UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS

ESCUELA ACADMICO PROFESIONAL DE GENTICA Y BIOTECNOLOGA

GRUPO:

Mircoles de 1pm a 5pm (Laboratorio B)

TEMA:

Cromatografa de papel y placa

INTEGRANTES:

HINOJOSA ENCISO, ELTHON THOMAS - 17100117

MAGAO BOCANEGRA, KEVIN JORGE - 17100106

MORANTE CALDERN, NICOLE SONYA 17100122

OREJON CAHUAYA MICHAEL CRISTIAN 16100111

SILVA QUISPE WILLIAM ARNOLD - 16100114

FECHA DE ENTREGA:

18 de octubre del 2017

RESUMEN

Los objetivos de esta prctica son de carcter preparativo y analtico, el objetivo de la

cromatografa preparativa es separar los componentes de una mezcla mientras que la

cromatografa analtica tiene la finalidad de identificar y cuantificar las distintas sustancias

que la componen. La cromatografa es un mtodo fsico de separacin para la

caracterizacin de mezclas complejas y se compone de un conjunto de tcnicas basadas en

el principio de retencin selectiva; en toda cromatografa hay dos fases: una mvil y otra

estacionaria. La fase mvil se mueve respecto de la estacionaria manteniendo un contacto

ntimo con ella y arrastrando la muestra, cuyos componentes se distribuyen entre ambas

fases, cumpliendo la ley del reparto, los componentes de la mezcla invierten un tiempo

diferente en interactuar con cada una de las fases, por lo que se produce la separacin y/o

identificacin. Las tcnicas cromatogrficas se dividen segn cmo est dispuesta la fase

estacionaria: cromatografa plana, donde la fase estacionaria se sita sobre una superficie

plana y puede ser en papel o en capa fina; cromatografa en columna, donde la fase

estacionaria se sita sobre una columna y segn el fluido empleado como fase mvil

pueden ser: cromatografa de lquidos, gases o fluidos supercrticos; entre otros tipos. Sus

aplicaciones se pueden visualizar ms que todo en el campo de la industria alimenticia y de

la biologa, con la cromatografa se puede detectar y cuantificar la sacarina, benzoatos y

cafena en refrescos, el ciclomato en jugos de fruta, el contenido de ismeros trans en

aceites y alimentos grasos mediante la separacin de steres de cidos grasos y triglicridos

por la longitud de la cadena y el grado de insaturacin, para el estudio de aceites y grasas

adulteradas, para la determinacin del contenido de vitamina A (caroteno) en margarina y

del contenido en vitamina D en leche en polvo y cereales, entre otros.

DETALLES EXPERIMENTALES

A) PREPARACIN DEL EXTRACTO

DE FLORES

TRITURAR LAS POLVO FINO DE

FLORES SECAS FLORES SECAS
EN EL MORTERO

PESAR 2g DE ESTE 5mL DE CIDO CLORHDRICO

POLVO FINO Y AGREGAR METANLICO AL 1%

PRESIONAR LA MEZCLA
CON UNA BAGUETA

EL LQUIDO
SOBRENADANTE NO
QUED FUERTEMENTE
COLOREADO?

GUARDAR LA MEZCLA
EN LA OSCURIDAD
HASTA SU USO

FILTRE EL LQUIDO
SOBRENADANTE Y UTILCELO
PARA LA CROMATOGRAFA
 CROMATOGRAFA DE PAPEL
B)

CORTAR DE TAMAO TIRAS DE PAPEL PARA

ADECUADO CROMATOGRAFA

UNA LNEA A 3cm DEL UNA LNEA A 1.5cm DEL

TRAZAR CON UN LPIZ
BORDE SUPERIOR DEL PAPEL BORDE INFERIOR DEL PAPEL

MARCAR SOBRE UN PUNTO (DONDE SE

LA LNEA INFERIOR APLICAR LA MUESTRA)

APLICAR EN EL PAPEL CON

LA MUESTRA
UN CAPILAR DELGADO

SE PRODUJO UNA MANCHA

DE APROXIMADAMENTE NO
3mm DE DIMETRO EN EL
PAPEL?

DEJAR SECAR

LA TIRA DE PAPEL AL
SUJETAR MEDIANTE UN
CORCHO QUE
CLIP O CINTA SCOTCH
CERRAR LA CMARA

INTRODUCIR EN LA CMARA (LA

LA TIRA DE PAPEL CUAL DEBE CONTENER EL
VOLUMEN DE LA FASE MVIL)
 LA LNEA INFERIOR DEL
NO
PAPEL SOBREPASA EL
NIVEL DE LA FASE MVIL?
REPETIR LA EXPERIENCIA CON
UNA LNEA INFERIOR A MAYOR
DISTANCIA DEL BORDE
INFERIOR DEL PAPEL

TAPAR Y DEJAR CORRER

EL CROMATOGRAMA

EL SOLVENTE NO
ALCANZ LA LNEA
SUPERIOR?

RETIRAR EL PAPEL Y
DEJAR SECAR

CALCULAR EL Rf COMO
FRACCIN UNITARIA CON
DOS CIFRAS DECIMALES
C)
CROMATOGRAFA DE CAPA FINA

UNA LNEA A 1cm DEL TRAZAR CON UN LPIZ EN UN UNA LNEA A 0.5cm DEL
BORDE INFERIOR DEL CROMATOFOLIO DE 5cm DE BORDE SUPERIOR DEL
CROMATOFOLIO LARGO POR 2cm DE ANCHO CROMATOFOLIO

MARCAR SOBRE UN PUNTO (DONDE SE

LA LNEA INFERIOR APLICAR LA MUESTRA)

APLICAR EN EL CROMATOFOLIO
LA MUESTRA
CON UN CAPILAR DELGADO

SE PRODUJO UNA MANCHA

DE APROXIMADAMENTE NO
3mm DE DIMETRO EN EL
CROMATOFOLIO?

DEJAR SECAR

INTRODUCIR EN LA CMARA (LA

EL CROMATOFOLIO CUAL DEBE CONTENER EL
VOLUMEN DE LA FASE MVIL)
LA LNEA INFERIOR DEL
REPETIR LA EXPERIENCIA CON
CROMATOFOLIO NO
UNA LNEA INFERIOR A MAYOR
SOBREPASA EL NIVEL DE
DISTANCIA DEL BORDE
LA FASE MVIL?
INFERIOR DE LA PLACA

TAPAR Y DEJAR CORRER

EL CROMATOGRAMA

EL SOLVENTE NO
ALCANZ LA LNEA
SUPERIOR?

RETIRAR LA PLACA Y
DEJAR SECAR

CALCULAR EL Rf COMO
FRACCIN UNITARIA CON
DOS CIFRAS DECIMALES
RESULTADOS EXPERIMENTALES

Como fase mvil: acetona, propanol y etanol (2:2:1)

Rf Cromatografa en papel

9.8/11.2
No se aprecia la separacin de pigmentos a
0.88 lo largo de la cromatografa en papel pese
al haberla realizado por segunda vez

Cromatografa en capa Sustancia

fina con
mayor Rf

Sustancia
con 3.9/4.1 Sustancia
segundo con Rf
0.95
mayor Rf intermedio

Sustancia
3.6/4.1 con 3.4/4.1
0.88 segundo 0.83
menor Rf

3.1/4.1 Sustancia 2.7/4.1

con
0.76 menor Rf 0,66
DISCUSIN

A) Preparacin del extracto de flores

15 minutos, luego de retirarlas se tritur hasta obtener polvo fino de ellas, lo cual demoro

20 minutos En este proceso se escogieron flores con ptalos rojos muy encendidos y se

puso a secar en la estufa durante debido a que el proceso debe hacerse continuamente

hasta obtener el polvo fino. No se le agreg los 5mL de cido clorhdrico metanlico al

1% debido a que no haba dicha sustancia en el laboratorio y no se guard en la oscuridad

debido a que no disponamos de las horas necesarias. Se opt por aadir alcohol al polvo

fino y usar la mezcla en conjunto como si fuera la fase mvil y la muestra juntas y se dej

correr en el papel cromatogrfico. Despus de 20 minutos se observ que la fase mvil

ascendi y se not que el color rosado de la muestra se difumin a lo largo del papel hasta

que alcanz en el borde superior un color amarillento (curcumina) terminando en color

verde. Se concluye que estos fueron los pigmentos de los ptalos de la flor y que el color

verde fue la clorofila que aunque estaba en menor proporcin que el pigmento rojo

(licopeno), estaba presente en la flor.

B) Cromatografa de papel

Se realiz el procedimiento respectivo, cortando de tamao adecuado la tira de papel

cromatogrfico y trazando las respectivas lneas y se aplic la muestra (la cual fue la tinta

mezclada color azul oscuro) con un capilar delgado en el punto respectivo, despus de dejar

secar, se introdujo en la cmara para lo cual se us una fase mvil que era una mezcla de

tres sustancias: acetona, propanol y etanol (en proporcin 2:2:1); y se tap rpidamente.
A los 18 minutos se observ que la fase mvil haba corrido y que la muestra tambin, pero

esta ltima no lo hizo de la forma esperada pues no se apreci la separacin de pigmentos a

lo largo de la cromatografa en papel pese al haberla realizado por segunda vez. Se

concluy que no observ la gama de colores respectiva debido a que el papel no es lo

suficientemente selectivo como la capa fina.

C) Cromatografa en capa fina

Se realiz todo el proceso con la placa cromatogrfica, repitiendo el proceso de la misma

forma que en la cromatografa anterior, se us la misma fase mvil: acetona, propanol y

etanol (en proporcin 2:2:1), pero esta vez con la capa fina. Cuando la muestra, la cual era

la mezcla de tintes que tena una coloracin azul, comenz a correr junto con la fase mvil,

se pudo observar un rango de colores, lo cual era lo que se esperaba visualizar. Se pudo

determinar que el color que ms ascendi era el menos polar debido a que tena menos

afinidad con la slica (la cual es polar) y el color que menos ascendi era el ms polar. El

color azul ndigo fue la sustancia con mayor Rf igual a 0,95 y por ende la ms apolar, el

color amarillo fue la segunda sustancia con mayor Rf igual a 0,88 (ms polar que el color

azul ndigo), el color rojo fue la sustancia con un Rf intermedio igual a 0,83 ( ms polar que

el color amarillo), el color verde fue el segundo con menor Rf igual a 0,76 (ms polar que

el color rojo) y el color azul brillante fue la sustancia con menor Rf igual a 0,66 , por lo

tanto fue la ms polar.

CONCLUSIONES

En la cromatografa de papel es necesario seguir los pasos de manera muy

minuciosa porque la alteracin intensifica el margen de error al no ser muy

selectivo el papel. Esto se debi a muchos factores, entre ellos est el no tener

un buen cierre en la cmara cromatogrfica o usar una fase mvil no adecuada.

Para usar una buena muestra en la cromatografa en papel se tiene que hacer

secar bien las flores.

En la cromatografa de capa fina se puede observar cmo la muestra se desplaza

de la parte inferior hacia la parte superior creando una gama de colores.

La cromatografa puede tener aplicaciones muy concretas en la biologa de

manera econmica cuando los equipos no estaban tan avanzados, empleando

una mezcla saturada de ptalos de flores carmes.

Al emplear pequeas porciones se puede tener una buena separacin de colores

pero se sacrifica la intensidad de colores, en grandes cantidades se tiene

intensidad, pero mal contraste por superposicin y sacrificio de un mayor

cantidad de muestra de estudio, se debe contrarrestar con mayor rea de la placa.

 Con este mtodo se puede saber con mucha precisin cual es el colorante (se

indic que eran colorantes vegetales), sabiendo que los ms polares tienden a

fijarse ms:

Las de mayor y menor Rf son azules y en el mercado hay dos colorantes, el azul

ndigo (azul 2) y azul brillante FCF (azul 1); la ms polar es azul brillante FCF,

es la de menor Rf y la de mayor Rf es azul ndigo. El colorante verde es

clorofila por ser muy usado y ser de origen vegetal. El rojo es difcil de

determinar, hay 3 colorantes en el mercado: licopeno, oleorresina del pimentn

y betanina; el licopeno es demasiado no polar y tendra un Rf mayor, la betanina

es demasiado polar, el colorante es la oleorresina del pimentn. El colorante

amarillo es curcumina, hay ms abundancia en el mercado.

En la cromatografa con la slica se puede determinar que el color que ms arriba

est es el apolar puesto que no tiene afinidad con la slica que es polar.

El orden de los colores de menos polar a ms polar es el siguiente:

Azul ndigo, Rf igual a 0,95

Amarillo, Rf igual a 0,88

Rojo, Rf igual a 0,83

Verde, Rf igual a 0,76

Azul brillante, Rf igual a 0,66

RECOMENDACIONES

Tener cuidado con la concentracin manipulada de reactivos, ya que son irritantes y

corrosivos.

La concentracin de la muestra al aplicarla debe ser controlada, esto con la finalidad

de evitar que la muestra se esparza por todo el cronograma.

La cromatografa se debe realizar en un envase cerrado para ayudar al

desplazamiento de la fase mvil.

Se debe esperar que los vapores de la fase mvil llenen el recipiente, para evitar el

avance excesivo de la muestra y los valores excesivos de .

Evitar aplicar la muestra demasiado cerca a la orilla del papel o la placa, esto evitar

alterar los valores de .

Al marcar con lpiz la placa de slica gel hacerlo suavemente para evitar deformarla.