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Dm = 7.4 x 10-12 MT
x Vs0.6
Resistencia a la Transferencia de Masas
La Resistencia a la Transferencia de Masa es propia de la facilidad con la cual las
molculas de la muestra se equilibran entre la fase mvil y la fase estacionaria. Es
directamente proporcional a la velocidad de flujo.
Para prevenir esto:
Deben de utilizarse partculas pequeas (o de pelculas delgadas) o superficies
porosas como fase estacionaria.
Deben de utilizarse solventes de baja viscosidad.
Alta razon de anlisis puede obtenerse a expensas de la resolucin y viceversa.
Nomenclatura y Clculos
Q Cromatograma: Segn IUPAC: Es un grfico u otra representacin de la
respuesta del detector, concentracin del afluente, versus el tiempo.
UnCromatograma debe de presentar Picos de forma simtrica y bien
definidos.
Debe de presentar alturas de Pico dentro de la escala de registro.
Debe de tener una lnea base consistente.
No debe de presentar bandas anchas.
tR2
tR1
Intensida
Compuesto 1
d de la
Seal
Compuesto 2
to
tR1 W1 W2
Inyeccin de tR2
la muestra
Que informacin me da un Cromatograma?
Factor de Capacidad: k.
Selectividad:
Nmero de Platos Tericos: N
Platos Tericos Equivalentes: HETP
Resolucin: Rs
Asimetra : As
Factor de Capacidad (k)
tr t0
k'=
t0 Vr
Injecci
El tiempo de Retencin puede
utilizarse para fijar el Volumen de
n
Retencin.
Vo 1 2 3 4
k = 0
Factor de Capacidad (k)
6 min (t1)
2 min (t0)
k' = 2
k1 t' R 1
donde:
k1 = coeficiente de distribucin del primer pico
k2 = coeficiente de distribucin del segundo pico
tR2 = tiempo de retencin ajustado del segundo pico
tR1 = tiempo de retencin ajustado del primer pico
Si > 1 la separacin es aceptable
Lo que hay que tener en cuenta para la
Selectividad
La Selectividad no depende de la fuerza de elucin sino de
la afinidad del soluto con la FM y la FE.
Medicin de Neff
Nmero de Platos Tericos
(tR/W0.1)2
N = 41.7 T + 1.25
Donde:
W0.1 = Es el Ancho del Pico al 10% de la altura
T = Factor de Cola del Pico.
Nmero de Platos Tericos
Los Platos
Tericos
tambin
dependen
del
dimetro,
longitud
de las
tuberas, de
la
celda de
flujo.
MEDICION DE LA HETP
Q La HETP describe la longitud de la columna equivalente a un
plato terico
Cuando ms pequeo es el valor de la HETP, ms eficiente es
la columna
L
HETP =
Nef
donde:
L = longitud de la columna (mm)
Nef = Nmero efectivo de platos tericos
Ejemplo:
t0 1.3
t' R 6.2 1.3
= = = 1.3
2
W1 0.13
L 25cm
HETP = = = 0.05mm
Nef 4500
Ecuacin de Van Deemter
C
HETP = A + B +
donde:
A = Difusin Eddy
B = Difusin longitudinal
C = Resistencia a la transferencia de masa
= Velocidad lineal de la fase mvil
GRAFICAS DE HETP
Q La HETP se puede utilizar para seleccionar la velocidad de flujo de la fase mvil.
Flujo
Efecto del tamao de partcula sobre la eficiencia
Resolucin (Rs)
Que es la Resolucin?
La Resolucin es un ndice numrico que nos indica el grado de
separacin de dos compuestos. Esta puede expresarse utilizando
los siguientes parmetros:
Matemticamente esta se
expresa como:
2(V2 V1)
Rs = (W + W )
1 2
Resolucin (Rs)
Otra forma de calcular este ndice es en base al
Nmero de Platos Tericos (N), la Selectividad () y el
Factor de Capacidad (k):
1 -1 N k
R =4 k + 1
N : Promedio de N1 y N2
k : Promedio de k'1 y k'2
Resolucin
Si los picos fueran de forma Triangular, dos picos pueden ser separados
con un valor de Resolucin igual a 1.
Rs = 0.80
Rs = 1.00
Rs = 1.25
Resolucion vs Selectividad, Capacidad y
Eficiencia
Pirmide de la Resolucin
Y N 1 k'
R=
4 k '+1
donde:
N = Nmero de platos tericos
= Tiempo de retencin relativo
k = Relacin de particin (capacidad)
RESOLUCION vs SELECTIVIDAD,
CAPACIDAD Y EFICIENCIA (cont.)
A) Resolucin pobre
ecc
ecc
in
Iny
in
Iny
Incrementando
Incrementando
k
ecc
in
Iny
ecc
in
Iny
Resolucin
Y ... Como llevo a cabo estos cambios?
Inicial
Para Incrementar N
Utilizar una columna ms grande o una
columna de mejor performance.
Para incrementar k
Disminuir el contenido de un solvente
orgnico para columnas ODS.
Cambiando
Cambiar el contenido orgnico, pH u orden del
solvente orgnico o cambiar la temperatura de la
columna.
OPTIMIZACION DE LA SEPARACION
CROMATOGRAFICA
Q Para optimizar el factor de capacidad, k:
As = W (0.05)
2a
Macropores: 2 m Mesopores: 13 nm
Mesopore Macropore
La Fase Mvil:
Mecanismo de Retencin:
El modo de interaccin entre el soluto y la fase ligada puede ser de
3 tipos:
Q Particin: Del soluto con FM y FE lquida.
Q Adsorcin: Interaccin con FE slida
Teora Solbofbica de Horvath: El soluto es expulsado de FM
y forzado a penetrar a la FE que acta como receptor pasivo. La
interaccin con FE ser mayor, cuanto mayor sea el grupo apolar.
Formas de la cromatografia
en fase reversa
Fase Mvil
* Es de naturaleza apolar: Hexano, Cloroformo.
Mecanismo de Separacin:
* Puede suceder varios tipos de interacciones:
* Interaccin dipolo-dipolo.
* Interacciones de puente de hidrgeno
* Mecanismos de transferencia de carga
Cromatografa de Intercambio
Inico (IEC)
R+X- + A- == R+A- + X-
R-X+ + C+ == R-C+ + X+
Cromatografa de Intercambio Inico
Q Material de Relleno:
Intercambiadores aninicos: Grupo iongnico fuertemente o
dbilmente cido (SAX WAX) : -SO3H;
-COOH; -PO3H2. Los intercambiadores catinicos, grupos ionognicos
fuertemente o dbilmente bsicos (SCX o WCX) : -NR3+ ; -NH3+
Q La Fase Mvil:
Son soluciones acuosas de pH y fuerza inica controlados por medio de
un buffer y puede contener cantidades moderadas (no ms 30%= de un
modificador orgnico: MeOH o AcN.
El anin decrece en el orden:
Citrato < SO4=<Oxalato<I-<NO3-<CrO4=
<Br-<SCN-<Formiato<Acetato<HO-<F-
El catin decrece en el orden:
Ba++<Pb++<Sr++<Ca++<Ni++<Cd++<Cu++<Co++<Zn++<Mg++
<UO2++<Ti+<Ag+<Cs+<Rb+<K+<NH4+<Na+<H+<Li+
Cromatografa de Intercambio Inico
Variable Efecto
Fase Mvil
pH La retencin depende del pKa. Permite variar tanto la fuerza como la
selectividad
Fuerza Inica A mayor fuerza inica, mayor fuerza de elucin (menor tiempo de retencin).
Escasa participacin sobre la selectividad.
Contrain A mayor valencia, mayor influencia (en proporcin directa sobre la fuerza
inica) El tipo de contrain determina la fuerza de elucin
Modificador A mayor proporcin de modificador orgnico, menor retencin.
Orgnico
Temperatura A mayor temperatura, mayor eficiencia y mayor retencin
Cromatografa de Intercambio Inico
Cromatografa de In Suprimido
Q Utiliza doble columna, la primera para la separacin de los iones y la
segunda para suprimir los electrolitos de la FM.
Cromatograf Inica de Columna Unica
Q Emplea columna inica de baja capacidad: 0,005 a 0,1 mE/g con un
eluyente de baja concentracin (0,1 mM). De esta forma la
conductividad del eluyente es tan baja que no es detectable por el
detector de conductividad.
proporcional a su PM.
Q Se Clasifica en:
Ventajas:
Q Separacin molecular vlida no slo para el anlisis directo sino
como mtodo preliminar de fraccionamiento de muestras complejas
para su posterior estudio por otros mtodos,
Q Picos angostos
Q Tiempos de separacin cortos y predecibles.
Q No hay prdida de muestra.
Q No hay desactivacin de la columna
Desventajas:
Q Limitada capacidad de picos: 10 a 12
Q Incapacidad de resolver muestras de PM similar
Q La resolucin no puede manipularse