MTODOS ALTERNATIVOS PARA EL CONTROL DE LA GARRAPATA

RHIPHICEPHALUS (BOOPHILUS) MICROPLUS EN EL TRPICO

MEXICANO: FASE II (EVALUACIN DE CAMPO DE PLANTAS CON PODER
IXODICIDA Y DEL HONGO METARHIZIUM ANISOPLIAE).

INSTITUCIN RESPONSABLE: Universidad Autnoma de Yucatn.

RESPONSABLE TCNICO: Roger Ivn Rodrguez Vivas
RESPONSABLE LEGAL: Alfredo Dajer Abimerhi
REPONSABLE ADMINISTRATIVO: Dr. Jos de Jess Williams

INTRODUCCIN.
La garrapata Rhipicephalus (Boophilus) microplus, produce el mayor
problema global de ectoparsitos en la ganadera bovina de las regiones
tropicales (Rodrguez-Vivas et al., 2005). El impacto econmico se debe al
dao a las pieles por accin de las picaduras, prdida de sangre, efectos
txicos, reduccin en la produccin de leche, en la produccin de becerros y
altos costos en el control de la garrapata; adems de los agentes etiolgicos
que transmiten, en Mxico, Babesia bovis, Babesia bigemina y Anaplasma
marginale (Rodrguez-Vivas et al., 2005).
Los mtodos de control de las garrapatas se clasifican en qumicos y no
qumicos. En Mxico, el mtodo ms utilizado para el control de R. microplus
es el uso de productos qumicos (Rodrguez-Vivas et al., 2005, 2006). Sin
embargo, el uso irracional de estos productos ha generado el desarrollo de
cepas resistentes a diferentes ixodicidas en Mxico (Rodrguez-Vivas et al.,
2006). Esto ha motivado a los cientficos en la bsqueda de nuevas alternativas
de control tales como el control biolgico y el uso de extractos de plantas con
poder ixodicida (Rodrguez-Vivas et al., 2005).
El mtodo de control biolgico ms utilizado para el control de R.
microplus se basa en usar hongos entomopatogenos siendo M. anisopliae el
ms importarte, demostrando su eficacia como biorregulador de R. microplus
en condiciones de laboratorio (Samish et al., 2004). La infeccin del hongo
comienza con la adhesin y penetracin de las conidias a la cutcula del
hospedero, causando la muerte por procesos fsicos y enzimticos sobre el
hospedero. Tiene una distribucin cosmopolita y su patogenicidad depende de
factores climticos, estado fisiolgico de las esporas y la especificidad de las
cepas para parasitar a sus hospederos (Dantigny y Nanguy, 2009). Polar et al.
(2008) mencionan que la eficacia de M. anisopliae para el control de R.
microplus vara entre cepas, ya que dependen de la variabilidad de las
secreciones enzimticas de proteasas y quitinasas durante la infeccin.
Por otra parte se ha reportado el uso de extractos de plantas como
repelente de garrapatas o como agentes ixodicidas. Entre estos se encuentra
Melissa officinalis (Citronela), Convallaria majalia (Lili del valle), Ageratum
houstonianum (Tedonkeng et al., 2005), Azadirachta indica (rbol del Neem)
(Benavides et al., 2001), y el rbol del Mamey (Mammea americana) (Oliveros
et al., 1996). En estudios preliminares realizados en el laboratorio de la
Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la UADY con plantas
encontradas en Yucatn, se observ que Petiveria alliacea presenta la mayor
eficacia para el control de larvas R. microplus (99%). Por lo tanto, el presente
trabajo tiene como objetivo evaluar la actividad ixodicida del hongo
Metarhizium anisopliae y de extractos de especies vegetales, como mtodo
alternativo para el control de garrapatas R. microplus en fases de larvas y
adultas en el trpico mexicano.

ANTECEDENTES.
Los hongos entomopatgenos y los extractos de plantas han
demostrado ser las alternativas ms prometedoras para el control de
garrapatas. El hongo Metharizium anisopliae ha demostrado ser eficiente para
la bioregulacin de R. microplus en condiciones de laboratorio (Samish et al.,
2004).
En la primera fase del proyecto Mtodos alternativos de control de la
garrapata R. microplus en Yucatn, Mxico (financiado por la Fundacin
Produce Yucatn), se evalu el efecto de M. anisopliae para el control de R.
microplus en condiciones de laboratorio encontrandose que la mezcla de las
cepas Ma34+Ma14 de M. anisopliae present eficacia del 100% para el control
de garrapatas adultas y 90% para larvas (Ojeda-Chi, 2009). Sin embargo, se
requieren estudios adicionales para evaluar el efecto entomopatgeno del
hongo M. anisopliae para el control de R. microplus en la fase parsita (in vivo)
y no parsita (en pasto).
Por otra parte, se evaluaron los extractos crudos de 15 plantas de la
regin y se encontr que 9 plantas tuvieron eficacia >80% sobre larvas de R.
microplus. Con base en estos resultados, se seleccionaron tres plantas con
mayor eficacia (Petiveria alliacea, Havardia albicans y Caesalpinha gaumeri),
las cuales fueron evaluadas nuevamente mediante bioensayos a diferentes
concentraciones (20%, 10%, 5% y 2.5%) contra garrapatas R. microplus en las
fases de larvas y adultas (20% y 10%) obtenindose que P. alliacea (tallo-
colecta Octubre 2007) fue la planta que present mayor eficacia en adultas
(mortalidad 87%), inhibicin de la oviposicin (91%) e inhibicin de la eclosin
larval (16%) (Rosado-Aguilar et al., 2010). Posteriormente se determin que la
actividad ixodicida fue conferida por los compuestos no polares del extracto
hexnico (mortalidad larval de 93.6%). La muestra hexnica fue analizada por
cromatografa de gases obtenindose 9 fracciones que fueron evaluadas contra
larvas de R. microplus (10% de concentracin) obtenindose la mayor eficacia
(50 %) en la fraccin 5. Se requieren de estudios adicionales sobre la
purificacin de esta fraccin para aislar los compuestos activos responsables
de la actividad ixodicida contra R. microplus. Por otro lado, se desconoce el
comportamiento de la planta a travs del ao. Ante esta situacin se hace
necesario evaluar la eficacia contra R. microplus de los extractos crudos de la
planta y sus metabolitos en poca de secas y de lluvias, as como probarlos in
vivo contra animales infestados con garrapatas adultas R. microplus.

PROBLEMTICA

En las regiones tropicales y subtropicales de Centro y Sudamrica,

frica y Australia, uno de los principales problemas econmicos en la
ganadera bovina son las garrapatas y las enfermedades que stas transmiten.
Por su importancia econmica y sanitaria la garrapata R. microplus es uno de
los principales ectoparsitos que causan graves problemas en la ganadera de
pastoreo (Rodrguez-Vivas et al., 2005). En Mxico la distribucin geogrfica de
R. microplus corresponde al 53% del territorio nacional (1,043,772.4 Km 2) y se
considera que aproximadamente el 70 % de la ganadera nacional se explota
en las regiones donde est presente ste ectoparsito (Sols, 1991).
El gnero Boophilus tienen efectos negativos directos en los animales como:
daos en la piel, reduccin en los niveles de produccin, alteraciones
reproductivas y mortalidad de los animales por las enfermedades con agentes
etiolgicos infecciosos que transmite (Babesia bovis, Babesia bigemina y
Anaplasma marginale). Las prdidas econmicas debidas a la infestacin por la
garrapata R. microplus son diversas e incluyen, la aplicacin de acaricidas y la
prdida en mejoras genticas al no poder introducir ganado altamente
especializado a las zonas tropicales. En algunos pases se ha calculado un
costo de $5.2 USD por cabeza/ao en reas infestadas (McCosker, 1979). En
Mxico se estima que las garrapatas y enfermedades que transmiten producen
prdidas que ascienden a los 48 millones de US dlares (Vega, 1991).
En Mxico, el mtodo ms utilizado para el control de R. microplus, es el
uso de productos qumicos tales como Organofosforados (OF), Piretroides
(PS), Amidinas (A), Fenilpirazolonas (F) y Lactonas Macrocclicas (LM)
(Rodrguez-Vivas et al., 2005). Sin embargo, a travs del tiempo, el uso
irracional de stos qumicos ha generado el desarrollo de resistencia a los
diferentes ixodicidas (Rodrguez-Vivas et al., 2006), tambin se ha
incrementado la demanda del consumidor por alimentos libres de qumicos y el
inters por disminuir los efectos negativos de los ixodicidas en el medio
ambiente (Kay y Kemp, 1994), por tal motivo, la bsqueda de mtodos
alternativos de control tales como la seleccin de razas de bovinos resistentes,
vacunas antigarrapatas, control biolgico y extractos de plantas con poder
ixodicida es cada da ms relevante (Rodrguez-Vivas et al., 2005).

JUSTIFICACIN

Importancia econmica de R. microplus.

Entre los efectos ms importantes que producen las garrapatas al ganado

bovino se encuentra el menor consumo de alimentos, prdidas de peso por
toxinas, anemias producidas por prdidas de sangre, irritacin por picaduras y
depreciacin de las pieles afectadas. Al lesionar la piel, pueden transmitir
diversos agentes patgenos como virus, bacterias, rickettsias y protozoos. Esto
puede conducir a enfermedades agudas, crnicas o incluso, a la muerte de los
animales. La prdida de peso de un bovino parasitado por garrapatas del
gnero Rhipicephalus se calcula en 0.26 kg/garrapata/ao, ocasionando
prdidas de varios miles de millones de dlares en la economa pecuaria
mundial. Jonsson (2006) encontr que animales infestados con garrapatas,
reducan su consumo de alimento (4.37 kg) en comparacin con animales no
expuestos a garrapatas (5.66 kg), adems report alteraciones en varios
metabolitos entre los que se encontraban la hemoglobina, glbulos blancos,
colesterol, albumina, globulina, amilasa, fosfatasa alcalina y tambin es posible
que secreten compuestos hepatotxicos. Esto ocasiona prdidas de varios miles
de millones de dlares en la economa pecuaria mundial incluyendo a Mxico.
Mtodos para el control R. microplus.
Existen varios mtodos para el control de R. microplus entre los que se
encuentran: el tratamiento qumico, el uso de razas de bovinos resistentes,
manejo de pastizales, uso de vacunas y control biolgico con hongos
entomopatgenos, nemtodos, bacterias y hormigas (Pruett, 1999).

a) Control qumico. Los qumicos disponibles que se utilizan para el

tratamiento de ectoparsitos de importancia en medicina veterinaria son
sistmicos, todos los ixodicidas son neurotxicos, ejerciendo efecto sobre el
sistema nervioso de los ectoparsitos (Taylor, 2001). Los mtodos tradicionales
del tratamiento ixodicida para el control de garrapatas requiere de
formulaciones que se diluyan en agua y se aplican por aspersin o inmersin
en los animales. Recientemente, se incluyen los mtodos de derrame (pour-
on), inyectables, bolos intraruminales, aretes impregnados con ixodicidas y
feromonas (George et al., 2004).
Entre los principales ixodicidas que se utilizan para el control de
garrapatas se encuentran los organoclorados (OCs), OFs, PSs, Am,
fenilpirazoles, reguladores del crecimiento y lactonas macrocclicas (LM)
(Aguilar-Tipacamu y Rodrguez-Vivas, 2003; George et al., 2004). Sin
embargo, el uso indiscriminado de estos productos ha provocado la seleccin
de poblaciones de garrapatas resistente, debido a la fuerte presin que elimina
a los individuos susceptibles, disminuyendo progresivamente el efecto y
elevando los costos de desarrollo de nuevos ixodicidas. La resistencia mundial
a los acaricidas se encuentra bien documentada (Rodrguez-Vivas et al., 2006).

b) Control no qumico. Los mtodos de control no qumico que se utilizan

para el control de garrapatas se basan en el uso de razas bovinos resistentes,
el manejo de pastizales, uso de vacunas y control biolgico.
El control biolgico se define como el uso consciente de organismos
vivos para reducir las poblaciones de organismos plaga o patgenos. Se
consideran agentes de biocontrol a depredadores, parsitos, patgenos,
competidores de las plagas, feromonas naturales y plantas resistentes. El uso
de control biolgico se va incrementando debido a que ha aumentado la
conciencia de sobre la seguridad medioambiental y salud humana, se ha
incrementado en costo del control qumico y ha ido en aumento la resistencia
de las garrapatas a los pesticidas (Samish et al., 2004a).
Dentro de los agentes biolgicos que potencialmente pueden ser usados
para el control de garrapatas se encuentran las bacterias, nematodos,
hormigas y hongos entomopatgenos (Samish et al., 2004).

Hongos entomopatgenos.
Los hongos entomopatgenos poseen extrema importancia en el control
de ectoparsitos; virtualmente todos los ectoparsitos son susceptibles a las
enfermedades fungosas y existen aproximadamente 700 especies de hongos
entomopatogenos, de las cuales solo el 10% se usan para el control de
insectos (Samish et al., 2004). Dentro de los ms importantes se mencionan a
Beauveria spp y Metarhizium spp (Rodrguez-Vivas et al., 2005).
M. anisopliae es un hongo entomopatgeno verdadero, aislado por
primera vez en 1879 del escarabajo Anisoplia austriaca Herbst por Metchnikoff,
quien sugiere su uso como agente microbiano contra el parsito del insecto.
Actualmente, se ha aislado de insectos, suelo, sedimentos del ro y material
orgnico en descomposicin. M. anisopliae presenta la habilidad de crecer en
forma saprfita, facilidad de diseminacin de las conidias, capacidad de
sobrevivencia en el suelo y reproduccin asexual (Kurtii y Keyhani, 2008).
En trabajos realizados en condiciones in vitro, M. anisopliae ha
demostrado ser efectivo para el control de R. microplus. M. anisopliae produce
100% de mortalidad en garrapatas adultas a los 6-14 das post-tratamiento
(Fernandes y Bittencourt, 2008). Asimismo, reduce la eclosin de huevos en
24-66% (Fernandes y Bittencourt, 2008) e invade los huevos produciendo el
90% de micosis (Galindo, 2005). Para el control de larvas, M. anisopliae
produce mortalidades de 100% a los 10 das post-tratamiento y disminuye
tiempo de sobrevivencia larval de 11.8 a 9.3 das. Adems se observ que este
hongo produce mortalidades 80-95% en el control de ninfas de R. microplus
(Kaaya y Hassan, 2000). Por otra parte, nuestro equipo de trabajo evalu las
cepas Ma34 y Ma14, encontramos 100% y 62% de mortalidad en garrapatas
adultas y larvas respectivamente, adems la cepa Ma34 redujo la postura de
huevo en un 55.5% a los 10 das pos-tratamiento R. microplus (Ojeda-Chi,
2009). Sin embargo, se requieren estudios adicionales para evaluar el efecto
entomopatgeno del hongo M. anisopliae para el control de R. microplus en la
fase parsita (in vivo) y no parsita (en pasto).

Plantas con poder ixodicida.

Se han reportado estudios sobre la actividad acaricida de extractos de
plantas contra adultas y larvas de R. microplus. Srivastava et al. (2008)
evaluaron extractos crudos etanlicos de Azadirachta indica, Prunus persica,
Mangifera indica, Psidium guajava y Curcuma longa a una concentracin de 80
mg/ml-1 da postratamiento (PT) contra adultas de R. microplus. El extracto de
semilla de A. indica fue el ms efectivo (80%) en comparacin con el extracto
de semilla de P. persica (70 %), el de hoja de A. indica (30 %) y el extracto de
C. longa (10 %). Los extractos de corteza de A. indica, hoja de P. persica y
corteza de M. indica no tuvieron actividad sobre las adultas de R. microplus. En
otro estudio, fueron evaluados los extractos crudos etanlicos (100 mg/ml-2
das PT) de Acanthus ebracteatus (hoja), Acorus calamus (rizoma), Annona
squamosa (semilla y hoja), Luffa acutngula (semilla) y Stemona collinsae
(raz) contra hembras repletas de R. microplus mostrando eficacias del 3%,
41%, 100%, 7%, 52% y 56%, respectivamente (Chungsamarnyart et al., 1990).
Por otra parte los extractos crudos metanlicos (partes areas) de Calea
serrata and Hypericum polyanthemum fueron evaluados (50 mg/ml-14 das PT)
contra adultas de R. microplus no demostrando un efecto significativo en
inhibicin de la oviposicin y en inhibicin del porcentaje de eclosin larval en
relacin con los controles (Sarda et al., 2007, 2008). Chagas et al. (2002)
evaluaron formulaciones comerciales de los aceites esenciales de Eucalyptus
staigeriana, E. citriodora (100 mg/ml) y de E. globules (200 mg/ml) contra larvas
de R. microplus obteniendo 100% de mortalidad. Sard et al. (2007) evaluaron
el extracto crudo metanlico de Hypericum polyanthemum a concentraciones
de 50, 25, 12,5, y 6,25 mg/ml contra larvas de R. microplus obteniendo
eficacias del 100%, 96.7%, 84.7% y 52.7%, respectivamente. El extracto crudo
etanlico de Sapindus saponaria tambin tuvo actividad larvicida contra R.
microplus con concentraciones letales al 50 y 99% (CL50 y CL99) de 1.25
mg/ml y 6.36 mg/ml, respectivamente (Fernndes et al., 2007).
Por otra parte son pocos los estudios que se han realizado in vivo con
extractos de plantas. Chungsamarnyart et al. (1992a) evaluaron los extractos
de Cymbopogon citratus y Cymbopogon nardus a una proporcin 1:3 con
etanol al 95% sobre bovinos infestados con garrapatas R. microplus en fase de
adultas ingurgitadas y preingurgitadas. Las hembras preingurgitadas
colapsaron y murieron en la piel del bovino a las 48 h postratamiento, mientras
que todas las hembras ingurgitadas que colectaron no ovipositaron y murieron
a los cinco das postratamiento. Las garrapatas control que fueron asperjadas
con etanol al 95% ingurgitaron y ovipositaron a los tres das de su colecta

Componentes qumicos de plantas con propiedades insecticidas e

ixodicidas.
Se conocen varios aceites esenciales que poseen propiedades ovicidas,
repelentes y biocidas contra varias plagas de artrpodos sin un efecto adverso
en especies no blanco. Adicionalmente, algunos extractos de plantas o
fiitoqumicos tienen alta efectividad contra plagas resistentes a insecticidas e
ixodicidas (Soon et al., 2004).
Se ha observado que compuestos voltiles de extractos de plantas y
aceites esenciales con potencial ixodicida, estn formados generalmente por
terpenoides, particularmente monoterpenoides y precocenes (Soon et al., 2004;
Tedonkeng et al., 2005). Chi et al. (2006) encontraron que los compuestos de
extracto de semilla de Foeniculum vulgare encargados de la actividad ixodicida
son: Naftaleno, carvona, eugenol, bencil, benzoato, timol, dibutil ftalato, dietil-
m-toluamida, metil eugenol, mirceno y acetil-eugenol. En otro estudio realizado
en Turka se evalu la eficacia con extractos de Micromeria fructicosa, Nepeta
racemosa y Origanum vulgare contra ninfas y adultos de Tetranichus urticae y
se encontr que los compuestos encargados de la actividad ixodicida eran -
terpineno, -terpineno, timol, carvacrol, linalol, eugenol, metil- eugenol y metil
chavicol (Onder et al., 2006). En Tailandia, Chungsamarnyart et al. (1992b)
lograron aislar la fraccin activa ixodicida de la Annona squamosa L. contra R.
microplus y encontraron que los compuestos activos constituyentes de dicha
fraccin eran estructuralmente similares a esquamosina, acetogenina y a un
triterpenoide no identificado. Por otra parte Lyndon et al. (1999) aislaron de la
raz de Petiveria alliacea un compuesto activo puro llamado dibenciltrisulfido y
lo evaluaron contra adultas R. microplus reportando eficacias de 50%: en
mortalidad (0.001 mg/ml-4 das PT), inhibicin de la oviposicin (0.0002 mg/ml-
14 das PT) e inhibicin de la eclosin (0.0002 mg/ml-56 das PT).

Petiveria alliacea L.
Petiveria alliacea), conocida comnmente como anamu, paich (en
Yucatn), es - es una hierba perenne de la familia Phytolaccaceae. La P.
alliacea puede ser encontrada en reas tropicales del Amrica central y del sur,
el Caribe, y frica. Las hojas y las races de la planta tienen un olor fuerte. Esta
planta contiene varios compuestos biolgicamente activos. La cantidad de
compuestos vara en las piezas de la planta. Los compuestos primarios en el
aceite esencial de las races incluyen: benzaldehdo, cido benzoico,
coumarina, trithiolaniacina, dibenzil sulfxido, hojas: benzyl-2-hydroxyethyl-
trisulfoxido, polifenoles, senfol y taninos; y en las semillas: iso-tiocianatos. En la
Repblica Dominicana, las races de P. alliacea se utilizan en los tratamientos
para los parsitos internos en ganado y como repelentes de insectos. Cuando
fue aplicada la raz de P. alliacea al suelo, las poblaciones de Meloidogyne
incgnitas fueron disminuidas compararon a los controles. Tambin, los
extractos del hexano de la planta demostraron una cierta actividad contra el
Trypanosoma cruzi in vitro. Los estudios han demostrado que los extractos
crudos del etanol exhiben una cierta actividad repelente contra R. microplus.
Dibenzyltrisulfoxido, uno de los compuestos en las races de la planta, es
insecticida (Cylas formicarius e Hypothenemus hampei) y acaricida (R.
microplus) (Ansci, 2006). En estudios hechos en Jamaica, Lyndon et al. (1999)
reportaron el potencial de actividad insecticida e ixodicida que tiene el
dibenzyltrisulfido (DBTS) aislado de las races de L. La CL50 a las 96 horas
obtenida para garrapatas adultas R. microplus tratadas tpicamente con DBTS
fue 0.920 g por garrapata. Las CL50 obtenidas de tres ixodicidas comerciales:
dimethoato, lindano y carbaril fueron 4.6, 9.3 y 6.9 g por garrapata
respectivamente. Las concentraciones inhibitorias de oviposicin al 50% y la
concentracin inhibitoria de eclosin al 50% in DBTS fueron 0.22 y 0.24 g por
garrapata respectivamente.
Con la colaboracin de investigadores del CICY y de la FMVZ-UADY
estn realizando estudios etnobotnicos para documentar las plantas nativas
con potencial ixodicida. Con ayuda de encuestas etnobotnicas, se han
identificado plantas que tienen efectos ixodicidas, las cuales estn siendo
evaluadas contra larvas de R. microplus en bioensayos in vitro. En la fase 1 del
proyecto se evaluaron extractos crudos metanlicos (hoja, tallo, raz y corteza)
de 15 plantas a una concentracin de 100 mg/ml (10%) contra larvas de R.
microplus. El tallo (99.2%) de Petiveria alliacea demostr la mayor actividad
ixodicida contra larvas de R. microplus. Sin embargo no han sido probado los
extractos de Petiveria alliacea a diferentes concentraciones (contra larvas y
adultas de R. microplus), en poca de secas y lluvias y en condiciones in vivo.
Se requiere tambin aislar y purificar los compuestos activos responsables de
la actividad ixodicida contra R. microplus.

OBJETIVOS DE LA SEGUNDA FASE DEL PROYECTO

Evaluar el efecto entomopatgeno del hongo M. anisopliae para el

control de R. microplus en la fase parsita (in vivo) y no parsita
(en pasto).
Obtener extractos crudos de P. alliacea en pocas de seca y lluvia
y evaluar su eficacia contra garrapatas R. microplus (adultas y
larvas).
Purificar los compuestos activos de P. alliacea y evaluar su
eficacia contra garrapatas adultas de R. microplus.
Evaluar la variacin en la concentracin de los compuestos
activos de P. alliacea obtenidos en pocas de seca y lluvia.
Evaluar los extractos de P. alliacea in vivo contra animales
infestados con garrapatas adultas de R. microplus.
 METAS QUE SE LOGRARN:

Disponer de un mtodo biolgico (hongo entomopatgeno M.

anisopliae) para el control de R. microplus.
Disponer de un extractos crudos de planta que tenga poder
ixodicida para el control de garrapatas R. microplus.
Contar con un o varios compuesto activos de P. alliacea que
tenga alta eficacia para el control de garrapatas R. microplus.

PRODUCTOS ENTREGABLES.

Tecnologa para controlar garrapatas a base de hongos

entomopatgenos y extractos de plantas.

Difusin de resultado obtenidos: Capacitacin a productores sobre

mtodos alternativos de control de garrapatas en el ganado bovino (lista
de asistencia con firmas).

Manuel tcnico: Capacitacin a productores mediante la difusin de un

manual tcnico sobre mtodos alternativos de controlo de las garrapatas
en la ganadera bovina.
MATERIALES Y MTODOS

OBJETIVO 1. Evaluar el efecto entomopatgeno del hongo M. anisopliae

para el control de R. microplus en la fase parsita (en bovinos) y no
parsita (en pasto) (AO 1: TRIMESTRES 1-4).

Para el estudio in vivo se usar la mezcla de las cepas Ma34+Ma14 a

una concentracin de 1x108 conidias/ml ya que present mayor eficacia para el
control de adultos y larvas de R. microplus (Ojeda-Chi, 2009, Fase 1 del
proyecto).

Control de R. microplus en la fase parsita (en bovinos).

Localizacin del estudio. El presente estudio se llevar a cabo en un rancho

localizado en el municipio de Tizimn, Yucatn, Mxico, situado en un rea
enzotica de garrapatas R. microplus, al oriente del estado. El rancho deber
contar con garrapatas resistentes a organofosforados y piretroides y ser
susceptible al amitraz diagnosticado con base en estudios previos (Rodrguez-
Vivas et al., 2006, 2007).

Manejo del hato. El rancho deber contar con al menos una poblacin de 150
bovinos y con reas para el pastoreo de 200 a 250 ha con zacate Guinea
(Panicum maximum) y que utilice el sistema rotacional, donde todos los
animales permanezcan 2-4 das en cada potrero. Todos los animales debern
recibir suplementacin en poca de seca; su sistema de produccin deber ser
extensivo y la finalidad zootcnica la produccin de carne. Los animales
debern recibir vacunas tales como la aplicacin de la bacterina doble (carbn
sintomtico y pasteurelosis) cada seis meses, y anualmente la vacuna contra el
virus de la rabia paraltica bovina. Las razas de bovinos presentes en el rancho
debern ser cruzas de Bos indicus x Bos taurus.

Diseo experimental. Se utilizarn 30 bovinos hembras Bos taurus x Bos

indicus. Las edades fluctuarn entre los 9-12 meses de edad. El peso promedio
de los animales ser de 220-250 kg. Estos animales debern pastorear y rotar
los mismos potreros (cuatro potreros asignados para el proyecto) durante el
experimento.
Cuarenta y cinco das previos al experimento, todos los bovinos sern
expuestos a infestaciones naturales de garrapatas sin recibir tratamiento
ixodicida. Al da 46 (da 0 del experimento) los animales sern derribados para
realizar el conteo de garrapatas adultas (4.5-8.0 mm) siguiendo la tcnica
descrita por Wharton y Utech (1970). Una vez que se obtenga el nmero de
garrapatas adultas por animal, se proceder a obtener el promedio y
desviaciones estndar para formar dos grupos homogneos de 15 animales
cada uno. Al azar se designar a los dos grupos, identificndolos con aretes de
colores diferentes y los grupos recibirn los siguientes tratamientos:

Grupo Uno. Estar constituido por 15 bovinos que sern tratados por
aspersin de la cepa que present mejor eficacia y dilucin para el control de
R. microplus in vitro. La cepa del hongo ser diluido en Tween 80 (1 ml Tween/1
litro de agua) usando una bomba de mochila (5 litros por solucin preparada por
animal). Los tratamientos sern aplicados los das 0, 15, 30 and 45. Los animales
sern tratados en la tarde (6-7 PM) para evitar la radiacin solar (Polar et al.,
2005). De acuerdo a la literatura se asume que M. anisopliae persistir sobre el
bovino durante tres semanas (Kaaya et al., 1996).

Grupo Dos. Este grupo estar constituido por 15 bovinos que sern utilizados
como control y cada animal ser asperjado con Tween 80 (1 ml Tween/1 litro de
agua) usando una bomba de mochila. Esta manejo lo recibirn los das 0, 15, 30
and 45.
El nmero de garrapatas adultas se cuantificarn los das 0, 1, 3, 5, 7 y
14 postratamiento. Al mismo tiempo, se obtendrn al menos 10 garrapatas
hembras adultas para su identificacin taxonmica de acuerdo a Rodrguez-
Vivas y Cob-Galera (2005). Los bovinos sern inspeccionados loa das de
tratamiento para verificar cualquier reaccin adversa.

Anlisis de datos. En cada medicin, las garrapatas del grupo control y tratado
sern contadas y comparadas usando la prueba de U Mann Whitney, la cual
nos determinar si el efecto de los tratamientos es significante (SAS, 1991). La
eficacia del tratamiento con M. anisopliae ser evaluada usando la metodologa
descrita por Morin et al. (1996).

Control de R. microplus en la fase no parsita (en pasto)

Localizacin del estudio. Se seleccionar un rancho bovino del estado de

Yucatn con antecedente de resistencia de R. microplus a piretroides,
organofosforados y amitraz (Rodrguez-Vivas et al., 2007). De este rancho se
usar un potrero empastado con zacate Estrella (Cynodon nlemfuensis) o
Guinea (Panicum maximum), el cual ser dividido en dos reas (uno para el
grupo tratado y otra para el grupo control). En cada rea se formaran 6
parcelas de 9m2 las cuales sern separados entre si por una lnea divisoria de
1.5m de ancho (chapeadas y adicionada cal para evitar que las larvas migren).
Cada parcela ser infestada artificialmente con aproximadamente 20,000 larvas
(obtenidas del mismo rancho y cultivadas en condiciones de laboratorio). En
cada parcela del grupo tratado se administrar por voleo 1x10 8 conidias de
ambas cepas (Ma34+Ma14) de M. anisopliae teniendo como vehculo 45g de
salvado de trigo. En cada parcela del grupo control se administrar 45g de
salvado de trigo. Durante el estudio los tratamientos del grupo tratado y control
se realizarn tres veces con intervalo de 15 das. Todas las parcelas sern
irrigadas tres veces por semana. Para medir la eficacia del hongo se realizarn
colectas los das 0, 7, 14, 28 y 35. El conteo de larvas por parcela se realizar
mediante la tcnica de bandera descrita por Fernndez et al. (1996) realizando
las colectas entre 5-6 p.m. Este estudio se realizar con dos repeticiones en
distintos perodos de tiempo (Enero-Marzo y Abril-Mayo). En cada repeticin se
usarn distintas parcelas del mismo potrero.
Para medir la eficacia de M. anisopliae sobre las larvas se usar la
frmula descrita por Bittencourt et al. (2003). Para el anlisis de los datos, se
utilizar la prueba de t para determinar la significancia estadstica entre los
grupos tratado y control.
OBJETIVO 2. Obtener extractos crudos de P. alliacea en pocas de seca y
lluvia y evaluar su eficacia contra garrapatas R. microplus (adultas y
larvas) (AO 1: TRIMESTRES 1-4).

Diseo experimental y seleccin del material vegetal. En la fase 1 del

proyecto las fracciones de la planta P. alliacea presentaron eficacia del 50%
contra larvas de R. microplus (Rosado-Aguilar et al., 2010), por lo cual se
necesita evaluar ms colectas de esta planta para seleccionar el material con
mayor eficacia y poder llevar a cabo los estudios in vivo con animales
infestados con garrapatas adultas de R. microplus. Para ello se realizarn 4
colectas de la planta P. alliacea en el centro, sur y oriente del estado de
Yucatn. Dos colectas sern realizadas en los meses de Julio a Diciembre del
2010 (poca de lluvia) y las otras dos en los meses de Enero a Junio del 2011
(poca de seca). Se colectarn 100g de materia fresca de toda la planta
(area) y de las siguientes estructuras vegetales: hoja, tallo y raz. Por lo tanto
se evaluarn los extractos de area, hoja, raz y tallo. De estas cuatro colectas
ser seleccionada la que tenga la mayor eficacia contra larvas (Fase A) y
adultas (Fase B) de R. microplus y ser empleada para realizar los estudios in
vivo con animales infestados con R. microplus. Este experimento tendr una
duracin de 12 meses.

Procesamiento y extraccin del material vegetal. Toda la planta y sus partes

vegetales se cortarn en trozos pequeos (4-5 cm). El material ser desecado
a temperatura ambiente (24 horas). Inmediatamente despus ser transferido a
una cmara de secado a 50 C durante 72 horas en el herbario de la Unidad
de Recursos Naturales del CICY. Para que el secado del material vegetal sea
uniforme, cada 24 horas ser movido dentro de la cmara. Una vez seca la
muestra, se proceder a reducir el tamao del material vegetativo (molido fino)
utilizando un molino mecnico.
El material seco y molido ser extrado con Metanol (MeOH) (30 mL de
disolvente por 25 gr de material seco y molido) por maceracin durante 24
horas. Se realizarn tres extracciones en total. El MeOH que se emplear para
los procesos de extraccin ser destilado en el laboratorio. El disolvente ser
eliminado a presin reducida en un rotavapor Buichi. Los extractos metanlicos
secos sern pesados para calcular el rendimiento de extracto y se redisolvern
en una mezcla de diclorometano/MeOH 3:2 para tomar alcuotas y distribuir en
viales que sern previamente pesados para su conservacin en refrigeracin y
para usos posteriores (Chungsamarnyart et al., 1988).

Obtencin de muestras de garrapatas. Para la evaluacin del poder ixodicida

de los extractos se recolectarn cepas de garrapatas R. microplus
caracterizadas previamente como multiresistentes (resistentes a las amidinas,
organofosforados y piretroides) (Rodrguez-Vivas et al., 2006). Estas
garrapatas provendrn de al menos cinco ranchos bovinos del estado de
Yucatn. Para evaluar los extractos de vegetales, se recolectarn 800
teleoginas de R. microplus. Las teleoginas colectadas sern depositadas en
tubos de ensayo y se transportarn al Laboratorio de Parasitologa de la FMVZ-
UADY. Una parte de las teleoginas sern incubadas para evaluar su progenie
(fase A) y las dems sern expuestas a bioensayos directamente (Fase B).
 Manejo de la muestras. Las teleoginas colectadas sern lavadas con
agua y con una solucin de hipoclorito de sodio al 1%. Despus sern secadas
dejndolas escurrir en papel toalla.
Fase A. Evaluacin de la progenie. La produccin de huevos se realizar
con 20 teleoginas aisladas en cajas de Petri de plstico en completa oscuridad
a temperatura controlada de 27 + 2C en una cmara hmeda (80-90% de
humedad). Concluida la oviposicin (dos semanas despus de la colecta de
teleoginas) los huevos se recolectarn y se depositarn en viales de vidrio con
tapn de algodn, se sometern a las mismas condiciones de temperatura y
humedad al que fueron expuestas las teleoginas para inducir la eclosin (dos
semanas ms). Una vez que las larvas eclosionen, se esperar a que tengan
una edad de 7 a 14 das, para ser sometidas al diagnstico de susceptibilidad
con los extractos vegetales (Rodrguez-Vivas y Cob-Galera (2005).
Prueba de paquete de larvas: La prueba utilizada para diagnosticar la
susceptibilidad se realizar mediante la tcnica de inmersin larval modificada
descrita por Rodrguez-Vivas y Cob-Galera (2005). Esta tcnica consiste en la
exposicin por 10 minutos de larvas de garrapatas R. microplus de 7 a 15 das
de eclosionadas a distintas concentraciones de un qumico, pero en este caso
las larvas sern expuestas por 60 segundos y se utilizarn extractos de
vegetales. Esto ser con el objeto de obtener porcentajes de mortalidad del
orden de 0 a 100 que pueden ser analizados por medio de la metodologa
Probit.
Para diluir los extractos de vegetales y realizar las concentraciones
(cuatro concentraciones por extracto) se utilizar Tween 20 al 2%. Tambin se
obtendrn las concentraciones letales 50 y 99 % (CL50 y CL99) y para ello se
utilizarn 4 concentraciones de los extractos de vegetales (2.5, 5.0, 10.0 y
20.0% (Chungsamarnyart y Jansawan, 1996) con un factor de dilucin de 0.5
(Rodrguez-Vivas y Cob-Galera, 2005).
El llenado de paquetes se iniciar con los controles, siguiendo con la
concentracin ms baja para terminar con la ms alta. Para colocar las larvas
dentro del paquete se utilizar un pincel y se tomarn de 80 a 120 larvas
dejndolas caer al paquete. Al concluir el llenado de los paquetes, se colocarn
en una charola limpia y se introducirn en una estufa de incubacin a 27 2 C,
con una humedad relativa de 80 a 90%, permaneciendo por 48 horas
(Rodrguez-Vivas y Cob-Galera (2005).
En todas las muestras se realizarn tres repeticiones de cada
concentracin, incluyendo a los controles. La lectura de nmero de larvas vivas
y muertas en los tratados y controles se efectuar a las 48 horas Rodrguez-
Vivas y Cob-Galera (2005). Para calcular el porcentaje de mortalidad y
mortalidad media se usar la metodologa descrita por Rodrguez-Vivas y Cob-
Galera (2005).
Fase B. Evaluacin de teleoginas. Las 780 teleoginas restantes sern
pesadas en una balanza analtica digital y se incluirn aquellas que tengan un
peso de 200 mg 20. Se formarn 6 grupos homogneos de 10 garrapatas y
que recibirn diferentes tratamientos (Chungsamarnyart y Jansawan, 1996).
Los tratamientos con extractos metanlicos de tallo (demostr la mayor eficacia
en la fase 1, Rosado-Aguilar et al., 2010) al 10 y 20 % de P. alliacea y un
control (Tween 20 al 2%) sern evaluados. En todas las muestras se realizarn
tres repeticiones de cada concentracin, incluyendo a los controles.
Prueba de inmersin de adultas. Cada grupo de garrapatas ser sumergido
por 1 minuto a la concentracin indicada para posteriormente ser transferida a
una placa de 24 pozos y con la finalidad que las garrapatas llevarn a cabo el
proceso de oviposicin sern incubadas en una cmara hmeda (80-90% de
humedad) en completa oscuridad a temperatura ambiente de 28 C (Cen et al.,
1998).
La lectura se realizar por medio de un estereoscopio contando el
nmero de teleoginas vivas y muertas en los tratados y controles a las 24 h, 48
h y hasta 15 das despus de la inmersin para observar tambin si hay
inhibicin de la puesta (Chungsamarnyart et al., 1990). Posteriormente sern
comparados los grupos tratados con el control para determinar el ndice de
mortalidad (IM) que ser calculado del nmero de garrapatas muertas por
grupo dividido entre el nmero total de garrapatas incubadas por grupo;
capacidad de puesta de huevos (CPH) que ser calculada del peso de los
huevos puestos por grupo dividido entre el peso total de las hembras
ingurgitadas por grupo (Guedes et al., 2000).
Para calcular el porcentaje de mortalidad y mortalidad media se usar la
metodologa descrita por Rodrguez-Vivas y Cob-Galera (2005).

Anlisis Probit. Para obtener las CL50 y CL99 de cada colecta se utilizar la
metodologa Probit con los resultados de mortalidad de las cuatro
concentraciones. Los resultados de la prueba sern analizados mediante el
programa Polo-Plus (Le Ora Software, 2004), el cual proporcionar tambin
informacin de la desviacin estndar, la pendiente y los lmites de confianza,
los cuales indican si existen diferencias significativas en la sensibilidad a un
insecticida determinado (Hubert, 1980).

OBJETIVO 3: Purificar los compuestos activos de P. alliacea y evaluar su

eficacia contra garrapatas adultas de R. microplus (AO 1: TRIMESTRES
3 y 4; AO 2: TRIMESTRES 1 Y 2).

Diseo experimental. En la fase 1 del proyecto la fraccin B de la planta P.

alliacea (colecta octubre 2007) present 50% de eficacia contra larvas de R.
microplus por lo cual se programo purificar esta fraccin en la fase 2.
Adicionalmente se determinar la CL50 in vitro de la fraccin activa con larvas
de R. microplus segn Datta y Saxena. (2001).

Aislamiento y purificacin de los metabolitos con actividad ixodicida de P.

alliacea. Para el aislamiento y purificacin de los metabolitos de las fracciones
con actividad ixodicida se utilizarn las diversas tcnicas cromatogrficas que
se llevan a cabo rutinariamente en el grupo, las cuales incluyen cromatografa
en columna por gravedad, cromatografa en columna flash, cromatografia de
permeacin en gel (sephadex LH 20), cromatografa lquida al vaci y
cromatografa preparativa. La eleccin de la tcnica ms adecuada para la
purificacin se realizar mediante el anlisis y monitoreo por cromatografa en
capa delgada de los extractos empleando cromatofolios con soporte de
aluminio, impregnados con gel de slice 60 F254 de 0.20 mm de espesor. Las
placas sern observadas bajo luz UV de onda corta (254 nm) y larga (365 nm)
en un gabinete marca spectroline modelo CX-20. Para la visualizacin de los
cromatogramas se utilizar una solucin de cido fosfomolbdico (Valcalcel,
1999).

OBJETIVO 4. Evaluar la variacin en la concentracin de los compuestos

activos de P. alliacea obtenidos en pocas de seca y lluvia (AO 1:
TRIMESTRES 3 y 4; AO 2: TRIMESTRES 1 Y 2).

En la fase 1 del proyecto, la fraccin 5 (colecta Octubre 2007-poca de

lluvias) de la planta P. alliacea present 50% de eficacia contra larvas de R.
microplus, sin embargo se desconoce el comportamiento de los metabolitos de
la planta P. alliacea en pocas de seca y de lluvia Para evaluar la variacin en
la concentracin de los compuestos activos se requiere la purificacin de la
fraccin activa de cada colecta (4 colectas del objetivo 2) y analizarlas en un
cromatgrafo de gases masas (Agilent Technologies 6890N) combinado con un
detector selectivo de masas (5875B). Se utilizar una columna capilar tipo
ULTRA1 (100% dimetilpolisiloxano, 25 m x 0.32 mm x 0.52 mm) y Helio como
gas acarreador a flujo de 1.0ml/min con 1 ml de volumen. Las muestras sern
inyectadas en la columna a una temperatura de 100C durante 4 minutos y
analizadas. Posteriormente se proceder a incrementar gradualmente la
temperatura (10C/min) hasta alcanzar los 200C. La inyeccin ser realizada
en forma pausada (split radio 50:1). La identificacin y concentracin de los
componentes de la fraccin activa de cada colecta ser realizada por medio de
computadores de bibliotecas comerciales de referencia (NIST05).

OBJETIVO 5. Evaluar los extractos de P. alliacea in vivo contra animales

infestados con garrapatas adultas de R. microplus (AO 2: TRIMESTRES
3 y 4).

Diseo experimental. En este experimento sern probados los extractos

de P. alliacea que obtuvieron la mayor eficacia contra adultas de R. microplus
(obtenidos del objetivo 2) y sern evaluadas sobre bovinos infestados
naturalmente con garrapatas adultas de R. microplus.
Unidad de investigacin. El trabajo se llevar a cabo en los corrales del
rea de lechera de la FMVZ-UADY.
Tamao de muestra y aplicacin de los tratamientos. Para la aplicacin
de los tratamientos se seleccionarn 9 bovinos hbridos (Bos indicus x Bos
taurus) machos de 250 kg y dos aos en promedio y que tengan al menos 30
teleoginas y 50 garrapatas preingurgitadas. Cuarenta y cinco das antes de
iniciar el experimento, los animales se asperjarn con un ixodicida qumico
(Amitraz), cuya base es una amidina que tiene una persistencia de 7 das sobre
el animal (Garris y George, 1985). Luego se inducir a la reinfestacin de los
animales en una pradera de zacate estrella africana (Cynodon nlemfuensis)
durante 45 das.
Posteriormente, los animales se trasladarn a un establo aislado y se
distribuirn en tres grupos (tratamientos), cada uno con tres bovinos. Antes de
aplicar los tratamientos, a cada animal se le contarn las garrapatas mayores
de 4 mm de longitud en 20 cm de seis reas predeterminadas: la tabla del
cuello por ambos lados, las dos ingles (entrepiernas) y las axilas de los
miembros anteriores (Cen et al., 1998).
Una vez que se registre el conteo se aplicarn los tratamientos de
acuerdo a los resultados obtenidos en el experimento uno con larvas (CL50 y
CL99). A cada grupo se le asperjara con un atomizador de 1 litro en las reas
mencionadas con los siguientes tratamientos:
Grupo 1. Agua con Tween 20 al 2% (grupo control).
Grupo 2. Extractos de P. alliacea con Tween 20 al 2%.
Grupo 3. Producto comercial de amitraz al 12.5% a la dosis
recomendada en la etiqueta (2 ml/litro de agua).

Alimentacin del ganado en establo. Durante los cinco das que estn
estabulados los animales sern alimentados con pasto Taiwn cortado (ad
libitum), alimento balanceado al 14 % de protena cruda, agua limpia y
minerales en roca (ad libitum). A todos los animales se les colocar una
gamarra y se les atar en comedero individual con cobertizo y piso de concreto.
Evaluacin de los tratamientos y variables a estudiar. Una vez
efectuados los tratamientos se recolectarn a los 90 minutos postratamiento
(Chungsamarnyart y Jiwajinda, 1992a) 10 teleoginas de las zonas tratadas de
cada animal. Las teleoginas que caigan antes del tiempo no sern evaluadas.
Las teleoginas sern depositadas en tubos de ensayo y se llevarn al
Laboratorio de Parasitologa de la FMVZ-UADY.
Posteriormente las 10 teleoginas de cada grupo sern pesadas y se
incluirn aquellas que tengan un peso de 200 mg 20. Se formarn 3 grupos
homogneos de 10 garrapatas que sern transferidas a una placa de 24 pozos;
y con la finalidad que las garrapatas llevarn a cabo el proceso de oviposicin
sern incubadas en una cmara hmeda (80-90% de humedad) en completa
oscuridad a temperatura ambiente de 28C (Cen et al., 1998). En todos los
grupos se realizarn tres repeticiones incluyendo a los controles (270
teleoginas en total).
Se realizar la lectura por medio de un estereoscopio del nmero de
teleoginas vivas y muertas en los tratados y controles a las 24 h, 48 h y hasta
los l5 das despus del tratamiento para observar tambin si hay inhibicin de
la puesta (Chungsamarnyart et al., 1990). Posteriormente sern comparados
los 2 grupos con el control para determinar el IM y la CPH que sern calculados
de la misma manera que en el experimento uno (Guedes et al., 2000). Adems
sern evaluados el periodo de preoviposicin y de incubacin del huevo. El
periodo de preoviposicin de la teleogina, se medir del da en que se colecto
la garrapata hasta el primer da de postura. Una vez que las garrapatas
terminen la oviposicin, sern separados 50 huevos en un vial de vidrio de 10
ml con tapa de algodn con el fin de medir el periodo de incubacin, desde la
fecha que inicio la postura, hasta el primer da que las larvas eclosionen
(Bazan, 2002). Para calcular el porcentaje de mortalidad y mortalidad media se
usarn las mismas frmulas que en el experimento 1 (Rodrguez-Vivas y Cob-
Galera (2005).
Para el caso de las hembras preingurgitadas se observarn diariamente
(7 am y 6 pm) por 5 das a los animales estabulados para contabilizar las
garrapatas muertas; y aquellas que lleguen a teleoginas sern recolectadas y
se les dar el mismo manejo mencionado anteriormente (Chungsamarnyart y
Jiwajinda, 1992b). Las teleoginas que cayeran durante el tiempo de no
observacin no sern evaluadas.
Una vez transcurridos los 5 das, los grupos control y de los extractos
sern baados con amitraz al 12.5% a la dosis recomendada (4 litros x animal)
para posteriormente ser liberados con el resto de la manada. Todo este
procedimiento se repetir a los tres meses siendo dos muestreos que sern
evaluados.

OBJETIVO 6: CAPACITAR A PRODUCTORES A TRAVS DE PLTICAS Y

UN MANUAL SOBRE MTODOS ALTERNATIVOS DE CONTROL DE
GARRAPATAS (AO 1: TRIMESTRE 4, Y AO 2 TRIMESTRE 4).

Se difundirn los resultados y capacitarn a productores en mtodos

alternativos de control de garrapatas. Para ello se elaborar un manual sobre
mtodos alternativos de control de garrapatas y se imprimirn 600 ejemplares
(300 ejemplares para el primer ao y 300 ejemplares actualizados para el
segundo ao) que sern entregados a las asociaciones ganaderas
pertenecientes a la UGRY y a la UGROY, y a los productores personalmente.
As mismo, se impartirn cuatro plticas a productores y tcnicos sobre la
importancia de utilizar los mtodos alternativos de control de garrapatas para
disminuir la dependencia de los ixodicidas para el control de esta plaga.
 PRESUPUESTO SOLICITADO A FUNDACIN PRODUCE YUCATN A. C.
(Desglosado por trimestre para el primer ao):

Conceptos Trim. 1 Trim. 2 Trim. 3 Trim. 4 Total

Honorarios Asimilables $21,000 $21,000 $21,000 $21,000 $84,000
a sueldos
Artculos, materiales y $29,000 $27,000 $22,000 $8,000 $86,000
tiles diversos.
Materiales vivos, $5,000 $5,000 $10,000
vegetales y/o animales
Servicios externos y
comerciales.
Documentos y servicios
de informacin.
Ediciones e $10,000 $10,000
impresiones.
Pasajes para eventos
tcnico cientficos.
Viticos para eventos
tcnico cientficos.
Equipo y maquinaria. $25,000 $25,000

Gastos para trabajos de $10,000 $5,000 $5,000 $20,000

campo
Pasajes para trabajos de
campo.
Viticos para trabajo de $5,000 $5,000 $5,000 $15,000
campo
TOTAL $90,000 63,000 $58,000 $39,000 $250 ,000
 JUSTIFICACIN DEL PRESUPUESTO SOLICITADO A FUNDACIN
PRODUCE YUCATN A. C.

PERSONAL
Honorarios Asimilables a Sueldos.
CONCEPTO U. DE CANTIDAD PRECIO IMPORTE JUSTIFICACIN
MEDIDA UNITARIO
Asistente de pesos 1 7,000 84,000 Se requerir de un asistente de investigacin
investigacin especializado en bioensayos con ixodicidas y extractos
bioensayos y en la de plantas contra la garrapata R. microplus. As como
purificacin de los tambin para el aislamiento y purificacin de los
componentes activos compuestos activos de los extractos con actividad
ixodicida. Adems realizar las colectas de campo de
garrapatas y de plantas y ayudar en la redaccin de
informes parciales, de artculos de difusin y cientficos.
**PERSONAL TOTAL:
MATERIALES Y SUMINISTROS
Artculos Materiales y tiles Diversos.
CONCEPTO U. DE CANTIDAD P.UNITARIO IMPORTE JUSTIFICACIN
MEDIDA
Materiales y artculos Pesos 1 $86,000 $86,000 Durante la realizacin de la segunda etapa del proyecto
diversos se requerirn diversos artculos y materiales, que a
continuacin se describen: Bioensayos: viales de vidrio,
esptulas, recipientes de plstico, pinzas, papeles filtro,
guantes de latex natural y de plstico, cubrebocas,
papel aluminio, cristalera en general, algodn y alcohol
de caa, frascos para muestras, coladores, puntillas
para micropipetas, viales de microcentrfuga, papel de
cera parafilm, frascos de almacenamiento, sanitas,
detergentes y tapabocas. Fotoqumica: Se requiere la
compra de disolventes grado analtico industrial, as
como disolventes deuterados para la realizacin de la
pruebas espectroscpica elucidacin estructural,
materiales para la realizacin de las purificaciones
cromatogrficas que incluye, gel de slice, sephadex
LH20, cromatoplacas para cromatografa preparativa,
cromatoplacas para cromatografa de placa delgada
con indicador de UV, tanque de nitrgeno y material de
cristalera. Muestreo de campo: tubos de ensayo,
bolsas se plstico, marcadores, libretas, clips, maletn
para muestreo, cinta maskintape, nevera, arreador
elctrico, lmparas, bateras y sogas. Asimismo, se
requerir material de impresin (copias fotostticas,
catuchos de tinta, toner, hojas en blanca, impresin de
documentos de difusin tales como posters). Se
requerir de un termohigrmetro para medir la
temperatura y humedad en el mantenimiento de las
garrapatas en el laboratorio. Bomba de aspersin para
el tratamiento de los animales. Ixodicidas para el
tratamiento de animales.
SUBTOTAL: $86,000

Materiales Vivos Vegetales y /o Animales.

Alimentacin de U. DE CANTIDAD PRECIO IMPORTE Durante la fase de evaluacin del hongo se requerir
animales durante la MEDIDA UNITARIO alimentar con concentrado a los animales durante la
prueba in vivo pruebas in vivo. Estos animales recibirn 2kg de
suplemento alimenticio al da durante 60 das.

Peso 2,880 Kg 3.5 10,000

SUBTOTAL:
**MATERIALES Y SUMINISTROS TOTAL: $10,000

SERVICIOS GENERALES
Servicios Externos y Comerciales.
CONCEPTO U. DE CANTIDAD PRECIO IMPORTE JUSTIFICACIN
MEDIDA UNITARIO
 SUBTOTAL:

Documentos Y Servicios de Informacin.

CONCEPTO U. DE CANTIDAD PRECIO IMPORTE JUSTIFICACIN
MEDIDA UNITARIO

SUBTOTAL:

Ediciones e Impresiones.
CONCEPTO U. DE CANTIDAD PRECIO IMPORTE JUSTIFICACIN
MEDIDA UNITARIO
Impresiones pesos 1 10,000 10,000 Se difundirn los resultados y capacitarn a
productores en mtodos alternativos de control de
garrapatas. Para ello se elaborar un manual sobre
mtodos alternativos de control de garrapatas y se
imprimirn 300 ejemplares (primer ao) que sern
entregados a las asociaciones ganaderas
pertenecientes a la UGRY y a la UGROY, y a los
productores personalmente.
SUBTOTAL: 10,000
**SERVICIOS GENERALES TOTAL: 10,000

ENTRENAMIENTO Y CAPACITACIN.
Pasajes Para Eventos Tcnicos Cientficos.

CONCEPTO U. DE CANTIDAD PRECIO IMPORTE JUSTIFICACIN

MEDIDA UNITARIO

SUBTOTAL:

Viticos Para Eventos Tcnico Cientficos.

CONCEPTO U. DE CANTIDAD PRECIO IMPORTE JUSTIFICACIN
MEDIDA UNITARIO

SUBTOTAL:
**ENTRENAMIENTO Y CAPACITACIN TOTAL:

INFRAESTRUCTURA.
Equipo y Maquinaria.
CONCEPTO U.
MEDIDA
Equipo de laboratorio grs
(Balanza analtica)
DE CANTIDAD PRECIO IMPORTE JUSTIFICACIN
UNITARIO
1 25,000 25,000 Durante el proyecto se procesara material vegetal
obteniendo extractos puros que necesitan pesarse en
miligramos (cantidades exactas) para realizar los
bioensayos contra larvas y adultas de R. microplus.
Adems se necesita pesar las garrapatas teleoginas
que sern utilizadas en las tcnicas de inmersin de
adultas para obtener los porcentajes de inhibicin de la
oviposicin, y pesaje de hongos liofilizados.
**INFRAESTRUCTURA TOTAL:

MOVILIZACIN POR COBERTURA.

Gastos Para Trabajo De Campo.
CONCEPTO U. DE CANTIDAD PRECIO IMPORTE JUSTIFICACIN
MEDIDA UNITARIO
Gasolina y lubricantes Pesos 1 $20,000 $20,000 Durante el proyecto es necesario realizar muestreos de
campo en el estado de Yucatn. Esto requerir de al
menos 20 salidas de campo que sern realizadas 4
veces por mes. Las salidas de campo se efectuarn
para recolectar garrapatas y el material vegetal a
evaluar; realizar entrevistas y entregar resultados de
avances a los productores. En la parte final del
 proyecto se tiene contemplado la capacitacin de
productores de Yucatn en manejo integral de plagas
donde se incluyan los mtodos alternativos de control.
Se harn al menos 8 visitas a asociaciones ganaderas
pertenecientes a la UGROY y UGRY.
SUBTOTAL: $20,000

Pasajes Para Trabajo de Campo.

CONCEPTO U. DE CANTIDAD PRECIO IMPORTE JUSTIFICAC
MEDIDA UNITARIO IN

SUBTOTAL:

Viticos para trabajo de campo.

CONCEPTO U. DE CANTIDAD PRECIO IMPORTE JUSTIFICACIN
MEDIDA UNITARIO
Viticos para trabajo de Pesos 1 $15,000 $15,000 Los gastos de campo contemplan alimentacin,
campo hospedaje durante el muestreo, y tarjetas telefnicas
para contactar productores.
SUBTOTAL: 15,000
**MOVILIZACIN POR COBERTURA TOTAL: 35,000
SUMA TOTAL DE LAS PARTIDAS(**): $250,000
Nota: Insertar las filas necesarias.
RERERENCIAS.

Aguilar-Tipacamu G, Rodriguez-Vivas RI. Effec of moxidectin against natural

infection of the cattle tick Boophilus microplus (Acari:Ixodidae) in the Mexican
Tropics. Vet. Parasitol. 2003; 111: 211-216.

Ansci (2006). Treating Livestock with Medicinal Plants: Beneficial or Toxic?.

http://www.ansci.cornell.edu/plants/medicinal/anamu.html.

Bazn, T.M. (2002). Efecto de Metarhizium anisopliae

(Deuteromycotina:Hyphomycetes) en el control biolgico de Boophilus
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