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Radio Ion Chromatography

Article in Lc Gc North America June 2012

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Control de radiofrmacos mediante
cromatografa inica
M. Espinosa1, J. Chesa-Jimnez2, Andrea Wille3, Alfred Steinbach3
1
Gomensoro S.A., 28044 Madrid (Espaa)
2
Instituto Tecnolgico PET, 28040 Madrid (Espaa)
3
Metrohm International Headquarters, CH-9100 Herisau (Suiza)
Resumen
L
a tomografa por emisin de po-
sitrones (PET) es una de las ms
potentes herramientas no inva-
sivas de diagnstico para el control del
funcionamiento de los rganos. El control
de calidad de los radiofrmacos de vida
media corta es un reto debido a la estric-
ta limitacin de tiempo, la exposicin a la
radiacin y las bajas cantidades de estos
trazadores, en torno a los nanomoles.
Este artculo presenta un sistema de
cromatografa inica flexible y a su vez
robusto para el control en la produccin
del radionucleido [18F]fluoruro (precur-
sor) y los dos trazadores sintetizados a
partir de ste, [18F]fluorodeoxiglucosa y
[18F]fluorocolina, de acuerdo con las re-
gulaciones descritas en la farmacopea.
Los principios de la
tomografa por emisin de
positrones (PET)
Los radiofrmacos son frmacos ra-
diactivos utilizados en medicina nuclear
cromatografa inica
para el diagnstico, tratamiento, o pre-
vencin de enfermedades. Contienen
un istopo radiactivo, denominado ra-
dionucleido, enlazado a una molcula
biolgicamente activa o inerte.
Los radionucleidos son istopos ines-
tables que presentan un exceso, bien
de neutrones o bien de protones y por
tanto un decaimiento radiactivo, pro-
ducindose como resultado la emisin
de rayos gamma o partculas subatmi-
cas. En nclidos ricos en protones, un
protn se transforma en un neutrn
emitindose un positrn (antipartcula
del electrn o un electrn con carga
positiva, tambin denominado part-
cula b+) junto con un neutrino (v) de
acuerdo con
Protn (p) neutrn (n) +
positrn (b+) + neutrino (v) En tomografa por emisin de positrones
El positrn liberado pierde su energa
cintica y entonces se combina con un
electrn. El encuentro aniquila a ambos,
positrn y electrn, proporcionando dos
fotones (rayos gamma), cada uno con
tcnicas de LABORATORIO 156 N 370 ABRIL 2012
una energa de 0,511 MeV, siendo emi-
tidos en direcciones opuestas (Figura 1).
me+ + me- 2g
Esta aniquilacin positrn-electrn re-
presenta una conversin directa de
masa a energa. Utilizando sofisticados
escneres (detectores), se obtienen im-
genes tridimensionales de las estruc-
turas de los tejidos. Los radionucleidos
con perodos de semidesintegracin
cortos ms comnmente utilizados en
radiofarmacia son 11C, 13N, 15O y 18F. Sus
perodos de semidesintegracin son,
respectivamente, 20,38; 9,96; 2,03 y
109,7 minutos.
Radiofrmacos
(PET), la desintegracin del radionuclei-
do emisor de positrones, tambin de-
nominado trazador, libera dos fotones
opuestamente dirigidos con 0,511 MeV
que pueden ser registrados con alta sen-
sibilidad mediante deteccin coinciden-

Figura 1. Principio de tomografa por emisin de positrones.
te. Para el suministro del radionucleido
a un humano o animal vivo, este puede
ser incorporado en una molcula inerte
(por ejemplo los trazadores de flujo san-
guneo [15O]agua o [15O]butanol) o bien
en una molcula biolgicamente activa
que es absorbida por el rgano diana.
Una vez el marcador es concentrado en
el tejido del rgano diana, el paciente
se sita en el escner PET. El seguimien-
to de los fotones y la generacin de
imgenes en tres dimensiones a partir
de la fuente emisora es realizada por
computadoras con sofisticados progra-
mas. De esta forma, es posible el es-
tudio a escala molecular de funciones
fisiolgicas, bioqumicas y farmacol-
gicas. Enfermedades como el cncer,
cardiovasculares, e incluso alteraciones
neurolgicas pueden ser detectadas
mucho antes de la aparicin de los pri-
meros sntomas.
Produccin
de radiofrmacos PET
Los radionucleidos utilizados en ex-
menes PET como son 11C, 13N, 15O y 18F
cromatografa inica
son producidos artificialmente en un
ciclotrn, donde un haz de partculas
subatmicas son aceleradas y se hacen
incidir sobre un blanco previamente
preparado. Posteriormente, los radionu-
cleidos resultantes son aislados y enlaza-
dos a un trazador mediante un proceso
de sntesis. Debido a que el tomo del
flor presenta un radio similar al tomo
de hidrgeno, ste primero acta como
un pseudo-hidrgeno y encaja de forma
ideal en posiciones correspondientes a
tomos de hidrgeno en molculas or-
gnicas. El emisor de positrones 18F es,
por tanto, uno de los ms importantes
radionucleidos utilizados para diagnsti-
co en medicina nuclear. El 18F es produ-
cido por el bombardeo de protones en
un blanco de agua enriquecido en 18O.
En una reaccin 18O(p,n)18F, los protones
muy acelerados (p) reaccionan con los
ncleos de tomos 18O para emitir un
neutrn (n) y 18F, que decae inmediata-
mente por emisin de positrones pre-
sentando una vida media de 109,7 mi-
nutos. El producto de la desintegracin
de 18F es el istopo estable 18O. Tras el
aislamiento del 18F existente en el agua
utilizado como blanco, el radionucleido
es enlazado al compuesto qumico de
tcnicas de LABORATORIO 158 N 370 ABRIL 2012
inters. Con este fin, la preparacin de
radionucleidos reactivos de flor en di-
solventes orgnicos es un prerrequisito
importante para la sntesis de compues-
tos alifticos con enlaces carbono-flor.
a) [18F]Fluorodeoxiglucosa
La [18F]fluorodeoxiglucosa, comnmente
abreviada como [18F]FDG, o sencillamen-
te FDG, es un anlogo de la glucosa en
la que el grupo hidroxilo de la posicin
2 es sustituido por [18F]flor (Figura 2a).
Esto permite observar la funcin y meta-
bolismo de la glucosa en el corazn, los
pulmones y el cerebro. Adems, es usado
en oncologa para identificar metabolis-
mos anormales de la glucosa con el fin de
caracterizar diferentes tipos de tumores.
Una vez administrada al paciente, la FDG
es incorporada en las clulas por el mismo
mecanismo de transporte que presenta la
glucosa normal, pero a diferencia de sta,
una vez dentro de la clula, no es metabo-
lizada y por ello se mantiene en la clula
permitiendo la imagen en tomografa PET.
No solo por sus funciones para diagns-
tico, sino adems por el alto nmero de
procedimientos de marcaje y por su venta-
josa vida media de aproximadamente dos
horas, que permite su transporte a centros
que carecen de ciclotrn, hacen de la [18F]
FDG el radiofrmaco orgnico PET ms
frecuentemente utilizado.
b) [18F]Fluorocolina
La colina acta en las clulas como pre-
cursor para la biosntesis de fosfolpi-
dos. Los fosfolpidos son componentes
esenciales en las membranas celulares
y debido a que los tumores revelan
un aumento en el metabolismo de los
constituyentes de las membranas celu-
lares y por consiguiente un aumento en
la actividad de la colina, los trazadores
de colina son valiosas herramientas de
diagnstico para la deteccin del cncer.
La [18F]fluorocolina es un trazador PET
recientemente desarrollado que permi-
te visualizar el metabolismo de la colina
in vivo. Est basado en el trazador [11C]
colina empleado para la deteccin de
tumores. La principal razn para la pro-
duccin de derivados sustituidos con 18F
 cromatografa inica

es su considerablemente superior vida

media, que permite la distribucin de
este trazador a los centros PET que care-
cen de un ciclotrn en sus instalaciones.

Cromatografa inica
Control de radiofrmacos

Adems de la exactitud y reproducibili-

dad requerida en los resultados, se de-
manda una tcnica capaz de afrontar
un gran nmero de anlisis. Cada uno
de los tres canales que configuran el sis-
tema de cromatografa inica permite Figura 2. Estructuras qumicas de dos radiofrmacos PET. (a) En la [18F]FDG, el grupo
el control de tres lneas de produccin, hidroxilo de la posicin 2 de la molcula de glucosa es sustituido por 18F. (b) En la
respectivamente. El sistema analtico [18F]fluorocolina, un grupo [18F]alquilo fluorado es enlazado al tomo de nitrgeno de
proporciona las siguientes ventajas: la N,N-dimetiletanolamina (DMEA).

a) Flexibilidad en la eleccin
del canal cromatogrfico
El sistema de cromatografa inica que
opera en el Instituto Tecnolgico PET
combina tres canales cromatogrficos de ser dirigido automticamente hacia
en un nico equipo para el control de cualquiera de los tres canales cromato-
calidad de los frmacos PET. Desde un grficos. El [18F]fluoruro, la [18F]FDG, y
nico sistema de inyeccin, el flujo pue- la [18F]fluorocolina pueden ser determi-
 cromatografa inica

Tabla 1. Condiciones cromatogrficas para el control de calidad de [18F]fluoruro, [18F]FDG y [18F]fluorocolina.

[18F]fluoruro [18F]FDG [18F]fluorocolina

Columna Metrosep A Supp 5 - 150/4.0 Metrosep Carb 1 - 150/4.0 Metrosep C 4 - 150/4.0

Temperatura de separacin 45 C 25 C 40 C
Volumen de inyeccin 10 L 10 L 10 L
Eluyente 3,2 mmol/L carbonato de sodio 0,1 mol/L hidrxido de sodio 1,7 mmol/L cido ntrico
1,0 mmol/L bicarbonato de sodio 0,7 mmol/L cido dipicolnico
Flujo 0,7 mL/minuto 1,0 mL/minuto 1,5 mL/minuto
Deteccin Conductividad con supresin qumica Amperometra de pulsos (PAD) Conductividad
Tiempo de anlisis 8 minutos 18 minutos 14 minutos

nados de forma independiente (Tabla
1) seleccionando entre diferentes com-
binaciones de columnas de separacin
cromatogrfica, eluyentes y detectores.
El software MagIC Net controla todas
las funciones de operacin del sistema,
as como la adquisicin y evaluacin de
los datos obtenidos.
b) Seguridad
La automatizacin en la inyeccin de
muestras con la tecnologa Dosino
patentada por Metrohm permite aspi-
rar muy bajos volmenes de muestra
con exactitud y precisin. La dosifica-
cin y aspiracin de lquidos, as como
las tareas de dosificacin y enjuague
son completamente automatizadas y
controladas desde el software MagIC
Net evitando cualquier posibilidad de
contaminaciones cruzadas. El diseo
modular en los cromatgrafos inicos
de Metrohm permite la instalacin
del escudo de plomo requerido para
garantizar la seguridad de los ope-
rarios. La vlvula de inyeccin est
situada dentro de una caja de plomo
fabricada a medida con un espesor de
5 cm, mientras la radiacin emitida por
los radiomarcadores durante la separa-
cin cromatogrfica es atenuada has-
ta valores seguros por una proteccin
de plomo lo suficientemente gruesa.
Adems, un portamuestras de plomo
fabricado tambin a medida evita la
exposicin del operario respecto a la
radiacin gamma.
c) Control de calidad utilizando
la cromatografa inica de Metrohm
Los radiofrmacos poseen caractersticas
nicas y requieren estrictas y especiales
medidas de calidad descritas en nume-
rosas farmacopeas. El control de calidad
incluye verificaciones de la pureza qu-
mica y radioqumica antes de que el ra-
diofrmaco sea suministrado al paciente.
La pureza radioqumica de un trazador
el ratio existente entre el radionuclei-

Figura 3. Cromatogramas obtenidos para [18F]fluoruro con deteccin (a) de conductividad y (b) de radiactividad. En las fluoraciones
nucleoflicas, se utiliza una cantidad (muy baja) de iones [18F]fluoruro (trazador) para formar enlaces carbono-flor. El software del
sistema IC convierte las unidades de radiacin, cuentas por segundo (cps) a mV. Las condiciones cromatogrficas se muestran en la
Tabla 1.

tcnicas de LABORATORIO 160 N 370 ABRIL 2012

 cromatografa inica

Figura 4. (a) Cromatograma PAD de glucosa (precursor), [18F]FDG y clorodeoxiglucosa como impureza. (b) Cromatograma de la [18F]
FDG con deteccin de radiactividad. El software del sistema IC convierte las unidades de radiacin, cuentas por segundo (cps), en
mV. Las condiciones cromatogrficas se muestran en la Tabla 1.

do enlazado (por ejemplo [18F]FDG) y el
radionucleido no enlazado (por ejemplo
[18F]fluoruro) garantiza la calidad de la
imagen en el escner PET y protege al pa-
ciente frente a una radiacin innecesaria.
En primer lugar ha de ser determinada la
concentracin del radionucleido produ-
cido en el ciclotrn, que actuar como
precursor en la posterior radiosntesis
(Figura 3).
En segundo lugar, es preciso determi-
nar la pureza qumica como en cual-
quier otra preparacin farmacutica
y la concentracin del radiofrmaco
sintetizado, que mayoritariamente se
 cromatografa inica

Figura 5. Cromatograma (a) con deteccin de conductividad y (b) cromatograma con deteccin de radiactividad de las especies ob-
tenidas en la reaccin de sntesis de la [18F]fluorocolina. La [18F]fluorocolina es producida por la reaccin nuclefilica de N,N-dimeti-
letanolamina (DMEA) con [18F]fluorobromometano gaseoso. Esta reaccin de marcaje produce un alto contenido de DMEA residual.
Otros subproductos potenciales como la bromocolina pueden ser tambin determinados. El software del sistema IC convierte las
unidades de radiacin, cuentas por segundo (cps), en mV. Las condiciones cromatogrficas se muestran en la Tabla 1.

encuentra en concentraciones del ran- Conclusin Vos, Reduced dimethylaminoetha-

go de los nanomoles. Al mismo tiempo
han de ser cuantificados los precursores
en exceso y las impurezas derivadas de
los trazadores. La Figura 4 muestra el
cromatograma con deteccin ampero-
mtrica pulsada (PAD) con la glucosa
(precursor), la [18F]FDG y la clorodeoxi-
glucosa como impureza. El anlisis fina-
liza en menos de 10 minutos.
La Figura 5 muestra el cromatograma
correspondiente a las especies obteni-
das en la reaccin de sntesis de la [18F]
fluorocolina. Aparte de la alta cantidad
de sodio y de N,N-dimetiletanolamina
solo el calcio fue detectado en cantida-
des considerables.
d) Tiempo de anlisis
Debido a que la mayora de los radio-
frmacos emisores de positrones se ca-
racterizan por un corto tiempo de vida
media, el objetivo es reducir el tiempo
empleado en el control de calidad. El
control completo de la determinacin
por el software y las secuencias de en-
juague de los circuitos cromatogrficos
y circuitos de inyeccin garantizan anli-
sis rpidos y precisos.
Los sistemas de cromatografa inica
Metrohm, flexibles en su configuracin
y totalmente optimizables, cumplen con
los estrictos requerimientos de la indus-
tria radiofarmacutica y las regulaciones
de la farmacopea. Un nico sistema de
cromatografa inica rene lo requeri-
do en el control de calidad para varias
lneas de produccin. Adems de la alta
calidad, el cromatgrafo inico de Me-
trohm presentado asegura la seguridad
de los operarios, bajos costes de man-
tenimiento y una excepcional robustez.
Agradecimientos
Los autores desean dar las gracias a to-
dos los profesionales del Departamento
de Cromatografa Inica de Gomenso-
ro por su gran labor de asesoramiento
tcnico y su productiva colaboracin en
este trabajo.
Referencias
[1] D. Slaets, S. De Bruyne, C. Dumolyn,
L. Moerman, K. Mertens, and F. De
nol in [18F]fluoromethylcholine: an
important step towards enhanced
tumour visualization, Europ J Nucl
Med Mol Imaging 37(11), 2136-
2145 (2010).
[2] Cyclotron-produced radionuclides:
physical characteristics and pro-
duction methods, Technical Report
Series No. 468, International Ato-
mic Energy Agency, Vienna, 266 p.
(2009).
[3] D. Kryza, V. Tadino, M. Azuzurra
Filannino, G. Villeret, and L. Le-
moucheux, Fully automated [18F]
fluorocholine synthesis in the Tra-
cerLab MXFDG Coincidence syn-
thesizer, Nucl Med Biol 35, 255-260
(2008).
[4] J. Passchier, Fast high-performance
liquid chromatography in PET qua-
lity control and metabolite analysis,
Q J Nucl Med Mol Imaging 53, 411-
416 (2009).
Stand en Achema 2012:
Pabelln 4.1, B49.
www.metrohm.de

tcnicas de LABORATORIO 162 N 370 ABRIL 2012

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