UNIVERSIDAD DE LA Ministerio de

Educacin Nacional
AMAZONIA Repblica de Colombia
NIT: 891.190.346-1
Sede Florencia - Caquet Libertad y Orden

FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS

PROGRAMA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA

PRACTICA No. 001 IDENTIFICACIONES MORFOLGICAS

LUGAR FECHA DD/MM/AA

31, de agosto, 7 y 21 de septiembre
Laboratorio de Microbiologa

DOCENTE: JULIO CSAR BLANCO RODRGUEZ

ASIGNATURA: MICROBIOLOGA
CODIGO: 3020401

OBJETIVOS
1 Identificar la morfologa de bacterias y diferenciacin de Gram
Reconocer caractersticas de las colonias bacterianas de inters veterinario
2
presentes en diferente tipo de muestras.

ACTIVIDADES
a. Cada grupo de trabajo escoger un lugar con la especie animal de su inters y
tomar una muestra para cultivo bacteriolgico de la siguiente manera:

Muestras de leche de vacas con sospecha de procesos infecciosos.

Lavar, enjuagar y secar la ubre, posteriormente con solucin de alcohol o usando el gel
antibacterial recomendado, desinfectarse las manos o usar guantes y desinfectar los
pezones con algodn impregnado de alcohol al 70%, se deja secar por 2 minutos y se
ordea, dejando eliminar los dos primeros chorros de leche antes de tomar la muestra. Se
ordea, recogiendo en un recipiente estril para muestras preferiblemente de vidrio con
capacidad de 3ml aproximadamente (tubos ependorff, tubos de vidrio con rosca o frascos
pequeos para muestra) si hay sospecha de infeccin y el grupo quiere saber cual es el
cuarto ms infectado, es necesario tomar una muestra para cada cuarto por separado.
Marcar las muestras correctamente y mantenerlas refrigeradas (con hielo o gel
1 refrigerante y en termo de hicopor) y se el tiempo previo al laboratorio es prolongado,
mantener congeladas -20 oC.

Muestras de heces. Se utiliza para esto un recipiente para muestras de coprolgico de

uso humano los cuales contienen una esptula. La muestra se coma directamente del
animal en el momento de la deposicin. Se tapa el recipiente y se refrigera la muestra, si
se va a mantener hasta por 24 horas mantener a 4oC en el refrigerador, mas tiempo
requiere uso de glycerol para su conservacin.

Muestra de hisopo rectal. Es necesario conseguir un hisopo rectal con medio de

transporte o en su defecto un hisopo al que se agregar solucin salina en el tubo con
rosca. Se toma el hisopo y se introduce pasando el esfinter anal, sobre las criptas del
recto, donde se deja un momento para que el hisopo absorba microorganismos presentes.
Posteriormente se guarda se tapa bien y se refrigera durante tiempo no mayor a 24 horas.

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Lquido peritoneal. Se emplea una jeringa acoplada a una aguja, realizando

abdominocentesis directa. Si de esta forma no se obtiene la muestra, debe recurrirse a
solucin salina fisiolgica estril, que se administra intraperitonealmente a razn de 20
ml/kg. Porsterior a la aplicacin, se masajea el abdomen y se procede a su aspiracin.

Lavado prepucial. Lavar el orificio prepucial con agua y jabn exhaustivamente, estimule
la miccin para que el animal orine completamente y seque muy bien el orificio prepucial.
Con la ayuda de una banda elstica selle el orificio prepucial despus de introducir una
pipeta de plstico conectada a una jeringa hasta la parte ms profunda de la cavidad.
Introduzca 10-100 mililitros de solucin salina fisiolgica y selle el extremo con una banda
elstica. Masajear fuertemente de abajo hacia arriba para que haya el mayor
desprendimiento posible del epitelio. Normalmente se requieren entre 2 y 4 minutos de
masaje para este efecto. Terminado el masaje permita que el lquido regrese al recipiente
original. Si la muestra es tomada al menos 6 horas antes del laboratorio, puede ser
transportada a temperatura ambiente y si es un tiempo mayor a 12 horas, debe
transportarse con solucion salina esteril en recipiente con 3ml de la solucion del lavado y
debe manternerse en refrigeracin a 4oC hasta el laboratorio.

Secrecin vaginal Lavar meticulosamente los genitales externos con agua y jabn. Secar
con toallas desechables. Desinfectar con alcohol yodado y alcohol antisptico, alternados,
tres veces cada uno. Con un hisopo estril, realizar barrido del contenido o secrecin
vaginal. Mezclar la muestra con el medio de transporte adecuado (Cary-Blair para
Campylobacter fetus y Amies con charcoal para Taylorella equigenitalis o Stuart de ser
conseguido)y romper el mango del hisopo para eliminar la parte que ha estado en contacto
con la mano.

Abscesos, edemas y lquido articular. Se debe hacer puncin con aguja fina. Antes de
pinchar, se debe depilar, lavar y desinfectar el sitio de la puncin con alcohol yodado.
Introducir la aguja en forma perpendicular a la zona de puncin y a la profundidad
necesaria de acuerdo al caso. Recuerde utilizar material estril. Aspirar la muestra hasta
obtener una cantidad suficiente (2-3 ml). Pasar la muestra a un tubo estril o bien sellar la
jeringa de manera que su contenido no se derrame. Cuando la muestra no puede ser
aspirada por lo denso (espeso) del material, se puede inyectar en el sitio solucin salina
estril para facilitar el procedimiento. Mantener en refrigeracin a 4oC.

Raspados cutneos. Limpiar y lavar la piel con jabn, raspar suavemente con una hoja
estril de bistur los bordes del rea afectada, tomando pelo y piel y profundizando hasta
que sangre. Tambin se puede tomar la muestra con un hisopo humedecido en solucin
salina estril. Llevar en frascos o tubos estriles. No precisan refrigeracin.

Secrecin de odos. Es fundamental la aplicacin de tcnicas de asepsia rigurosa. En la

prctica, se debe tomar una muestra de cada odo, aunque slo uno est afectado. Con
un hisopo estril tratar de recoger la mayor cantidad de secrecin posible. De estar muy
seca o escasa, se puede remojar los hisopos en solucin salina estril para facilitar la

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recoleccin. El hisopo no debe introducirse ms all del conducto auditivo externo, sin
llegar al tmpano. De transportar la muestra inmediatamente, se puede mantener en
solucin salina y refrigerar.

Sospecha de infeccin ocular. Con un hisopo estril, recolectar el material que se

acumula en el ngulo del lacrimal. Preservar y mantener en medio de transporte Stuart
(de ser conseguido).

Semen. Se debe evitar hacer la recoleccin en un lugar donde haya polvo. Adems, Se
debe preparar al animal, especialmente porque el prepucio es una fuente de
contaminacin. Para esto, es necesario hacer una limpieza, haciendo masajes
cuidadosamente, lo que ayuda al estmulo. Se recomienda utilizar dos guantes de ltex,
uno encima del otro, para que cuando al finalizar la limpieza, se retire uno y se tenga uno
limpio para la recoleccin. No utilizar guantes empolvados (entalcados). Indiferentemente
del procedimiento utilizado (electroeyaculador, estimulacin de rganos sexuales o
vagina artificial) para la obtencin de semen, los frascos o tubos utilizados para la
recoleccin deben estar estriles y no contener ningn preservativo. Las muestras se
conservan en refrigeracin a 4oC y deben ser procesadas lo ms pronto posible.

El protocolo sealado, ser documentado y sustentado bajo soporte fotogrfico.

Laboratorio 1.

b. Una vez en laboratorio, con la muestra tomada, el estudiante realizar un cultivo

de la siguiente manera:

Con el medio de cultivo dispuesto (Agar Sangre, Agar Sabouradud y Agar

Macconkey ) en la caja o placa de Petri, con el asa esterilizada, se toma una
muestra del material obtenido, el cual es distribuido a en el medio de cultivo
mediante aislamiento en estra. Se dispone a incubacin 48 horas a 37,5 oC sin
intervencin. Sin embargo, debido a la manipulacin constante de las incubadoras
de la Universidad de la Amazonia en el laboratorio dado su uso en diferentes
asignaturas y programas que modifica la curva de crecimiento de los
microorganismos, es necesario una incubacin de mayor tiempo das, para
obtener resultados adecuados.
Una vez obtenida la muestra, se conserva a bajas temperaturas en refrigerador
hasta la siguiente prctica.

Laboratorio 2.

c. En la siguiente prctica, se realizan los siguientes pasos:

1. Identificacin de las colonias: Descripcin, caracterizacin (forma, color,
cambios en el medio) y conteo de las colonias (registro fotogrfico) clculos de
UFC.

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2. Extensin bacteriana: Una vez finalizada la observacin de la placa o caja de

Petri con las colonias, se procede a tomar muestra de cada una para extendido
en placa de la siguiente manera:

Se limpia un portaobjetos hasta dejarlo libre de grasa.

Se coloca una gota de agua estril sobre el portaobjetos con el asa desinfectada,
posteriormente se mezcla con una pequea cantidad de cultivo
Se deja secar las extensiones al aire y se pasa por la llama de un mechero para
fijar de la misma forma como se realiz en la prctica No 1
Posteriormete las extensiones se tien mediante el mtodo de Gram de la
siguiente manera:

- Se aplica tincin durante 2 minutos con violeta de genciana o cristal violeta

- Lavado con agua
- Aplicacin de lugol durante 1 minuto
- Verter el exceso de lquido
- Lavar con solucin de acetona (30 partes) y alcohol al 95% (70 partes) por
aproximadamente 10 segundos o alcohol cetona
- Lavado con agua
- Aplicar tincin de contraste con solucin de safranina
- Lavar con agua, secar y examinar

Laboratorio 3.

d. Debido a que se obtienen varios extendidos, se ralizar una tercera prctica

de laboratorio donde se observarn las placas pendientes que han sido
extendidas y no observadas an.

Describir las observaciones, y de acuerdo a lo visto en clase e indicar:

Cul es la forma de las bacterias identificadas ?
Existe algn tipo de agrupacin? Cual es de acuerdo a lo visto hasta el momento?
Qu cantidad est presente por campo y cules son sus caractersticas?
Cuantas bacterias Gram positivas identifican y cuantas Gram Negativas por
campo en cada extensin observada (soporte visual), de acuerdo a su criterio por
que es importante identificarlas?
2 Investigar a cerca de procesos infecciosos presentes en la especie animal
seleccionada, especficamente en el lugar o tipo de tejido donde se tomaron las
muestras e indicar que tipo de bacterias estn relacionadas y de acuerdo con lo
encontrado (Gram positivas o Gram negativas) plantear cuales principios activos
(antibiticos) con 5 ejemplos de nombres comerciales y dosis seran adecuados
para su control para el caso identificado.

Atencin: No consultar frmacos de uso humano ni productos veterinarios que no

sean vendidos en Colombia.

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MATERIALES
1 Cajas Petri
2 Agar Verde Brillante, Citrato Simons, Sangre, Sabouradud y Macconkey
3 Azul de metileno, fuscina, violeta de genciana, yodo, yoduro potsico, alcohol etlico al 95%
4 Microscopios
5 Porta objetos, cubreobjetos
6. Asas
7 Hisopos
8 Agua estril
9 Aceite de inmersin
10 Mecheros
11 Papel de cocina para secar
12 Violeta de genciana
13 Lugol
14 Solucin de acetona y alchohol
15 Safranina
16 Cmara digital
17 Batas de laboratorio
18 Gel antibacterial
19 Tubos con rosca para muestras
20 Frascos para muestras
21 Medios de transporte
22 Hielo, termos

EVALUACION
1 Toma de informacin real en la prctica
2 Informe de laboratorio
3 Sustentacin

JULIO CSAR BLANCO RODRGUEZ

Mdico Veterinario Zootecnias Esp. Msc.
Docente Asociado

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