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Resumo: A candidase vulvovaginal uma doena inflamatria causada por leveduras pato-
gnicas sendo a Candida albicans responsvel por cerca de 90% das infeces humanas. A
espcie Rosmarinus officinalis L., popularmente chamada alecrim, possui inmeras proprie-
dades, dentre elas antifngica. O presente trabalho teve por objetivo obter o extrato das folhas
de alecrim, realizar determinaes fitoqumicas qualitativas, desenvolver um sabonete lquido
ntimo e avaliar a ao do referido extrato e do sabonete ntimo contendo extrato frente
Candida albicans. O extrato hidroalcolico das folhas de Rosmarinus officinalis L. foi prepa-
rado por macerao exaustiva e aps foi utilizado no preparo de um sabonete lquido (F1).
Realizou-se tambm o preparo de uma formulao sem o extrato como branco (F2) para com-
parao. As determinaes fitoqumicas qualitativas foram realizadas para verificao da pre-
sena de taninos e flavonides. A atividade antimicrobiana foi avaliada pelo mtodo de difu-
so de gar (tcnica do poo). As anlises fitoqumicas realizadas no extrato de alecrim mos-
traram a presena de flavonides e taninos. Verificou-se que as duas formulaes provocaram
inibio do crescimento microbiano sendo maior o dimetro do halo da formulao contendo
o extrato alcolico de Rosmarinus officinalis L., evidenciando assim sua eficcia.
1 INTRODUO
1
Aluna do 8 perodo do curso de Farmcia do Centro Universitrio de Patos de Minas, formanda de 2012.
2
Professora do UNIPAM, orientadora do trabalho.
3
Professora do UNIPAM, co-orientadora do trabalho.
2
Em estudos foi observada alta sensibilidade de bactrias Gram positivas aos leos
essenciais de alecrim (borneol 26,5%, -terpineno 15,6%, -pineno 12,7%), incluindo Sta-
phylococcus aureus, Micrococcus sp. e Sarcina sp., bem como a levedura Saccharomyces
cerevisiae, porm este se mostrou pouco efetivo contra as bactrias gram negativas Pseudo-
monas fluorences, Escherichia coli e Serratia marcescens (PORTE; GODOY, 2001).
A candidase vulvovaginal (CVV) uma doena inflamatria causada por levedu-
ras patognicas. O gnero Candida apresenta diversas espcies, porm a Candida albicans a
responsvel por cerca de 90% das infeces humanas (BASTOS et al., 2003). Quando as con-
dies do hospedeiro mudam por diversos fatores, tais como diabetes, gravidez, tratamentos
prolongados com antibiticos ou corticosterides, desnutrio, baixa das defesas do indiv-
duo, uso de prtese dentria ou cardaca, contato com enfermos de candidase, at ento sa-
prfita, ou seja, faz parte da microbiota normal, torna-se patognica, multiplica-se, invade os
tecidos do hospedeiro disseminando-se at chegar a tornar-se sistmica (GARCIA; SIQUEI-
RA, 1988).
A Candida albicans existe como comensal no homem. um fungo dimorfo,
gram-positivo, que apresenta proliferao tanto em levedo como filamentosa. Estima-se que
25% de todas as mulheres adultas no mundo sero acometidas de candidase vaginal em al-
gum momento de suas vidas, sendo muitas vezes recorrente. A colonizao vaginal por Can-
dida albicans comum em mulheres no menacme (perodo de vida da mulher entre a menarca
e a menopausa), e em metade das mulheres encontrado como habitante da microbiota nor-
mal da vagina (BASTOS et al., 2003).
O presente trabalho teve por objetivo obter e avaliar o extrato de alecrim frente
Candida albicans, desenvolver o sabonete lquido ntimo e realizar determinaes fitoqumi-
cas qualitativas.
A realizao desse estudo trar grandes benefcios sade da populao como co-
nhecimento e comprovao das atividades antifngicas do alecrim, reduo do uso de medi-
camentos antifngicos, desenvolvimento de um sabonete lquido ntimo para combate da can-
didase vulvovaginal com maior potencial de estabilidade.
Quando se leva em considerao a resistncia das leveduras pertencentes ao gne-
ro Candida em relao aos antifngicos atualmente usados, pode-se inferir que a pesquisa de
busca de novos compostos antifngicos de origem vegetal mostra-se de relevante importncia.
possvel observar o potencial antibitico que os produtos vegetais possuem, e por conse-
qncia, a real possibilidade de aplicao destes produtos na preveno e tratamento de doen-
as infecciosas de origem fngica. Porm, necessrio a realizao de estudos de cunho toxi-
3
colgico e clnico como suporte de segurana ao uso destes produtos como frmacos (LIMA,
et al., 2006).
Segundo o mesmo autor citado acima, o interesse em incorporar o extrato vegetal
a uma formulao de sabonete lquido est na preocupao de resistncia microbiana, pois o
nmero de microrganismos resistentes vem aumentando muito e o nmero de infeces hospi-
talares torna-se preocupante.
2 REFERENCIAL TERICO
2.3 FUNGOS
2.3.1 Antifngicos
responsveis pela invaso da mucosa vaginal ocasionando o prurido (VAL; ALMEIDA FI-
LHO, 2001).
O termo Candida refere-se ao gnero sendo a espcie mais comum a albicans,
responsvel por 85% dos casos de candidase. As espcies glabrata e tropicalis correspondem
a 10 a 15%. Outras espcies menos comuns so a krusei e a lusitnia (VAL; ALMEIDA FI-
LHO, 2001).
Em mulheres da raa negra, h um maior isolamento de C. albicans. Provavel-
mente um dos fatores a condio socioeconmica, pois condies precrias de higiene e
carncia nutricional favorecem o desenvolvimento da levedura (GARCIA; SIQUEIRA, 1988).
Clinicamente, a candidase pode ser cutnea, mucosa, cutaneomucosa ou visceral.
O microrganismo cresce melhor em superfcies quentes e midas, causando frequentemente
vaginite, dermatite das fraldas e candidase oral. Essas infeces so as manifestaes usuais
da doena e, embora normalmente no apresentem ameaa vida, representam um problema
de considervel importncia social e econmica (LVARES, 2007).
Segundo o mesmo autor, formas cutaneomucosas severas so menos comuns, en-
caixando-se em duas grandes categorias como a candidase cutaneomucosa crnica e candid-
ase vaginal crnica. A primeira est geralmente associada ao enfraquecimento da resposta
imune mediada por clulas, como o observado em portadores do vrus da imunodeficincia
humana o HIV, e indivduos com defeitos imunolgicos hereditrios ou iatrognicos. A se-
gunda categoria desencadeada por fatores de risco, como gestao, uso de contraceptivos
orais, terapia com antibiticos, diabetes mellitus (DM), entre outros. A candidase dissemina-
da intensa est associada neutropenia secundria a doena granulomatosa crnica, leucemia,
terapia antineoplsica ou imunossupresso aps transplante.
O ph da vagina varia entre 3,8 e 4,2. A microbiota vaginal normal rica em lactobaci-
los produtores de perxido conhecidos como bacilos de Dderlein, os quais formam cido
ltico a partir do glicognio, cuja produo e secreo so estimuladas pelos estrognios. Esse
mecanismo propicia uma acidez adequada do ambiente vaginal em torno de 4,5, o que dificul-
ta a proliferao da maioria dos patgenos. A Candida exceo, pois prolifera em ambiente
cido (VAL; ALMEIDA FILHO, 2001; GARCIA, et al.,2009).
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2.6 VULVOVAGINITE
C. tropicalis e C. glabrata, entre outras, tem crescido de maneira importante nos ltimos
anos. Na dcada de 70 as espcies no-albicans no eram encontradas em mais do que 5-10%
dos casos de infeco genital, porm na dcada de 80 os trabalhos mostravam um crescimento
desta taxa para 15 a 25%.
O aumento da incidncia dessas espcies tem importncia e relevncia, na medida
em que apresentam sintomatologia mais branda do que a C. albicans e um espectro diferente
de resistncia aos tratamentos antifngicos (ALEIXO NETO et al., 1999).
A candidase vulvovaginal foi descrita pela primeira vez na dcada de 49, por
Wilkinson, que estabeleceu uma relao entre a existncia de fungos na vagina e o apareci-
mento de vaginite. A partir desse momento, os conhecimentos foram evoluindo progressiva-
mente.
A candidase vulvovaginal ocasionada pelo crescimento anormal de fungos do
tipo leveduras na mucosa do trato genital feminino. Trata-se de uma infeco de vulva e vagi-
na, causada por leveduras comensais que habitam a vagina bem como as mucosas digestiva e
respiratria. Essas leveduras podem-se tornar patognicas quando o stio de colonizao do
hospedeiro passa a ser favorvel ao seu desenvolvimento (LVARES et al.,2007).
As manifestaes clnicas so: prurido, ardor, dispareunia e eliminao de um cor-
rimento vaginal em grumos, semelhante nata de leite. Com frequncia, a vulva e a vagina
encontram-se edemaciadas e hiperemiadas, algumas vezes acompanhadas de ardor ao urinar e
sensao de queimadura, as leses podem-se estender por perneo, regio perianal e inguinal.
O corrimento, geralmente branco, espesso e inodoro, tem aspecto farinceo nas vestes a seco.
Em alguns casos, aparecem nas paredes vaginais e colo uterino pequenos pontos branco-
amarelados. Os sintomas se intensificam no perodo pr-menstrual, quando a acidez vaginal
aumenta (LVARES et al.,2007).
A importncia do conhecimento acerca da vulvovaginite causada por Candida si-
tua-se principalmente em relao sua frequncia e sua recorrncia, pois esta pode ainda
apresentar sob a forma de candidase vaginal recorrente ou recidivante, definida como infec-
o por Candida caracterizada por quatro ou mais episdios em perodo de um ano. Ocorre
quando o fungo no completamente eliminado da vagina permanecendo baixas concentra-
es de microrganismos. Esta forma relaciona-se com fatores inerentes ao hospedeiro imuno-
lgicos ou no, e no com a virulncia do microrganismo.
J o termo reinfeco considerado quando a Candida completamente erradica-
da da vagina e novamente introduzida atravs da via sexual ou do trato gastrointestinal.
(VAL; ALMEIDA FILHO, 2001).
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2.7 TRATAMENTO
3 MATERIAL E MTODOS
O material fresco foi lavado em gua corrente, sanitizado com gua sanitria a
10% por 15 minutos e submetido secagem por aproximadamente 24 horas temperatura
ambiente (sem presena de luz) sobre bancadas previamente limpas, sanitizadas e revestidas
com papel absorvente. Aps este processo, o material vegetal foi pesado (21,398g) e acondi-
cionado em recipientes com paredes escuras e vedado.
utilizados 20% da planta seca (21,398g) e 80% de soluo hidroalcolica a 70% em lcool v/v
(85,59mL). Utilizou-se processo de macerao exaustiva durante sete dias agitando-se o mate-
rial diariamente. Aps, foi realizada filtrao em papel filtro e o solvente foi eliminado utili-
zando-se um evaporador rotatrio (a 35C) do Laboratrio de Qumica Orgnica. O extrato
foi levado capela para trmino de secagem, e acondicionado em geladeira a -4C(ALVES et
al, 2008; SILVA, 2008).
digesto papica de farinha de soja, 6,0g/L de dextrose, 2,5g/L de cloreto de sdio, 0,5g/L de
glicolato sdico, 0,25g/L de Lcistina, 0,1g/L de sulfito de sdio e 0,7g/L de gar.
O meio de cultura foi preparado a partir de uma base desidratada disponvel co-
mercialmente (Diagnostic Thioglycollate Medium Himedia, Lote XK046, Cd. M191).
Foram dissolvidos 30 gramas da base desidratada em 1000 mL de gua destilada.
Em seguida, a mistura foi aquecida at completa dissoluo do meio. O meio dissolvido foi
acondicionado em um recipiente de vidro autoclavvel e esterilizado em autoclave a uma
presso de 1 atm e 121C de temperatura por 15 minutos. Aps a esterilizao o meio foi res-
friado a temperatura ambiente e armazenado em geladeira (de 2 a 8C) antes do uso. O pH do
meio aps o preparo (a 25C) era igual a 7,0.
que foi removido assepticamente com uma pina flambada e resfriada, e em seguida transferi-
da para um tubo de ensaio de vidro contendo 3mL de caldo tioglicolato.
Logo, a cultura foi incubada, a 35 C, at alcanar a turbidez de uma soluo pa-
dro de McFarland 0,5. Isso resultou numa suspenso contendo aproximadamente de 1 a 2
vezes 108 UFC/mL. Para realizao dessa operao a olho nu, comparouse o tubo de inculo
com a soluo padro McFarland de 0,5.
Foram umedecidas reas diferentes de uma tira de papel de filtro com extrato
hidroalcolico e foi colocado sobre uma das regies umedecidas uma gota de soluo
alcolica de cloreto de alumnio (AlCl3) 5% e aps, esperou-se alguns minutos para secar.
Foi observado a intensificao de fluorescncia das duas reas sob luz ultravioleta de ondas
longas (366 nm).
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Para a extrao dos taninos foram colocados 0,5g do extrato em um bquer de 100mL
e adicionados cerca de 20 mL de gua e levado para aquecer em chapa aquecedora por 15
minutos e filtrado em seguida em papel filtro. Para as reaes de identificao foram
executados diferentes testes.
Tabela 2- Sabonete lquido com a presena (F1) e sem o extrato (F2) de R. officinalis L..
Constituintes F1 (%) F2 (%) Funes
Lauril ter sulfato de sdio 12,5 12,5 Tensoativo
Dietanolamida de cido graxo de 1,5 1,5 Sobreengordurante e estabilizante
coco de espuma
Cocoamidopropilbetana 1,5 1,5 Tensoativo secundrio anftero
Glicerina 1,5 1,5 Umectante
EDTA 0,05 0,05 Quelante
Chemynol 0,25 0,25 Conservante
Cloreto de sdio 2,1 2,1 Espessante
Essncia 0,025 0,025 Essncia
Corante - - Corante
Extrato de alecrim 5% - Ativo: ao antifngica
Soluo de cido ctrico qs pH 4,0 pH 4,0 Acidulante
gua purificada qsp 100,0 100,0 Veculo
Fonte: Dados obtidos durante o experimento.
4 RESULTADOS E DISCUSSO
O O O
OH
O O O
Flavanonas Flavonas Flavonis
Fotografia 2- Foto da reao com hidrxidos alcalinos, reao de Shinoda (da cianidina)
e reao com cloreto frrico respectivamente.
Fotografia 4- Foto da reao com gelatina, sais de ferro, vanilina e acetato de chumbo
respectivamente.
zindo, assim, etapas qumicas e, consequentemente, custos financeiros. Isso viabiliza uma
possvel utilizao como fitoterpico (CUNHA, 2006). Por outro lado, geralmente os compos-
tos presentes em menor proporo na planta so os que apresentam melhores efeitos biolgi-
cos. A espcie R. officinalis L. (alecrim) apresentou-se positiva para taninos e flavonides,
confirmando sua caracterizao fitoqumica que registra para folhas a presena de taninos,
flavonoides (MATOS, 2000; LORENZI; MATOS, 2006).
Os resultados obtidos a partir do teste para determinao da atividade antimicro-
biana esto indicados na Tabela 3. Diante dos resultados obtidos pelo mtodo de difuso em
poo, a espcie vegetal (R. officinallis L.) avaliada apresentou potencial antimicrobiano para o
microrganismo testado C. albicans. Alguns trabalhos j foram realizados utilizando a mesma
espcie vegetal, dentre eles Cowan (1999) tambm mostrou a atividade antimicrobiana de R.
officinalis L. (alecrim).
Tabela 3- Atividade inibitria medida pelo tamanho do halo determinada pelo mtodo
de difuso em poo.
Dimetro dos halos de inibio (cm)
Anlises
F1 F2 Extrato
1 1,9 1,5 0,7
2 1,6 1,5 0,7
3 1,8 1,4 0,7
Mdia 1,77 1,47 0,7
Fonte: Resultados obtidos durante o experimento.
Verificou-se que o sabonete lquido sem o extrato (F2- branco) tambm provocou
inibio do crescimento microbiano (Fotografia 5). Isto pode ser justificado pela presena de
chemynol, o conservante utilizado na formulao que se trata de um agente conservante com
amplo espectro antimicrobiano (FERREIRA, 2008).
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Tabela 4- Anlise estatstica entre os valores de halos de inibio apresentados por F1,
F2 e o extrato.
ANOVA
Fonte da varia-
o SQ gl MQ F valor-P F crtico
Entre grupos 1,815556 2 0,907778 102,125 2,32E-05 5,143249
Dentro dos gru-
pos 0,053333 6 0,008889
Total 1,868889 8
Fonte: Resultados obtidos durante o experimento.
Tabela 5- Anlise estatstica entre os valores de halos de inibio apresentados por F1,
F2 e o extrato.
ANOVA
Fonte da varia-
o SQ gl MQ F valor-P F crtico
Entre grupos 0,135 1 0,135 10,125 0,033472 7,70865
Dentro dos gru-
pos 0,053333 4 0,013333
Total 0,188333 5
Fonte: Resultados obtidos durante o experimento.
5 CONSIDERAES FINAIS
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AGRADECIMENTOS