I.

Introduccin

La tincin de Gram, tambin conocida como coloracin de Gram, es una tcnica de laboratorio
que se utiliza rutinariamente en los estudios microbiolgicos de las bacterias. Fue diseada por
Christian Gram, un cientfico dans, en el ao 1884. El objetivo de Gram era conseguir una
prueba con la que fuera posible diferenciar diferentes grupos de bacterias para as poder
estudiarlas y clasificarlas. La prueba result todo un xito y pronto se convirti en una tcnica
muy til no solo para el estudio de las bacterias, sino tambin para poder identificarlas
rpidamente en una infeccin y seleccionar el antibitico ms adecuado para tratarla.

La tcnica se basa en aplicar una serie de colorantes a una muestra de cualquier origen (esputo,
orina, pus, etctera) que supuestamente contenga bacterias no identificadas. Los colorantes
tien la pared de las bacterias de color morado y, tras unos minutos, se realiza un lavado del
colorante. Despus de eso puede que el colorante permanezca en la pared bacteriana o que se
haya ido. En el primer caso permanecera el color morado, y se tratara de bacterias Gram
positivas y, en el segundo, la pared tendra un color rosado, y seran Gram negativas.

Estos dos grupos de bacterias son los pilares en los que se basa la clasificacin de la amplia
mayora de las bacterias. Cada uno de los grupos responde de forma diferente a cada tipo de
antibiticos, por eso es una tcnica til para seleccionar el frmaco antimicrobiano inicial ante
una infeccin. Hay que tener en cuenta que en ciertas situaciones (como la sepsis) es muy
importante iniciar un tratamiento antibitico adecuado de forma precoz, por eso la tincin de
Gram se pide de urgencia en muchas ocasiones.

La tincin de Gram tambin tiene ciertas limitaciones. Algunas bacterias no tienen pared, como
por ejemplo las Chlamidias, y no se podrn identificar, al igual que los virus. En esos casos la
tincin no colorear ningn germen. Otro aspecto negativo de la prueba es que no puede
identificar el tipo exacto de bacteria responsable de la infeccin. Para ello es necesario realizar
un cultivo microbiolgico que se acompaa siempre de un antibiograma para estudiar de forma
exacta el antibitico ms efectivo.
II. FUNDAMENTO

Las bacterias Gram negativas pierden un colorante (el cristal violeta) con mayor facilidad que las
Gram positivas.
La menor cantidad de mucopptido de las paredes de las bacterias Gram negativas.

DIFERENCIA DE COLOR
Cantidades de etanol a las clulas teidas con cristal violeta.
El citoplasma de las clulas que han perdido el cristal violeta se tien con otro colorante
(safranina). La diferencia de color se relaciona con el tipo de pared bacteriano:
clulas de color violeta (bacterias de pared Gram positivas)
Clulas de color rosa (bacterias de pared Gram negativa).

COLORANTES
Cristal violeta
El cristal violeta es bsico (se une a componentes celulares de carga negativa). Atraviesa la pared
celular y se acumula en el citoplasma.

La pared de Gram negativas debe su rigidez a una capa de murena ms delgada, a travs de la
cual el alcohol extrae el cristal violeta de estas clulas.
Cuando se aade etanol a una mezcla de clulas Gram positivas y Gram negativas teidas con
cristal violeta, las clulas Gram positivas quedan teidas de violeta.

DECOLORACION
El colorante utilizado pone de manifiesto diferencias entre clulas bacterianas o entre partes de
una misma clula.
DIFERENCIACION
todas las clulas sin pared (como las animales) pierden fcilmente el cristal violeta (se vern de
color rosa).
Todas las clulas con pared gruesa (como las de hongos) se vern de color violeta.
La correlacin entre el color y el tipo de pared solo tiene sentido con clulas bacterianas.

1. CRISTAL VIOLETA
2. LUGOL
3. ALCOHOL ACETONA
4. SAFRANINA
III. PRODCEDIMIENTOS
Muestra de orina
Recoger muestra de orina en un tubo de ensayo (10ml).
Centrifugar por 5 a 2,500 rpm
Decantar el sobrenadante y dejar aproximadamente 500 ul de sedimiento
Colocar una gota en una porta objeto y cubrir con una laminilla cubre objeto.
Observar el microscopio

MATERIALES:
Tubos de ensayo 13x100
Lamina porta objeto
Laminillas cubre objeto
Centrifuga de tubos
Microscopio
Mechero

COLORANTES
violeta de genciana
lugol
Alcohol acetona
Safranina
TINCIN DE GRAM
IV. Conclusin

Logramos observar las bacterias de Gram positiva y Gram negativa de

orina.

En esta experiencia pudimos observar que con la de tincin de Gram (

diferencial) facilita la diferencia de una bacteria gran positiva y
Gram negativa realizando cada uno de los pasos fundamentales que nos
facilitan tener un buen resultad teniendo en cuenta que para que se de
este tipo de tincin la pared bacteriana de peptidoglucano de las
bacterias juega un papel importante ya que esta nos permite diferenciar
el tipo de bacteria al momento de teir la clula utilizadas en el laboratorio
ya que en el momento de teir su estructura gruesa
o delgada de la pared permite que la clula quede incolora o con
color.
V. ANEXOS

MECHERO
MECHEROS

PORTAOBJETOS

MUESTRA DE ORINA

CENTRIFUGA
MICROSCOPIO

COLORANTES
VII. BILIOGRAFIA

http://www.webconsultas.com/pruebas-medicas/tincion-de-gram-13399.

https://prezi.com/f2avau_7kkyn/fundamento-de-la-coloracion-de-gram/.

http://laboratoriodemicrobiologia.weebly.com/conclusion-y-fotos3.html.

http://campus.usal.es/~micromed/Practicas_odontologia/unidades/labv/L
abMicro/Diag_directo.html