UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA

FACULTAD DE INGENIERA
E.A.P. INGENIERA AGROINDUSTRIAL

INFORME

TEMA: ANALISIS INSTRUMENTAL

INTEGRANTES: LOREO JIMNEZ ESTRELLA

CURSO: ANLISIS INSTRUMENTAL

DOCENTE: VCTOR CASTRO

Ciclo: VI

NUEVO CHIMBOTE-2017
 I. INTRODUCCIN

El estudio a nivel bioqumico de cualquier biomolcula requiere la utilizacin de

tcnicas analticas que permitan su determinacin cualitativa y cuantitativa, as
como su caracterizacin fsico-qumica y biolgica. Uno de los mtodos ms
sencillos, accesibles, tiles y utilizados es la espectroscopa, en general, y la
espectroscopa ultravioleta-visible, en particular. Se pueden identificar y
cuantificar biomolculas en solucin y en muestras biolgicas, con el empleo de
reactivos especficos que reaccionan con el compuesto a analizar y forman un
producto coloreado que permite detectarlo en muestras complejas. El
fundamento de la espectroscopa se debe a la capacidad de las molculas para
absorber radiaciones, entre ellas las radiaciones dentro del espectro UV- visible.
Las longitudes de onda de las radiaciones que una molcula puede absorber y
la eficiencia con la que se absorben dependen de la estructura atmica y de las
condiciones del medio (pH, temperatura, fuerza inica, constante dielctrica), por
lo que dicha tcnica constituye un valioso instrumento para la determinacin y
caracterizacin de biomolculas. Las molculas pueden absorber energa
luminosa y almacenarla en forma de energa interna. Esto permite poner en
funcionamiento ciclos vitales como la fotosntesis en plantas y bacterias. Cuando
la luz (considerada como energa) es absorbida por una molcula se origina un
salto desde un estado energtico basal o fundamental, E1, a un estado de mayor
energa (estado excitado), E2. Y slo se absorber la energa que permita el
salto al estado excitado. Cada molcula tiene una serie de estados excitados (o
bandas) que la distingue del resto de molculas. Como consecuencia, la
absorcin que a distintas longitudes de onda presenta una molcula -esto es, su
espectro de absorcin- constituye una sea de identidad de la misma. Por ltimo,
la molcula en forma excitada libera la energa absorbida hasta el estado
energtico fundamental.

Figura 1.

Diagrama de niveles de energa en una molcula.

La absorcin de energa luminosa hace que la
molcula pase desde un E2 - E1 = h estado
fundamental (E1) a otro excitado (E2).
Posteriormente la molcula relaja su energa
mediante distintos mecanismos (vibracin,
rotacin, etc.)
En espectroscopa el trmino luz no slo se aplica a la forma visible de radiacin
electromagntica, sino tambin a las formas UV e IR, que son invisibles. En
espectofotometra de absorbancia se utilizan las regiones del ultravioleta (UV
cercano, de 195-400 nm) y el visible (400-780 nm).

La regin UV se define como el rango de longitudes de onda de 195 a 400 nm.

Es una regin de energa muy alta. Provoca dao al ojo humano, as como
quemadura comn. Los compuestos con dobles enlaces aislados, triples
enlaces, enlaces peptdicos, sistemas aromticos, grupos carbonilos y otros
heterotomos tienen su mxima absorbancia en la regin UV, por lo que sta es
muy importante para la determinacin cualitativa y cuantitativa de compuestos
orgnicos. Diversos factores -como pH, concentracin de sal y el disolvente- que
alteran la carga de las molculas, provocan desplazamientos de los espectros
UV. La fuente de radiacin ultravioleta es una lmpara de deuterio. En la regin
visible apreciamos el color visible de una solucin y que corresponde a las
longitudes de onda de luz que transmite, no que absorbe. El color que absorbe
es el complementario del color que transmite. Por tanto, para realizar mediciones
de absorcin es necesario utilizar la longitud de onda en la que absorbe luz la
solucin coloreada. La fuente de radiacin visible suele ser una lmpara de
tungsteno y no proporciona suficiente energa por debajo de 320 nm.

1.1. Transmitancia y Absorbancia

Cuando un rayo de luz de una determinada longitud de onda Io It de
intensidad Io incide perpendicularmente sobre una disolucin de un
compuesto qumico que absorbe luz o cromforo, el compuesto absorber
una parte de la radiacin incidente (Ia) y dejar pasar el resto (It), de forma
que se cumple: Io = Ia + It
La transmitancia (T) de una sustancia en solucin es la relacin entre la
cantidad de luz transmitida que llega al detector una vez que ha atravesado
la muestra, It, y la cantidad de luz que incidi sobre ella, Io, y se representa
normalmente en tanto por ciento:
 % T = It/Io x 100
La transmitancia nos da una medida fsica de la relacin de intensidad
incidente y transmitida al pasar por la muestra. La relacin entre %T y la
concentracin no es lineal, pero asume una relacin logartmica inversa.
La absorbancia (A) es un concepto ms relacionado con la muestra puesto
que nos indica la cantidad de luz absorbida por la misma, y se define como
el A = log 1/T = -log T = -log It/ Io. logaritmo de 1/T, en consecuencia: Cuando
la intensidad incidente y transmitida son iguales (Io = It), la transmitancia es
del 100% e indica que la muestra no absorbe a una determinada longitud de
onda, y entonces A vale log 1 = 0. 3
La cantidad de luz absorbida depender de la distancia que atraviesa la luz
a travs de la solucin del cromforo y de la concentracin de ste.
1.2. Ley de Lambert-Beer
Esta ley expresa la relacin entre absorbancia de luz monocromtica (de
longitud de onda fija) y concentracin de un cromforo en solucin:
A = log I/Io = cl
La absorbancia de una solucin es directamente proporcional a su
concentracin a mayor nmero de molculas mayor interaccin de la luz
con ellas-; tambin depende de la distancia que recorre la luz por la solucin
a igual concentracin, cuanto mayor distancia recorre la luz por la muestra
ms molculas se encontrar-; y por ltimo, depende de , una constante de
proporcionalidad -denominada coeficiente de extincin- que es especfica de
cada cromforo. Como A es adimensional, las dimensiones de dependen
de las de c y l. La segunda magnitud (l) se expresa siempre en cm mientras
que la primera (c) se hace, siempre que sea posible, en M, con lo que las
dimensiones de resultan ser M-1cm-1. Este coeficiente as expresado, en
trminos de unidades de concentracin molar (o un submltiplo apropiado),
se denomina coeficiente de extincin molar (M). Cuando, por desconocerse
el peso molecular del soluto, la concentracin de la disolucin se expresa en
otras unidades distintas de M, por ejemplo gL-1, las dimensiones de
resultan ser distintas, por ejemplo g-1Lcm-1, y al coeficiente as expresado
se denomina coeficiente de extincin especfico (s).
La ley de Lambert-Beer se cumple para soluciones diluidas; para valores de
c altos, vara con la concentracin, debido a fenmenos de dispersin de la
luz, agregacin de molculas, cambios del medio, etc.
1.3. Instrumentacin para la medicin de absorbancias de la luz visible y
ultravioleta: espectrofotmetro UV-visible
La medicin de absorbancia de la luz por las molculas se realiza en unos
aparatos llamados espectrofotmetros. Aunque pueden variar en diseo, en
especial con la incorporacin de ordenadores para el anlisis de datos, todos
los espectrofotmetros constan, segn se indica en la figura, de:
1. Una fuente de energa radiante: lmpara de deuterio y tungsteno.
2. Un monocromador para la seleccin de radiaciones de una determinada
longitud de onda: filtros, prismas, redes de difraccin.
3. Un compartimento donde se aloja un recipiente transparente (cubetas o
tubos) que contenga la muestra Pueden ser de vidrio, cuarzo o plstico
transparente. Para medir en UV se deben usar las de cuarzo o slice fundido,
 porque el vidrio no transmite la radiacin UV. 4. Un detector de luz y un
amplificador convertidor de las seales luminosas en seales elctricas.
5. Un registrador o sistema de lectura de datos.
Desde el punto de vista operativo, el primer paso es seleccionar la fuente de
luz y longitud de onda a la que se va a realizar la medida. Hay
espectrofotmetros de un solo haz (con una sola celdilla para alojar la cubeta
con la muestra) y de doble haz (con dos celdillas para dos cubetas); en
nuestro caso se trabajar con los de un solo haz. Se mide primero la
absorbancia del disolvente (conocido como blanco) y al que se le asigna el
valor de cero mediante el ajuste del mando, de forma que la intensidad
incidente y transmitida sean iguales (Io = It), y por tanto la absorbancia es
cero. A continuacin, se pone en la celdilla la cubeta con la muestra y se lee
la absorbancia de sta.

1.4 Obtencin de un espectro de absorcin

El espectro de absorcin es una representacin grfica que indica cantidad de
luz absorbida () a diferentes valores de . A partir de una solucin diluida de un
compuesto, cuya absorbancia mxima entra dentro del rango de medida del
espectrofotmetro, se ver el valor de absorbancia a diferentes longitudes de
onda frente a un blanco que contenga el disolvente de la solucin de la muestra
a caracterizar. A partir del espectro de absorcin se obtendr el valor de al que
el compuesto presenta la mayor absorbancia (max). Dicho se utilizar a la
hora de hacer determinaciones cualitativas y cuantitativas del compuesto. El
espectro de absorcin de un cromforo depende, fundamentalmente, de la
estructura qumica de la molcula.
 II. OBEJTIVOS:

Conocer el manejo des espectrofotmetro UV visible.

Construir curvas estndar.
Manejar adecuadamente los instrumentos y materiales de
medidas volumtricas.

III. MATERIALS Y MTODOS:

Espectrofotometra:

DETERMINACIN DE LOS ESPECTROS DE ABSORCIN: Segn

la tabla, determinar los espectros de absorcin de cada una
de las soluciones de colorantes (azul de metileno y safranina),
leyendo las absorbancias en cada una de las longitudes de
onda del espectrofotmetro, llevando el equipo a cero con agua
destilada(calibrarlo).
Nuestro grupo trabajo con el reactivo: acido oxlico el cual nos dio los
siguientes datos:

Colorantes 524 nm
L1 L2 Absorbancia
0.0401 0.0112
0.0289
0.0312 0.0238
0.0074
0.0423 0.0359
0.0064
0.0462 0.0471
0.0009
0-0477 0.0634
0.0157

Con estos datos construir una grfica para cada espectro

de absorcin, colocando en las ordenadas las absorbancias y en
las abscisas las longitudes de onda. Debe indicar cul es la
longitud de onda de mxima absorbancia para cada una de las
soluciones.

PREPARACIN DE UNA CURVA DE CALIBRACIN: Preparar 5

diluciones de la solucin de 1:2, 1:4, 1:6, 1:8 y 1:10, utilizando
agua destilada como diluyente. Leer cada dilucin a la
 longitud de onda seleccionada en la experiencia
anterior. Graficar absorbancia vs. concentracin.

IV. RESULTADOS

EXPERIENCIA 1:
Al tubo de ensayo (solucin patrn)

Y este es colocado
en la cubeta

Luego es llevada al
espectrofotmetro para la
medicin respectiva

EXPERIENCIA 2:

Solucin Patrn
DATOS OBTENIDOS

Colorantes 524 nm
Concentracin L1 L2 Absorbancia
2 mg 0.0401 0.0112
0.0289
4 mg 0.0312 0.0238
0.0074
6 mg 0.0423 0.0359
0.0064
8 mg 0.0462 0.0471
0.0009
10 mg 0-0477 0.0634
0.0157
 Sample-1
3

2
Absorbance(Abs)

-1
200 300 400 500 600 700 800 900 1000 1100
Wavelength(nm)
 Concentracin absorbancia
2 0.0209
4 0.0258
6 0.0359
8 0.0471
10 0.0527

Chart Title
0.06
y = 0.0042x + 0.011
0.05 R = 0.9833

0.04
Axis Title

0.03
Series1
0.02 Linear (Series1)

0.01

0
0 2 4 6 8 10 12
Axis Title
V. CONCLUSIONES

El conocer el adecuado uso del espectrofotmetro permiti obtener

en el laboratorio resultados con alta calidad analtica en las
mediciones que son emitidas por ste.
Pudimos observar a travs del espectrofotmetro como es que
varan las absorbancias con diferentes longitudes de onda.
Hemos concluido que a mayor concentracin de soluto mayor va
ser la absorcin de dicha solucin.

VI. BIBLIOGRAFIA

Espectrofometra: Espectros de absorcin y cuantificacin

colorimtrica de
biomolculas.http://www.uco.es/organiza/departamentos/bioquimi
ca-biol- mol/pdfs/08_
ESPECTROFOTOMETR%C3%8DA.pdf
[2]http://es.scribd.com/doc/8510425/Tecnica-de-bilirrubin
[3]http://www.biosimex.com.mx/pdf/insertos/QUIMICA%20CLINIC
A/11515%20115 11%2011510.pdf
http://es.calameo.com/read/004518311fab360583904
https://es.scribd.com/upload-
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