Datos, clculos y resultados

De acuerdo a lo experimentado se procede a calcular la constante Rf de cada compuesto

= (1)

Con la ecuacin (2) se calcula el error relativo de las constantes Rf encontradas

. .
% = 100 (2)
.

Los resultados son resumidos en la siguiente tabla.

Tabla 1. Constante Rf calculada para cada proceso.

Rf-Cromatografa de
TLC estndar*
columna

Recorr Recorrid Error

Compuestos Recorrid Recorrido
ido del o del relativo
o del del
Rf solven compue Rf
solvente compuest
te sto
(mm) o (mm)
(mm) (mm)
Fluorescen
25.1 32.0 0.784 21.0 28.0 0.750 -4.34%
a

Azul de
1.50 32.0 0.0468 1.80 28.0 0.0623** 33.1%
metileno

*El Rf de cromatografa de capa delgada estndar es considerado el valor que se obtuvo

antes de realizar el proceso de separacin en la columna, este fue realizado en silica
soportada en alumino con etanol como fase mvil.
**Este valor es hallado corriendo el compuesto en la misma fase estacionaria y mismas
condiciones ambientales, pero se cuenta con una mezcla cido actico: agua 1:1 como
fase mvil.

Discusin
La cromatografa de capa delgada o TLC (Thin-Layer Chromatography) es la ms simple
de toda la gran variedad de mtodos usados para el anlisis de mezclas, la separacin de
esta misma y el seguimiento de reacciones adems de la identificacin nmero de
componentes y su pureza.1
La TLC en consiste en la adecuacin de una placa normalmente de gel de slice llamada
fase estacionaria, a la cual se adicionan pequeas cantidades de las mezclas analizadas.
En un vaso con un solvente al cual se le da el nombre la fase mvil, se pone la placa. Los
componentes de la mezcla migran a diferentes velocidades durante el movimiento de la
fase mvil a travs de la fase estacionaria2 como muestra la imagen 1, cuando la fase
mvil se ha movido una distancia apropiada que por lo general es determinada antes de
llevarse a cabo, se remueve la fase estacionaria (placa), es secada la fase mvil
rpidamente y las nuevas zonas producto de los diferentes desplazamientos son
detectadas por la aplicacin de luz Uv de onda corta (254 nm) y onda larga (366 nm).3

Imagen 1. Montaje TLC2

La transferencia de la fase mvil a travs de la capa delgada y el movimiento por toda la

placa es inducida por las fuerzas capilares, la cual es favorecida por la volatilidad de los
solventes, por lo cual se escogen compuestos de bajo punto de ebullicin. La fase
estacionaria tiene en toda su superficie micro-poros dndole una gran rea superficial
(alrededor de 500 2 /g) lo que le atribuye un mayor contacto con el solvente, facilitando la
absorcin.1
La diferencia de velocidades con la que se mueven los compuestos en la fase
estacionaria depende de su interaccin con la misma. Estas interacciones son dipolo-
dipolo o del tipo de enlace de hidrogeno si es que lo presenta. El componente de la fase
estacionaria debe ser tal que sea inerte con la sustancia a analizar, si se trata de gel de
slice, la siguiente imagen ilustra las interacciones fase mvil-estacionaria2:

Imagen 2. Interacciones entre la slice y el compuesto de inters4

La cromatografa de columna (CC) sigue este mismo principio pero en este caso la fase
estacionaria es una columna con gel de slice o almina en un vidrio, metal o placa de
plstico. La cromatografa en columna funciona en una escala mucho ms grande por el
embalaje de los mismos materiales en una columna de vidrio vertical5.
 Imagen 3. Estructura de la fluorescena. Imagen 4. Estructura del azul de metileno.

La fluorescena es una sustancia orgnica con una cetona como grupo funcional (imagen
3) por lo que su interaccin con la fase estacionaria no es fuerte y por consiguiente su
movilidad a lo largo de esta resulta ms fcil, esto se sustenta observando que su Rf
estndar es de 0.784, mucho mayor que el Rf del azul de metileno que tan solo es del
0.0468, que como muestra la imagen 4 es una sal. Las sales en solucin forman iones,
razn por la cual su afinidad por la fase estacionaria es alta3, por ende su movilidad en
esta misma se ve ms restringida.

Imagen 5. Fluorescena y azul de metileno separados por cromatografa de columna

respectivamente.

El objetivo de la prctica era la separacin de una mezcla de fluorescena con azul de

metileno por medio de CC. Haciendo un anlisis cualitativo de la apariencia de las
sustancias aisladas (imagen 5) se puede decir que la separacin fue exitosa. De igual
forma es necesario sustentar esta conclusin de una manera ms estricta, realizando un
TLC se pudo observar que cada compuesto era desplazado sin crear puntos adicionales,
en otras palabras se pudo garantizar la presencia nica de cada componente, sin
embargo como muestra la tabla 1, con respecto a las pruebas de TLC realizadas al tinte,
hubo un error del -4.34% en la separacin de la fluorescena, que es atribuido a que a
placa de silica tuviera imperfecciones (despicada) en los bordes y la corrida del
compuesto en la misma no se realizara de manera lineal, dando al fina menor recorrido
vertical que el medido en la placa estndar, generando un error negativo. El porcentaje
de error del Rf del azul de metileno es de 33.1%, adems de contar con la imperfeccin
en los bordes, tambin es necesario tener en cuenta que su separacin en la CC se dio
con una mezcla de cido actico: agua 1:1 como fase mvil a diferencia de la fluorescena
que fue desplazada con etanol. Es posible que la solucin de cido actico no se
evaporara antes de aplicar el punto en la placa de silica, como se observa en la imagen 6
la polaridad del cido actico es alta, se provoca un aumento en el desplazamiento en la
fase estacionaria, disminuyendo la afinidad del azul de metileno por los componentes de
esta misma y esto seguramente conllevo a un aumento abrupto del Rf.
 Imagen 6. Estructura del cido actico

Conclusiones
La cromatografa de capa delgada permite la separacin cualitativa de sustancias
de una muestra; esto entre otras cosas permite la identificacin del nmero de
compuestos que existe en una mezcla obtenida, adems de que es una tcnica
esencial para hacer seguimiento de una reaccin qumica.
La cromatografa de columna es una tcnica muy completa con la capacidad de
separar de una manera cuantitativa, muy efectiva, los compuestos presentes en
determinada muestra. De igual forma, la cromatografa de columna asociada a
otros mtodos cromatografico como el CCD permiten un desarrollo mltiple de la
tcnica, proporcionando informacin adicional sobre la pureza de los componentes
separados.
Los eluyentes en los mtodos trabajados son quiz una de las partes ms
importantes pues dependiendo de sus caractersticas qumicas como la polaridad
se puede obtener una mejor separacin. Por tal razn es conveniente la utilizacin
de gradientes en la aplicacin de la cromatografa para la identificacin y
separacin de compuestos con mayor efectividad.

Bibliografia

(1) Thin Layer Chromatography http://www.chem.umass.edu/~samal/269/tlc.pdf

(accessed Sep 28, 2016).
(2) Sherma, J.; Bernard, F. Handbook of Thin-Layer Chromatogaphy, 2nd ed.; Marcel
Dekker, I., Ed.; Easton.
(3) Insuasty, B.; Ramirez, A. PRCTICAS DE QUMICA ORGNICA EN PEQUEA
ESCALA; Cali.
(4) Cromatografa de capa fina
https://www.uam.es/docencia/jppid/documentos/practicas/actuales/guion-p6.pdf
(accessed Sep 28, 2016).
(5) COLUMN CHROMATOGRAPHY
http://www.chemguide.co.uk/analysis/chromatography/column.html (accessed Sep
28, 2016).
(6) Cromatografia. Cromatografia en capa fina y en columna
http://www.ub.edu/oblq/oblq castellano/cromatografia_tipus.html (accessed Oct 1,
 1BC).
(7) Carey, F. Organic Chemistry; McGraw-Hill: New York, 2003; pp 528588.