FACTORES QUE AFECTAN LA FLUORECENCIA

INTRODUCCIN
La fluorescencia es un proceso de emisin en el cual las molculas son excitadas por la absorcin
de radiacin electromagntica. Las especies excitadas se relajan al estado fundamental, liberando
su exceso de energa en forma de fotones. Una de las caractersticas ms atractivas de los
mtodos de fluorescencia es su sensibilidad inherente, la cual es , con frecuencia, de uno a tres
ordenes de magnitud mejor que las de la Espectroscopa de absorcin. No obstante, los mtodos
de fluorescencia se aplican mucho menos que los mtodos de absorcin debido al nmero
relativamente limitado de sistemas qumicos que se pueden hacer fluorescer.

FACTORES QUE AFECTAN A LA FLUORECENCIA

Del compuesto:
1.- Rendimiento cuntico: El rendimiento cuntico o la eficacia cuntica de la fluorescencia es
simplemente la relacin entre el nmero de molculas que emiten fluorescencia respecto al
nmero total de molculas excitadas. Las molculas altamente fluorescentes, por ejemplo, la
fluoresceina, tienen eficiencias cunticas que, en ciertas condiciones, se aproximan a la unidad.
Las especies no fluorescentes tienen eficiencias que son prcticamente cero.

2.- Estructura: La fluorescencia ms intensa y la ms til es la que presentan los compuestos que
contienen grupos funcionales aromticos. Los compuestos que contienen estructuras alifticas y
alicclicas de carbonilo o estructuras con dobles enlaces muy conjugados pueden presentar
tambin fluorescencia. La mayora de los hidrocarburos aromticos no sustituidos son
fluorescentes en disolucin, la eficacia cuntica aumenta con el nmero de anillos y con su grado
de conjugacin. La sustitucin en un anillo aromtico causa desplazamientos en la longitud de
onda de absorcin mxima y los cambios correspondientes en los picos de fluorescencia. Adems,
la sustitucin afecta frecuentemente la eficiencia de la fluorescencia como se demuestra en la
siguiente TABLA
Del entorno qumico
1. Disolvente

2. Temperatura: La eficacia cuntica de la fluorescencia disminuye en muchas molculas con

el aumento de la temperatura, ya que el aumento de la frecuencia de las colisiones a temperatura
elevada hace aumentar la probabilidad de desactivacin no adiante ( conversin externa ). Una
disminucin en la viscosidad del disolvente tambin aumenta laprobabilidad de conversin externa
y produce el mismo resultado.

3. Efecto del pH: La fluorescencia de un compuesto aromtico con sustituyentes cidos o

bsicos en el anillo depende normalmente del pH. Tanto la longitud de onda como la intensidad de
emisin son probablemente diferentes para la forma ionizada y no ionizada del compuesto. Por lo
tanto ser muy frecuente en los mtodos fluorimtricos el control estricto del pH.

4. Presencia de O2

5. Efecto de la concentracin: La potencia de la radiacin fluorescente F es proporcional a la

potencia radiante del haz de excitacin que es absorbido por el sistema.
F = K' (P0 - P)
donde P0 es la potencia del haz incidente sobre la disolucin y P es su potencia
despus de atravesar la longitud b del medio. La constante K' depende de la eficacia cuntica del
proceso de fluorescencia. Con objeto de relacionar F con la concentracin c escribimos la ley de
Beer as:

Sustituyendo nos queda

Si desarrollamos el trmino exponencial como una serie de Maclaurin ser

Siempre que 2'303ebc < 0'05 podemos escribir que,

F = K'P0 2'303eebc
y si P0 se mantiene constante,

F = Kc

Cuando c es suficientemente elevada como para que la absorbancia multiplicada por '303 sea
mayor que 0'05, los trminos de mayor orden de la expresin anterior no son despreciables y la
linealidad se pierde. Este efecto es un resultado de autoapagamiento, en el cual las molculas del
analito absorben la fluorescencia producida por otras molculas de analito.