1. Obtencin del extracto 3.

Medicin de la
con actividad actividad enzimtica:
peroxidasas:

Licuar 50 gr de
vegetal con 1 50ml
buffer 0.1 M Leer blanco a
470 nm

Pasar por un colador

la mezcla para Lavar el filtro y la
eliminar materia celita antes de filtrar Preparar: Extracto
residual, con bao con el buffer de enzimtivo +
de hielo fosfatos guayacol+H2O2+B
uffer

Filtrar con cama de Reposar 5 min a

celita de 1 2 cm Tamb

Calentar para
detener la reaccion

Leer la ansorbancia
de reaccion

2. Medicin de la
concentracin de
Realizar lo mismo
protena: pero adicionando
ms buffer

Leer el blanco a 280 Realizar por

y 260 nm duplicado

Leer el extracto de
enzima a 280 y 260 Utilizar la formula
nm
4. Determinacin de la 6. Determinacin de la
especificidad de la Km y Vmax del extracto
peroxidasa de peroxidasa
inmovilizado
Preparacion de tubos
de reaccion

Mezclar y agregar el
agua oxidenada

Leer los blancos

de reaccion
Contar el tiempo en
que tarda en
aparecer una
coloracion

Preparar los
Realizar los blancos tubos con las
disoluciones

Comparar las
velocidades de
reaccion

Leer la
absorbancia a
470 nm
5. Inmovilizacin de la
peroxidasa

Realizar por
Alginato de sodio + duplicado
extracto de
enzima. con cada
tratamiento

Gotear la mezcla
en disolucion de
CaCl2

Mantener 10 a 15
min. y decantar

Lavar las esferas

con buffer

Escurrir las esferas

y reservar en vaso
de pp