UNIVERSIDAD TCNICA DE MACHALA

UNIDAD ACADEMICA DE CIENCIAS QUMICAS

Y DE LA SALUD
LABORATORIO DE MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGA
NMERO DE PRCTICA: CM. 3.03-04
NOMBRE DE LA PRCTICA:

Tinciones de Gram y Ziehl Neelsen

1. DATOS INFORMATIVOS:
CARRERA: Ciencias Mdicas
CICLO/NIVEL: Tercer Semestre
FECHA: Machala, 22 de junio de 2017
DOCENTE RESPONSABLE: Md. Carina Serpa Andrade M.Sc

2. FUNDAMENTACIN:
La tincin es el proceso por el cual las molculas de un colorante se adsorben a una superficie.
El uso de permite cambiar el color de las clulas de los microorganismos y poder realizar la
observacin en el microscopio ptico. Dado que las bacterias son casi incoloras no presentan
contraste con el medio en el cual se encuentran suspendidas y no pueden observarse
claramente sin algn tratamiento previo. 1

Aunque los microorganismos vivos se pueden observar directamente en fresco al microscopio

ptico, la mayora de las veces es necesario teirlos para que, por medio del uso de
colorantes, sea mucho ms fcil su identificacin. 1,2

Las tinciones se pueden clasificar como simples cuando toda la muestra se tie del mismo
color y se utiliza un slo colorante (azul de lactofenol o tinta china); tincin diferencial, cuando
se visualiza ms de un color porque se utiliza ms de un colorante. 2

Las tinciones de Gram y Ziehl Neelsen son dos mtodos diagnsticos directos bacteriolgicos
de gran importancia debido a que las bacterias Gram representan ms del 90% de las bacterias
de importancia mdica, y las bacterias teidas por Ziehl Neelsen aunque de menor nmero
que las Gram no menos importante en la microbiologa mdica humana. 3

3. OBJETIVOS.

Objetivo General
- Conocer el fundamento y aplicar las tinciones que se usan con ms frecuencia en el
laboratorio de microbiologa (Gram y Ziehl Neelsen)

Objetivos Especficos

- Diferenciar las caractersticas de las tinciones segn el nmero de colorantes a usarse.

- Recordar los componentes de la pared bacteriana para el fundamento cientfico de las
tinciones de Gram y Ziehl Neelsen.
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4. MATERIALES E INSUMOS
- Materiales de proteccin: Mandil, Mascarilla y Guantes de manejo
- Lpiz graso
- Muestra de orina
- Aplicadores estriles
- Lugol
- Reactivos Gram: (Violeta de genciana, Lugol, Alcohol/acetona, Safranina o fucsina Gram)
- Reactivos Ziehl Neelsen: (Fucsina fenicada, Alcohol / cido, azul de metileno.)
- Mechero de alcohol
- Porta objetos
- Aceite de inmersin.
- Microscopio

5. PROCEDIMIENTO

1 Clase terica. Responsables: estudiantes previamente designados.

2 Ejecucin de la tincin de Gram:

- Frotis o extendido de la muestra: tomar un portaobjeto nuevo, limpio y sin

melladuras, someter a la llama para desempaar. Con un aplicador estril,
asa, o un palillo estril, tomar una porcin pequea y representativa de la
muestra y ejecutar un frotis homogneo desde el centro con movimientos
circulares o elpticos y no tocar los bordes del porta objetos. Dejar que
seque al ambiente el frotis y finalmente fijar a la llama de mechero el frotis.
- La tincin: Teir el frotis con violeta de genciana durante 1 minuto, luego
desechar el exceso y lavar en chorro fino de agua corriente o agua destilada.
o Fijar con lugol el frotis durante 1 minuto y luego lavar.
o Decolorar con alcohol acetona el tiempo necesario y luego lava
o Recolorar con safranina o fucsina Gram las bacterias desteidas
como son las Gram negativa que tomarn el colorante rojo.
- Observacin microscpica e interpretacin: tras el secado no forzado de la
placa teida: sobre la superficie teida colocar una pequea gota de aceite
de inmersin a fin de clarificar la imagen en el microscopio.
Colocar la placa teida sobre la platina y focalizar la imagen con el lente de
100x. 3.3. focalizada la imagen leer la forma, agrupacin y tincin de las
bacterias. Pueden ser cocos Gram positiva (violetas), cocos gramnegativos
(rosados), bacilos Gram positivos (violetas) y bacilos Gram negativos
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(rosados), stas deben ser las lecturas e interpretaciones de un principiante.

3 Ejecucin de la tincin de Ziehel Neelsen

- Preparacin del frotis o extendido de la muestra: los pasos son semejante a
la de Gram ya descrita.
- Ejecucin de la tincin: Teir con fucsina fenicada durante 5 minutos y en el
transcurso de ese tiempo se fija el frotis con el calor de la llama del
mechero, con los siguientes cuidados, mantener la llama fijadora bajo la
placa controlando que mximo emita vapores y no hervir. (esto es para
permeabilizar la pared bacteriana a fin de que penetre el colorante en la
pared bacteriana). Enfriar el frotis y decolorar con alcohol cido hasta que el
frotis quede originalmente blanco. Colorear con azul de metileno durante
medio minuto, teir de azul todo de campo, lavar con agua corriente.
Luego secar la placa teida al ambiente.
- Microscopa: Se realiza lecturas cualitativas y semi-cuantitativas sea por
cruces o por el cdigo del nueve. Una vez seca y bien teida la placas.
Colocar la placa con aceite de inmersin sobre la platina del microscopio.
Enfocar con el lente 100x3.3 sobre un campo azul buscar estructuras
bacilares de un color rojo brillante sobre un campo azul.
Se reconocen las estructuras rojas sobre un campo azul y se reporta como
BAAR positivo por presencia de Bacilos cido Alcohol Resistentes. BAAR
negativo por ausencia de los Bacilos cido alcohol resistentes.
4 Eliminacin del material biolgico.

5 Limpieza y desinfeccin del rea de trabajo

6 Eliminacin de guantes y mascarilla

7 Lavado de manos antes de salir del laboratorio

6. CUADROS DE RESULTADOS:

F
i
g
u
r
a
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Figura 2: Tincin de Gram

Figura 3: Tincin de Gram (microscopia)

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7. CONCLUSIONES
- Aplicar la tcnica para las correcta ejecucin de la tincin de Gram y Ziehel Neelsen
- Reconocer los microorganismos sensibles a la tincin de Gram y Ziehel Neelsen
- Elaborar el informe de la prctica.

8. RECOMENDACIONES
- Llevar el equipo necesario para el ingreso al laboratorio. (mandil, guantes, mascarilla,
plantilla de calificacin de la prctica)
- Descartar adecuadamente el material utilizado en la prctica.
- Lavarse las manos antes y despus de cada actividad prctica.
- Aplicar las normas de bioseguridad durante y despus de la prctica de laboratorio.

9. BIBLIOGRAFA
1. Microbiologa General y Bucal. Prctica: diagnostico microbiolgico directo. Universidad
de Salamea, 2010
2. Keller PJ. Imaging morphogenesis: technological advances and biological insights. Science.
2013; 340: 123-168
3. Microbiologa mdica de Jawetz, 27va edicin; McGRAW-HILL; ISBN: 978-607-15-1370-0;
2016.

10. ANEXOS