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UNIVERSIDADE FEDERAL DE GOIS

ESCOLA VETERINRIA E ZOOTECNIA


PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM CINCIA ANIMAL

Disciplina: SEMINRIOS APLICADOS

CARACTERSTICAS BIOLGICAS E ANTIGNICAS DE


Escherichia coli COM NFASE AOS GENES DE VIRULNCIA

Ana Maria de Souza Almeida


Orientadora: Maria Auxiliadora Andrade

GOINIA
2013
ii

ANA MARIA DE SOUZA ALMEIDA

CARACTERSTICAS BIOLGICAS E ANTIGNICAS DE


Escherichia coli COM NFASE AOS GENES DE VIRULNCIA

Seminrio apresentado junto Disciplina


de Seminrios Aplicados do Programa
de Ps-Graduao em Cincia Animal
da Escola de Veterinria e Zootecnia da
Universidade Federal de Gois
Nvel: Mestrado

rea de Concentrao:
Sanidade Animal Higiene e Tecnologia de Alimentos

Linha de Pesquisa:
Etiopatogenia, epidemiologia, diagnstico e controle das
doenas infecciosas e parasitrias dos animais.

Orientadora:
Maria Auxiliadora Andrade

Comit de orientao:
Valria de S Jayme
Guido Fontgalland Coelho Linhares

GOINIA
2013
iii

SUMRIO

1 INTRODUO .................................................................................................... 1
2 REVISO DE LITERATURA ............................................................................... 3
2.1 Escherichia coli ................................................................................................ 3
2.2 Patotipos .......................................................................................................... 3
2.3 Estruturas antignicas ...................................................................................... 6
2.4 Patognese ...................................................................................................... 7
2.5 Ilhas de patogenicidade.................................................................................. 10
2.6 Genes de virulncia ........................................................................................ 11
2.6.1 Genes de aquisio de ferro ....................................................................... 11
2.6.2 Genes plasmidiais ....................................................................................... 12
2.6.3 Adesinas fimbriais ....................................................................................... 13
2.6.4 Adesinas afimbriais ..................................................................................... 15
2.7 Toxinas ........................................................................................................... 17
3. CONSIDERAES FINAIS ............................................................................. 20
REFERNCIAS .................................................................................................... 21
iv

LISTA DE ABREVIATURAS

A/E leses de fixao e esfacelamento


Aerobactina sistema de aquisio de ferro
AmpC adenosina monofosfato
APEC Escherichia coli patognica para aves
bfp feixe formador de pelos
CDT toxina de distino citoletal
CNF fator citotxico necrosante
CNF-1 citotoxina necrosante fator 1
Crl gene de filamento curli
Csg gene de filamento curli regulada pela temperatura
eae intimina
EaggEC Escherichia coli enteroagregativa

EAST-1 toxinas termoestveis enteroagregativas


EHEC Escherichia coli enterohemorrgica
EIEC Escherichia coli enteroinvasora
EPEC Escherichia coli enteropatognica
ETEC Escherichia coli enterotoxignica
Hly alfa hemolisina

IL interleucina
IP ilhas de patogenicidade
iss gene de alta sobrevivncia ao soro
iuc hidroxamato siderforo aerobactina
iut gene aerobactina de captao frrica
LEE Ilhas de patogenicidade locus para esfacelamento de
entercitos
LPS lipopolissacardeo
v

LT toxina termolbeis
MHC-1 complexo principal de histocompatibilidade classe 1
NMEC Escherichia coli de meningite neonatal
Pap fimbria P
REDEC Escherichia coli enteropatognica para coelhos
Sab protena autotransportadora para formao de biofilme.
Sfa Adesina S fimbria
ST toxina termo-estvel
STEC Escherichia coli produtora de toxina Shiga

SSTT sistema de secreo tipo lll


STx Shiga-toxinas
Tir receptor de intimina

TNF- fator de necrose tumoral


TraT gene estrutural para fator de sexo F de protenas de
superfcie de membrana externa
Tsh adesina regulada pela temperatura
UFC unidades formadoras de colnias
UPEC Escherichia coli uropatognica
1 INTRODUO

Escherichia coli (E.coli) um microrganismo comensal, presente no


intestino de mamferos e aves (FERREIRA & KNBL, 2009), entretanto
apontado como um dos agentes bacterianos mais frequentes em diarreias de
seres humanos e animais. Alm de ter grande importncia nas leses
extraintestinais em aves.
Estudos recentes tm contribuido com descobertas a respeito de novas
estirpes, mutaes, genes de virulncia e sistemas de resistncia indentificados
em diferentes bactrias. A alta capacidade adaptativa, mudanas fenotpicas e
genotpicas dos microrganismos tornam a pesquisa sobre o seu comportamento e
sua composio, essenciais para sade pblica e animal.
Colibacilose uma das principais doenas de aves causadas por
E.coli. Apesar do grande conhecimento a respeito dessa doena, ela ainda
persiste entre as principais enfermidades endmicas na avicultura mundial
(DZIVA & MARK, 2008). Isso ocorre devido a diversidade antignica da E.coli,
que dificulta o controle e preveno de todas enfermidades vinculadas a ela.
As manifestaes de doenas por E.coli so associadas a diversos
fatores, destacando os genes de virulncia codificados por plasmdeos,
bacterifagos, ou ilhas de patogenicidade (IP) (GYLES & FAIRBROTHER, 2010).
Acredita-se que a maior parte dos sorogrupos de E.coli no
apresentem qualquer gene de virulncia, porm, durante o processo evolutivo,
algumas cepas adquirem diferentes combinaes de genes que lhes atribuem
capacidade de promover enfermidades (CHERNAKI-LEFFER et al., 2002).
Ressalta-se que as doenas vinculadas a esse patgeno trazem
grandes perdas econmicas como; queda na produo, custos com tratamento,
desvalorizao dos animais, diminuio de ndices reprodutivos, mortes e
reposio dos animais, alm de sua relevante importncia na sade humana. Por
isso, a deteco e caracterizao molecular de genes de virulncia e de suas
combinaes torna possvel sua associao com a patognese da doena e
possibilita o desenvolvimento de mecanismos eficazes no combate s infees.
A elaborao de vacinas eficazes para a preveno dessas doenas
vinculadas a E.coli um dos principais objetivos das pesquisas atuais. Entretanto,
2

para eficcia dessas vacinas necessrio profundo conhecimento a respeito,


sobretudo, de seus genes de virulncia.
O objetivo dessa reviso descrever as principais caractersticas
biolgicas e antignicas da E.coli, com nfase na patognica para aves (APEC),
bem como seus principais genes de virulncia e mecanismos ligados a resistncia
no hospedeiro.
3

2 REVISO DE LITERATURA

2.1 Caractersticas da Escherichia coli


E.coli uma bactria Gram negativa da famlia Enterobacteriaceae,
no esporulada, anaerbica facultativa, fermentativa, em sua maioria mveis
(flagelo peretrqueos) e pertence a microbiota entrica de mamferos e aves.
Crescem em temperaturas de 18 a 44C sendo 37C a temperatura ideal
(FERREIRA & KNBL, 2009).
Essa bactria tambm caracterizada por suas propriedades
bioqumicas; positiva para reao para indol, lisina, motilidade e reao de
vermelho metila; negativa para testes para urease e hidrognio e utilizao de
citrato. Alm disso, algumas cepas podem produzir H2S (OLIVEIRA et al. 2004;
QUINN et al. 2005).
A produo de gs e cido ocorre posteriormente fermentao de
manitol, glicose, sorbitol, ramanose, maltose, manose, xilose, arabiose e glicerol.
A grande maioria das estirpes capaz de fermentar lactose, embora algumas a
fermente tardiamente (ANDREATTI FILHO, 2007).
Em meios de nutrientes slidos as unidades formadoras de colnias
(UFC) apresentam cerca de 1 a 3mm de dimetro tanto com aspecto rugoso
quanto liso, no entanto podem existir colnias intermedirias e mucides.
Colnias rugosas tm aspecto grosseiro e contornos irregulares, j as colnias
lisas so convexas, brilhantes e com bordos regulares (FERREIRA & KNBL,
2009).
Grande parte das E.coli so comensais, no apresentam qualquer
gene de virulncia (CHERNAKI-LEFFER et al., 2002). Alguns estudos descrevem
que mesmo cepas de E.coli comensais podem conter um ou mais genes de
virulncia com potencial de causar doenas em animais imunossuprimidos
(KARIYAWASAM et al., 2006).

2.2 Patotipos

Com base nos mecanismos de virulncia especficos das cepas


patognicas, E.coli pode ser classificada em patotipos. So eles;
enteropatognica (EPEC), enterotoxignica (ETEC), enteroinvasora (EIEC),
4

enterohemorrgica (EHEC), enteroagregativa (EaggEC), uropatognica (UPEC),


de meningite neonatal (NMEC); enteropatognica para coelhos (REDEC) e
patognica para aves (APEC) (FERREIRA & KNBL, 2009).
E.coli produtora de toxina Shiga (STEC) um dos patotipos mais
importantes para sade pblica. Embora sua maior caracterstica seja a produo
da shiga toxina, ela atribuda a algumas doenas veiculadas aos alimentos,
principalmente produtos crneos, sendo capaz de colonizar o epitlio intestinal
(CADONA et al., 2013).
O patotipo APEC considerado uma das principais causadores de
morbidade e mortalidade de frangos, alm de contribuir com perdas econminas
na indstria avcola (KNBL et al., 2004). Dentre os diversos quadros
anatomopatolgicos atribudos a esse patotipo, destacam-se; pericardites,
hepatites, endocardites (Figura 1), doenas respiratrias (LYNNE et al., 2012),
doenas reprodutivas e colibaciloses (ANDREATTI FILHO, 2007).

FIGURA 1a: Leses de colisepticemia em galinhas no vacinadas causada por E.coli O78.
(A) pericardite; (B) aerossaculite; (C) perihepatites. Presena de franjas
amareladas (fibrina) nas serosas dos sacos areos, corao e fgado.
FIGURA 1b: Leses histopatolgicas em um frango no vacinado desafiado com APEC
O78: (A) aerosaculite. Hiperplasia epitelial, congesto e infiltrado de
heterfilos e linfcitos. (B) perihepatite. Material fibropurulento sobre a
superfcie heptica e infiltrado inflamatrio de heterfilos e linfcitos. (C)
Leso heptica. Necrose de hepatcitos e infiltrado inflamatrio linfocitrio.
(D) Leses cardacas. Infiltrado inflamatrio de heterfilos e linfcitos no
pericrdio e epicrdio.
Fonte: LYNNE et al. (2012).

Atualmente, com novas pesquisas a respeito dos inmeros genes de


virulncia presentes na APEC, no se pode mais considera-l como um patgeno
simplesmente oportunista, pois algumas cepas podem causar a doena em
animais sadios, como o caso das estipes relacionadas sndrome da cabea
5

inchada que so mais patognicas e possuem caractersticas mais agressivas,


incluindo elevada letalidade, presena de ampla combinao de genes de
virulncia e capacidade de se aderir aos diferentes tipos celulares (MATURANA et
al., 2011).
Alm da diferenciao de patogenicidade e agressividade MATURANA
et al. (2011) distinguem as cepas de acordo com a doena causada por elas. Os
autores citam a existncia de pelo menos dois subgrupos dentro do patotipo
APEC, classificados de acordo com seus genes de virulncia e as doenas
desenvolvidas por elas. Uma delas composta, principalmente, por estirpes que
determinam a sndrome da cabea inchada e outra composta especialmente por
estirpes que causam onfalite. Os autores acrescentam ainda que a diversidade
existente entre estirpes que ocasionam diferentes doenas esto relacionadas ao
nmero de genes de virulncia e suas caracteristicas fenotpicas como aderncia
e letalidade. Estirpes que causam septicemia esto distribudas entre essas duas
enfermidades. A aparente diversidade de estirpes que provocam septicemia pode
repletir na falta de identificao de um conjunto especfico de genes de virulncia
entre essas linhagens.
Cepas enteropatognicas so comumente isoladas de aves com
diarreia e no isoladas de aves sadias. Porm, quando em ambiente adequado e
alimentao saudvel, as aves podem albergar bactrias patognicas sem
desenvolver a doena. Nesse caso, tambm podem ser isoladas de frangos
aparentemente hgidos cepas de EPEC e ETEC portadores de pili, gene que
auxilia na aderncia da bactria ao epitlio traqueal da ave, facilitando a
penetrao e invaso da mucosa (KARIUKI et al., 2002).
Recentemente a preocupao com doenas ocasionadas por estirpes
de EHEC tem aumentado, pois surtos de diarreia hemorrgica esto sendo
relatados. Os bovinos so descritos como uma das principais fontes de infeco
de cepas de EHEC, que geralmente colonizam o tero final do intestino e so
excretadas pelas fezes, sem causar prejuizos ao animal (JORIS et al., 2013).
6

2.3 Estruturas antignicas

A estrutura da APEC composta de seguimentos antignicos que


permitem a diferenciao sorolgica e identificao de antgenos somticos O,
flagelares H, fimbrial F e capsular K (Figura 2).
O antgeno somtico O corresponde ao lipopolissacardeo (LPS),
elemento termo-resistente que se projeta da membrana externa para o ambiente
extracelular. O lipdeo A (endotoxina), componente do LPS, liberado durante a
multiplicao ou aps a morte da bactria, atua na ativao de macrfagos e de
mediadores da inflamao (FERREIRA & KNBL, 2009). O comprimento da
cadeia lateral na unidade de repetio do antgeno somtico O impedem a ligao
do complexo de ataque a membrana do sistema complemento (HIRSH, 2003).
A colibacilose possui vrios sorogrupos associados a sua patogenia,
porm os mais frequentes so O1, O2 e O78 (DZIVA et al., 2008). J os
sorogrupos O2 e S8 de APEC, foram os mais encontrados por SILVEIRA et al.
(2002) e o O6 por KNBL el al. (2012), que caracteriza influncia na prevalncia
de diferentes estirpes de acordo com a regio estudada.
Os antgenos capsulares K so polissacardeos capsulares
relacionados resistncia bacteriana perante o sistema complemento. A cpsula
um dos componentes bacterianos de menor patogenicidade, sendo removida
quando submetida a temperatura de 100C por uma hora (FERREIRA & KNBL,
2009).
Antgenos flagelares H so compostos proteicos no utilizados com
frequncia na identificao antignica das cepas de E.coli, nem a sua
patogenicidade tem sido relacionada presena do flagelo (ANDREATTI FILHO,
2007; FERREIRA & KNBL, 2009).
Os antgenos fimbriais F, tambm chamados de adesinas, pili ou
fmbrias, so molculas proteicas que recobrem a superfcie bacteriana, capazes
de reconhecer receptores especficos na superfcie de clulas eucariticas. A
expresso de adesinas considerada um gene de virulncia fundamental para
aderncia e colonizao dos tecidos do hospedeiro. Elas tambm conferem
especificidade de aderncia da bactria em relao a determinados tecidos e
rgos do hospedeiro. Embora essas adesinas apresentem poucas diferenas
7

morfolgicas existem caractersticas antignicas e hemaglutinantes distintas


(FERREIRA & KNBL, 2009).

FIGURA 2 Ilustrao da estrutura antignica molecular de E.coli.


A= estrutura molecular do flagelo em relao ao corpo
bacteriano; B= estrutura do polissacardeo e a sua
relao com lipdeo A; C= estrutura do pili em relao
ou fmbria que se projeta da membrana externa da
bactria. PS= polissacardeo; LA= localizao do
lipdeo A ou endotoxina; PG= peptideoglicano ou
citoesqueleto das bactrias Gram negativas; MC=
membrana citoplasmtica em oposio membrana
externa que ancora o flagelo, pili e LPS.
Fonte: FERREIRA & KNBL (2009), com adaptaes.

2.4 Patognese

O conceito de patogenicidade a capacidade de um microrganismo


causar a enfermidade. Os microrganismos da mesma espcie se diferenciam uns
dos outros por possurem ou expressarem genes de virulncia que proporcionam
colonizao e expresso de inmeros mecanismos que dificultam o combate do
hospedeiro, ocasionando assim a doena (VIEIRA, 2009).
De acordo com o patotipo, com o sorogrupo e com a presena de
genes de virulncia as estirpes de E.coli podem causar desde quadro leves de
diarria at doenas septicemicas graves. Adesinas, sistema de captao de
8

ferro, invasinas, toxinas e os fatores, inibitrios do sistema imune do hospedeiro e


genes de resistncia a antimicrobianos so os genes mais importantes de
virulncia (VIEIRA, 2009).
A infeco por ETEC se d pela via oral e a fixao no epitlio do
intestino delgado ocorre pela ao de adesinas fimbriais (Figura 3). Aps a
aderncia entre a bactria e a clula hospedeira h produo de enterotoxinas
que estimulam a secreo de gua e eletrlitos no lmen intestinal, ocasionando
diarreia lquida, desidratao, acidose metablica e morte. Grandes quantidades
de LPS podem ser liberadas, aumentando o nmero de fatores de necrose
tumoral (TNF-), interleucina L-1 e L-6 que contribuam para um quadro de choque
(WHITT & SALYERS, 2002; HISRH, 2003).

FIGURA 3 Ataque de ETEC as clulas epiteliais


do leo de um leito desmamado,
mostrando ntima aderncia
bacteriana (A) e o efeito nas clulas
epiteliais. Barra = 1 m.
Fonte: GYLES & FAIRBROTHER (2010), com
adaptaes.
O estabelecimento da infeco por EPEC se d por fraca fixao de
adesinas bfp (feixe formador de pelos) no co e AF/R1, AF/R2 e Ral em coelhos
(REDEC). Um sinal transmitido da bactria para a clula hospedeira, ativa
intiminas bacterianas (gene eae), provocando alteraes no citoesqueleto celular
hospedeiro e posterior desenvolvimento de leses de fixao e esfacelamento
(A/E) das vilosidades. O patotipo EHEC alm das leses de A/E produz tambm
toxinas shiga-like, shiga toxina ou verotoxinas. Stx-1 e Stx-2, codificadas por
bacterifagos, que lesionam e provocam perda da integridade das clulas
endoteliais, causando diarria hemorrgica (HIRSH, 2003).
9

A adeso ao trato respiratrio pela APEC, tambm mediado por


fimbrias, com destaque para fimbria tipo 1 (Figura 4), fimbria P (pap) e curli. A
adesina regulada pela temperatura (tsh) esta relacionada aos estgios iniciais da
infeco. O antgenos K e o gene de alta sobrevivncia no soro (iss) tornam estas
estirpes mais resistentes ao efeito bactericina do soro, e o sistema de aquisio
de ferro (aerobactina) possibilitam a permanncia e infeco do hospedeiro
(HIRSH, 2003; GYLES & FAIRBROTHER, 2010), ocasionando leses sistmicas
como; infeces respiratrias (aerossaculites), hepatites, perihepatites e
endocardites (LYNNE et al., 2012).
SZEMLAKO et al. (2013) afirmam que a ocorrncia da combinao
fmbria P e genes que codificam alfa-hemolisina (hly) so mais frequentes entre
as E.coli que causam septicemias.

FIGURA 4 Eletromicrografia de uma amostra


de E.coli de origem aviria. Nota-
se na superfcie bacteriana a
projeo de estruturas finas e
longas denominadas de pili ou
fmbrias, sendo caracterizado
como pili Tipo 1. Colorao
negativa molibdato de amnio
(30X).
Fonte: FERREIRA & KNBL (2009).

O incio da colonizao da UPEC ocorre na regio periuretral e em


seguida move-se para uretra. A colonizao da bexiga mediada pelo pili tipo1 e
fimbria P. A presena de siderforos e hemolisinas permitem a captao de ferro
e o antgeno K confere resistncia fagocitose, estimulando a produo de
citotoxina necrosante fator 1 (CNF-1) e as alfa-hemolisinas lesionam as clulas
10

epiteliais hospedeira, provocando quimiotaxia de neutrfilos, causando cistites e


pielonefrites (WHITT & SALYERS, 2002).
Cepas EaggEC produzem toxinas termolbeis (LT), toxinas
termoestveis enteroagregativas codificadas por um plasmdeo (EAST-1), toxinas
termo-estveis (ST), toxina do tipo hemolisina e em alguns casos produzem
Shiga-toxinas. Essas toxinas auxiliam a instalao da infeco (CAMPOS &
TRABULSI, 2002).

2.5 Ilhas de patogenicidade

Ilhas de patogenicidade (IP) so ilhas genmicas, constitudas por


amplas regies cromossmicas (10.000 a 200.000 pares de bases) de alta
instabilidade e com caractersticas distintas do restante do genoma bacteriano.
Codificam um ou mais genes de virulncia, e parte ou todo arsenal molecular para
que esses genes possam alcanar sua clula alvo (VIEIRA, 2009).
IP so compostas por guanidina e citosina (G+C), diferentes do
restante do cromossomo e esto comumente associadas a genes que codificam
RNA transportador. Possuem hot spots em suas extremidades, que so
elementos envolvidos na mobilidade gentica (local de insero ou deleo
genmica simplificada), como; fagos temperados, sequncias de insero e
integrases (VIEIRA, 2009).
Estudos a respeito de IP so essenciais para deteco de genes de
virulncia, que por sua vez permitem a identificao e caracterizao de E.coli
patognicas. Um exemplo so as leses do fentipo A/E codificadas na IP locus
para esfacelamento de entercitos (LEE), presente principalmente no patotipo
EPEC, STEC (GYLES & FAIRBROTHER, 2010) e EHEC (JORIS et al., 2013).
LEE codifica tambm adesinas de membrana externa denominada
intimina (gene eae), sistema de secreo tipo lll - SSTT (Esc e protena Sep),
chaperones (protenas Ces), translocadores (EspA, EspB e EspD), protenas
efetoras (EspF, EspG e Map) e receptores translocados intimina (Tir) (GIRARD,
2005), demostrando a importncia de cada IP na patognese bactria.
Estudos recentes com finalidade de determinar se a presena de
anticorpos e/ou a cintica das respostas de anticorpos contra eae, Tir, EspA,
11

EspB pode ser usada para monitorar infeces por EHEC, foram feitos rebanhos
de gado de corte no Brasil. Os resultados demonstraram que apenas respostas
sricas EspA e EspB podem ser utilizadas para monitorar o estado de infeco
de rebanhos bovinos com diarreia causada por EHEC. A correlao entre a
presena de anticorpos contra eae ou Tir e a baixa prevalncia de EHEC no
pode ser presumida, pois, rebanhos negativos para essa estirpe podem
apresentar esses mesmos anticorpos (JORIS et al., 2013).
Fimbria P, fimbria S, hemolisinas, CNF-1 e sistema de sequestro de
ferro tambm so genes codificados em IP. No entanto, alguns podem ser
encontrados tanto em IP quanto em plasmdeos, como os genes hly e
aerobactina. Existem ainda, aqueles codificados do genoma nuclear, so eles;
fimbria tipo 1, antgenos especificos O (comumente O1, O2, O4, O6 e O25), e
aerobactina (GYLES & FAIRBROTHER, 2010).

2.6 Genes de virulncia

2.6.1 Genes de aquisio de ferro

A aquisio de ferro um importante fator de virulncia para bactrias


(WHITT & SALYERS, 2002). E.coli possui recursos de aquisio e assimilao de
ferro proveniente do hospedeiro (GYLES & FAIRBROTHER, 2010). So eles; os
siderforos (enterobactina, aerobactina e outros), que promovem esse sequestro
e aquisio atravs da remoo do ferro de protenas carreadoras (HIRSH, 2003;
GYLES & FAIRBROTHER, 2010) e as hemolisinas, que capturam ferro obtido da
lise de eritrcitos (ROCHA et al., 2002).
O operon aerobactina contm o gene responsvel pela produo de
hidroxamato siderforo aerobactina (iuc), com suas respectivas variantes
(iucABCD), e o gene aerobactina de captao frrica (iutA). A capacidade de
obteno de ferro pelo sistema aerobactina devidamente estabelecida, porm,
em algumas situaes como o caso da estirpe APEC O2, esse sistema
incompleto, pela ausncia de iucA. No entanto, a presena de operons
cromossmicos yersinabacterina e enterobactina nessa estirpe, compensam a
perda de iucA, tornando a captao de ferro possvel (LING et al., 2013).
12

2.6.2 Genes plasmidiais

A transferncia de material gentico entre as bactrias outra forma de


aquisio de genes de virulncia, com destaque para a conjugao, em que o
simples contato com outras bactrias vivas possibilita a transmisso de genes de
virulncia presentes em uma molcula de DNA extra-cromossmico, denominada
plasmdeo (VIEIRA, 2009).
O rpido desenvolvimento de resistncia das enterobactrias s
cefalosporinas de largo espectro est relacionada a cepas cujos plasmdeos
produzem beta-lactamases de espectro estendido ESBLs e beta-lactamase tipo
AmpC, que hidrolisam o anel beta-lactmico destes antimicrobianos. Em 2006, o
Programa de Vigilncia a resistncia antimicrobiana Holands, isolou 153 E.coli
obtidas de amostras cecais de frangos saudveis em diferentes abatedouros na
Holanda, em que 80% das amostras resistentes a cefotaxima carreavam o gene
ESBL e 17% carreavam o gene AmpC (DIERIKX et al., 2010).
Diferente de outros patotipos, a STEC capaz de transportar grandes
plasmdeos, que codificam dentre outros genes de virulncia, o gene sab que se
adere tanto superfcies abiticas quanto a clulas epiteliais (CADONA et al.,
2013), produzindo biofilme (BUVENS & PIRARD, 2012). J em pesquisas feitas
na Blgica a partir STEC isoladas de humanos, e carnes cruas de ruminantes e
animais silvestres, o gene sab foi infrequente nesse patotipo quando LEE era
negativo (BUVENS & PIRARD, 2012). Os autores acrescentam que talvez sab
possa promover recursos alternativos nos mecanismos de adeso em STEC LEE
negativos, porm precisa-se de maiores estudos respeito. Outro plasmdeo,
vinculado principalmente a certas estirpes de STEC como O157: H7 o
plasmdeo-hemolisina, que condifica enterohemolisinas (GYLES &
FAIRBROTHER, 2010).
Outro gene plasmidial de grande importncia o brp ou gene colicina,
que produz e secreta colicinas. As colicinas so toxinas proteicas acionadas por
bactrias no combate clula hospedeira (WHITT & SALYERS, 2002; LLOUBES
et al., 2013).
13

TraT e iss tambm so genes plasmidiais, codificados pelo plasmdeo


ColV. So genes determinantes para resistncia srica, aos efeitos bactericidas
do sistema complemento e fagocitose, comumente relacionados a cepas
septicmicas (GYLES & FAIRBROTHER, 2010). Essa resistncia atribuda a
produo de protenas de membrana externa (OMPs), produzida por esses genes
(KNBL et al., 2001; MONROY et al., 2005). O operon aerobactina tambm
codificado pelo plasmdeo ColV em estirpes APEC O2 (LING et al., 2013).
Alm da codificao via plasmdeo, o gene iss tambm pode ser
codificado no cromossomo bacteriano. Ultimamente sabe-se que muitas cepas de
E.coli tem iss em seus cromossomos e sua seleo para os diferentes alelos iss
possibilita uma melhor deteco desse gene entre estirpes (JOHNSON et al.,
2008). O gene iss vem sendo isolado de papagaios com colibacilose (KNBL et
al., 2008), porm no h estudos a respeito do seu local de codificao.
Anlises das variantes allicas tornam possvel o estudo sobre a
evoluo iss e o conhecimento de suas variantes, afim de explorar a possibilidade
que esse gene e a protena codificada por ele so ferramentas teis para
preparao de vacinas (JOHNSON et al., 2008).
Um estudo piloto para produo de vacina contra a colibacilose em
aves baseado no gene iss mostrou bons resultados, em que galinhas imunizadas
com glutationa-S-transferase-Iss (GST-Iss) foram capazes de produzir anticorpos
contra GST-Iss e iss, alm de induzirem resposta imunoprotetora em desafios
com duas estirpes de APEC diferentes. A forte associao entre iss e APEC,
juntamente com a localizao de iss na membrana externa, possibilita estratgias
de uso desse gene em vacinas para controle de colibacilose (LYNNE et al., 2012).

2.6.3 Adesinas fimbriais

A maioria das estirpes de E.coli apresentam algum tipo de aderncia


(Figura 5). Um exemplo a intimina eae, responsvel pela ligao ntima entre a
bactria e o epitlio intestinal do hospedeiro (SILVEIRA et al., 2002). A sua
ausncia promove diminuio significativa na aderncia bacteriana, como em
algumas estirpes de STEP e EPEC, por exemplo (GIRARD, 2005).
14

FIGURA 5 Aderncia de E.coli O78


patognica para aves nas
clulas ciliadas da traquia,
aderncia ao muco secretado
pelas clulas secretrias de
muco da traquia. Giemsa
140X.
Fonte: FERREIRA & KNBL (2009).

Os genes de virulncia pap ou fmbria P (ROCHA et al., 2002; KNBL


et al., 2004) e sfa so fmbrias D+ manose resistentes na mediao de adeso da
E. coli para diferentes tecidos do hospedeiro. A presena dos genes pap e sfa
varia entre estirpes associadas a diferentes doenas. O gene pap encontrado
com maior frequncia em aves com sndrome na cabea inchada e doena
respiratria crnica, j o gene sfa mais comum em isolados de onfalites,
sugerindo assim, que esses genes possibilitam infeces extra-intestinais em
diferentes locais (KNBL et al., 2004).
A utilizao do carboidrato D+ manose permite classificar as fmbrias
em: manose sensveis, quando a hemaglutinao inibida pela presena do
carboidrato, e manose resistentes quando a hemaglutinao ocorre na presena
de manose. Estudos mostram que as adesinas manose sensveis (pili tipo 1 ou
tipo1 like) so responsveis pela colonizao de traquia e sacos areos durante
a fase inicial da doena, enquanto a colonizao de rgos internos e o
desenvolvimento de septicemias dependa da expresso de adesinas manose
resistentes (fmbria P) (FERREIRA & KNBL, 2009).
Mudanas no padro de adeso observadas na presena ou na
ausncia de D+manose sugerem associao de mais de um tipo de fmbria. A
adeso exclusivamente na ausncia de D+manose indica que o pili tipo 1 ou tipo
15

1 like, podem participar da patognese de certos patotipos (SILVEIRA et al.,


2002).
Cada variante do gene pap (papA, papC, papE, papF, etc)
responsvel por codificar diferentes subunidades das fmbrias, como o papA que
codifica o eixo principal da fmbria. Dentre as variantes do gene pap destaca-se o
papC por sua maior frequncia em APEC do que nos demais patotipos. Genes
pap no so essenciais para a patognese da APEC, porm podem desempenhar
um papel significativo nesse processo. No entanto, papA e APEC so
antigenicamente correlacionadas e provvel que esse gene proporcione uma
vantagem evolutiva pela aquisio de DNA estranho ou supresso de
informaes genticas existentes, resultando no desenvolvimento de novas
estirpes e at mesmo patotipos (KARIYAWASAM & NOLAN, 2011).
PapA, diferente dos genes papC e papG, isolado apenas de cepas
patognicas, no sendo encontrado em cepas comensais avcolas
(KARIYAWASAM et al., 2006). Estudos relacionados ao sequenciamento gentico
de papA em APEC, revelaram a possibilidade da presena de um transposon
Tn10 (resistncia a tetraciclina), possivelmente selecionado devido prtica
comum de utilizao desses antimicrobianos como promotores de crescimento e
na teraputica das aves. A incorporao de genes de resistncia antimicrobiana
ao genoma do operon pap pode trazer vantagens na sobrevivncia dessas
bactrias (KARIYAWASAM & NOLAN, 2011).
Alm das caractersticas decritas acima SZEMLAKO et al. (2013)
sugerem que pap com capacidade para causar resposta inflamatria grave podem
auxiliar na ultrapassagem de barreiras dos tecidos, possibilitando o acesso
corrente sangunea, causando bacteremia.

2.6.4 Adesinas afimbriais

O receptor de intimina Tir uma protena transportada atravs do


sistema de secreo tipo lll (SSTT) (Figura 6) para o citoplasma da clula
hospedeira, onde atua como receptor de eae, que expressa na superfcie
bacteriana, resultando em ntima ligao com a clula hospedeira. A
16

consequncia dessa interao uma mudana histopatolgica A/E (GYLES &


FAIRBROTHER, 2010).

FIGURA 6 (A) Esquema do sistema de secreo tipo III, aqui


apresentado com dois anis atravessando a membrana e a
agulha surgindo da superfcie da bactria. As protenas
efetoras e translocadoras esto estocadas. (B) Esquema do
SSTT em operao. As protenas translocadoras formam um
poro na membrana da clula alvo e as protenas efetoras so
translocadas para o citosol da clula alvo. (C) Microscopia
eletrnica da superfcie da bactria com agulhas do SSTT.
Fonte: TROISFONTAINES & CORNELIS (2005).

O gene tsh, codificado no plasmdeo ColV (DOZOIS et al., 2000)


responsvel pela sntese de protenas termo-sensveis com capacidade
hemaglutinante (GYLES & FAIRBROTHER, 2010) e auxilia nos estgios iniciais
de infeces em galinhas (DOZOIS et al., 2000; NGELEKA et al., 2002; ROCHA
et al., 2002;). O gene tsh tambm uns dos genes principais no desenvolvimento
de colibacilose em papagaios (KNBL et al., 2008).
Curli um apndice proteico encontrado na superfcie externa da
maioria das cepas de E.coli, codificado pelo gene crl (gene de filamento curli),
essencial para aderncia em superfcies biticas e abiticas, alm de participar da
formao de biofilme (WHITT & SALYERS, 2002). Este gene promove a ligao
17

entre o complexo principal de histocompatibilidade classe 1 (MHC-1), entre a


matriz extracelular, entre as protenas sricas e entre as clulas intestinais
(NGELEKA et al., 2002; WHITT & SALYERS, 2002).
NENNINGER et al. (2011) citaram que as variantes do gene curli, csgG
e csgE, agem em conjunto para proporcionar estabilidade na secreo de outras
variantes como; csgA, csgB e csgF. O gene csgE pode inibir a polimerizao de
csgA purificado nas fibras amilides, sugerindo que certas estirpes de E.coli
podem impedir a formao de amilide. Os autores acrescentaram, que cepas
que superexpressam csgG so sensveis Eritromicina, porm quando h
induo da expresso de csgE essas cepas se tornam novamente resistentes a
este antimicrobiano.
Em isolados de E. coli enteropatognicas de humanos com diarrria
pode-se encontrar modificaes na presena de variantes do gene curli, como
nos estudos feitos por HERNANDES et al. (2012), onde 97% dos isolados de
EPEC possuiam o gene csgD e apenas 19,7% apresentavam gene csgA, que
indica alta diversidade na sequencia de nucleotdeos deste ultimo gene.
SAIDENBERG et al. (2013) detectaram os genes iss, pap, iuc, hlyA e
tsh de E.coli isoladas de Mutum-do-Nordeste (Pauxi mitu), ave considerada em
extino, aparentemente sadios. Esses achados foram motivo de preocupao,
pois fatores de estresse, como: incio da poca de reproduo; doenas
concomitantes e manejo imprprio do ambiente e da criao podem desencadear
desequilbrios no organismo e assim conduzir a manifestao de colibacilose, que
pode ter resultados graves em uma espcie nativa ameaada de extino.

2.7 Toxinas

As toxinas produzidas pelas diferentes estirpes de E.coli tambm so


fatores importantes para patognese das enfermidades atribudas a essa bactria.
GYLES & FAIRBROTHER (2010) pontuam as enterotoxinas termo-estvel (STa,
STb), termo-estvel enteroagregativa (EAST-1) e termo-lbil (LT) como
promotoras de distrbios metablicos dos fluidos intestinais.
A STa induz acmulo de lquido na luz intestinal de camundongos
lactentes e leites (HIRSH, 2003; QUINN et al. 2005; GYLES & FAIRBROTHER,
18

2010), provocando diminuio e atrofia das vilosidades. J o STb inativado pela


presena da tripsina (GYLES & FAIRBROTHER, 2010) e afeta leites lactentes e
desmamados (HIRSH et al., 2003).
ARAGO et al. (2012), descrevem que a deteco de determinadas
toxinas, como STa isolada por eles, na maioria dos isolados de ETEC obtidos de
um surto de colibacilose em carneiros, possibilita a identificao do patotipo e
sugerem que esta toxina contribua para o desenvolvimento da enfermidade, at
mesmo em casos de ausncia das demais toxinas.
J a LT induz a secreo de fluidos atravs da estimulao de
prostaglandinas e citocinas no sistema nervoso entrico, possui efeitos
imunomoduladores potentes e ainda pode induzir a apoptose de leuccitos. O
subtipo LT l torna o entercito afetado, um hipersecretor de AMPc, provocando
secreo excessiva de eletrlitos e gua, causando desidratao, acidose
metablica e morte. Os mecanismos de LT 2 ainda so obscuros e necessitam
de maiores estudos (GYLES & FAIRBROTHER, 2010).
Stx so protenas citotxicas inibidoras da sntese proteica nas clulas
hospedeiras, semelhantes da toxina produzida por Shigela (HIRSH, 2003).
Elevados ndices de produo dessa toxina esto relacionados induo de
bacterifagos, como durante a ao dos antimicrobianos, que causam danos ao
DNA bacteriano ou na parede celular da bactria. Stx1 est envolvida na
regulao de ferro, presente em maior nmero nos ambientes de privao de
ferro. Stx2 geralmente esta associada doena do edema (ataque clulas
endoteliais) ou em outras enfermidades vinculadas a sunos (GYLES &
FAIRBROTHER, 2010).
Outras toxinas consideradas importantes so toxina de distino
citoletal (CDT), fator citotxico necrosante (CNF), hemolisinas e as
enterohemolisinas necrosantes (MEHDIPOUR et al., 2012). A CDT tem como
funo desencadear a parada do ciclo celular, induzindo a apoptose celular. J as
CNF so atribudas a diarreia e septicemia em bezerros (WHITT & SALYERS,
2002)
Pesquisas feitas para avaliar a ocorrncia e funcionalidade CNF e CDT
em E.coli isoladas de bezerros e ces apresentaram inmeras combinaes de
genes de virulncia e foi possvel associar a cistite demonstrada por alguns
19

animais, com a presena de CNF-1 correlacionada com papC, hlyA e sfa


(SALVARANI et al., 2012), sugerindo que combinaes de genes e dessa toxina
podem ser necessrias para o desenvolvimento da cistite. CNF e CDT foram as
toxinas mais detectadas de E.coli isoladas de carcaas de carneiros iranianos em
pesquisas de MEHDIPOUR et al. (2012), definindo a importncia dessas toxinas
em diferentes espcies.
O gene hly (alfa hemolisina), alm de lesionar as clulas hospedeiras,
suprime a produo de citocinas e interleucinas pela clula eucaritica, permitindo
que a bactria se estabelea no organismo hospedeiro. Cepas que no possuem
genes que promovem hemlise consequentemente no apresentam citotoxicidade
elevada e no so capazes de suprimir citocinas, dificultando assim sua
colonizao no hospedeiro (HILBERT et al., 2012). J a pesquisa feita com a
UPEC sugerem que a hly um gene de virulncia que proporciona a migrao do
trato urinrio para a corrente sangunea, causando septicemia (SZEMLAKO et al.,
2013).
CNF e hly so toxinas conhecidamente importantes no estabelecimento
de doenas em mamferos, porm no h dados aprofundados em relao as
aves. Alguns estudos associados a APEC sugeriram que essas toxinas atuam
como facilitador na transposio da barreira interespcies (KNBL el al., 2012).
As colicinas so protenas txicas produzidas e secretadas no meio
extracelular pelas E.coli e outras bactrias (WHITT & SALYERS, 2002). O ataque
s clulas alvo se d por despolarizao da membrana citoplasmtica, por
atividade citotxica contra cidos nuclicos citoplasmticos, ou por interferirem
com a biossntese de peptiodeoglicanos (WHITT & SALYERS, 2002; LLOUBES et
al., 2013).
Em estudos realizados em isolados de E.coli obtidos de papagaios com
colibacilose no Brasil, no foram identificados genes que codifiquem toxinas,
tornando o conhecimento mais aprofundado sobre esses e outros genes de
virulncia em psitacdeos relevante (KNBL et al., 2008).
20

3. CONSIDERAES FINAIS

Escherichia coli possui diferentes classificaes perante seus


sorogrupos e mecanismos de virulncia. Essa diversidade antignica e de
patotipos pode explicar a natureza da manifestao clinico-patolgica da maioria
das doenas causadas por ela.
Os inmeros genes de virulncia, que podem estar presentes em
isolados de E.coli, desenvolvem mecanismos complexos para invaso e
colonizao da clula hospedeira. Mais estudos so necessrios para
identificao e caracterizao destes genes, para proporcionar maior clareza do
desenvolvimento dos processos patognicos utilizados por essas bactrias para
infectar seus hospedeiros.
A facilidade de transmisso dos genes plasmidiais dificulta o controle
de determinadas bactrias e importante no aumento da patogenicidade de
estirpes. Genes de aquisio de ferro e genes de resistncia srrica so
essenciais para E. Coli, pois, facilitam a infeco do hospedeiro mesmo em
ambientes adversos. As adesinas so elementos essenciais nos estgios iniciais
da invaso ao organismo hospedeiro. A combinao de genes de virulncia com
diferentes finalidades tornam estirpes cada vem mais difcil o seu combate pelo
organismo hospedeiro e dificultam a ao dos antimicrobianos.
Alm disso, conhecimentos mais aprofundados a respeito da
diversidade antignica da E.coli podero, futuramente, contribuir para elaborao
de vacinas eficazes no controle de enfermidades atribudas a essa bactria.
21

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