MANUAL DE INSTRUCCIONES

LABORATORIO DE ENSAYO
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(X) Vibrio cholerae FDA/BAM

1. OBJETIVO
Describir el proceso a seguir para la realizacin de las pruebas L- lisina descarboxilasa,
L-ornitina descarboxilasa y L-arginina dihidrolasa en la identificacin de Vibrio cholerae.
CERTIFICACIONES DEL PERU S.A.

Especificar los medios selectivos y no selectivos a utilizar durante el desarrollo del

mtodo.

2. ALCANCE
Esta instruccin es aplicable a los medios selectivos y no selectivos de aislamiento, a las
pruebas L- lisina descarboxilasa, L-ornitina descarboxilasa y L-arginina dihidrolasa realizadas
para la identificacin de colonias tpicas de Vibrio cholerae segn Mtodo BAM Online,
FDA/CFSAN, Capitulo 9. A-B:1-5 c, excepto el uso del antisuero O139, 8th Ed.1995. Revisin
A/1998. Reescrito y revisado Mayo 2004, en todos los productos indicados en la matriz de
aseguramiento de la calidad.

3. TERMINOS Y DEFINICIONES
Descarboxilacin: Proceso por el cual las bacterias que poseen enzimas descarboxilasas
especificas son capaces de atacar a los aminocidos en su grupo carboxilo (-COOH) dando
una amina o una diamina y anhdrido carbnico provocando una desviacin del pH hacia la
alcalinidad del medio de cultivo. Este proceso es irreversible y se produce anaerbicamente.
Hidrolasa: Enzimas que catalizan reacciones hidrolticas.

4. RESPONSABILIDADES.
4.1 El Jefe de Seccin y/o Supervisor es el responsable de la implementacin y seguimiento
de esta instruccin.

4.2 Los analistas son responsables de su aplicacin.

5. DESARROLLO.
5.1 Para el aislamiento de Vibrio chlolerae el mtodo indica utilizar agar TCBS, sin
embargo puede inclurse el agar mCPC (agar modificado de celobiosa polimixina
colistina) o el agar CC (agar celobiosa colistina).

5.2 El laboratorio utilizar como segundo medio selectivo al agar mCPC e incubar a
35C-37 C

5.3 Para purificar las colonias sospechosas desarrolladas en los agares selectivos el
laboratorio emplear el agar T1N1.

5.4 Para la realizacin de las pruebas bioqumicas se tomar del crecimiento del agar
T1N1 inclinado.

5.5 El mtodo tambin indica realizar como mnimo las pruebas: L- lisina descarboxilasa, L-
ornitina descarboxilasa y L-arginina dihidrolasa para la identificacin de colonias tpicas de
V. cholerae, pero no se indica el procedimiento y/o lecturas para la realizacin de estas
pruebas.

5.6 El laboratorio realizar la siembra y lecturas de los medios L- lisina, L-ornitina y L-arginina
de la siguiente manera.

Elaborado: C. Beltrn Revisado: D.Snchez Aprobado: G. Reyes

Fecha: 2012-06-25 Fecha: 2012-06-26 Fecha: 2012-06-26

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5.6.1 Se inocular las colonias tpicas de V. cholerae justo debajo de la superficie de los
caldos de medio de cultivo y adicionar 1 mL de aceite mineral estril. Se realizar
un control del medio lquido sin la adicin del aminocido.
5.6.2 Los cultivos se incubarn a 35C 2 C por 24 horas.
5.6.3 Para la realizacin de las lecturas se tendr en cuenta:
5.6.3.1 Si en los medios L- lisina descarboxilasa y L-ornitina descarboxilasa se
muestra turbidez y un color violeta luego de la incubacin indica una
CERTIFICACIONES DEL PERU S.A.

reaccin positiva (hay crecimiento de la bacteria y descarboxilacin de los

aminocidos) por lo que la prueba es positiva para V. cholerae.
El color amarillo indica reaccin negativa.
5.6.3.2 La turbidez y un color violeta en el medio L-arginina dihidrolasa despus de
la incubacin indica una reaccin positiva (hay desarrollo de la bacteria y
dihidrolacin de la arginina). Un color amarillo indica reaccin negativa por
lo que la prueba es positiva para V. cholerae.
5.6.4 Los resultados se registran en la hoja de ensayo.

6. REGISTROS.
Hoja de ensayo: Anlisis de alimentos Vibrio Cholerae HE-MI-VC.

7. REFERENCIA.
ISO/TS 21872-1:2007 Microbiology of food and animal feeding stuffs - Horizontal method for the
detection of potentially enteropathogenic Vibrio spp. Part 1: Detection of Vibrio
parahaemolyticus and Vibrio cholerae.
Jean F. Mac Faddin. Pruebas bioqumicas para la identificacin de bacterias de importancia
clnica. 1990. Editorial Mdica Panamericana S.A de C.V
BAM online, FDA/CFSAN, Cap. 9: A-B 1-5 c 8th Ed. 1995. Revisin A/1998. Revisado Mayo
2004.

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ANEXO 1

(M44) Medio Base Descarboxilasa (Arginina, Lisina, Ornitina)*

Base
CERTIFICACIONES DEL PERU S.A.

Peptona o gelisato 5g
Extracto de levadura 3g
Glucosa 1g
Prpura de bromocresol 0.02 g
Agua 1L
Ajustar el pH para que despus de la esterilizacin sea de 6.5 0.2. Dispensar 5 mL en tubos
con tapa rosca de 16 x 125 mm. Autoclavar con la tapa ligeramente abierta a 121C por 10
minutos. Cerrar las tapas fuertemente para el almacenamiento y durante la incubacin. Para el
control usar el medio base sin el suplemento.

Suplemento

1 L de medio base
Para:
adicionar:
Caldo Arginina 5 g L-arginina
Caldo Lisina (Falkow) 5 g L-lisina
Caldo Ornitina 5 g L-ornitina

* BAM online, FDA/CFSAN, BAM Medio M44 , 8th Ed. 1995. Revision A/1998. Reescrito y
revisado Mayo 2004.

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