MARCO TEORICO

Los medios de cultivo, pueden clasificarse segn su consistencia, origen, comportamiento y

utilizacin.

Consistencia

1. Lquidos. Contienen los nutrientes antes citados, adicionados de un tampn, capaz de

mantener el pH adecuado. Se utilizan para el crecimiento de cultivos puros en lote. Se
denominan caldos de cultivo y no tienen agar en su formulacin. Entre los ms empleados
estn: el caldo nutritivo y el caldo peptona.

2. Semislidos. Contienen 0.5% de agar en su formulacin. Se utilizan para la conservacin

de cepas bacterianas y para estudiar la movilidad de las bacterias (presencia o ausencia de
flagelo.

3. Slidos. Se obtiene agregando agar de 1.5-2% en su formulacin. Este conjunto,

debidamente esterilizado, se vierte en placas Petri o en tubos de ensayo. Las exigencias
nutritivas y las condiciones fisicoqumicas son similares a las de los medios lquidos. Estos
medios inmovilizan a las clulas, permitindoles crecer y formar masa aisladas visibles
llamadas colonias, siempre que la cantidad de inoculo este suficientemente diluida. En
este caso se puede observar la existencia de colonias separadas unas de otras.
Origen

1. Medios sintticos o qumicamente definidos. Son medios compuestos por productos

qumicos conocidos y se usan para estudios metablicos. Ejemplo: agar nutritivo, agar
blando, caldo nutritivo, agar eosina azul de metileno, etc.

Staphylococcus aureus en agar sangre.

2. Medios naturales o qumicamente no definidos. Son aquellos medios preparados a partir

de sustancias naturales animales o vegetales, de composicin no rigurosamente
constante. Ejemplo: el suero, la leche, la papa, etc.

Composicin y utilizacin

1. Medios simples. Poseen los requisitos nutricionales mnimos para permitir el desarrollo
bacteriano en general. Ejm: agar nutritivo, caldo nutritivo, entre otros.
 E.coli en agar nutritivo

2. Medios definidos. Es aquel medio de cultivo del cual se conoce su composicin exacta.
Son muy utilizados en estudios fisiolgicos. Los medios mnimos son medios definidos que
nicamente le proporcionan al microorganismo los nutrientes necesarios para crecer, pero
no para desarrollarse ptimamente.

3. Medios complejos. Es aquel del cual no se conoce la composicin exacta del medio. A
menudo, los medios complejos emplean sangre, leche, extracto de levaduras, extracto de
carne u otras sustancias muy nutritivas pero de las cuales se desconoce a composicin
qumica exacta. Estos medios son muy utilizados para cultivar bacterias desconocidas o
bacterias de requerimientos nutricionales muy complejos.

4. Medios selectivos. Se consigue aadiendo al agar nutritivo compuestos qumicos que sean
nocivos para las bacterias cuyo crecimiento no interesa, o tambin alterando las
condiciones fsicas del medio como el pH, la temperatura, etc. Ejm: agar Mac Conkey,
Thayer-Martin, lwestein Jennsen.
5. Medios diferenciales. A estos medios de cultivo se les adicionan sustancias para que solo
crezcan determinadas bacterias y estas, al actuar sobre algunas de las sustancias
adicionadas ya sea por produccin de algn pigmento o por cambios de color en el medio
debido a indicadores de pH o por halos de degradacin de algn componente en el medio
de cultivo, permiten observar macroscpicamente, ciertas propiedades de crecimiento
que ayudan a diferenciar sus colonias de otras especies diferentes. Ejm: agar eosina azul
de metileno, EMB, DLA, agar sangre, agar SS (Salmonella-Shigella).

E.coli en agar eosina azul de metileno

6. Medios enriquecidos. Son medios simples o comunes, se emplean para cultivar

microorganismos que requieren un gran nmero de factores de crecimiento.
Generalmente contiene extractos biolgicos como sangre, suero, lquido asctico, huevo,
glucosa, vitaminas, entre otros, que permiten el aporte de factores de crecimiento o
sustancias que neutralizan agentes inhibidores del crecimiento, en bacterias exigentes
nutricionalmente. Ejemplo: agar sangre, lwestein Jennsen, DLA.

agar sangre

7. Medios de enriquecimiento. Son medios lquidos que favorecen o permiten la

multiplicacin de bacterias cuando la muestra obtenida es muy pobre. Contiene algn
componente que permite el crecimiento de cierto tipo especfico de bacteria, pero no
contienen sustancias inhibidoras. Ejm:caldo de tioglicolato, caldo tetrationato, caldo bilis,
caldo Muller-Kaufman.
 Caldo de tioglicolato

8. Medios de recuento. Se utilizan para determinar el contenido bacteriano de sustancias

como leche, agua, carnes, etc., contando macroscpicamente el nmero de colonias y
aplicando frmulas matemticas para obtener el resultado final. Ejm: agar cuenta-
grmenes (ACG), DLA.

9. Medios de transporte. Son utilizados para asegurar la viabilidad de las bacterias y evitar
que se reproduzcan alternando el nmero de bacterias iniciales, desde el momento de la
toma de la muestra hasta su posterior siembra en el laboratorio. Estos medios no
presentan nitrgeno evitando as su divisin celular. Ejm: medio de Stuart.

Materiales

Medios de cultivo ingredientes deshidratados:

o Peptona
o Manitol
o Almidn
o Gelatina agar

Balanza
Enlermeyers de 250 ml
Probetas de 100 ml
Esptula agua destilada
Algodn
Papel
Ligas
Procedimiento

a. Caldo nutritivo (extracto de carne, 0.3% y peptona, 0.5%)

1. Utilizando un trozo de papel aluminio pese cuidadosamente la cantidad de medio

deshidratado suficiente para preparar 100 ml de caldo nutritivo ( ).
2. Coloque el polvo en un Erlenmeyer de 250 ml limpio y seco, y agregue cuidadosamente el
agua destilada medida en la probeta.
3. Mezcle la preparacin con movimientos giratorios hasta la completa disolucin.
4. Colocar un tapn de algodn y sellarlo con papel y ligas
5. Llevar a Autoclave a 121C y 15 lbs por 15 minutos

b. Agar nutritivo (Extracto de carne, 0.3%; peptona, 0.5%; agar, 1.5%)

1. Preparar 100 ml de caldo nutritivo (Repita los pasos 1,2 y 3 del procedimiento anterior)
2. Agregue g de agar (1.5%), y lleve a licuar en bao de agua en ebullicin hasta que el
medio luzca transparente a la luz.
3. Colocar un tapn de algodn y sellarlo con papel y ligas
4. Llevar a Autoclave a 121C y 15 lbs por 15 minutos

c. Agar Mac Conkey (peptona, 1.7%; proteosa-peptona, 0.3%; lactosa 1%; sales biliares,
0.15%; NaCl, 0.5%; agar, 1.5%; rojo neutro, 0.003%; cristal violeta, 0.0001%)

1. Pesar la cantidad necesaria de medio deshidratado agar Mac Conkey para 100 ml de
solucin.
2. Coloque el polvo en un Erlenmeyer de 250 ml limpio y seco, y agregue cuidadosamente el
agua destilada medida en la probeta.
3. Mezcle la preparacin con movimientos giratorios hasta la completa disolucin
4. Llevar a licuar en bao de agua caliente hasta completar la disolucin del agar
5. Colocar un tapn de algodn y sellarlo con papel y ligas
6. Llevar a Autoclave a 121C y 15 lbs por 15 minutos

d. Agar Manitol Salado (Extracto de carne, 0.1%; proteosa-peptona, 1%; NaCl, 7.5%; manitol,
1%; agar, 1.5%; rojo fenol, 0.0025%)

1. Pesar la cantidad necesaria de medio deshidratado agar Manitol para 100 ml de solucin (
).
 2. Coloque el polvo en un Erlenmeyer de 250 ml limpio y seco, y agregue cuidadosamente el
agua destilada medida en la probeta.
3. Mezcle la preparacin con movimientos giratorios hasta la completa disolucin
4. Llevar a licuar en bao de agua caliente hasta completar la disolucin del agar
5. Colocar un tapn de algodn y sellarlo con papel y ligas
6. Llevar a Autoclave a 121C y 15 lbs por 15 minutos

e. Agar Almidn (peptona, 1%; K2HPO4, 0.5%; almidn, 0.3%; agar, 1.5%)

1. Pesar la cantidad necesaria de almidn para obtener la concentracin mencionada en 100

ml de agua
2. Coloque el polvo en un Erlenmeyer de 250 ml limpio y seco, y agregue cuidadosamente el
agua destilada medida en la probeta.
3. Caliente el recipiente con almidn mezclando con movimientos giratorios hasta la
completa disolucin
4. Pesar el resto de ingredientes para obtener las concentraciones estimadas en 100 ml de
agua
5. Llevar a licuar en bao de agua caliente hasta completar la disolucin del agar
6. Colocar un tapn de algodn y sellarlo con papel y ligas
7. Llevar a Autoclave a 121C y 15 lbs por 15 minutos

f. Agar gelatina (Peptona, 0.1%; extracto de levadura; 0.3%; gelatina, 0.4%; agar; 1.5%)

1. Pese cuidadosamente la cantidad necesaria de cada ingrediente para obtener las

concentraciones dadas para 100 ml de medio.
2. Coloque el polvo de gelatina en un Erlenmeyer de 250 ml y agregue agua destilada medida
en probeta.
3. Lleve el recipiente a licuar en bao de agua en ebullicin hasta diluir la gelatina
4. Agregar el resto de ingredientes y de agua, seguir licuando hasta la total disolucin de los
ingredientes
5. Colocar un tapn de algodn y sellarlo con papel y ligas

Llevar a Autoclave a 121C y 15 lbs por 15 min

Cuestionario:

Determine la naturaleza qumica y la funcin nutritiva de cada uno de los ingredientes que
contienen los medios que ha utilizado.

Se prepar el medio de cultivo llamado Caldo nutritivo en base a extracto de carne 0.3 % y
peptona 0.5 %.

El extracto de carne proporciona al medio fuente de carbohidratos, de nitrgeno y vitaminas.

Constituyen la fuente de carbono y nitrgeno necesarios para el adecuado desarrollo bacteriano.

PEPTONAS: mezclas de aminocidos y pptidos. Resultan de la hidrlisis de protenas o materiales

proteicos (carne, vegetales, casena, o gelatina).

En general, la peptona contiene un amplio rango de nutrientes como son protenas, carbohidratos
y vitaminas, por lo que constituye una excelente base nutritiva para el cultivo de los
microorganismos fastidiosos. Por estas razones la peptona contina siendo un componente
indispensable de muchos medios de cultivo para la deteccin y enumeracin de los contaminantes
microbianos en alimentos, crecimiento de importantes patgenos en el diagnstico veterinario y
clnico, as como en los medios para las fermentaciones en las industrias farmacutica y
biotecnolgica.

BIBLIOGRAFIA

http://www.ugr.es/~pomif/pom-bac/pb-i/pb-i-2-concepto.htm
http://microbitosblog.com/2011/08/03/staphylococcus-aureus-epidermidis-
saprophyticus/
F.J. Baker; M.R. Breach. 1970. Manual de tcnica bacteriolgica. 2 edicin. Editorial
Acribia Zaragoza. Espaa.

C. H. Collins; P. M. Lyne. 1989. Mtodos microbiolgicos. Editorial Acribia Zaragoza.

Espaa.