FACULTE

DES SCIENCES DE TUNIS

Cycle prparatoire Biologie-Gologie: BG1
GENETIQUE
Cours 2

Prsent par Salwa ZEHDI

et Hajer ENNAFAA

CHAPITRE II
ORGANISATION DES GENOMES
EUCARYOTES ET PROCARYOTES
(SUITE)

S. ZEHDI & H. ENNAFAA


II-3 PROPRIETES PHYSICO-CHIMIQUES DE
LADN

II-3-1 Charge lectrique
Les acides nucliques sont des polyanions.
Une charge lectrique ngaEve est associe
c h a q u e g r o u p e m e n t p h o s p h a t e d u
polynucloTde.
Soumis un champ lectrique, les acides
nucliques sont aVrs par lanode (ple posiTf-
lectrophorse).

S. ZEHDI & H. ENNAFAA
II-3-2 AbsorpEon de la lumire UV
Les htrocycles des bases absorbent les
ultraviolets et prsentent un maximum
dabsorpEon 260nm.
Il est ainsi possible de quanTer la
concentraTon en bases, donc la concentraTon
en acides nucliques dune soluTon en
mesurant sa DO 260nm ( laide dun
spectrophotomtre).

S. ZEHDI & H. ENNAFAA

III-3-3 DnaturaEon, renaturaEon et
hybridaEon molculaire
- Eet de la temprature :
Dans la double hlice, A est appari T par 2
liaisons hydrogne (A = T) et G C par 3 liaisons
(G C). Aux tempratures biologiques, ces
liaisons, bien que trs labiles, assurent une
grande stabilit la double hlice.

S. ZEHDI & H. ENNAFAA

Une lvaEon de la temprature provoque la
sparaEon des deux brins par rupture des
liaisons H pour des tempratures comprises
entre 60C et 95C :
on dit que lADN est dnatur.
C e f e d n a t u r a T o n s e e c t u e u n e
temprature dautant plus leve que le
contenu en paires GC est lev.

S. ZEHDI & H. ENNAFAA
S. ZEHDI & H. ENNAFAA
- La dnaturaEon peut tre suivie au
spectrophotomtre 260nm car lappariTon
de molcules simple-brin dmasque les
htrocycles des bases, ce qui entrane une
augmentaEon de la DO de la soluTon:
Cest leet hyperchrome.
- On appelle T de fusion = Tm (m pour
melTng ), la temprature pour laquelle 50%
des chaines dADN ont t spares (elle
correspond au point dinexion de la courbe).
S. ZEHDI & H. ENNAFAA
S. ZEHDI & H. ENNAFAA
S. ZEHDI & H. ENNAFAA
Si, la suite du chauage:
on refroidit brusquement la soluTon, lADN reste dnatur.
Si, au contraire, le refroidissement est lent, la structure
secondaire se reforme par complmentarit des deux brins :
cest la renaturaEon.
Dans ces condiTons, il est possible dobtenir des molcules
bicatnaires stables parTr de brins prsentant des squences
complmentaires :
cest lhybridaEon molculaire.
Homoduplex : molcule obtenue par lassociaTon de deux brins dADN de mme
origine.
Htroduplex : molcule obtenue par lassociaTon de deux brins dADN dorigine
dirente.
On peut aussi obtenir des hybrides ADN/ARN car la base A peut sapparier U.

S. ZEHDI & H. ENNAFAA

S. ZEHDI & H. ENNAFAA
- Eet du PH :
Une courte exposiEon de lADN pH acide ou
alcalin entrane une dnaturaTon parTelle
(sparaTon prfrenTelle des rgions riches
en A = T et mainTen de la structure double-
brin dans les rgions riches en G C).
LexposiEon prolonge de lADN pH acide
ou alcalin provoque sa dnaturaTon en
monobrins.

S. ZEHDI & H. ENNAFAA
II-4 STRUCTURE DES CHROMOSOMES
II-4-1 Eucaryotes
Chez les Eucaryotes, la plus grande parTe de
lADN est localis dans les chromosomes qui
se trouvent lintrieur du noyau (ADN
nuclaire).
Le nombre de chromosomes par cellule est
une caractrisTque de lespce.
Chaque chromosome est form par une trs
longue molcule dADN double-brin linaire.
S. ZEHDI & H. ENNAFAA
Cet ADN est en fait associ des protines
(Histones et non-histones) et lensemble
forme un complexe appel chromaEne.
Les Histones, dont la structure est trs
conserve travers tous les organismes
Eucaryotes, ont un rle important dans la
d t e r m i n a T o n d e l a s t r u c t u r e d e s
chromosomes.

S. ZEHDI & H. ENNAFAA
Lunit fondamentale de la chromaTne est le
nuclosome qui conTent 146pb dADN
enroul deux fois autour dun octamre
dhistones (2 sous-units de chacune des 4
histones suivantes : H2A, H2B, H3 et H4).
Cefe structure rpte donne un aspect de
collier de perles la chromaTne.

S. ZEHDI & H. ENNAFAA

LE NUCLEOSOME

S. ZEHDI & H. ENNAFAA

Les nuclosomes peuvent sassocier en
structures dordre suprieur qui augmentent la
condensaTon de lADN:
Grce aux histones H1 qui stabilisent le
nuclosome, le collier de perles peut
former une super hlice: la bre 30nm .
Celle-ci sorganise son tour en boucles de
300nm de longueur.
Enn, cefe organisaTon en boucles senroule
encore en une spirale plus ou moins resserre
de 700nm de diamtre.
S. ZEHDI & H. ENNAFAA
S. ZEHDI & H. ENNAFAA
Lorsque des chromosomes interphasiques sont colors
chimiquement , on peut observer que la chromaTne
nest pas homogne et se prsente sous deux formes
direntes:
Lune, faiblement colore, appele euchromaEne,
est forme par de la chromaEne peu condense et
correspond aux rgions qui conEennent les gnes
frquemment exprims par la cellule.
L a u t r e , f o r t e m e n t c o l o r e , a p p e l e
htrochromaEne, est forme par de la chromaEne
trs condense.

S. ZEHDI & H. ENNAFAA

 Au niveau de lhtrochromaEne, on peut disTnguer :

lhtrochromaTne facultaTve correspond aux

rgions qui conTennent des gnes qui ne sont pas
exprims par la cellule. Sa parTcularit est dtre
rversible, cest--dire quelle peut passer un tat
euchromaTque (gnes qui sexpriment) selon le type
cellulaire ou le stade de dveloppement de
lorganisme.
lhtrochromaTne consTtuTve, pauvre en gnes,
riche en squences dADN rptes. Elle est
condense en permanence dans tous les types
cellulaires. On la trouve principalement autour des
centromres et des tlomres.
S. ZEHDI & H. ENNAFAA
REMARQUE:
Comme nous lavons dj vu, chez les
Eucaryotes, on trouve de lADN dans les
mitochondries (ADN mitochondrial) et les
chloroplastes (ADN chloroplasEque):
Dans les deux cas, il est praTquement
nu (dpourvu de protines), double-brin et
circulaire.

S. ZEHDI & H. ENNAFAA

II-4-2 Procaryotes
Chez les Procaryotes, l ADN baigne dans le
cytoplasme o il consTtue lunique
chromosome.
D ans ce chromosome, lADN est trs
faiblement associ des protines ( nu ),
double-brin et circulaire.

S. ZEHDI & H. ENNAFAA

Escherichia coli clate par un choc osmotique. L'ADN de
la bactrie s'est rpandu autour. Le fil jaune correspond
une seule molcule d'ADN en forme de boucle.
Notez l'chelle: une portion d'ADN d'environ la moiti de la longueur de la
cellule correspond environ 5000 paires de bases.
S. ZEHDI & H. ENNAFAA
REMARQUE:
Chez les Procaryotes, on trouve parfois des
plasmides : ce sont molcules dADN double-
brin, circulaires, de peTte taille, cytoplasmiques
qui se trouvent ct du chromosome. Les
plasmides se rpliquent de faon autonome.

S. ZEHDI & H. ENNAFAA