Los anlisis llevados a cabo en los productos lcteos son de una importancia considerable

dentro del control de calidad de los productos terminados, para por ejemplo poder determinar
cunto tiempo se mantendr fresco un producto, o su fecha de caducidad.

La seguridad alimentaria en la leche y los productos lcteos es fundamental en esta

industria. La imagen que se tiene de estos productos como saludables, y en particular la
percepcin de la calidad, est siempre bajo estrecha vigilancia debido a algunos brotes de
enfermedades humanas y retiradas de productos de este tipo (leche, queso, helados, etc). Por
ello, un anlisis exhaustivo con los medios de cultivo indicados es bsico para garantizar la
seguridad para el consumo.

Para la identificacin de patgenos importantes en seguridad alimentaria en la industria lctea

existen diversos medios de cultivo especficos:
Agar Bilis Esculina: aislamiento e identificacin de Estreptococos Grupo D.
Los alimentos de origen animal o vegetal obtenidos por fermentacin pueden tener unos
contenidos muy altos en estreptococos del grupo D, que estn presentes como flora
natural. Estos estreptococos pueden usarse como ndices de patgenos entricos muy
resistentes, son tiles en el anlisis de alimentos tratados trmicamente y tambin son
tiles para determinar la eficacia de los sistemas de desinfeccin y de limpieza.

Base de Caldo Bryant-Burkey: deteccin de especies de Clostridium en productos

lcteos, especialmente Clostridium tyrobutyricum.
Esta bacteria es la responsable de la hinchazn tarda que aparece en ciertos tipos de
queso y que les confiere un olor y sabor desagradable, y que llega a agrietar e incluso a
hacer estallar el queso.

Agar M17: cultivo y enumeracin de estreptococos lcticos en productos lcteos.
Recomendado para aislamiento de Streptococcus thermophilusen yogures. Tambin
para crecimiento y mantenimiento de fermentaciones en queso y yogur.


Morfologa colonial bacteriana en

medios de cultivo.
Cuando tienes un cultivo en agar (caja petri) siempre es
relevante anotar la morfologa colonial (colonias aisladas) de la cepa
bacteriana para facilitar la identificacin, los siguientes datos te sern
de utilidad:
Generalmente se reporta la morfologa colonial tal como uno la
percibe, por ejemplo si se ves que las colonias bacterianas son como
puntitos, pues reportan que son puntiformes, si son lisas pues reportan
que son lisas.
Si observas que estn como moco, pues reportan que estn mucosas, si
su color es amarillento pues reportan que son de color amarillento, y
as sucesivamente., tambin puedes agregar caractersticas que
 consideres importante para identificarlas, por ejemplo el olor., Aun as
checa las siguientes imgenes para orientarte.

Morfologa colonial bacteriana

superficie. Morfologa colonial

bacteriana forma. Morfologa

colonial bacteriana borde.
Streptococcus spp.
 Streptococcus-betahemolisis-medio-
de-cultivo-agar-sangre.
Klebsiella spp., en agar Mac Conkey.
Colonias grandes planoconvexa, mucoides, brillantes, forma irregular,
tambin se observan redondeadas, bordes ondulados, lactosa
positivo(consume el carbohidrato lactosa lo cual acidifica el medio y
el indicador rojo de fenol cambia rojo-rosado, por ello las colonias se
ven de ese color).
Para leer sobre enfermedades morfologia microscopica, historia,
prevencin, entre otras de Klebsiella spp dar clik para mas
informacin.

Colonias rosas, mucoides, bordes

irregulares, convexas. Medio de cultivo Mac Conkey
 Colonias de Klebsella pneumoniae en

medio agar Mac Conkey. Colonias de

Klebsiella pneumoniae en medio agar Mac Conkey.

Staphylococcus spp.
Colonias medianas, convexas, de color blanco, forma circular, bordes
redondeados.

Staphylococcus aureus en agar

sangre.
Bacillus spp.
Colonias medianas, convexas, blanquecinas como cera,
forma fusiforme y circular, bordes redondeados.
 Colonias de Bacillus sp en agar
nutritivo.
Colonias Grandes, planas, blanquecinas, forma irregular, bordes
lobulados, dan la apariencia de estar secas, tambin se observa una
protuberancia en el centro de las colonias lo cual les da una
apariencia de huevo estrellado.

Colonias de Bacillus sp en agar

nutritivo.
Escherichia coli.
Las colonias de esta bacteria varan segn el medio de cultivo donde
crezcan, en este caso el medio de cultivo es Agar Eosina Azul de
Metlileno abreviado EMB, podemos observar en la imagen que las
colonias tienen en demasa una coloracin verde-metalico, lo cual es
caracterstico de E. coli, aunque hay otras bacterias que logran
producir este color es muy tenue y escaso. Se logran ver colonias
aisladas, son colonias medianas, circulares, convexas, moradas,
contorno verde-metalico, bordes redondeados.
 Color verde metlico en las colonias
caracterstico de Escherichia coli en medio de cultivo. EMB

Escherichia coli en agar Mac

Conkey. Se logran ver colonias aisladas, son colonias medianas,
circulares, convexas, bordes redondeados, lactosa positivas lo que les

da coloracin rosada. Color

verde metlico en las colonias caracterstico de Escherichia coli en
medio de cultivo. EMB
Serratia marcensens.
 Colonias medianas, brillantes, convexas de color rojo intenso, forma
circular, bordes redondeados o irregulares, acuminada y/o con
protuberancia en el centro.

Cultivo de Serratia marcescens , se observa el

color rojo obscuro intenso caracterstico de esta bacteria. Medio de

cultivo BHI. Cultivo de Serratia

marcescens, se observa el color rojo intenso que es caracterstico de
esta bacteria.

Proteus mirabilis.
El genero Proteus es bien conocido por su amplia motilidad, esta se
puede evidenciar en medios nutritivos como agar sangre, agar
nutritivo, agar BHI, entre otros. Se forman una especie de ola
alrededor de las colonias bacterianas y esta se desplaza de forma
radial, a este fenmeno se le llama efecto de swarming el cual es
caracterstico de Proteus sp.Colonias medianas, convexas,
 blanquecinas o translucidas, forma circular, bordes redondeados hay
precencia de swarming.

Proteus mirabilis en agar BHI con un

efecto de swarming tenue. Proteus mirabilis

en agar BHI se puede observar claramente el efecto de swarming.

Proteus vulgaris en agar sangre se observa

claramente el efecto de swarming, lo que evidencia la gran motilidad
de la bacteria
Tincin de Gram


Sesin 4 Prctica 6
Vamos con esta prctica que es de las que ms me han gustado, porque encima
de tener su parte de puro laboratorio haciendo la tincin, luego viene
comprobar los resultados en el microscopio, y el microscopio es todo un
mundo! Es emocionante descubrir que puede ser lo que ests observando, bien
aqu contar la tincin pero luego en el siguiente post har un resumen de cmo
funciona el microscopio y que podemos observar A por la bata!

Objetivos

Hacer la tincin de una muestra para hallar que microorganismos se encuentran
presentes

Fundamento

Diferenciar mediante la tincin entre las paredes celulares de las bacterias Gram
negativa y Gram negativa. Mientras que la pared celular de las bacterias Gram
positivas posee una gruesa capa depeptidoglicano, adems de dos clases de cidos
teicoicos, la capa de peptidoglicano de las Gram negativas es delgada, y se
encuentra unida a una segunda membrana plasmtica exterior (descomposicin
distinta a la interna) por medio de lipoprotenas. Por lo tanto, ambos tipos de
bacterias se tien diferencialmente debido a estas diferencias constitutivas de su
pared. La clave es el peptidoglicano, ya que es el material que confiere su rigidez a
la pared celular bacteriana, y las Gram positivas lo poseen en mucha mayor
proporcin que las Gram negativas.

Materiales

Cubeta de cristal
Puente de tincin
Mechero bunsen
Vaso de precipitado
Pipeta Pasteur x3
Asa de siembra
Portaobjetos
Agua destilada
Papel secante




Reactivos
Lugol
Acetona (30% acetona y 70% Etanol)
Safranina
Cristal violeta


Procedimiento

1. Primero se pone una cubeta y sobre el un puente de tincin que es sobre lo
que vamos a trabajar, siempre sobre un papel para evitar posibles manchas en la
mesa.

2. Cogemos un portaobjetos y en caso de ser un medio espeso sobre el que
vamos a hacer la tincin aadimos una gota de solucin salina estril. En caso de
ser ya un medio lquido podemos obviar este paso.

 3. Tomamos una colonia de la muestra que vamos a tintar y disgregamos por el
centro del portaobjetos de forma que quede delimitado en el centro pero bien
extendido para evitar grumos o aglomeraciones de clulas

4. Secamos el contenido del porta objetos bien al aire o sobre la llama del
mechero bunsen teniendo cuidado que no vayamos a quemar de ms la muestra,
cuando se seque pasamos 4 o 5 veces otra vez la muestra para fijar bien los
microorganismos

5. Empezamos la primera tincin con el cristal violeta durante un minuto para
que se impregne lo suficiente del tinte, ste dar color a las Gram positivas

6. Lavar con abundante agua corriente el exceso de colorante, es importante
lavar por lo menos durante 4 o 5 veces siempre intentado quitar todo el exceso
posible de tinte hasta que el porta objetos tenga la zona con la muestra con un
tenue color azulado .En nuestro caso usamos agua del grifo porque sabemos que
tiene un pH correcto, pero en caso de no serlo usar agua con un pH neutro

7. Ahora aadiremos Lugol durante un minuto a la muestra, actuara como una
laca fijando bien el tinte a las clulas que lo tengan

8. Lavar otra vez con agua en exceso para eliminar bien, repetir durante tres o
cuatro veces

9. Ahora procedemos a utilizar el Alcohol-Acetona 7:3, verteremos gota a gota
en el portaobjetos inclinado durante unos 40 segundos. Es recomendado 1
minuto pero evita ms errores quitarlo un poco antes.

10. Lavar con abundante agua en exceso otra vez, pero en este caso
especialmente para asegurarnos que se elimina todo el disolvente, es importante
este paso.

11. Por ltimo aadiremos la Safranina, que es el segundo colorante que
usaremos o colorante de contraste para darle la tincin a las bacterias Gram
negativas. Lo haremos durante un minuto.

12. Lavar con abundante agua en exceso

13. Dejaremos secar la preparacin para poder ser utilizada en el microscopio

14. Examinar la composicin de la placa al microscopio, pudiendo ir con el
revolver de ms lejano a cercano o rpidamente con el objetivo 100X y aceite de
inmersin

Medidas de prevencin

Nunca utilizar acetona pura porque eliminara completamente la tincin
Usar guantes a la hora de realizar la tincin ya que los indicadores son muy
fuertes y tarda en eliminarse el color de la piel




Resultados

Presencia de diplobacilos en la muestra de color rojo claro