ALUMNAS.
por su parte la solucin 2 sirve para tener una lisis
CEVADA SANTIAGO KAREN JAZMN
MORALES LUNA LUCA
4QM1. SECCIN 2
PRCTICA: AISLAMIENTO DE DNA PLASMDICO.
INTRODUCCIN.
Los plsmidos son moculas de DNA
extracromosomales presentes en algunas clulas
bacterianas, levaduras y hongos. Poseen DNA de
doble hebra, mayormente son circulares; poseen su
propio origen de replicacin. Los plsmidos no son
esenciales para el desarrollo de la clula, pero le
proveen una ventaja de competitiva a las clulas
que lo poseen, dado que los plsmidos poseen
genes que le confieren caractersticas selectivas a
su husped tales como resistencia a antibiticos,
nuevas habilidades metablicas como de
degradacin de carbohidratos, factores de
virulencia y produccin de toxinas entre otros. En
la ingeniera gentica poseen un inters singular,
por se uno de los sistemas de vectores ms
sencillos de utilizar.
OBJETIVO.
Aislar DNA plasmdico bacteriano, comprobando
dicho aislaminento mediante electroforesis en gel
de agarosa.
RESULTADOS.
Fig. 1 Resultados de la electroforesis del DNA plasmdico, se
aprecian 3 lneas, la primera corresponde al DNA circular
relajado, la segunda al DNA lineal y la tercera al DNA
superenrrollado.
DISCUSIN.
En la realizacin de la prctica se realiz primero un
proceso de separacin de los plsmidos
bacterianos de cepas tipo a los cuales se les agreg
una solucin con GTE (tris/EDTA/GLUCOSA) la cual
genera las condiciones ptimas para que la cepa
pueda regenerarse despus de su criogenizacin,
alcalina de la pared as como tambin un agente
emulsionante de los lpidos de membrana, la
siguiente solucin (3) es un amortiguador de pH
utilizado para que cuando se exponga el contenido
interno de la bacteria los plsmidos puedan
precipitar, en la solucin 4 el isopropanol cambia la
constante dielctrica de la solucin precipitando
las protenas y el plsmido y finalmente la quinta
solucin es un agente quelante que har que los
iones magnesio y en especial el calcio sean
capturados evitando as la accin de las nucleasas.
Despus del proceso de aislamiento de plsmido se
procedi a su caracterizacin mediante una
electroforesis, la cual es una tcnica de separacin
y caracterizacin de molculas utilizando un campo
elctrico en funcin del tamao y carga elctrica de
la molcula, as pues el, ADN teniendo carga
negativa migr a travs de los poros de la matriz
hacia el lado con carga positiva y la tincin del gel
con bromuro de etidio, que es una sustancia
fluorescente se intercala en la molcula de ADN, y la
exposicin con luz ultravioleta, permite observar el
resultado de sta migracin, observndose tres
bandas muy marcadas, correspondiendo la primera
al DNA circular relajado la cual es una isoforma del
DNA, donde debido a una fuerza mecnica el
plsmido que tiene una forma normal de dos anillos
unidos, se rompi una cadena de ellos, la segunda
banda muestra al DNA lineal lo cual indica que
ambas cadenas del plsmido se rompieron y por
ltimo la tercer banda indica al DNA sper enrollado
el cual es la forma correcta de separacin del
plsmido y en el cual ambas cadenas estn intactas.
CONCLUSIONES.
Se aislaron los tres tipo de DNA plasmdico (sper
enrollado, lineal y circular relajado).
Mediante la electroforesis se pudo aislar en mayor
cantidad la isoforma del DNA plasmdico lineal y
sper enrollado.
BIBLIOGRAFA.
DNA plasmdico, consultado en
https://bacteriologiaclinica.wikispaces.com
, el da 16 de mayo de 2017.