Pr ueba1

Tema:Calidaddelagua
NUI,Galway
Lunes,16deMayode2005
 Instr ucciones.
Dentrodellaboratoriosedebenusarsiempregafasdeseguridadylabatade
laboratorio.

Estterminantementeprohibidocomer,beberyfumarenellaboratorio.

Sedisponedeguantesdesechablesydebenserusadoscuandosemanejenmuestras
microbiolgicasyproductosqumicas.

Todoelpapelutilizado,incluyendoelpapeldesucio,debeserentregadoalfinaldela
tarea.

Todoslosresultadosdebenserescritosenelcuadernoderespuestas.

Lasgrficasdebenseradjuntadasconelcuadernoderespuestas.

SlosepuntuarnelCuadernodeRespuestasylasgrficasadjuntas

Cuandosepidaqueunsupervisorfirmeunresultadoantesdeseguirconelsiguientepaso,se
puntuarpositivamenteslocuandolafirmadelresultadosehagaenelmomentoadecuado.

Lasdistintastareassepuedenrealizarencualquierorden(p.e.simultneamente).

Puntuacindelastar eas.
LaTarea1sepuntasobre9puntos

LaTarea2sepuntasobre25puntos

LaTarea3sepuntasobre32puntos

LaTarea4sepuntasobre11puntos

LaTarea5sepuntasobre11puntos

LaTarea6sepuntasobre12puntos

1
Intr oduccin.
Los residentes de cierto lugar han solicitado una investigacin sobre las fuentes y la
naturalezadelacontaminacinenelroquepasaporsuciudad.

Las urbanizaciones e industrias descargan las aguas residuales tratadas (aguas fecales, aguas
de lecheras y residuos qumicos) en el ro. Esterodesembocaenelmarcercadeunazona
turstica con playa. Algunas de las plantas de tratamiento son antiguas y pueden funcionar
mal.

La naturaleza y las consecuencias de estas descargas pueden ser determinantes para el

desarrollolocal.

Para llevar a cabo esta investigacin se han tomado muestras de agua del ro y de agua
marinadesietelugaresdiferentes(SepuedenverenlaFigura1enlosrecuadrosnumerados
del 1 al 7). Todas estas muestras han sido analizadas para determinar la naturaleza de las
aguas y la contaminacin orgnica y qumica. Los anlisis los ha realizado el Laboratorio
Estatal y los resultados de cada muestra han sido entregados a la Autoridad Local de
ProteccinMedioambiental.

Las muestras se extrajeron por duplicado y, previamente a los anlisis, se envi un

subconjunto de ellas a otros laboratorios aprobados para confirmar yverificarlosresultados
(usando mtodos alternativos si es posible). Vuestro equipo representa uno de esos
laboratoriosdeanlisis.
Paraellotenisqueanalizartresmuestrasdeagua.EstasmuestrashansidollamadasMuestra
A(Sample A),MuestraB(Sample B)yMuestraC(SampleC).

Elobjetivodeestaspruebasesdeterminarlossiguientespuntos:
1. Naturalezadelagua(aguadulceomarina)
2. Lanaturalezay,dondeseaposible,elniveldeloscontaminantesorgnicos.
3. Identificarloscontaminantesqumicosylafuentedeestacontaminacin.
4. Localizarloslugaresdeextraccindelasmuestras.

Parapoderhacertodoestosepidequerealicislassiguientestareas(enelordenqueos
convenga,repartindoselas).

1. DeterminarlosnivelesdeBacteriaspresentes(enCFUpor100mililitros,
CFU=colonyformingunits,estoes,unidadesqueformancolonias).
2. Determinarel ContaminanteQumico(R)presentesenlaMuestraA(SampleA).
3. HallarlaDensidaddecadaunadelasmuestras.
4. DeterminareltipodebacteriapresentepormediodelaTincindeGram,delaforma
delasclulasydelagrupamientodelasclulas.
5. DeterminarlaMateriaOrgnicapresenteporelmtododeBOD(Demanda
BiolgicadeOxgeno)paraelquintoda.(Verlapgina14paraunaexplicacin
detalladadelaBOD).
6. LocalizarlosSitiosdondesehanextradolasmuestrasA,ByC(SampleA,ByC)

2
3
TAREA1DETERMINARLOSNIVELESBACTERIANOS.
Dispones de tres placas con cultivos, de diluciones de la muestras originales expresadas en
potencias de 10 (cada placa corresponde a una de las muestras A, B o C) y hay que
determinarlacantidaddebacteriasexistentesen100mLdelasmuestrasoriginalesA,ByC.
Ladilucindecadaplacaseindicanenpotenciasdediez.

Determinacin de las unidades que forman una colonia* (CFUs) en 100 mL de

muestra.
En este caso, se utiliz 0,1 mL de muestra para preparar cada placa. Dividir el nmero de
colonias en una placa por el factor de dilucin para obtener el nmero de CFUs en un 0,1
mLdemuestra.Porejemplo,sicuentas125coloniasdiluidasa107,hay:
(125)/(10-7)=1,25x 109 CFUsen0,1mLdemuestra

DespushayquetransformarlosresultadosparaexpresarlosenCFUsen100mL.

Resultados:
Escribirlosresultadosenlapregunta1delCuadernillodeRespuestas.

*Unacoloniaesunapoblacinmacroscpicavisiblecreciendoenunmedioslidoapartirde
unanicaclula.

AQUTERMINALATAREA1.

4
TAREA 2 DETERMINAR EL CONTAMINANTE QUMICO
PRESENTEENLAMUESTRAA

Problema:
Una de las plantas qumicas que se sealan en el mapa (Figura 1) es una factora de tintes,
queutilizaanilinasyfenolesparafabricartintesazoicos.Desdeesafactora,poraccidente,se
ha vertido al agua uno de los compuestos siguientes: ortonitroanilina (X), para
nitroanilina (Y) y ortonitrofenol (Z). Este contaminante qumico se extrajo solamente del
agua de la Muestra A mediante un disolvente orgnico adecuado. Este compuesto es el
contaminantequmico(R).Sedebeutilizarcromatografadecapafina(TLC)paraidentificar
elcompuestocontaminante(R),apartirdetresmuestrasdeloscompuestospuros(X),(Y)y
(Z). Se obtendrn los tintes azoicos elaborados por la factora haciendo reaccionar la sal de
diazoniode(R)confenoly1naftol.Debesconocerloscoloresdeestostintesparaidentificar
futurosvertidosdelafactora.

NH2
NH2 OH
NO2 NO2

NO2

(X) (Y) (Z)

AhoraresponderalaPregunta2enelCuadernillodeRespuestas.

BrevedescripcindelaCromatografadeCapaFina(TLC):
La cromatografa se utiliza para separar compuestos, que estn mezclados, segn las
interacciones de esos compuestos con un fase estacionaria y una fase mvil. Enestecasola
fase estacionaria es gel de slice (silicagel)adsorbidasobrealuminio,quegeneralmentese
conoce como placa TLC. La fase mvil es una mezcla de disolventes orgnicos. El
compuesto ms polar de la mezcla interacciona ms intensamente con el gel de slice, y
requiere un disolvente ms polar para desplazarlo a travs de la fase estacionaria. El
compuesto menos polar se desplaza a travs de la fase estacionaria ms rpidamente, y
requiere una disolvente menos polar o apolar para desplazarse. Se proporciona acetato de
etilo,queesundisolventepolar,yhexano,queesundisolventeapolar.

ProcedimientoparallevaracabounaCromatografiadeCapaFina(TLC):
1. Con un lpiz marcar cuatro puntos equidistantes sobre la lnea base que hay en cada
placa (a lpiz), e identifcarlos escribiendo (con lpiz) debajo X, Y, Z y R. No dejar
seales de los dedos en las placas, ya que los compuestos orgnicos que hay en tus
dedospuedeninterferirenelanlisis.UtilizalaspinzasparamanejarlasplacasTLC.

2. Mediante los tubos capilares de cristal (TLC Spotters) colocar una gota de cada
compuesto en su correspondiente marca alpizX,Y,ZyR.Lasmuestrasnodeben
tener un dimetro superior a 3 mm para lograr una mxima resolucin (poner una
pequeagotatocandoconelcapilarelpunto,esperaraqueseseque,volveraponer
gotas varias veces hasta que cada muestra se vea con claridad). Debes asegurartede
que las muestras sean claramente visibles (amarillas o naranjas) sobre la fase
estacionaria(geldeslice)delaplacaqueesblanca.

5
 3. Laprimeraplacasedebecolocarenelvaso.Previamentedehancolocadoenelvaso,
56 cm3 de una fase mvil formada por 20% (en
volumen) de acetato de etilo y un 80% (en volumen) de
hexano. Es esencial que la lneabaseestporencimadel
niveldedisolventecuandosecoloquelaplacadentrodel
vaso (el vaso ha de taparse con un papel de filtro y un
vidriodereloj).

Elpapeldefiltroyelvidrioderelojsecolocaencimadel
vaso para evitar la evaporacin del disolvente y as
mantenerunaatmsferasaturadadentrodelvaso.

Figura2:Ejemplodecmaracromatogrfica

4. Colocar con cuidado la placa dentro del vaso. Mantener el vaso tapado con el
papel del filtro y con el vidrio de reloj durante la cromatografa. Debes permitir
quelafasemvil(eldisolvente)alcanceunaalturahastaquefalte1cmparallegar
al extremo superior de la placa. Entonces sacar la placa del vaso utilizando las
pinzas. Inmediatamente marcar con el lpiz la altura alcanzada por la fase mvil.
Estasealeselfrentedeldisolvente.
5. Sealar con el lpiz un crculo sobre cada mancha y medir la distancia desde la
lnea base hasta el centro de cada mancha (distancia a), y la distancia desde la
lneabasehastaelfrentedeldisolvente(distanciab).Conestasmedidassepuede
determinar el Factor de Retencin (R f) para cada compuesto (X), (Y) y (Z),
mediantelasiguienteexpresin:R f= (a)/(b).

AhoraescribirlasrepuestasalasPreguntas35delCuadernillodeRespuestas.

Llevaracabounasegundacromatografautilizandocomofasemvil56cm3 deuna
disolucinformadapor30%(envolumen)deacetatodeetiloyun70%(envolumen)
dehexano.

AhoraescribirlasrepuestasalasPreguntas68delCuadernillodeRespuestas.

Elfactorderetencin(R f)delcompuestodesconocido (R)tienequecoincidirconel

de uno de los compuestos (X), (Y) o (Z) en ambas cromatografas. Esto sirve para
identificarelcompuesto(R).

AhoraescribirlasrepuestasalasPreguntas9y10delCuadernillodeRespuestas.

6
Sntesisdetintesazoicos:
Generalmente un tinte se puede describir como un colorante que tiene una afinidad con el
sustrato o sustancia sobre el que se aplica y as queda adherido a l. La siguiente tarea
consiste en preparar dos de los tintes azoicos que fabrica la factora anteriormente indicada.
Losdiferentescompuestosazoicostienendistintoscolores.

Brevedescripcindelasreacciones
Los compuestos azoicos se utilizan como tintes desde hace 150 aos. Se preparan uniendo
una sal de arildiazonio (por ejemplo el compuesto I en el esquema del diagrama 1 que se
muestra ms abajo) con un compuesto aromtico activado (por ejemplo el fenol P en el
esquemadeldiagrama1).Lasaldediazonio,esdecirelcompuestoI,seobtieneapartirdela
reaccin de una anilina con cido nitroso. El cido nitroso se obtiene in situ a partir de la
reaccin de nitrito de sodio (NaNO2) con cido clorhdrico diluido (HCl). Las sales de
diazoniosoninestables,ysedebenmantenera0oC.

+ _
NH2 N NCl OH
HCl
N N
NaNO2
I OH Brightlycolouredazodye
Compuestoazoicocoloreado
I
P
P
Esquema1

AhoraescribirlarepuestaalaPregunta11delCuadernillodeRespuestas.

Pr ocedimiento(utilizandolos12tubosdeensayoquesepr opor cionan)

NotaPedirhielocuandolonecesites.
1. Aadirunapizcadelslidodesconocido(R)(lapuntadelaesptula)a23cm3 de
cido clorhdrico. Agitar constantemente, utilizando la varilla de vidrio que se
proporciona,mientrasseenfraenunbaodehielo.
2. Preparar una disolucin deconcentracinsimilaraadiendounapizcadenitritode
sodio en 23 cm3 de agua. Agitarconstantemente,utilizandolavarilla,mientrasse
enfraenunbaodehielo.
3. Aadir la disolucin fra de nitrito de sodio a la disolucin cida, tambin fra,del
compuesto(R)paraobtenerlasaldediazonio.Mantenerestamezclaenelbaode
hielo.
4. Enuntercertubodeensayoaadirconlaesptulaunapizcadefenolsobre3cm3
dedisolucindehidrxidodesodio(disolucinalcalina)
5. Mezclar una pequea porcin de la disolucin de la sal de diazonio con la
disolucin alcalina de fenol. La reaccin tiene lugar rpidamente y se forma un
precipitadoslidocoloreado.Eseprecipitadoeseltinteazoicocrudo.
6. Preparar anlogamente el tinte azoico a partir de la sal de diazonio (R) y el
compuestoaromticoactivado,1naftol.

AhoraescribirlasrepuestasalasPreguntas12y13delCuadernillodeRespuestas.

AQUTERMINALATAREA2

7
Tar ea3Deter minar ladensidaddecadaunadelasmuestr as

Introduccin
El agua dulce tiene una densidad de 1000 kgm-3 a 4oC. La densidad del agua de mar
depende de su temperatura y de las sales y otros materiales disueltos en ella. Los valores
tpicosdeladensidaddelaguasuperficialdelocanoestnentre1025kgm-3 y1030kgm-3.
Elaguaenlosestuarios,bahasycercadelasdesembocadurasdelosrostieneunadensidad
queestaentreladensidaddelaguadulceyladensidaddelaguamarina.Sudensidaddepende
delamezcladeaguadulceyaguademar.Lasmuestrasdeesteaguatieneunadensidadque
vara conlasituacindelospuntosdemuestreo,msomenoscercadelasdesembocaduras
delosros,tambinvaraconlacantidaddeaguaqueviertenlosrosyconlasmareas.

Unhidrmetro(densmetro)esundispositivoquesirveparamedirladensidaddeunlquido.
Enestatareasepidequeseconstruyaunhidrmetroysemidaladensidaddelasmuestrasde
agua.

Construccindeunhidrmetro.

Fundamento
ElPrincipiodeArqumedesdicequetodocuerpoqueesttotaloparcialmentesumergidoen
unfluidoexperimentaunempujeascensionalequivalentealpesodelfluidodesalojado.

Procedimientodeconstruccin.
Se proporcionan los componentes necesarios para construir un hidrmetro como muestra la
Figura3.Paraellohayqueseguirlossiguientespasos.

(i) Introduzca la pipeta en el agujero del tapn de goma, conelladoafiladohaciafuera

deltubodeensayo.
(ii) Quite el papel que protege el adhesivo en la escala de papel. Pegue firmemente la
escala a la pipeta mientras est seca. La posicin del 0 debe quedar a pocos
centmetros de la parte superior de la pipeta. Por si sedespegaralaescalamarqueel
puntodelapipetaquesecorrespondeconel0delaescala.

8
 0

Escala

Niveldeagua

Pipeta

Tapndegoma

Tubodeensayo

Perdigonesde
plomo

Figura3:Elhidrmetroacabado.

(iii) Calculelamasadeperdigonesquedebeponerenelhidrmetroparaquepuedaflotar
enaguadulceconlamayorpartedesuvolumensumergido.Lamasadelosdiferentes
componentes(excluidoslosperdigones)sedanenlatablainferior.

Componente Masa(g)

Tubodeensayo 42
Tapndegoma 16
Pipeta 1,5
Escala 0,5

(Nota:Esnecesariocalcularelvolumendelhidrmetropararesponderesteapartado)

EscribalosclculosyelresultadoenlaPregunta14delCuadernillodeRespuestas

ANTES DE SEGUIR CON EL SIGUIENTE PASO, pide al supervisor del

laboratorioquefirmeestosclculos.

(iii) Aadesuficientesperdigonesdeplomoaltubodeensayoparaqueelhidrmetroflote
verticalmente en agua potable, de manera que la marca del 0 est en la superficie
del lquido. Por si el tapn de goma se moviera, haz una marca con un rotulador
indelebleeneltapnsealandolaposicindelbordedeltubodeensayo.

Lalecturadelaescalaenaguadulce(lamedidaquesealalasuperficiedelagua)
debeescribirseenlaPregunta15delCuadernillodeRespuestas.

9
Calibradodelhidrmetro:
Laescaladelhidrmetrodebesercalibradaantesdequesepuedausarparamedirladensidad
de las muestras de agua. Para hacer esto, hay que dibujar la curva de calibracin del
hidrmetroconstruido.Lacurvadecalibracinesunagrficaquerepresentalalecturadela
escala del hidrmetro frente a la densidad. Los datos de esta grfica se obtienen de las
lecturasdelasmedidasdelaescalacuandosesumergeelhidrmetroenlquidosdedensidad
conocida.

No esta permitido suponer que la escala del hidrmetro vara linealmente con la densidad.
Parahacerlasmedidassecuentaconaproximadamente1000cm3 deaguademar,quetiene
una densidad de 1026kgm-3. Tambin se dispone de agua dulce (agua del grifo) que se
puedesuponerquetieneunadensidadde1000kgm-3.Conestasdosmuestras(aguademar
y agua dulce) se tienen dos puntos para la curva de calibracin. Para tener ms puntos se
pueden hacer disoluciones de densidades conocidas diluyendo cuidadosamente el agua de
marconlacantidadapropiadadeaguadulce.Lacurvadecalibracinsedebedibujarconlos
datosobtenidosusandodisolucionesdeaguademar.

(i) Deduzcalafrmulaqueexpresaladensidaddeladisolucinqueseobtienecuandose
mezclaunvolumenV1 deunlquidodedensidad r1 conunvolumenV2 deunlquido
dedensidad r2.

EscribalafrmulaobtenidaenlaPregunta16delCuadernillodeRespuestas.

(ii) Antesdetomarcualquiermedida,planifiquecuidadosamentecomovaaobtenercada
una de las diluciones que se vayan a usar para tener disoluciones de diferentes
densidades.
Empiece con agua de mar pura. Incluyendo los puntos de densidad 1026kgm-3 y
1000kgm-3,lagrficadeberatenersietepuntosregularmentedistribuidos.Sepuede
usar tanta cantidad de agua dulce como se desee, pero slo se tienen
aproximadamente 1000 cm3 de agua de mar para todo el trabajo. Para hacer el
esquemadedilucinsepuededesecharpartedelasdisoluciones.
Elabore un plan paso a paso de cmo se van a hacer las diluciones, dando la
densidad de la mezcla de cada dilucin. Esta planificacin debe hacerse muy
cuidadosamenteypuedeocuparbastantetiempo.
ExamineelesquemacuidadosamenteantesdeescribirloenlatabladelaPregunta17
delCuadernillodeRespuestas.

ANTES DE SEGUIR CON EL SIGUIENTE PASO, pide al supervisor del

laboratorio que firme el esquema de dilucin. Cualquier cambio posterior que se
hagaaesteesquemadedilucindebeserfirmadoconsusinicialesporelsupervisor
dellaboratorio.

(iii) Llenalaprobetadeaguademareintroduceenellaelhidrmetro.
Registre la lectura de la escala del hidrmetro del agua en la fila apropiada de la
tabladelaPregunta18delCuadernillodeRespuestas.

(iv) Realicelasdilucionessegnelesquemadedilucindiseadoanteriormente.
Para cada dilucin obtenida registre su densidad y la lectura de la escala del
hidrmetro en la fila apropiada de la tabla de la Pregunta 18 del Cuadernillo de

10
 Respuestas.Elsupervisordellaboratoriodebeobservaryfirmarconsusinicialesen
laslecturassealadasenlatabladelCuadernillodeRespuestas.

ANTES DE DIBUJ AR LA CURVA DE CALIBRACIN, pide al supervisor del

laboratorioquefirmeeltabladedatos.

(iv) (Pregunta 19) Dibuje la curva de calibracin en el papel milimetrado que se

proporciona. Si se considera apropiado, dibuje la lnea que mejor se ajuste a los
datos. NO SE DEBE OLVIDAR INCLUIR LA CURVA DE CALIBRACIN EN EL
CUADERNILLODERESPUESTAS.

Medidadelasdensidadesdelasmuestras.
Sehanproporcionadotresmuestrasdeagua,rotuladascomoSampleA,ByC.Useel
hidrmetroparamedirladensidaddeestasmuestras.Noesnecesariocalcularelerror.

Registrelaslecturasdelaescaladelhidrmetroysuscorrespondientesdensidadespara
cadaunadelasmuestrasA,ByCenlaPregunta20delCuadernillodeRespuestas.

ESTOCOMPLETALATAREA3.

11
Tar ea4TincindeGr am,for mayor ganizacindelasbacter ias.
HayquerealizarunatincindeGramencadaunodelosportaobjetosquesesuministrandel
loscultivosbacterianosdelaTarea1(MuestrasA,B,yC).

Introduccin:
LatincindeGrampermitedistinguirdosclasesdebacterias:lasGrampositivas,ylasGram
negativas.Sielmtodoserealizaadecuadamente:
LosorganismosGrampositivos(+)setiendecolorvioletaoscuro.
LosorganismosGramnegativos(-)setiendecolorrosaorojoclaroporla
safranina.

Nota:SeproporcionalaMuestraBporduplicadoparapoderentrenarse.

ProcedimeintodelaTincindeGram:
Antes de empezar, comprobar quesedisponedetodoslosreactivos,ascomoqueelfrasco
lavadorestcercayllenodeagua,porquenovaahabertiempoduranteelprocedimeintode
tincin de ir a buscarlo. Hacer la tincin sobre el cuenco metlico y cerca de una pileta,
porque los colorantes manchan mucho y puede formarse una buena. Hay que ponerse
guantes.

ETAPA1: Colocar el portaobjetos sobre la horquilla de alambre y esta sobre el cuenco

metlico. Cubrir completamente todo el portaobjetos con el reactivocrystal
violet. Dejar actuar al crystal violet durante 60 segundos. Finalizado este
tiemporegarelportaobjetosconelaguadelfrascolavadordurante5segundos
para eliminar todo el reactivo. La muestra debe tener color azul violeta a
simplevista.

ETAPA2: Cubrir el portaobjetos con la disolucin de iodo. Dejarla actuar durante un

minuto. Pasado este tiempo, regar igualmente con el agua del frasco lavador
durante 5 segundos e inmediatamente pasar a la Etapa 3. Todava la muestra
debetenercolorazul.

ETAPA3: Para decolorar la muestra, aadir gota a gota la disolucin de decolorante

(etiquetada decolourising solution) hasta que deje de observarse, a simple
vista, color azulvioleta. Como en las etapas anteriores, regarconelaguadel
frascolavadordurante5segundos.

ETAPA4: Finalmente, hay que aplicar el tinte de recuento, safranin. Cubrir el

portaobjetos con este tinte como en las etapas 1 y 2. Dejar actuar el tinte
durante,almenos,unminuto,paraquelasbacteriasincorporesnelsafranin.
LasbacteriasGrampositivasincorporanmuypoco,onada,deestetinteyno
sehandecoloradoenlaetapatres,porloqueaparecerndecolorazulvioleta.
Las Gram negativas, adoptan ahora un color rosa, siendo fcilmente
distinguibles de las positivas. De nuevo, regar con agua durante 5 segundos
paraeliminarelexcesodetinte.

Completadas las Etapas 1 a4,paracadaportaobjetos,sedebensecarsuavementeconpapel

de filtro, sin frotar, o airear, antes de ponerlos en el microscopio. !NO FROTAR LA
PREPARACION!

12
Finalmente, examinar las preparaciones al microscopio, primero con el objetivo X40 y
posteriormenteutilizandoelaceitedeinmersinyelobjetivoX100.

Nota ESTATAREADEBESERVERIFICADAPORVUESTROSUPERVISORDE
LABORATORIO,FIRMANDOENLOSRECUADROSADECUADOSDELA
PREGUNTA21DELCUADERNILLODERESPUESTAS,ANTESDEESCRIBIR
VUESTROSRESULTADOS.

Resultados:
ResponderalassiguientespreguntassealandoenelCuadernillodeRespuestaselrecuadro
apropiado de la tabla correspondiente a la Pregunta21. En elApndice1seexplicanlos
trminosutilizados.

(i) Describirlaformayagregacindelasbacteriasencadamuestra.
(ii) Determinar la muestra que contiene E.coli, y por tanto, contaminada con aguas
fecales.
(iii) Determinarlamuestraquecontienebacteriascidolctico,yportanto,contaminada
conresiduosdeindustrialechera/quesera.

ESTOCOMPLETALATAREA4.

13
Tar ea 5 Deter minacin de la Mater ia Or gnica por BOD (Demanda
BiolgicadeOxgeno).

Introduccin.
Las bacterias son responsables de la descomposicin de los residuos orgnicos. Cuando la
materia orgnica, tal como restos de plantas, estiercol, aguas fecales o residuos de comida
presentes estn presentes en el agua, las bacterias comienzan el proceso de ruptura deestos
residuos. Cuando esto sucede, las bacterias aerbicas consumen gran parte del oxgeno
disuelto en el agua, impidiendo que otros organismos acuticos dispongan del oxgeno que
necesitanparasobrevivir.LadeterninacindelaDemandaBiolgicadeOxgeno(BOD)nos
permite conocer el oxgeno que necesitan los microorganismos para decomponer estos
residuos. Si hay una gran cantidad de residuos orgnicos en el agua a tratar, habr tambin
una gran cantidad de bacterias para descomponer los residuos. Por tanto, la demanda de
oxgenosermuyalta(debidoalacantidadtotaldebacterias)yelvalordeBODseralto.A
medidaqueelresiduoseconsumeodispersaenelagua,elvalordeBODdescender.

El ensayo de BOD necesita 5 das para completarse. El valor de BOD se determina

comparando el valor del Oxgeno Disuelto (DO) existente en una muestra de agua recien
tomadaconelvalordeDOdeunamuestradeaguaquehaestadoincubndosedurante5das
en la oscuridad. La diferencia entre estos dos valores de DO indica la cantidad de oxgeno
necesario para descomponer cualquier clase de materia orgnica presente en la muestra y es
una buena aproximacin al valor de BOD. A cada equipo se le dar el valor del DO de la
muestra recien tomada (da 1) y tendr que determinar el valor del DO a los 5 das
correspondientesalasmuestrassuministradas.

Cada grupo recibe tres muestras de agua (A, B y C), en donde se ha fijado el valor del
oxgeno disuelto por el mtodo Winkler. La muestra 1estdiluida1a100,lamuestraBes
unadilucin1a200ylamuestraCesunadilucin1a20delamuestraoriginal.

NOTA:Valorarlasmuestrassuministradascontiosulfatodesodio(1/80Mo0,0125M)
paradeterminareloxgenopresenteencadamuestra.

Procedimiento:
Mediante la probeta graduada, verter 100 mL de la muestra en el matraz
erlenmeyer y valorarla con la disolucin de tiosulfato hasta que quede un
color amarillo plido. (Para apreciar mejor el cambio de color, colocar el
erlenmeyer sobre el azulejo blanco o sobre un trozo de papel blanco).
Aadir al erlenmeyer dos gotas de la disolucin de almidn (etiquetada starch) que actua
como indicador, y adoptar un color azul intenso. Seguir valorando hasta que desaparezca
dichocolorazul(enelpuntodeequivalencialadisolucinesincolora).Elprocedimientohay
querelizarlo,unasolavezparacadamuestra.

14
Resultados:
En esta tarea se supone que el nmero de mL de tiosulfato gastados en la valoracin es
equivalentealnmerodemgL1 deoxgenodisueltoenlamuestra.!Hayquetenerencuenta
elfactordedilucinpararealizarlosclculoscorrectamente!

Losvaloresdeoxgenodisueltocorrespondientesalasmuestrasrecientes(da1)son:
Da1,valordeloxgenodisueltoparalaMuestraA=11,5mgL-1
Da1,valordeloxgenodisueltoparalaMuestraB=11,8mgL-1
Da1,valordeloxgenodisueltoparalaMuestraC=11,2mgL-1
Responder las siguientes preguntas, sealando el cuadro apropiado en la tabla del
CuadernillodeRespuestas,correspondientealaPregunta22.

IndicarlaBODresultanteenmgL-1.
Determinarlamuestraquetienemayordemandabiolgicadeoxgeno.
Determinarlamuestraquetienemenordemandabiolgicadeoxgeno.

ESTOCOMPLETALATAREA5.

15
Tar ea 6 Deter minar los lugar es de la figur a 1 donde se tomar on las
Muestr asA,B,andC.
DeacuerdoconlosresultadosdelostestsrealizadosconlasMuestrasA,B,yCenlasTareas
1a5,localizarlossitiosdondesetomaroncadaunadelasmuestars.

Sealar en el cuadro del Cuadernillo de Respuestas, Pregunta23, marcando el sitio que

correspondeacadaMuestra.

CONESTOSECOMPLETALATAREA6YSEACABAESTEEXPERIMENTO.

16
Apndice1Mor fologadelasBacter iasycolor acindeGr am.

Lamayoradelasbacteriasaparecencontresdiferentesformas:cocos,bacilosconformade
bastnybacilosconformaespiral.

Loscocos:
Loscocossonesfricosuovaladosconunadesiguientes
agregacionesuorganizaciones:
Pardecocos : Diplococus
Cadenadecocos: Estreptococos
Tetrada : Gruporectangulardecuatrococos
Cubode8cocos: Sarcina
Alazar : Estafilococos

Losbacilosconformadebastn:

Losbacilostienenlassiguientesagregaciones:
Bacilos:unsolobastn
Estreptobacilos:unacadenadebacilos
Cocobacilos:disposicinovaladaysimilaraloscocos

Losbacilosconformaespiral:
Lasespiralessepresentanenunadelastresdisposiciones:
vibrio
spirilio
espiroqueta

SielmtodoGramserealizaadecuadamente,seobtiene
LosorganismosGrampositivos(+)setiendecolorvioleta
oscuro.
LosorganismosGramnegativos(-)setiendecolorrosaorojoclaro(porlasafranina).

Las bacterias coliformes son buenos indicadores de contaminacin, y entre ellas se

encuentran muchas especies que encontramos en el suelo, sobre las frutas, hojas, semillas y
en el agua corriente. A las bacterias coliformes de origen fecal se les denomina colifirmes
fecales.ElEscherichiacoli(E.coli)esunabacteriafecalqueseencuentraenlashecesdelos
humanos, mamferos y aves. La cantidad de colonias de E.coli nos informa de la calidad
microbiolgicadelagua.LadeteccindeE.colienaguaindicacontaminacinfecal.
LasE.colisonGramnegativasconmorfologadebastonesdelgados.

Lasdenominadasbacteriascidolcticoagrupaaunagrancantidaddebacteriasbeneficiosas
que sienen propiedades similares, todas producen cido lctico como producto final del
proceso de fermentacin. Estn muy extendidas en la naturaleza e incluso se encuentran en
nuestro sistema digestivo. Estos microbios se utilizan para producir alimentos fermentados,
talescomoyogurt(Streptococcusspp.y Lactobacillusspp.),quesos,mantequillayelkefir.
LasbacteriascidolcticosonGrampositivasyvaranmuchoensumorfologa.
desde bastoncitos largos y delgados hasta cocobacilos cortos o cocos que suelen
disponerseencadenascortasoracimos.

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