de filamentos durante tres (3) das ms
en relacin con el experimento anterior en el cual se detect presencia de
filamentos nicamente hasta el segundo da de incubacin. Tal y como se
evidencia en los resultados, si se tiene en cuenta que esta vez el contenido de
fsforo fue igualado al del medio sinttico de Schlosser para crecimiento de
Spirulina, no fue el exceso de fsforo el causante directo de la inhibicin del
crecimiento de la cianobacteria en el experimento previo. Por lo tanto, todo parece
33
indicar que deben existir otras fuentes de inhibicin (mencionadas anteriormente)
las cuales deben ser identificadas y estudiadas a mayor profundidad.
Adicionalmente, durante el crecimiento de la Spirulina se observ un cambio
notorio en el color del sustrato, tornndose de amarillo claro a caf oscuro, lo cual
implica un cambio en la disponibilidad de luz para la cianobacteria y por lo tanto
un efecto sobre el crecimiento de la misma. Con el fin de confirmar si dicho
planteamiento podra ser vlido, se procedi a aumentar la disponibilidad de luz
en el sustrato aumentando su transparencia mediante dilucin a la dcima parte.
Para esto, se realiz un tercer experimento con suero nuevo cuya caracterizacin
fisicoqumica se detalla en la Tabla 14. Al igual que en los experimentos
anteriores, para los ensayos de crecimiento se utilizaron tres tipos de sustrato a
base de suero: a) suero alcalinizado diluido (Sustrato 1); b) suero alcalinizado
diluido y enriquecido con nitrato de sodio para mantener la relacin N/P
correspondiente al medio sinttico, tal y como se muestra en la Tabla 15 (Sustrato
2) y c) medio sinttico de Schlosser (Sustrato 3). Por ltimo, los tres sustratos se
inocularon de tal forma que la concentracin inicial de S. platensis en cada uno de
ellos fuera de aproximadamente 1611 411 filamentos mL-1.
34
Tabla 13. Crecimiento de S. platensis en los tres sustratos del segundo experimento.
2 556 x 102 642 x 102 6,94 x 102 1,18 x 102 1,11 x 103 1,57 x 103
35
Tabla 15. Concentracin de nitrgeno y fsforo en los sustratos del tercer
experimento.
Tabla 16. Crecimiento de S. platensis en los tres sustratos del tercer experimento
2 2,22 x 103 2,40 x 103 972 1,25 x 103 1,39 x 103 556
4 1,67 x 103 1,43 x 103 1,25 x 103 1,10 x 103 1,39 x 103 1,06 x 103
8 3,33 x 103 3,01 x 103 1,39 x 103 1,30 x 103 6,67 x 103 2,72 x 103
36
Teniendo en cuenta las caractersticas bioqumicas del suero, as como tambin
las condiciones de incubacin, la causa ms probable para el pardeamiento de
este podra ser una reaccin de Maillard. Otra posible causa del pardeamiento
podra ser la misma Spirulina o uno de sus metabolitos secundarios, que
probablemente tornaran el sustrato pardo o simplemente serviran como
catalizadores de una reaccin de pardeamiento no enzimtico tipo Maillard. Para
verificar dicho planteamiento, se procedi a evaluar la formacin de
hidroximetilfurfural, uno de los productos caractersticos de la reaccin de
Maillard, en dos sustratos diferentes: a) suero alcalinizado diluido a la quinta parte
y b) medio sinttico adicionado con lactosa. Igualmente, se evalu el proceso de
formacin de HMF en los mismos sustratos inoculados con Spirulina para verificar
el efecto de la cianobacteria sobre el pardeamiento. Para evitar introducir ruidos
en el resultado se seleccion un sustrato a base de suero diluido a la quinta parte
por cuanto el contenido de fsforo es aproximadamente igual al contenido de
fsforo del medio sinttico de Schlosser. La prueba se corri por triplicado para
cada sustrato (inoculado y sin inocular) en tubos de ensayo de 10mL. El contenido
de HMF se determin por el mtodo de Carrez modificado (Anexo C) mediante
espectrofotometra en un equipo CARY 100 conc UV Visible, utilizando celdas
de cuarzo. Las muestras tomadas se midieron por triplicado cada dos das
durante 16 das.
37
Tabla 17. Concentracin de HMF en los sustratos evaluados.
38
Grfica 1. Formacin de HMF en SA y SAI.
60
SA SAI
50
Contenido de HMF (mgL )
-1
40
30
20
10
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18
Tiempo de incubacin (das)
60
MSL SA
Contenido de HMF (mgL )
50
-1
40
30
20
10
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18
Tiempo de incubacin (das)
39
7.4 DETERMINACIN DEL EFECTO DEL CRECIMIENTO DE S. platensis LB
2340 SOBRE LA DQO Y EL CONTENIDO DE NITRATOS Y FOSFATOS DE LOS
SUSTRATOS
40
8. CONCLUSIONES
41
9. RECOMENDACIONES
42
BIBLIOGRAFIA
43
FOX, Ripley D. Construction of Village Scale System Integrating Spirulina
Production with Sanitation and Development. En: DOUMENGE, F.; DURAND
CHASTEL, H. y TOULEMONT, A. Bulletin de l Institut Ocanographique:
"Spiruline, algue de vie". Monaco, 1993. p. 41-48.
IKAN, Raphael. The Maillard Reaction: Consequences for the Chemical and Life
Sciences. Inglaterra: John Wiley and Sons, 1996. p. 527-547
44
Ministerio de Agricultura y Desarrollo Rural, Observatorio Agrocadenas Colombia
(en lnea). La cadena de lcteos de Colombia: Una mirada global de su estructura
y dinmica 1991-2005. Bogot, 2005. Disponible en
http:/www.agrocadenas.gov.co
SPREER, Edgar. Lactologa Industrial. 2 ed. Zaragoza: Acribia S.A., 1991. p. 527
548.
45
TOMASELLI L; GIOVANNETTI L y TORZILLO G. Physiology of stress response in
Spirulina spp. En: DOUMENGE, F.; DURAND CHASTEL, H. y TOULEMONT, A.
Bulletin de l Institut Ocanographique: "Spiruline, algue de vie". Monaco, 1993. p.
65-76.
46
ANEXOS
47
Anexo B. Ecuacin para el clculo de filamentos de SpirulinamL-1.
Conteo.de. filamentos.en.cmara.de.Neubauer
Nmero.de. filamentos.mL1 =
9 x10 4 mL
volumen.del.cultivo.a.inocularxconcentracin.inicial .deseada.del.cultivo =
volumen.del.inculo.a.adicionarxconcentracin.del.inculo.a.adiconar
48
Anexo C. Mtodo de Carrez modificado para determinacin de HMF.
Material:
Matraces volumtricos
Tubos de ensayo
Reactivos y Soluciones
Ferrocianuro de potasio
Acetato de Zinc grado reactivo
Bisulfito de sodio grado reactivo
Expresin de resultados:
49
Donde 14,97 es el factor = (126/16,830)(1000/10)(100/5)
126 = peso molecular del hidroximetilfurfural
16,830 = absortibidad molar del hidroximetilfurfural a 284 nm
1000 = mgg-1
10 = cLL-1
100 = g de miel reportados
5 = peso nominal de la muestra en g
50
Anexo D. Conteo en cmara de filamentos de S. platensis en los cultivos de
los experimentos realizados.
Tabla 1: Propagacin de la suspensin inicial
Cultivo de propagacin 1 Cultivo de propagacin 2 Cultivo de propagacin 3
Da Conteo Conteo Conteo Conteo Conteo Conteo Conteo Conteo Conteo Conteo Conteo Conteo
1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4
Nmero de Filamentos Nmero de Filamentos Nmero de Filamentos
18 0 0 0 0 66 57 71 68 0 0 0 0
20 0 0 0 0 97 74 63 69 0 0 0 0
23 0 0 0 0 117 150 171 150 0 0 0 0
25 0 0 0 0 100 136 136 172 0 0 0 0
27 0 0 0 0 160 128 280 240 0 0 0 0
30 0 0 0 0 216 180 180 168 0 0 0 0
Da Conteo Conteo Conteo Conteo Conteo Conteo Conteo Conteo Conteo Conteo Conteo Conteo
1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4
Nmero de Filamentos Nmero de Filamentos Nmero de Filamentos
2 1 0 1 2 2 1 2 0 2 0 0 1
6 12 7 6 12 3 5 5 3 28 24 28 31
10 27 25 30 29 6 3 3 4 35 32 34 56
13 26 38 36 18 10 6 8 6 77 73 86 54
15 50 38 44 32 10 12 9 8 78 82 68 74
17 54 56 66 50 9 11 8 11 62 50 74 96
20 61 59 84 61 21 21 13 21 72 72 69 102
22 86 96 84 88
51
Tabla 3: Crecimiento de S. platensis en suero alcalinizado y suero alcalinizado diluido a la mitad enriquecido con nitrato de sodio
Suero alcalinizado diluido a la mitad Suero alcalinizado diluido a la mitad
Suero alcalinizado Suero alcalinizado Blanco
enriquecido con nitrato de sodio enriquecido con nitrato de sodio
Da
Conteo 1 Conteo 2 Conteo 3 Conteo 4 Conteo 1 Conteo 2 Conteo 3 Conteo 4 Conteo 1 Conteo 2 Conteo 3 Conteo 4 Conteo 1 Conteo 2 Conteo 3 Conteo 4 Conteo 1 Conteo 2 Conteo 3 Conteo 4
Nmero de Filamentos Nmero de Filamentos Nmero de Filamentos Nmero de Filamentos Nmero de Filamentos
2 2 3 2 3 2 3 2 3 2 0 1 0 1 0 3 2 1 5 1 0
5 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 4 3 1 1
Tabla 4: Crecimiento de S. platensis en suero alcalinizado diluido a la quinta parte y suero alcalinizado diluido a la quinta parte
enriquecido con nitrato de sodio.
Suero alcalinizado diluido a la Suero alcalinizado diluido a la
Suero alcalinizado diluido a la
quinta parte enriquecido con quinta parte enriquecido con Blanco
quinta parte
nitrato de sodio nitrato de sodio
Da
Conteo Conteo Conteo Conteo Conteo Conteo Conteo Conteo Conteo Conteo Conteo Conteo Conteo Conteo Conteo Conteo
1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4
Nmero de Filamentos Nmero de Filamentos Nmero de Filamentos Nmero de Filamentos
2 1 1 0 0 3 0 0 0 1 0 0 1 0 0 1 3
5 0 0 0 0 1 0 0 0 1 0 2 0 1 0 5 2
7 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 2 2 2 0
Tabla 5: Crecimiento de S. platensis en suero alcalinizado diluido a la dcima parte y suero alcalinizado diluido a la dcima parte
enriquecido con nitrato de sodio hasta igualar la relacin N/P presente en el medio sinttico.
Suero alcalinizado diluido a la Suero alcalinizado diluido a la
Suero alcalinizado diluido a la
dcima parte enriquecido con dcima parte enriquecido con Blanco
dcima parte
nitrato de sodio nitrato de sodio
Da
Conteo Conteo Conteo Conteo Conteo Conteo Conteo Conteo Conteo Conteo Conteo Conteo Conteo Conteo Conteo Conteo
1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4
Nmero de Filamentos Nmero de Filamentos Nmero de Filamentos Nmero de Filamentos
2 2 0 5 1 3 0 0 1 0 1 0 2 1 1 1 2
4 3 0 1 2 1 1 3 1 0 0 2 1 2 0 2 1
8 1 2 2 7 2 0 1 0 2 0 2 3 4 9 4 7
11 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 13 2 8 10
52
Anexo E. Datos de formacin de HMF.
mgL-1 de hidroximetilfurfural
Medio con
Medio
Dia lactosa e Suero Suero inoculado
con lactosa
inoculado
0 0 0 0
0 0 0 0 0
0 0 0 0
2,91 4,15 8,89 7,05
3,26 3,99 9,05 8,22
2,79 4,04 9,62 1,16
3,00 3,72 8,38 5,64
2 3,14 3,85 8,50 5,76
3,12 3,20 8,14 5,61
3,76 4,44 10,66 6,77
3,62 4,36 10,68 7,13
3,38 4,30 10,90 6,81
5,22 5,17 9,57 8,31
4,62 4,81 8,96 8,15
5,36 5,04 9,79 8,89
2,42 4,17 10,26 5,38
4 2,61 4,07 10,11 10,55
1,86 4,24 4,92 5,95
3,17 4,64 5,52 4,56
3,23 4,47 5,69 4,52
3,04 3,82 5,19 4,56
6,31 7,45 6,50 7,73
5,54 7,65 7,02 8,22
5,40 7,35 7,13 7,77
8,35 5,45 9,51 5,48
9 6,87 5,63 10,11 5,57
8,59 5,99 9,93 6,32
8,97 8,91 8,87 7,11
8,61 8,74 7,51 6,85
8,35 8,35 8,90 7,48
53
mgL-1 de hidroximetilfurfural
Medio con
Medio con
Da lactosa Suero Suero inoculado
lactosa
e inoculado
16,96 10,53 51,09 43,98
17,14 10,80 42,67 40,85
16,91 10,02 35,50 38,32
25,54 24,94 49,80 46,12
11 24,91 24,64 45,71 47,54
25,25 24,73 49,62 46,85
10,64 5,68 3,89 -3,07
7,89 5,73 3,01 -4,12
8,18 5,97 3,29 -6,47
13,45 1,56 7,22 6,03
13,09 2,17 7,34 6,60
12,85 1,62 6,32 6,77
11,04 3,98 8,59 7,70
14 10,14 3,76 6,93 5,48
10,20 3,96 7,37 7,20
6,56 4,23 5,97 6,36
6,27 4,60 5,72 5,20
6,42 5,02 6,20 6,15
10,25 7,19 11,12 11,11
10,00 6,57 12,74 11,38
9,65 11,08 10,90 9,58
9,18 5,69 9,16 12,11
16 9,21 8,03 9,12 12,35
9,42 6,69 9,81 11,56
9,02 11,07 16,90 9,72
7,44 8,58 16,20 8,09
8,99 9,76 15,87 8,35
54
Anexo F. Anlisis de varianza de dos factores para la prueba de HMF.
Tabla 1. Anlisis de varianza entre el suero alcalinizado y el suero alcalinizado e inoculado
Origen de las variaciones Suma de cuadrados de libertad Cuadrado medio Fo Probabilidad Valor crtico para F
Tabla 2. Anlisis de varianza entre el medio sinttico con lactosa y el suero alcalinizado
Origen de las variaciones Suma de cuadrados de libertad Cuadrado medio Fo Probabilidad Valor crtico para F
55